生物技術(shù)制藥小抄1

1、螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈

2、螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿

3、袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇

4、裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆

5、蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈

6、薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆

7、薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆

8、薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇

9、蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇肁肇薇蠆襖蒞薆螂聿芁薅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀螈肆莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螃羇肆芇裊螀蒞芆薅羅芁蒞蚇螈膇莄蝿羃肂莃葿螆肈莂蟻肂莇莁螄襖芃莁袆肀腿莀薅袃肅荿蚈肈羈蒈螀袁芀蕆蒀肆膆蒆薂衿膂蒅螄膅肈蒅袇羈莆蒄薆螀節(jié)蒃蠆羆膈蒂螁蝿肄薁蒁羄羀薀薃螇艿蕿蚅羂芅蕿袈螅膁薈薇 生物技術(shù)制藥:采用現(xiàn)代生物技術(shù)，借助某些微生物、植物、動(dòng)物生產(chǎn)藥品。生物技術(shù)藥物一般來(lái)說(shuō)，采

10、用dna重組技術(shù)或其他生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物。生物技術(shù)：基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、生化工程、蛋白質(zhì)工程、抗體工程等?；蚬こ淌巧锛夹g(shù)的核心和關(guān)鍵，是主導(dǎo)技術(shù)；細(xì)胞工程是生物技術(shù)的基礎(chǔ)；酶工程是生物技術(shù)的條件；發(fā)酵工程是生物技術(shù)獲得最終產(chǎn)品的手段。生物技術(shù)：從廣義角度來(lái)看，是人類對(duì)生物資源（包括微生物、植物、動(dòng)物）的利用、改造并為人類服務(wù)的技術(shù)?，F(xiàn)代生物技術(shù)包括:重組dna技術(shù)細(xì)胞和原生質(zhì)體融合技術(shù)酶和細(xì)胞的固定化技術(shù)植物脫毒和快速繁殖技術(shù)動(dòng)物和植物細(xì)胞的大量培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物胚胎工程技術(shù)現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)現(xiàn)代生物反應(yīng)工程和分離工程技術(shù)蛋白質(zhì)工程技術(shù)海洋生物技術(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)的

11、發(fā)展趨勢(shì)主要體現(xiàn)在下列幾個(gè)方面：基因操作技術(shù)日新月異，不斷完善。新技術(shù)、新方法一經(jīng)產(chǎn)生便迅速地通過(guò)商業(yè)渠道出售專項(xiàng)技術(shù)，并在市場(chǎng)上加以應(yīng)用。基因工程藥物和疫苗的研究和開(kāi)發(fā)突發(fā)猛進(jìn)。新的生物治療制劑的產(chǎn)業(yè)化前景十分光明，21世紀(jì)整個(gè)醫(yī)藥工業(yè)將面臨全面的更新改造。轉(zhuǎn)基因植物和動(dòng)物取得重大突破現(xiàn)代生物技術(shù)在農(nóng)業(yè)上的廣泛應(yīng)用將給農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)新的飛躍。闡明生物體基因組及其編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能是當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的一個(gè)主流方向，基因治療取得重大進(jìn)展，有可能革新整個(gè)疾病的預(yù)防和治療領(lǐng)域。蛋白質(zhì)工程是基因工程的發(fā)展，它將分子生物學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)結(jié)合起來(lái)，形成一門(mén)高度綜合的學(xué)科。信息技術(shù)的飛躍

12、發(fā)展?jié)B透到生命科學(xué)領(lǐng)域中，形成形成引人注目、用途廣泛的生物信息學(xué)。新型生物反應(yīng)器有:1.氣升式生物反應(yīng)器2.流化床式生物反應(yīng)器3.固定床式生物反應(yīng)器4.袋式或膜式生物反應(yīng)器5.中空纖維生物反應(yīng)器一、 生物技術(shù)藥物分類1.重組dna技術(shù)制造的多肽、蛋白類藥物2.基因藥物，包括基因治療藥、基因疫苗、反義藥物、核酶3.來(lái)自動(dòng)、植物、微生物的天然藥物4.合成與半合成的生物藥物按照醫(yī)學(xué)用途分類：1.治療藥物，治療疾病是生物藥物的主要功能。2.診斷藥物，具有速度快、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。3.預(yù)防藥物，對(duì)于許多傳染性疾病來(lái)說(shuō)，預(yù)防比治療更重要。二 、生物技術(shù)藥物的特性1.分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜2.具有種屬特異性3

13、.治療針對(duì)性強(qiáng)，療效高4.穩(wěn)定性差5.基因穩(wěn)定性6.免疫原性7.體內(nèi)t1/2短8.受體效應(yīng)9.多效性和網(wǎng)絡(luò)性效應(yīng)10.檢驗(yàn)的特殊性生物技術(shù)制藥的特征1.高技術(shù)：高知識(shí)人才，高技術(shù)手段2.高投入：13億美元/藥3.長(zhǎng)周期：810年/藥4.高風(fēng)險(xiǎn)：成功率510%5.高收益：回報(bào)率10倍生物技術(shù)在制藥中的應(yīng)用1.基因工程制藥：（1）基因工程藥物品種的開(kāi)發(fā)；（2）基因工程疫苗；（3）基因工程抗體；（4）基因診斷與基因治療；（5）應(yīng)用基因工程技術(shù)建立新藥的篩選模型；（6）應(yīng)用基因工程技術(shù)改良菌種，產(chǎn)生新的微生物藥物；（7）基因工程技術(shù)在改進(jìn)藥物生產(chǎn)工藝中的應(yīng)用；（8）利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)、植物生產(chǎn)蛋白質(zhì)類藥物。

14、第一節(jié) 基因的概念與特性一、基因的概念:dna分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。二、基因的一般特性：基因可自我復(fù)制，基因決定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，基因可突變。 基因按功能分為：結(jié)構(gòu)基因 調(diào)控基因三、dna的結(jié)構(gòu)與性能dna的結(jié)構(gòu)：四種核苷酸（a t c g）連接一級(jí)結(jié)構(gòu)、dna二級(jí)結(jié)構(gòu)（，），雙螺旋結(jié)構(gòu)。dna的性質(zhì)與功能:吸收光譜260電場(chǎng)中泳動(dòng)變性、復(fù)性、雜交第二節(jié) dna的復(fù)制與表達(dá)二、基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄：在rna聚合酶的催化下以dna為模板合成mrna的過(guò)程。2.翻譯：以mrna為模板,trna作為運(yùn)載工具,將活化的氨基酸在核糖體上合成蛋白質(zhì)的過(guò)程。(1)分為三個(gè)階段：

