2017-2018學年高中生物 第一章 無菌操作技術實踐 第1課時 微生物的分離和培養(yǎng)同步備課教學案選修1

1、學必求其心得，業(yè)必貴于專精第1課時微生物的分離和培養(yǎng)學習導航1。簡述高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法及注意事項。2。掌握制備細菌培養(yǎng)基的方法。3.學會利用無菌操作技術接種與培養(yǎng)大腸桿菌。重難點擊1。培養(yǎng)基的配制方法及常見種類.2.大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng)。一、微生物分離和培養(yǎng)的基本理論1.無菌操作技術實驗室常利用高溫處理達到滅菌效果，包括采用干熱滅菌或濕熱滅菌等方法。（1）干熱滅菌方法是將擬滅菌的物品放在干熱滅菌箱內，在160170 溫度下加熱12 h以達到滅菌的目的.(2）濕熱滅菌方法常采用高壓蒸汽滅菌鍋進行，如手提式高壓蒸汽滅菌鍋就是實驗室常用的滅菌儀器之一。高壓蒸汽滅菌鍋的使用包括加水、裝鍋、加

2、熱排氣、保溫保壓、出鍋等步驟.2。配制培養(yǎng)基（1)培養(yǎng)基概念：為人工培養(yǎng)微生物而制備的適合微生物生長、繁殖或積累代謝產物的營養(yǎng)基質。(2）培養(yǎng)基類型天然培養(yǎng)基：采用動植物組織或微生物細胞以及它們的提取物或粗消化物配制而成，如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。優(yōu)點:取材便利、營養(yǎng)豐富、配制簡便；缺點：營養(yǎng)成分難以控制、實驗結果的重復性較差。合成培養(yǎng)基：由準確稱量的分析純等級別的高純度化學試劑加蒸餾水配制而成，如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基。優(yōu)點：化學成分及其含量明確、實驗的可重復性好；缺點：配制繁瑣、成本較高.(3)培養(yǎng)基成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物質）、氮源（提供氮元素的物質)和無機鹽等最基本的物質.（4)

3、培養(yǎng)基的配制原則：在配制培養(yǎng)基時，根據(jù)擬培養(yǎng)的微生物的不同需要,有時還要加入維生素等特殊的營養(yǎng)物質,并要調節(jié)培養(yǎng)基的ph使之滿足微生物生長的需要。3.接種微生物（1)接種的概念:在無菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過程。(2)常用的接種工具：玻璃涂布器、接種針、接種環(huán)等。（3)接種方法用接種針進行穿刺接種。用接種環(huán)進行斜面接種或在固體培養(yǎng)基平板上進行劃線接種.用玻璃涂布器進行涂布平板接種等.1.“無菌操作”與人們的生活休戚相關，無時無處不在。在日常生活、生產實踐、自身健康防護中,有哪些“無菌操作”的例子？答案日常生活、生產實踐、自身健康防護中“無菌操作”的例子分別有：(1)被褥、鞋襪要常曬；肉

4、制品儲存時用鹽腌等。（2)家畜閹割后，要在其傷口處涂抹一些酒精或白酒；初冬楊樹樹干涂刷生石灰水等.（3)打針時，注射部位要用酒精棉球擦洗，一般要在其傷口處涂抹一些碘酒。2。實驗室常利用高溫處理達到滅菌效果,包括采用干熱滅菌或濕熱滅菌等方法。以下圖高壓蒸汽滅菌鍋的使用為例,探究無菌技術的方法.(1）高壓蒸汽滅菌的使用原理是什么？答案使用原理:將待滅菌物品放在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內；把鍋內的水加熱煮沸，并把其中原有的冷空氣徹底驅盡后將鍋密閉；再繼續(xù)加熱就會使鍋內的蒸汽壓逐漸上升,從而溫度也隨之上升到100 以上。(2)簡述手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用步驟。答案加水、裝鍋、加熱排氣、保溫保壓、出

5、鍋等。（3)消毒和滅菌的原理是什么？消毒和滅菌都能殺死所有的微生物嗎？是否適用于所有的生物和物品？答案都是使微生物的蛋白質變性，借此殺死微生物。滅菌可殺死處理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒僅能殺死物體表面或內部的部分微生物(一般不包括芽孢和孢子）。不是，無菌技術既要考慮效果,又要考慮操作對象的承受能力。例如，活體生物材料、操作者的雙手等只能消毒，而不能滅菌.（4)無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答案還能有效避免污染環(huán)境以及操作者自身被微生物感染。3。微生物的培養(yǎng)離不開培養(yǎng)基，根據(jù)下面某微生物培養(yǎng)基的配方回答下列問題：成分含量nano33 g

