大黃素對白蛋白誘導人腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響精選文檔

1、研究背景研究背景1技術(shù)路線與方法技術(shù)路線與方法2結(jié)結(jié) 果果3討討 論論4結(jié)結(jié) 論論5概概 要要 蛋白尿不僅僅是腎臟損傷的生物學標志，還蛋白尿不僅僅是腎臟損傷的生物學標志，還是加速腎臟疾病向終末期腎衰進展的主要是加速腎臟疾病向終末期腎衰進展的主要危險因素之一。危險因素之一。 研究背景研究背景腎臟損傷腎臟損傷蛋白尿蛋白尿臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)反作用反作用物理損傷物理損傷誘導化學趨化因子、炎癥因子誘導化學趨化因子、炎癥因子激活補體激活補體促進細胞凋亡促進細胞凋亡損傷及加速纖維化損傷及加速纖維化機制機制1、正常腎單位的丟失和腎結(jié)構(gòu)的、正常腎單位的丟失和腎結(jié)構(gòu)的破壞破壞 2、成纖維細胞及肌成纖維細胞的、成纖維

2、細胞及肌成纖維細胞的大量增生大量增生 3、細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和積聚、細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和積聚 病理變化病理變化 腎臟纖維化腎臟纖維化研究背景研究背景腎間質(zhì)腎間質(zhì)纖維化纖維化腎小球腎小球硬化硬化腎臟纖維化腎臟纖維化腎間質(zhì)纖維化是關(guān)鍵！腎間質(zhì)纖維化是關(guān)鍵！間質(zhì)纖維化的程度更能預(yù)測腎功能的變化！間質(zhì)纖維化的程度更能預(yù)測腎功能的變化！研究背景研究背景 腎小管上皮細胞腎小管上皮細胞-肌成纖維細胞轉(zhuǎn)分化（肌成纖維細胞轉(zhuǎn)分化（temt） 在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展中有著重要的作用，它被定義為腎小管上皮細胞丟失了上皮表型，而獲得腎小管上皮細胞丟失了上皮表型，而獲得新的肌成纖維細胞特征的過程新的肌成纖維細胞特征的過程

3、。研究背景研究背景轉(zhuǎn)分化轉(zhuǎn)分化ecmecmecm上皮細胞肌成纖維細胞化學名：3-甲基-1，3，8-三羥基蒽醌大黃素大黃素傳統(tǒng)的生物學作用：抗傳統(tǒng)的生物學作用：抗菌消炎、抗腫瘤、免疫菌消炎、抗腫瘤、免疫抑制、保肝、抑制、保肝、護腎護腎 研究背景研究背景保護腎臟作用：清除氧保護腎臟作用：清除氧自由基及炎癥因子、抗自由基及炎癥因子、抗細胞增殖、促細胞外基細胞增殖、促細胞外基質(zhì)降解、阻滯質(zhì)降解、阻滯temt 體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)大黃素可延緩糖尿病腎病、梗阻性腎病等腎臟纖維化發(fā)生，其中阻滯temt過程發(fā)揮重要地位。研究背景研究背景研究目的研究目的白蛋白能否誘導白蛋白能否誘導hk-2細胞轉(zhuǎn)發(fā)生轉(zhuǎn)分化過程細胞轉(zhuǎn)發(fā)

4、生轉(zhuǎn)分化過程、促進細胞外基質(zhì)合成、促進細胞外基質(zhì)合成 大黃素對白蛋白產(chǎn)生的上述過程是否產(chǎn)生影響大黃素對白蛋白產(chǎn)生的上述過程是否產(chǎn)生影響技術(shù)路線與分組技術(shù)路線與分組空白對照組空白對照組 大黃素對照組大黃素對照組大黃素干預(yù)組大黃素干預(yù)組白蛋白誘導組白蛋白誘導組hk-2細胞細胞無處理因素 20g/ml大黃素作用大黃素作用0、12、24、48h5mg/ml白蛋白刺激時同白蛋白刺激時同時加入時加入20g/ml大黃素作用大黃素作用0、12、24、48h觀察各組細胞形態(tài)學變化，收集細胞總觀察各組細胞形態(tài)學變化，收集細胞總rna半定量檢測半定量檢測-sma、e-cadherin、fnmrna的表達的表達5mg