15、起始延長(zhǎng)終止(2)翻譯后的肽鏈加工:羥基化糖基化磷酸化乙?；诙?基因工程制藥醫(yī)用活性蛋白和多肽類包括：免役性蛋白，如各種抗原和單克隆抗體。細(xì)胞因子，如各種干擾素、白細(xì)胞介素、集落刺激生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子及凝血因子。激素，如胰島素、生長(zhǎng)激素、心鈉素。酶類，如尿激酶、鏈激酶、葡激酶、組織型纖維蛋白溶酶原激活劑及超氧化物岐化酶等?；蚬こ碳夹g(shù)生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)1.利用基因工程技術(shù)可大量生產(chǎn)過(guò)去難以獲得的生理活性蛋白和多肽（如胰島素、干擾素、細(xì)胞因子等），為臨床使用建立有效的保障。2.可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)，以便對(duì)其生理、生化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入的研究，從而擴(kuò)大這些物質(zhì)的應(yīng)用范圍。3.利用基因工程

16、可以發(fā)現(xiàn)挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)。4.內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用時(shí)，存在不足之處，可以通過(guò)基因工程和蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造。5.利用基因工程技術(shù)可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來(lái)源。第二節(jié) 基因工程藥物生產(chǎn)的過(guò)程基因工程技術(shù)是將重組對(duì)象的目的基因插入載體，拼接后轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，構(gòu)建成工程菌 (或細(xì)胞），實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)。基因工程藥物制藥的主要程序（步驟）目的基因的克隆構(gòu)建dan重組體dan重組體轉(zhuǎn)入宿主菌構(gòu)建工程菌工程菌發(fā)酵表達(dá)產(chǎn)物的分離純化產(chǎn)品的檢驗(yàn)等基因工程藥物制藥的主要程序獲得目的基因組建重組質(zhì)粒構(gòu)建工程菌（或細(xì)胞）培養(yǎng)工程菌 產(chǎn)物分

17、離純化除菌過(guò)濾半成品檢定成品檢定包裝第三節(jié) 目的基因的獲得克隆真核基因常用方法：逆轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。1、 逆轉(zhuǎn)錄法 ：逆轉(zhuǎn)錄法就是先分離純化目的基因的 mrna，再反轉(zhuǎn)錄成 cdna，然后進(jìn)行 cdna 的克隆表達(dá)。 mrna的純化 cdna第一鏈的合成 cdna第二鏈的合成 cdna的克隆 將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞： cdna文庫(kù)的鑒定：抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法 目的cdna克隆的分離和鑒定：核酸探針雜交法、免疫反應(yīng)鑒定法三、化學(xué)合成法 ：較小的蛋白質(zhì)或多肽的編碼基因可以用化學(xué)合成法合成。必須知道目的基因的核苷酸順序或目的蛋白質(zhì)的氨基酸順序。再按相應(yīng)的密碼子推導(dǎo)出dna的核甘酸序列。用

18、化學(xué)法合成目的基因dna不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘性末端的dna雙鏈片段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進(jìn)行退火使連接成較長(zhǎng)的dna片段，再用連接酶連接成完整的基因。人工化學(xué)合成基因的限制有： 不能合成太長(zhǎng)的基因 目前 dna 合成儀所合成的寡核苷酸片段僅為 5060 bp，因此只適用于克隆小分子肽的基因。遺傳密碼的簡(jiǎn)并使選擇密碼子困難，用氨基酸順序推測(cè)核苷酸序列，得到的結(jié)果可能與天然基因不完全一致，易造成中性突變。費(fèi)用高。四、基因篩選的新方法1.編碼序列富集法2.島嶼獲救pcr法3.動(dòng)物雜交法4.功能克隆法5.構(gòu)建cdna文庫(kù)6.差異顯示技術(shù)的應(yīng)用五、對(duì)已發(fā)現(xiàn)基因

19、的改造應(yīng)用基因修飾技術(shù)和點(diǎn)突變技術(shù)提高目的基因表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性、t1/2、提高表達(dá)量，降低毒性或免疫原性。第四節(jié) 基因表達(dá)基因表達(dá)是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過(guò)程?；蚋咝П磉_(dá)研究是指外源基因在某種細(xì)胞中的表達(dá)活動(dòng)，即剪切下外源基因片段，拼接到另一個(gè)基因表達(dá)體系中，使其能獲得原生物活性又可高產(chǎn)的表達(dá)產(chǎn)物。最佳的基因表達(dá)體系：;目的基因的表達(dá)產(chǎn)量高;表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定;生物活性高和表達(dá)產(chǎn)物容易分離純化一、宿主細(xì)胞的選擇適合目的基因表達(dá)的宿主細(xì)胞應(yīng)滿足以下要求:1.容易獲得較高濃度的細(xì)胞；2.能利用易得廉價(jià)原料；3.不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素；4.發(fā)熱量低、需氧低、適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)；

20、5容易進(jìn)行代謝調(diào)控；6.容易進(jìn)行dna重組技術(shù)操作；7.產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提取純化。宿主細(xì)胞分為兩大類：第一類為原核細(xì)胞：常用有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、鏈霉菌等；第二類為真核細(xì)胞：常用有酵母、絲狀真菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。二、大腸桿菌中的基因表達(dá)載體 ：是基因工程的目的和基本手段，是選用合適的載體把供體dna（外源基因）運(yùn)載到受體細(xì)胞內(nèi)，從而復(fù)制擴(kuò)增大量的目的dna分子或轉(zhuǎn)錄表達(dá)為相應(yīng)的產(chǎn)物?；蚬こ梯d體分為：克隆載體,轉(zhuǎn)錄載體,表達(dá)載體;dna(克隆載體）dna(轉(zhuǎn)錄載體）rna蛋白質(zhì)（表達(dá)載體）原核細(xì)胞的基因組特點(diǎn)：染色質(zhì)為環(huán)狀雙股dna分子 具有操縱子結(jié)構(gòu) 結(jié)構(gòu)基因多為單拷貝 特定

21、區(qū)域分布特異dna順序，因此外源dna分子可以插入原核細(xì)胞dna復(fù)制體系的特定區(qū)段基因克隆載體1）定義：基因克隆載體是一類能夠承載外源基因并將其帶入受體細(xì)胞得以穩(wěn)定維持的dna分子。2）目前經(jīng)常使用的載體，有質(zhì)粒和病毒兩類。各種不同的載體，盡管分子量大小、結(jié)構(gòu)和用途上存在著較大的差異，但是作為載體，它們應(yīng)該具備一些共同的特性?；蚬こ炭寺≥d體的特點(diǎn)：具有復(fù)制子有單一限制內(nèi)切酶切位點(diǎn)或多克隆位點(diǎn)有選擇性遺傳標(biāo)記如抗藥基因拷貝數(shù)高生物安全性好質(zhì)粒的分類按復(fù)制型式嚴(yán)緊型 松弛型按基因轉(zhuǎn)移性傳遞性質(zhì)粒 非傳遞性質(zhì)粒按遺傳性狀產(chǎn)物分類:抗生素抗性限制酶、修飾酶系統(tǒng)真核基因在原核細(xì)胞中表達(dá)載體必須具備條件