6、k2hpo41 gkcl0.5 gmgso47h2o0。5 gfeso40。01 gc6h12o630 gh2o1 000 ml青霉素0。1萬單位(1)該培養(yǎng)基的碳源、氮源分別是什么?答案碳源:c6h12o6；氮源:nano3。(2）依據(jù)物理性質用途劃分,該培養(yǎng)基屬于什么培養(yǎng)基？答案依據(jù)物理性質劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基；依據(jù)用途劃分，則屬于選擇培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基的原料,所培養(yǎng)微生物的同化作用的類型是異養(yǎng)型，培養(yǎng)的微生物可能是酵母菌或霉菌。（3）在固體培養(yǎng)基中加入的瓊脂能為微生物提供營養(yǎng)嗎？為什么？答案不能,微生物不能分解瓊脂。(4）普通培養(yǎng)基能培養(yǎng)病毒嗎？為什么？答案不能，因為病毒只能進行

7、活細胞寄生生活。整合提升（1）消毒與滅菌的區(qū)別項目條件結果常用的方法消毒較為溫和的物理學或化學方法僅殺死物體上絕大多數(shù)微生物（包括病原微生物和有害微生物的營養(yǎng)細胞）煮沸消費法（在100 下56 min可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢）、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法滅菌強烈的物理學或化學方法殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌（2）培養(yǎng)基的成分及功能營養(yǎng)要素含義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質構成生物體細胞的物質和一些代謝產物,有些是異養(yǎng)生物的能源物質無機碳源：co2、nahco3等；有機碳源:糖類、脂肪酸、花生餅粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物

8、質合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物無機氮源:nh3、銨鹽、硝酸鹽等;有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子(特殊營養(yǎng)物質）生長必不可少的微量有機物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內含量很高,在低等生物體內含量更高不僅是優(yōu)良的溶劑,而且可維持生物大分子結構的穩(wěn)定培養(yǎng)基、大氣、代謝產物等無機鹽為微生物提供除碳、氮元素以外的各種重要元素,包括某些大量元素細胞內的組成成分；生理調節(jié)物質;某些化能自養(yǎng)菌的能源;酶的激活劑培養(yǎng)基、大氣等環(huán)境1。高溫滅菌的原理是()a.每種微生物生長的最適溫度是一定的b。微生物對于高溫環(huán)境不適應c。高溫破壞了微生物細胞內的蛋白質、核酸，影響其生命活動d

9、.高溫降低了環(huán)境中氧的濃度答案c解析高溫的致死作用主要是使微生物的蛋白質和核酸等重要生物大分子物質發(fā)生不可逆轉的變性.2.下列關于培養(yǎng)基的說法正確的是()a.培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質b。培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基c。除水以外的無機物只能提供無機鹽d.無機氮源不可能提供能量答案a解析根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質，可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，在液體培養(yǎng)基中加入不同量的凝固劑如瓊脂可形成半固體或固體培養(yǎng)基；除水以外的無機物如nh4hco3,既可以是碳源,也可以是氮源，不僅僅提供無機鹽；無機氮源有時也能提供能量，如nh3可以為硝化細菌提供能量.方法鏈接培養(yǎng)基的種類分

10、類標準培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點作用物理性質固體培養(yǎng)基外觀固態(tài)微生物的分離、計數(shù)等半固體培養(yǎng)基容器放倒不致流出,劇烈振動則破散觀察微生物的運動、鑒定菌種等液體培養(yǎng)基呈液態(tài)常用于工業(yè)生產功能選擇培養(yǎng)基允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他微生物生長選擇、分離鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點,在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品鑒定成分來源天然培養(yǎng)基化學成分還不清楚工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產合成培養(yǎng)基化學成分完全了解在實驗室用來對微生物分析二、大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng)1.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2.斜面接種和培養(yǎng)大腸桿菌斜面接種大腸桿菌的主要目的有菌種轉移、擴大培養(yǎng)和保存純凈菌種等。具體操作步驟:3。