5、/ml白蛋白作用白蛋白作用0、12、24、48h各組各組實驗重復(fù)實驗重復(fù)3 3次，所有數(shù)據(jù)以次，所有數(shù)據(jù)以x xs s表示，行表示，行方差齊性檢驗方差齊性檢驗，多組間，多組間計量資料采用單因素方差分析計量資料采用單因素方差分析用用spss12.0spss12.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理軟件對數(shù)據(jù)進行處理以以p p0.050.05為有顯著性差異為有顯著性差異, p, p0.010.01有非常顯著性差異有非常顯著性差異 rt-pcrrt-pcr正常正常hk-2細胞僅表達少量的細胞僅表達少量的-sma、fnmrna，而而e-cadherinmrna的表達較強。的表達較強。e-cadherin -sma f

6、nm 0 12 24 48h 大黃素對照組上述因子的表達與正常對照組無差異結(jié)結(jié) 果果白蛋白誘導白蛋白誘導hk-2細胞表型轉(zhuǎn)化及大黃素干預(yù)后的效果細胞表型轉(zhuǎn)化及大黃素干預(yù)后的效果 白蛋白可誘導白蛋白可誘導hk-2細胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，即細胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，即e-cadherinmrna的表達下調(diào)，的表達下調(diào)，-smamrna的表達上調(diào)，與的表達上調(diào)，與0h比較，比較，12h后即有差異，后即有差異，48h后差異顯著，后差異顯著，p0.01。而同時加入。而同時加入20g/ml大黃素作用后，其變化趨勢明顯減弱。大黃素作用后，其變化趨勢明顯減弱。-sma 白蛋白誘導白蛋白誘導大黃素干預(yù)大黃素干預(yù)m 0 12

7、24 48h 結(jié)結(jié) 果果白蛋白誘導白蛋白誘導hk-2細胞表型轉(zhuǎn)化及大黃素干預(yù)后的效果細胞表型轉(zhuǎn)化及大黃素干預(yù)后的效果 e-cadherin 大黃素干預(yù)大黃素干預(yù)白蛋白誘導白蛋白誘導m 0 12 24 48h m 0 12 24 48h 白蛋白誘導白蛋白誘導hk-2細胞分泌纖維連接蛋白（細胞分泌纖維連接蛋白（fn）的情況及大黃素干預(yù)后的效果）的情況及大黃素干預(yù)后的效果fn的表達隨白蛋白刺激時間延長而逐漸增多，在大黃素干預(yù)后其表達上調(diào)趨勢亦明顯減緩。的表達隨白蛋白刺激時間延長而逐漸增多，在大黃素干預(yù)后其表達上調(diào)趨勢亦明顯減緩。fn白蛋白誘導白蛋白誘導大黃素干預(yù)大黃素干預(yù)m 0 12 24 48h

8、討討 論論蛋白尿與腎小管間質(zhì)損傷蛋白尿與腎小管間質(zhì)損傷蛋白尿的水平反映了腎小球損傷的程度蛋白尿的水平反映了腎小球損傷的程度mdrdmdrd試驗試驗 把蛋白尿基礎(chǔ)排出量作為獨立的危險因素納入加速慢性腎臟病進展的研究把蛋白尿基礎(chǔ)排出量作為獨立的危險因素納入加速慢性腎臟病進展的研究臨床研究發(fā)現(xiàn)臨床研究發(fā)現(xiàn)ckdckd患者在應(yīng)用患者在應(yīng)用 aceiacei、arbarb類藥物可非依賴降壓作用減少尿蛋白量的排泄而類藥物可非依賴降壓作用減少尿蛋白量的排泄而延緩慢性腎臟病惡化速度延緩慢性腎臟病惡化速度 降尿蛋白和延緩降尿蛋白和延緩gfrgfr下降之間有著緊密的聯(lián)系，蛋白尿的程度對下降之間有著緊密的聯(lián)系，蛋白

9、尿的程度對ckdckd預(yù)后具有很強的預(yù)測預(yù)后具有很強的預(yù)測價值價值 。討討 論論蛋白尿與腎小管間質(zhì)損傷蛋白尿與腎小管間質(zhì)損傷我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5mg/ml5mg/ml人純化白蛋白刺激人純化白蛋白刺激hk-2hk-2細胞一段時間內(nèi)后，上細胞一段時間內(nèi)后，上皮細胞表型標志物皮細胞表型標志物e-cadherinmrnae-cadherinmrna表達下調(diào)，肌成纖維細胞表型物表達下調(diào)，肌成纖維細胞表型物-smamrnasmamrna表達上調(diào)，且隨白蛋白作用時間的延長表達水平逐漸增強。表達上調(diào)，且隨白蛋白作用時間的延長表達水平逐漸增強。 結(jié)果表明結(jié)果表明hk-2hk-2細胞發(fā)生表型