22、載體能夠獨(dú)立復(fù)制。載體本身是一個(gè)復(fù)制子，具有復(fù)制起點(diǎn)。應(yīng)具有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記，以利于外源基因的克隆鑒定和篩選。應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子，能為大腸桿菌rna聚合酶所識(shí)別。應(yīng)具有阻遏子，使啟動(dòng)子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子，只轉(zhuǎn)錄克隆的基因，所產(chǎn)生的mrna較為穩(wěn)定。所產(chǎn)生的mrna必須具有翻譯的起始信號(hào)aug和sd序列，以便轉(zhuǎn)錄后順利翻譯。影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素外源基因的拷貝數(shù)：外源基因是克隆到載體上的，因此載體在宿主菌種的拷貝數(shù)就直接關(guān)系到外源基因的拷貝數(shù)。外源基因的表達(dá)效率啟動(dòng)子的強(qiáng)弱核糖體接合位點(diǎn)的有效性sd序列和起始密碼atg的間距密碼子組成

23、表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性：組建融合基因，產(chǎn)生融合蛋白；利用大腸桿菌的信號(hào)肽或某些真核多肽中自身的信號(hào)肽，把真核基因產(chǎn)物搬動(dòng)到胞漿周質(zhì)的空隙中；采用位點(diǎn)特異性突變的方法，改變真核蛋白質(zhì)中二硫鍵的位置，從而增加蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性；采用蛋白酶缺陷型大腸桿菌，有可能減弱表達(dá)產(chǎn)物的降解。細(xì)胞代謝負(fù)荷：工程菌的培養(yǎng)條件：外源基因的高水平表達(dá)，不僅涉及宿主、載體和克隆基因三者之間的相互關(guān)系，而且與其所處的環(huán)境條件息息相關(guān)，必須優(yōu)化基因工程菌的培養(yǎng)條件，進(jìn)一步提高基因表達(dá)水平。第五節(jié) 基因工程菌生長(zhǎng)代謝的特點(diǎn)一、菌體的生長(zhǎng)與能量的關(guān)系碳源物質(zhì)是組成培養(yǎng)基的主要成分。碳源物質(zhì)為細(xì)胞提供能量，當(dāng)菌體生長(zhǎng)所需能量大于菌體有氧代

24、謝提供的能量時(shí)，菌體會(huì)產(chǎn)生乙酸，導(dǎo)致培養(yǎng)基的ph值下降，從而影響菌體的生長(zhǎng)。提高ph，可減少乙酸的抑制作用。分批培養(yǎng)中選擇不同的碳源，連續(xù)培養(yǎng)中控制稀釋速率等都能一定范圍內(nèi)控制菌體的生長(zhǎng)，從而控制乙酸的產(chǎn)生，減少它的抑制作用。加入甲硫氨酸和酵母提取物都能減少乙酸的產(chǎn)生。大腸桿菌中克隆攜帶氧能力的vhb蛋白的基因可提高菌體生長(zhǎng)速率。采用磷酸乙?；溉毕葜曜鳛樗拗骷?xì)胞，阻止乙酸產(chǎn)生，可提高產(chǎn)量。二、菌體生長(zhǎng)與前體供應(yīng)的關(guān)系在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入氨基酸（小分子前體）能使菌體比生長(zhǎng)率提高，蛋白合成增加?；蚬こ叹|(zhì)粒的表達(dá)需與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)共同的前體和催化結(jié)構(gòu)，致工程菌生長(zhǎng)速率降低。質(zhì)粒存在對(duì)菌體代謝的影響

25、：中等拷貝質(zhì)粒（56拷貝）的工程菌中與前體合成有關(guān)的酶增加，這些酶的基因大多受終產(chǎn)物的反饋調(diào)節(jié)。如：三羧酸循環(huán)關(guān)鍵酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)?；傅?。高拷貝質(zhì)粒的工程菌（240拷貝）中，生長(zhǎng)速率和菌體總蛋白合成均減少。這與工程菌大量前體被利用引起前體不足，從而產(chǎn)生“嚴(yán)緊反應(yīng)”有關(guān)?！皣?yán)緊反應(yīng)”是當(dāng)氨酰trna不足時(shí),核糖體在密碼子上停留,并合成被稱為魔點(diǎn)的ppgpp的結(jié)果。第六節(jié) 基因工程菌的不穩(wěn)定性質(zhì)粒不穩(wěn)定 基因工程菌在傳代（25代以上）過(guò)程中常出現(xiàn)的現(xiàn)象。分裂不穩(wěn)定：指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變常見(jiàn)分裂不穩(wěn)定的

26、兩個(gè)因素：含質(zhì)粒菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代菌的頻率（質(zhì)粒丟失率）；這兩種菌（含質(zhì)粒菌和不含質(zhì)粒菌）比生長(zhǎng)速率差異的大小。二、提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法1.合適的宿主：宿主菌2.合適的載體:質(zhì)?？截悢?shù)3.選擇壓力：抗生素4.分階段控制培養(yǎng)：先使菌體生長(zhǎng)至一定密度； 再誘導(dǎo)外源基因的表達(dá)5.控制培養(yǎng)條件：溫度、ph值、培養(yǎng)基組分、溶氧6.固定化：卡拉膠第八節(jié) 重組工程菌的培養(yǎng)一、基因工程菌的培養(yǎng)方式：1分批培養(yǎng)；2補(bǔ)料分批培養(yǎng)；3連續(xù)培養(yǎng)；4透析培養(yǎng)；5固定化培養(yǎng)2. 補(bǔ)料分批培養(yǎng) 是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng),經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基（溶氧控制、流加補(bǔ)料），使菌體進(jìn)一步生長(zhǎng)的方法。良好的生

27、長(zhǎng)環(huán)境，延長(zhǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，獲得高密度菌體。對(duì)發(fā)酵影響較大的幾個(gè)因素有：培養(yǎng)基的影響接種量的影響溫度的影響溶解氧的影響誘導(dǎo)時(shí)機(jī)的影響誘導(dǎo)表達(dá)程序的影響7.ph的影響接種量是指移入的種子液體積和培養(yǎng)液體積的比例。最佳化的工藝是獲得（七最）:最快周期、最高產(chǎn)量、最好質(zhì)量、最低消耗、最大安全性、最周全的廢物處理效果和最低失敗率。第九節(jié) 高密度發(fā)酵高密度發(fā)酵：培養(yǎng)液中工程菌的菌體濃度在50g dcw/l（細(xì)胞干重/l）以上，最高200g dcw/l高密度發(fā)酵特點(diǎn) ：菌體高密度，總表達(dá)量高；生物反應(yīng)器體積??；單位體積生產(chǎn)能力高；生產(chǎn)周期短，分離成本小一、影響高密度發(fā)酵的因素1.培養(yǎng)基：c源、n源種類和含量；