10、轉(zhuǎn)變，介導了腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生。細胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)變，介導了腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生。討討 論論temt與腎小管間質(zhì)纖維化與腎小管間質(zhì)纖維化 temttemt在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用作用 temttemt過程包括：腎小管上皮細胞的黏附屬性缺失過程包括：腎小管上皮細胞的黏附屬性缺失(e-(e-鈣粘蛋白減少鈣粘蛋白減少) )，腎小管基底膜的破壞，表達，腎小管基底膜的破壞，表達-smasma的肌成纖維細胞增多及其向間質(zhì)遷移最終導致的肌成纖維細胞增多及其向間質(zhì)遷移最終導致間質(zhì)纖維化。間質(zhì)纖維化。 。 腎間質(zhì)纖維化的另一決定因素是腎間質(zhì)纖維化的另一決

11、定因素是ecmecm合成與降解合成與降解平衡的調(diào)節(jié)平衡的調(diào)節(jié) 肌成纖維細胞分泌肌成纖維細胞分泌fnfn參與參與ecmecm構(gòu)成。構(gòu)成。 本研究選擇本研究選擇fnfn作為觀察作為觀察ecmecm聚積的評價指標聚積的評價指標temt與腎小管間質(zhì)纖維化與腎小管間質(zhì)纖維化討討 論論 我們實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常腎小管上皮細胞因未發(fā)生我們實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常腎小管上皮細胞因未發(fā)生明顯轉(zhuǎn)分化，其明顯轉(zhuǎn)分化，其fnmrnafnmrna的分泌甚微，的分泌甚微， 而而5mg/ml5mg/ml人白蛋白誘導人白蛋白誘導hk-2hk-2細胞轉(zhuǎn)分化的發(fā)生同細胞轉(zhuǎn)分化的發(fā)生同時，檢測到時，檢測到fnmrnafnmrna表達呈現(xiàn)時間依

12、賴性增強，表達呈現(xiàn)時間依賴性增強，進一步參與腎間質(zhì)纖維化的形成。進一步參與腎間質(zhì)纖維化的形成。temt與腎小管間質(zhì)纖維化與腎小管間質(zhì)纖維化討討 論論 討討 論論大黃素阻滯大黃素阻滯temt在腎間質(zhì)在腎間質(zhì) 纖維化中的作用纖維化中的作用實驗中，我們通過使用實驗中，我們通過使用20g/ml20g/ml大黃素與白蛋白共同作用大黃素與白蛋白共同作用hk-2hk-2細胞制造干預(yù)模細胞制造干預(yù)模型。型。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)大黃素干預(yù)后實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)大黃素干預(yù)后hk-2hk-2細胞后其細胞后其e-cadherinmrnae-cadherinmrna的表達亦有漸的表達亦有漸降趨勢，降趨勢，-sma mrna-s

13、ma mrna表達上升，但在表達上升，但在48h48h內(nèi)其下降內(nèi)其下降/ /上升趨勢呈明顯減緩，上升趨勢呈明顯減緩，較白蛋白誘導組有明顯差異。較白蛋白誘導組有明顯差異。大黃素部分阻滯了大黃素部分阻滯了hk-2hk-2細胞的細胞的temttemt過程。過程。 討討 論論大黃素阻滯大黃素阻滯temt在腎間質(zhì)在腎間質(zhì) 纖維化中的作用纖維化中的作用而通過對而通過對fnmrnafnmrna表達情況的檢測發(fā)現(xiàn)：經(jīng)大黃素干預(yù)后，表達情況的檢測發(fā)現(xiàn)：經(jīng)大黃素干預(yù)后，fnmrnafnmrna表達亦表達亦受到部分抑制。受到部分抑制。原因可能為：原因可能為：1 1、大黃素阻滯了、大黃素阻滯了hk-2hk-2細胞的轉(zhuǎn)分化發(fā)生，使得細胞的轉(zhuǎn)分化發(fā)