28、c:n含量比值；微量元素；無(wú)機(jī)鹽（磷影響表達(dá)質(zhì)粒的復(fù)制速率）2.溶氧濃度：空氣分離系統(tǒng)提高氧分壓；透明顫菌血紅蛋白基因克隆到菌體中，提高氧傳質(zhì)能力；菌體與小球藻混合培養(yǎng)，藻細(xì)胞光合作用產(chǎn)氧供菌體呼吸。3.ph值：大腸桿菌產(chǎn)酸、co2必須加堿調(diào)節(jié)ph值4.溫度：控制菌體生長(zhǎng)，溫控誘導(dǎo)表達(dá)（誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和持續(xù)時(shí)間，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，2min）5.代謝副產(chǎn)物： c源物質(zhì)供應(yīng)超過(guò)三羧酸循環(huán)或電子傳遞鏈能力，產(chǎn)生乙酸，抑制菌體生長(zhǎng)和蛋白表達(dá)。采取流加補(bǔ)料法，或加入甘氨酸、甲硫氨酸抑制乙酸生成。二、實(shí)現(xiàn)高密度發(fā)酵的方法1.發(fā)酵條件的改進(jìn)（1）培養(yǎng)基的選擇：（2）建立流加式培養(yǎng)方式；（3）提高供氧能力2.構(gòu)建產(chǎn)乙酸能

29、力低的工程化宿主菌（1）阻斷乙酸生產(chǎn)的主要途徑：（2）對(duì)碳代謝流進(jìn)行分流：（3）限制進(jìn)入糖酵解途徑的碳代謝流；（4）引入血紅蛋白基因。3.構(gòu)建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌第十節(jié) 基因工程藥物的分離純化三.細(xì)胞破碎1.物理破碎法（1）高壓勻漿法（2）高速珠磨法（3）超聲破碎法（4）高壓擠壓法2.化學(xué)破碎法（1）滲透沖擊（2）增溶法（3）脂溶法3.生物破碎法：酶溶法四.固液分離1.離心沉淀法2.膜過(guò)濾法3.雙水相萃取五、重組蛋白的分離純化技術(shù)技術(shù)條件溫和能保持產(chǎn)物生物活性。選擇性好，能從復(fù)雜的混合物中有效的將目的產(chǎn)物分離，達(dá)到較高的純化倍數(shù)。收率要高。兩個(gè)技術(shù)間能直接銜接，不需要對(duì)物料加以處理。

30、純化過(guò)程要快，滿足高生產(chǎn)率的要求。目的產(chǎn)物的分離純化 蛋白質(zhì)分離純化方法的設(shè)計(jì)根據(jù)其分子的理化性質(zhì)和生物學(xué)特性來(lái)決定。分離純化的方法：色譜分離方法 離子交換層析（ iec）離子交換層析的基本原理是通過(guò)帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進(jìn)行交換，從而達(dá)到分離的目的。它具有分辨率高容量大操作容易，該法已成為多肽蛋白質(zhì)核酸分離純化的重要方法。反相色譜（rpc）和 疏水色譜（hic）反相色譜和疏水色譜是根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性的差異來(lái)分離純化的。反相色譜是利用溶質(zhì)分子中非極性基團(tuán)與非極性固定相之間相互作用力的大小以及溶質(zhì)分子中極性基團(tuán)與流動(dòng)相中極性分子之間在相反方向作用力的大小差異進(jìn)行分離的。常用固定相

31、為硅膠烷基鍵合相。流動(dòng)相為低離子強(qiáng)度的酸性水溶液，加入能與水互溶的乙腈、甲醇、異丙醇等有機(jī)溶劑。由于固定相骨架疏水性強(qiáng)，吸附的蛋白質(zhì)需用有機(jī)溶劑才能洗脫下來(lái)。疏水層析的原理與反相色譜的原理相似，主要是利用蛋白質(zhì)分子表面上的疏水區(qū)域和介質(zhì)中的疏水基團(tuán)之間的相互作用，無(wú)機(jī)鹽的存在能使相互作用力增強(qiáng)。固定相介質(zhì)表面的疏水性比反相色譜介質(zhì)表面的疏水性弱。為有機(jī)聚合物鍵合相或大孔硅膠鍵合相。流動(dòng)相為ph68鹽水溶液。高鹽濃度時(shí)，蛋白質(zhì)分子中疏水性部分與介質(zhì)的疏水基團(tuán)產(chǎn)生疏水性作用而被吸附；鹽濃度降低時(shí)，蛋白質(zhì)疏水性作用減弱，目的蛋白質(zhì)被逐步洗脫下來(lái)，蛋白質(zhì)疏水性越強(qiáng)，洗脫時(shí)間越長(zhǎng)。與反相色譜相比，疏水層

32、析回收率較高，蛋白質(zhì)變性可能性小。親和層析（ac）親和層析是利用固定化配基與目的蛋白質(zhì)之間特異的生物親和力進(jìn)行吸附，如抗體與抗原、受體與激素、酶與底物之間的作用。配基：在親和層析中起可逆性結(jié)合的特異性物質(zhì)。載體：與配基結(jié)合的支撐物。親和層析可分三步：配基固定化吸附目的物樣品解吸凝膠過(guò)濾層析凝膠過(guò)濾是以具有大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì)，小分子能進(jìn)入孔內(nèi)，在柱中緩慢移動(dòng)，而大分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，快速移動(dòng)，利用這種移動(dòng)差別可使大分子與小分子分開(kāi)。根據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量和蛋白質(zhì)分子的動(dòng)力學(xué)體積的大小差異，可以利用凝膠過(guò)濾來(lái)分離純化目的蛋白。主要應(yīng)用兩個(gè)方面：脫鹽和更換緩沖液蛋白質(zhì)分子的分級(jí)分離。在產(chǎn)

33、品的形成階段前用于除去產(chǎn)物的多聚體及降解產(chǎn)物。分離純化工藝應(yīng)遵循以下原則：具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性盡可能減少組成工藝的步驟各技術(shù)步驟間要相互適應(yīng)和協(xié)調(diào)工藝過(guò)程中盡可能少用試劑工藝所用時(shí)間要短工藝和技術(shù)必須收率高、易操作、能耗低具有較高的安全性第十二節(jié) 基因工程藥物的質(zhì)量控制基因工程藥物的質(zhì)量控制 產(chǎn)品的鑒定、純度、活性、安全性、穩(wěn)定性和一致性。產(chǎn)品的保存液態(tài)保存低溫保存在穩(wěn)定ph條件下保存高濃度保存加保護(hù)劑保存固態(tài)保存：冷凍干燥（預(yù)凍、升華、解吸干燥去除吸附水）第十三節(jié)基因工程藥物制造實(shí)例干擾素（interferon，ifn）是人體細(xì)胞分泌的一種活性蛋白質(zhì)，具有廣泛的抗病毒抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性

34、，是人體防御系統(tǒng)的重要組成部分。第三章 動(dòng)物細(xì)胞工程制藥第二節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)和生理特點(diǎn)離體培養(yǎng)細(xì)胞類型貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)須有貼附的支持物表面，自身分泌或培養(yǎng)基 中提供的粘附因子才能在該表面上生長(zhǎng)。兩種形態(tài)： 成纖維細(xì)胞型（來(lái)源于中胚層組織的細(xì)胞）；上皮細(xì)胞型（來(lái)源于內(nèi)、外胚層組織的細(xì)胞）懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)。如淋巴細(xì)胞。兼性貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)不嚴(yán)格依賴支持物。如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞，小鼠l929細(xì)胞。三、動(dòng)物細(xì)胞的生理特點(diǎn)（） 動(dòng)物細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng)：（）細(xì)胞生長(zhǎng)需貼附于基質(zhì)，并有接觸抑制現(xiàn)象。（）正常二倍體細(xì)胞的生長(zhǎng)壽命是有限的。原代培養(yǎng)；（4)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)周圍環(huán)境十分敏感：

35、對(duì)理化因素敏感，()動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基要求高：必需氨基酸（12種）、維生素（8種）、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、葡萄糖、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、貼壁因子等。()動(dòng)物細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。四、動(dòng)物細(xì)胞來(lái)源的藥物的種類() 動(dòng)物細(xì)胞多肽與蛋白質(zhì)類藥物()動(dòng)物酶與輔酶類藥物()動(dòng)物核酸類藥物()動(dòng)物糖類藥物：()動(dòng)物脂類藥物動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)的藥物特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn):分泌胞外、純化方便、翻譯后修飾蛋白糖基化，與天然產(chǎn)品一致。缺點(diǎn):培養(yǎng)條件高、成本貴、產(chǎn)量低，安全性問(wèn)題。第三節(jié) 生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的要求和獲得原代細(xì)胞二倍體細(xì)胞系3.轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：4.融合細(xì)胞系：5.重組工程細(xì)胞系第四節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基細(xì)胞體外培養(yǎng)

36、基本條件:無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)充足,防止有害物質(zhì)氧氣隨時(shí)清除代謝有害物質(zhì)良好的生存外環(huán)境：ph、滲透壓、離子濃度及時(shí)分種，適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度二、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基的種類和組成天然培養(yǎng)基：血清、羊水、腹水等。成分復(fù)雜、成分不穩(wěn)定，來(lái)源少。2.合成培養(yǎng)基（常用培養(yǎng)基成分及配方）氨基酸 維生素 糖類 無(wú)機(jī)鹽 其它成分添加小牛血清的作用提供生長(zhǎng)因子和激素提供貼附因子和伸展因子提供結(jié)合蛋白（識(shí)別離子、激素、維生素、脂質(zhì)）提供必需脂肪酸和微量元素3. 無(wú)血清培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：提高重復(fù)性（細(xì)胞）減少微生物污染（病毒）供應(yīng)充足穩(wěn)定細(xì)胞產(chǎn)品易純化避免血清因素對(duì)細(xì)胞的毒性減少血清中蛋白對(duì)生物測(cè)定的干擾第五節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法一、細(xì)

37、胞分離 二、細(xì)胞計(jì)數(shù) 三、細(xì)胞傳代 四、細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇第六節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞大量培養(yǎng)方法和操作方式一、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法1.懸浮培養(yǎng)2.貼壁培養(yǎng)3.貼壁-懸浮培養(yǎng)（假懸浮培養(yǎng)）二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式1.分批式操作2.半連續(xù)式操作3.灌流式操作:取出、補(bǔ)充培養(yǎng)基，細(xì)胞仍保留在反應(yīng)器內(nèi)。優(yōu)點(diǎn)：1.營(yíng)養(yǎng)好，代謝廢物少。2.細(xì)胞密度高（107108個(gè)/ml）產(chǎn)量高。3.產(chǎn)品罐內(nèi)停留時(shí)間短。4.培養(yǎng)基比消耗率低。第七節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器一、動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的類型攪拌罐式生物反應(yīng)器氣升式生物反應(yīng)器中空纖維式生物反應(yīng)器透析袋或膜式生物反應(yīng)器固定床或流化床式生物反應(yīng)器理想的動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的基本要

38、求1.生物反應(yīng)器的材料無(wú)毒2.生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)：滿足傳質(zhì)、傳熱、混合的功能3.密封良好，避免污染4.自動(dòng)檢測(cè)、調(diào)節(jié)控制精度高5.長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn) 6.容器內(nèi)表面光滑，無(wú)死角7.拆裝、連接、清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒8.設(shè)備成本低第八節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)品純化方法1.離心2.離子交換層析3.凝膠過(guò)濾4.親和層析5.鹽析和有機(jī)溶劑沉淀6.透析7.高壓液相層析第十節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞制藥的前景與展望（一)、改進(jìn)表達(dá)載體，提高表達(dá)水平和產(chǎn)量 (二)、利用代謝工程，改進(jìn)培養(yǎng)工藝，降低生產(chǎn)成本 (三)、抑制細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)培養(yǎng)周期( 四)、采用糖基化工程，提高產(chǎn)品質(zhì)量 (五) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究 （六）、組織工程的研究第四章

39、抗體制藥第一節(jié) 概述抗體是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。抗體的產(chǎn)生：機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，b淋巴細(xì)胞被活化增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白。20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤是漿細(xì)胞癌變形成的惡性增殖性疾病。病人血清中出現(xiàn)同抗體結(jié)構(gòu)類似的球蛋白，統(tǒng)稱為免疫球蛋白(immunoglobulin,ig)。ig是化學(xué)結(jié)構(gòu)的概念，而抗體是生物學(xué)功能的概念。（所有抗體均是ig，但不是所有ig 都有抗體活性）多克隆抗體：病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)，因此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體（特異性低，易產(chǎn)生假陽(yáng)性）。1975年khler和milstei

40、n首先利用b淋巴細(xì)胞-雜交瘤技術(shù)制備出單克隆抗體。單克隆抗體（monoclonal antibody，mcab）：針對(duì)一個(gè)抗原決定簇，單一的b淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體。單克隆抗體具有高度特異性、均一性、來(lái)源穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)等特點(diǎn)，第二節(jié) 單克隆抗體及其制備制備單克隆抗體（mcab）是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞相融合，通過(guò)有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的。一、抗原與動(dòng)物免疫 制備特定抗原的單克隆抗體，首先要制備用于免疫的適當(dāng)抗原，再用抗原進(jìn)行動(dòng)物免疫。有的抗原可以用化學(xué)合成：地高辛。多數(shù)抗原物為混合物須經(jīng)免疫、篩選、克隆化。為使雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定，采用免疫

41、動(dòng)物和骨髓瘤細(xì)胞供體同一品系動(dòng)物進(jìn)行免疫。目前常用的骨髓瘤細(xì)胞系多來(lái)自balb/c小鼠和lou大鼠，因此免疫動(dòng)物也采用相應(yīng)的品系?？寺』?是指單個(gè)細(xì)胞通過(guò)無(wú)性繁殖而獲得細(xì)胞集團(tuán)的整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程（單個(gè)細(xì)胞生物學(xué)特性和功能相同）。第三節(jié) 基因工程抗體及其制備雜交瘤單抗為鼠源性，應(yīng)用人體產(chǎn)生人抗鼠抗體及毒副作用。對(duì)鼠源性的單抗進(jìn)行基因加工和改造。目的：降低免疫源性；降低相對(duì)分子量。人-鼠嵌合抗體、改形抗體 、小分子抗體?；蚬こ炭贵w的類型：（一） 人鼠嵌合抗體 （二）、改形抗體 （三）、fab與fv抗體（小分子抗體） （四）、單鏈抗體 （五）、單域抗體和分子識(shí)別單位（最小識(shí)別單位）第四節(jié) 多功能抗體及

42、其制備一、雙功能抗體 是雙特性單鏈抗體。它是一種非天然性抗體。其結(jié)合抗原的兩個(gè)臂具有不同的特異性。構(gòu)建方法：化學(xué)交聯(lián)法生物學(xué)方法（雜種-雜交瘤）基因工程法第五節(jié) 抗體工程一、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的基本方法（）獲取目的基因（）抗體庫(kù)技術(shù)的載體（噬菌體 phagemid）（）淘篩（）表達(dá)與鑒定二、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn)（）模擬天然全套抗體庫(kù)（）避開(kāi)了人工免疫和雜交瘤技術(shù)（）可獲得高親和力的人源化抗體三、基因工程抗體表達(dá)（）原核細(xì)胞表達(dá)(融合表達(dá)，分泌表達(dá))（）真核細(xì)胞表達(dá)(分泌表達(dá))（）轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)（）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá)第六節(jié) 抗體診斷試劑抗體診斷試劑的類型： 一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑 二、免疫標(biāo)記

43、技術(shù)用的抗體類試劑 三、導(dǎo)向診斷藥物 四、cd單克隆抗體系列第七節(jié) 抗體治療藥物抗體治療藥物的種類： 一、放射性同位素標(biāo)記的抗體治療藥物 二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物 三、毒素偶聯(lián)的抗體藥物第五章 植物細(xì)胞工程制藥第一節(jié) 基本概念植物細(xì)胞工程：以植物細(xì)胞為單位應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，在離體條件下培養(yǎng)、繁殖和精細(xì)操作，使細(xì)胞的某些生物學(xué)特性按人們的意愿改變，從而改良品種、加速繁殖或得到有用的物質(zhì)的一門(mén)科學(xué)技術(shù)。1. 植物細(xì)胞的全能性：指任何具有完整的細(xì)胞核的活植物細(xì)胞，都攜帶一套完整的基因組（染色體），并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。2. 植物的分化:胚胎分化和器官分化，受精卵胚種

44、子植株3. 脫分化:一定條件下，原來(lái)已經(jīng)分化,并且具有一定功能的體細(xì)胞(或性細(xì)胞)，喪失了原有的結(jié)構(gòu)和功能,又重新恢復(fù)了分裂功能,就叫做植物細(xì)胞的脫分化。4. 再分化:已脫分化的細(xì)胞和組織再次分化發(fā)育成為完整植株。 愈傷組織形成胚狀體一般有兩個(gè)途徑：由體細(xì)胞或性細(xì)胞，通過(guò)脫分化形成胚狀體通過(guò)愈傷組織直接形成胚狀體。5. 植物組織和器官的培養(yǎng) ：在無(wú)菌條件下，將離體的植物器官（根尖、莖尖、葉、花、果實(shí)、種子等）、組織（花藥、胚乳、皮層等）、細(xì)胞（體細(xì)胞、生殖細(xì)胞等）、胚胎（成熟或未成熟的胚）、原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予人工控制的培養(yǎng)條件，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織或叢生芽或長(zhǎng)成新的完整的植株

45、的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。也叫“離體培養(yǎng)”或“試管培養(yǎng)”。6. 細(xì)胞培養(yǎng)：形成單細(xì)胞無(wú)性繁殖系。7. .植物無(wú)菌培養(yǎng)：（1）幼苗及植株的培養(yǎng)（2）愈傷組織培養(yǎng)（外植體，細(xì)胞聚集體）（3）懸浮培養(yǎng)（單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)的液體培養(yǎng)）（4）器官培養(yǎng)（5）胚胎培養(yǎng)8. 、分生組織培養(yǎng)：生長(zhǎng)錐培養(yǎng),人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)莖端分生組織細(xì)胞。如:莖尖0.1mm8.、外植體：植物組織培養(yǎng)中用來(lái)離體無(wú)菌培養(yǎng)的離體材料，可以是器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體等。如：根、莖、葉、花、果實(shí)、胚珠、花藥、花粉等。9、.愈傷組織：外植體產(chǎn)生的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。10.、無(wú)性繁殖系：克隆，同一外植體獲得很多無(wú)性繁殖后代。11、.突變體：經(jīng)誘變處

46、理而變異成新細(xì)胞12、.繼代培養(yǎng)：連續(xù)多代培養(yǎng)13、.初級(jí)代謝產(chǎn)物：核酸、蛋白質(zhì)、糖類14、形態(tài)發(fā)生：指細(xì)胞再生植株的過(guò)程或個(gè)體發(fā)育中機(jī)體及其器官形態(tài)結(jié)構(gòu)的形成過(guò)程。外植體 (脫分化)愈傷組織（再分化）生長(zhǎng)點(diǎn)（形態(tài)發(fā)生） 芽、根小植株15、次級(jí)代謝產(chǎn)物:1.有明顯的分類學(xué)區(qū)域界限2.其生物合成需要在一定條件下才能發(fā)生3.缺乏明確的生理功能4.是生命活動(dòng)的多余成分主要有：生物堿、黃酮類、萜類、有機(jī)酸、木質(zhì)素、皂苷類、多元酚類16.次級(jí)代謝作用是由特異蛋白質(zhì)調(diào)控產(chǎn)生的內(nèi)源化合物的合成、代謝及分解作用的綜合過(guò)程。第三節(jié) 植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性 （一） 、植物細(xì)胞的形態(tài) （二）、植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征：

47、細(xì)胞壁、液泡、質(zhì)體 （三）、植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分 （四）、植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性第四節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)二、培養(yǎng)基及其組成（1）無(wú)機(jī)鹽（2）碳源（3）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（5種天然激素：生長(zhǎng)素、分裂素、赤霉素、脫落酸、乙烯 ）（4）有機(jī)氮源（5）維生素。三、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)（方法） （1）.成批培養(yǎng)法： （2）.半連續(xù)培養(yǎng)法： 3.連續(xù)培養(yǎng)法： 4.固定化培養(yǎng)法： 固定化反應(yīng)器：網(wǎng)狀多孔板；尼龍網(wǎng)套；中空纖維膜 優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞位置固定，易于獲得高密度細(xì)胞群及維持細(xì)胞間理化梯度，利于細(xì)胞組織化，易于控制培養(yǎng)條件及獲得較高含量的次級(jí)代謝產(chǎn)物。第五節(jié) 影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物累積的

48、因素影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物生產(chǎn)和累積的因素：1.生物條件：外植體，季節(jié)，休眠，分化2.物理?xiàng)l件：溫度，光（光照時(shí)間，光強(qiáng)，光質(zhì)），通氣（o2），ph和滲透壓3.化學(xué)條件：無(wú)機(jī)鹽（n,p,k），碳源，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，維生素，氨基酸，核酸，抗生素，天然物質(zhì)，前體4.工業(yè)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)罐類型，通氣，攪拌和培養(yǎng)方法一、外植體選擇 二、培養(yǎng)條件的影響：1.培養(yǎng)環(huán)境的內(nèi)在因素 2.兩步培養(yǎng)法 3.培養(yǎng)環(huán)境的外部因素第六節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器一、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生物反應(yīng)器的類型（1）.機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器（2）.鼓泡塔生物反應(yīng)器（3）.氣升式生物反應(yīng)器（4）.轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器（）固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器。

49、.各種生物反應(yīng)器的性能比較 1.機(jī)械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) ：根據(jù)植物細(xì)胞的特性，機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器通常是在微生物發(fā)酵罐的基礎(chǔ)上改進(jìn)設(shè)計(jì)的。攪拌裝置要減少剪切力，一般改葉輪式為螺旋式；因?yàn)橹参锛?xì)胞生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，需要隨時(shí)補(bǔ)充水分和營(yíng)養(yǎng)，因此必須設(shè)計(jì)加液裝置；由于植物細(xì)胞的生理活動(dòng)需要新鮮空氣，且細(xì)胞代謝也可能產(chǎn)生有害氣體，所以必須設(shè)計(jì)通氣裝置；為便于取樣觀察，一般還設(shè)計(jì)有取樣口。優(yōu)點(diǎn)：易于控制溫度、 ph、溶氧及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度，混合均勻。2.鼓泡塔生物反應(yīng)器反應(yīng)器底部的噴嘴及多孔板實(shí)現(xiàn)氣體混合分散。優(yōu)點(diǎn)：適于對(duì)剪切敏感的細(xì)胞的培養(yǎng)，無(wú)運(yùn)動(dòng)部件，不易染菌，相對(duì)高的熱量和質(zhì)量傳遞，放大相對(duì)容易。缺點(diǎn)：流體流動(dòng)

50、形式難以確定，混合不勻，缺乏非牛頓流體的流動(dòng)與傳遞特性的數(shù)據(jù)。3.氣升式培養(yǎng)系統(tǒng)考慮到機(jī)械攪拌式反應(yīng)器的剪切作用難以避免，同時(shí)攪拌器轉(zhuǎn)動(dòng)的軸封處容易泄漏造成污染。因此，發(fā)展出空氣提升式生物反應(yīng)器，它是最適合培養(yǎng)植物細(xì)胞的反應(yīng)器之一。優(yōu)點(diǎn)：低剪切力，較好的混合，較高的氧傳遞效果。無(wú)運(yùn)動(dòng)部件，不易染菌，操作費(fèi)用低。改善營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)：增加培養(yǎng)細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面；避免細(xì)胞代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)在局部積累而對(duì)細(xì)胞自身產(chǎn)生毒害；缺點(diǎn):高密度培養(yǎng)時(shí)混合不均勻。4.轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)促進(jìn)反應(yīng)器內(nèi)氧及營(yíng)養(yǎng)物的混合。優(yōu)點(diǎn)：在高密度培養(yǎng)時(shí)有高的傳氧能力。缺點(diǎn)：放大困難，大規(guī)模操作困難。5.固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器：定義

51、：指固定在載體（惰性基質(zhì)）上，在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命活動(dòng)的細(xì)胞。采用固相培養(yǎng)，細(xì)胞有一定程度的分化發(fā)育，從而刺激調(diào)控代謝物合成的基因表達(dá)，促進(jìn)次級(jí)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。方法：吸附法（共價(jià)交聯(lián)，表面固定化，膜固定化）；包埋法（多孔載體，凝膠包埋）；材料：聚氨基甲酸乙酯泡沫，中空纖維素固定化植物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)：平床培養(yǎng)系統(tǒng)立體培養(yǎng)系統(tǒng)植物細(xì)胞固定化培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：1.可保護(hù)細(xì)胞免受剪切。2.細(xì)胞可長(zhǎng)時(shí)間重復(fù)使用，更換培養(yǎng)基帶走代謝物。3.易于實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高密度培養(yǎng)。4.細(xì)胞間接觸良好，易于分化，有利于次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成。5.減少細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性。6.易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)化操作。缺點(diǎn)：固定化培養(yǎng)的植物細(xì)胞其代謝產(chǎn)物必

52、須分泌到細(xì)胞外，多數(shù)植物細(xì)胞次級(jí)代謝產(chǎn)物存在于細(xì)胞內(nèi)或分泌到液泡中。植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)程序： 選材： 培養(yǎng)器官、組織的選擇：取有藥效成分的部位，且該部位較易成愈傷組織。 細(xì)胞株系建立：建立懸浮細(xì)胞繁殖體系（液體培養(yǎng)）。 大量培養(yǎng)：將選出的優(yōu)良細(xì)胞株擴(kuò)大繁殖后，可作為細(xì)胞工廠化培養(yǎng)的生產(chǎn)“種子”，進(jìn)行大量培養(yǎng)。 產(chǎn)品提取與純化：從植物細(xì)胞培養(yǎng)物中提取和純化有用的產(chǎn)品。應(yīng)用：大規(guī)模培養(yǎng)植物細(xì)胞；生產(chǎn)有用物質(zhì)。生物轉(zhuǎn)化：利用酶的作用將底物轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物。植物生物反應(yīng)器選擇標(biāo)準(zhǔn)（1）.供氧能力及氣泡分散程度（2）.剪切力大小及對(duì)細(xì)胞的影響（3）.高密度培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液的混合程度（4）. 溫度、ph及營(yíng)養(yǎng)

53、物質(zhì)的控制能力（5）.細(xì)胞團(tuán)大小的控制能力（6）.易于放大 植物細(xì)胞制藥的進(jìn)展與展望：一、誘導(dǎo)子在植物細(xì)胞工程研究中的應(yīng)用 二、前體飼喂 三、兩相法培養(yǎng) 四、轉(zhuǎn)基因技術(shù)在次級(jí)代謝產(chǎn)物生產(chǎn)中的應(yīng)用 五、植物生物轉(zhuǎn)化技術(shù)與生物制藥第六章 酶工程制藥第一節(jié) 概 述一、酶的特性 酶是由活細(xì)胞產(chǎn)生的具有特殊催化功能的一類蛋白質(zhì)。 特點(diǎn)：催化效率高專一性強(qiáng)反應(yīng)條件溫和催化活性受到調(diào)節(jié)和控制酶工程：是酶學(xué)和工程學(xué)相互滲透結(jié)合發(fā)展而形成一門(mén)新的技術(shù)學(xué)科。酶工程是從應(yīng)用的目的出發(fā)研究酶、應(yīng)用酶的特異性催化功能，并通過(guò)工程化將相應(yīng)原料轉(zhuǎn)化成有用物質(zhì)的技術(shù)。酶工程的研究?jī)?nèi)容：（1）.酶的分離、純化、大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用

54、（2）.酶和細(xì)胞的固定化及酶反應(yīng)器的研究（傳感器，檢測(cè)器）（3）.酶生產(chǎn)中基因工程技術(shù)的應(yīng)用及遺傳修飾酶（突變酶）的研究（4）.酶的分子改造與修飾，結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系的研究（5）.有機(jī)相中酶反應(yīng)的研究（6）.酶的抑制劑、激活劑的研究（7）.抗體酶、核酸酶的研究（8）.模擬酶及酶分子的人工設(shè)計(jì)研究三、酶的來(lái)源： （1）化學(xué)合成法，（2）從微生物中提取分離利用微生物生產(chǎn)酶制劑的優(yōu)點(diǎn)：1.微生物種類繁多，酶的種類齊全2.生長(zhǎng)繁殖快，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)量高3.培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，原料來(lái)源豐富，價(jià)廉經(jīng)濟(jì)效益好4.微生物又較強(qiáng)的適應(yīng)性，可通過(guò)基因工程培育新的高產(chǎn)菌株五、酶在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用1.疾病診斷：2.疾病治療：3

55、.藥物生產(chǎn)：4.分析檢測(cè)：第二節(jié) 酶和細(xì)胞固定化固定化酶的定義：固定化酶是指限制或固定于特定空間位置的酶，是經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動(dòng)受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑，屬于修飾酶。酶的固定化：是指制備固定化酶的過(guò)程。固定化酶的特點(diǎn)具有生物催化劑的功能，又有固相催化劑的功能。優(yōu)點(diǎn)：可多次使用。反應(yīng)后，酶、底物、產(chǎn)物易分開(kāi)，產(chǎn)物中無(wú)殘留酶，易純化，產(chǎn)品質(zhì)量高。反應(yīng)條件易控制，可實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化反應(yīng)的連續(xù)化和自動(dòng)控制。酶的利用效率高。比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng)。缺點(diǎn)：固定化時(shí)，酶活力有損失。初始投資較大。只能用于可溶性底物，而且分子量要小。胞內(nèi)酶必須經(jīng)過(guò)酶的分離純化過(guò)程。與完整菌體

56、相比不適宜多酶反應(yīng)，特別時(shí)需要輔助因子的反應(yīng)。酶和細(xì)胞固定化方法與制備技術(shù)酶和細(xì)胞固定化方法包括：載體結(jié)合法、交聯(lián)發(fā)、包埋法、選擇性熱變性法固定化酶制備技術(shù) 吸附法制備固定化酶技術(shù)包埋法制備固定化酶技術(shù)界面沉降法界面聚合法交聯(lián)法制備固定化酶技術(shù)共價(jià)結(jié)合法制備固定化酶技術(shù)二、固定化細(xì)胞的制備固定化細(xì)胞的定義將細(xì)胞限制或定位于特定空間位置的方法稱為細(xì)胞固定化技術(shù)。被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。細(xì)胞的固定化，避免了冗繁的酶純化手續(xù)，更有利于多酶反應(yīng)。用于固定化的細(xì)胞可以是活躍生長(zhǎng)的細(xì)胞，也可以是死細(xì)胞和靜止細(xì)胞。固定化細(xì)胞的特點(diǎn)有細(xì)胞特性，生物催化劑功能，固相催化劑特點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)：無(wú)須

57、進(jìn)行酶的分離純化保持酶的原始狀態(tài)，酶回收率高細(xì)胞內(nèi)酶比固定化酶穩(wěn)定性高細(xì)胞內(nèi)酶輔助因子可自動(dòng)再生細(xì)胞本身含多酶體系，可催化一系列反應(yīng)抗污染能力強(qiáng)缺點(diǎn)：利用的僅是胞內(nèi)酶，酶多副產(chǎn)物多細(xì)胞膜、細(xì)胞壁和載體都存在擴(kuò)散限制作用載體形成的空隙大小影響高分子底物的通透性固定化細(xì)胞的制備技術(shù) 載體結(jié)合法。包埋法（交聯(lián)法 無(wú)載體法第三節(jié) 固定化酶和固定化細(xì)胞的反應(yīng)器一、反應(yīng)器的類型和特點(diǎn)間歇式攪拌罐反應(yīng)器（bstr）用于游離酶,反應(yīng)后隨即放料,不回收游離酶。連續(xù)流動(dòng)攪拌罐反應(yīng)器(cstr)連續(xù)進(jìn)料、連續(xù)出料填充床反應(yīng)器（pbr）固定化酶填充于床層內(nèi)。反應(yīng)器內(nèi)的流體的流動(dòng)形態(tài)為平推流（活塞流）流形。又稱平推流反應(yīng)器（pfr）底物以恒定流速通過(guò)反應(yīng)床。流化床反應(yīng)器（fbr）底物以足夠大的流速向上通過(guò)固定化酶床層，使固體顆粒處于流化狀態(tài)，達(dá)到混合的目的。流速