11、平板劃線分離和培養(yǎng)大腸桿菌在實驗室中，平板常常被用來培養(yǎng)、分離細菌等微生物。（1）牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的平板制作配制好的培養(yǎng)基裝瓶滅菌倒平板操作（a。打開瓶塞b。灼燒瓶口滅菌c.倒培養(yǎng)基d.倒置平板）。（2）平板劃線分離與培養(yǎng)大腸桿菌平板劃線法的含義：用帶有微生物的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而純化分離微生物的一種方法。注意事項：接種和劃線操作時需要在酒精燈火焰附近進行。1.利用培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時，首先要把微生物接種到培養(yǎng)基上。以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制為例，完成下列有關問題:（1）以下為細菌培養(yǎng)基的配制的流程，若將分裝步驟與調節(jié)ph步驟顛倒過來是否可行?答案不行。若分裝后再調節(jié)ph,

12、會使培養(yǎng)基中ph調節(jié)不均勻；還可能將培養(yǎng)基弄到試管口，易被污染。(2）從防止雜菌污染的角度思考，平板冷凝后將平板倒置的原因是什么?答案平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。2。斜面接種和培養(yǎng)大腸桿菌（1)下圖接種方法分別是什么？答案圖1是穿刺接種、圖2是斜面接種、圖3是平板劃線接種。（2)下表是關于接種操作步驟及其目的或分析說明，請完善下表。順序接種操作步驟分析說明或目的將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅將接種環(huán)滅菌，避免污染菌種在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔去試管棉塞避免雜菌污染菌

13、種將試管口通過火焰灼燒滅菌,防止試管口菌體污染培養(yǎng)基將滅過菌的接種環(huán)伸入菌種管，先將環(huán)部接觸斜面頂端使接種環(huán)冷卻,避免殺死菌種抽出接種環(huán)時，帶菌部分不要觸及管壁或通過火焰防止菌種沾于管壁，防止菌種被殺死在培養(yǎng)基斜面上由底部向上輕輕劃“s”型曲線，但不要將培養(yǎng)基表面劃破初步接種.劃破培養(yǎng)基不利于后續(xù)的繼續(xù)劃線，長出的菌落不標準將試管口與試管塞通過火焰23次，迅速塞緊試管防止雜菌污染將接過種的試管，放在恒溫箱（37 ）中培養(yǎng)24_h培養(yǎng)細菌，觀察接種和培養(yǎng)的結果3。平板劃線分離和培養(yǎng)大腸桿菌在實驗室中，平板常常被用來培養(yǎng)、分離細菌等微生物。思考回答下列相關問題：(1）平板劃線法接種菌種時，哪些操作

14、可防止雜菌污染？答案接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。劃完一個區(qū)域后,將接種環(huán)灼燒，冷卻后再劃下一區(qū)域.接種環(huán)沾取菌液時，要將試管口、棉塞等通過火焰。劃線時將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內。(2)在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線?答案避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。（3）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?答案操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目

15、逐漸減少，是為了保證菌落是由單一的細菌繁殖而成.（4)在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答案需要.劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。（5）在做第二次劃線以及其后的操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答案劃線后末端含有的細菌數(shù)目較少，每次從上一次的末端開始劃線能夠使細菌的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終分散成單個的細菌。（6）為何最后一次劃線不能與第一次劃線相連？答案最后一次劃線已經將細菌稀釋成單個的細胞，如果與第一次劃線相連則增加了細菌的數(shù)目，達不到純化的效果。3。關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中,不正確的是(）

16、a.配制固體培養(yǎng)基時一般要加適量的瓊脂b.分裝到試管中的液體培養(yǎng)基的高度約為試管高度的1/2c。待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時進行擱置斜面d.擱置斜面時，斜面長度不超過試管總長的1/2答案b解析在配制固體培養(yǎng)基時，瓊脂是最常用的凝固劑,a正確;分裝到試管中的液體培養(yǎng)基的高度約為試管長度的1/5，b錯誤；待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時進行擱置斜面,以防培養(yǎng)基因溫度過高而燙手，也不能過低,防止凝固后不易倒平板，c正確;擱置斜面時，將試管口部枕在高約1 cm的木條或其他合適高度的物體上,使其自然傾斜,斜面長度不超過試管總長的1/2，d正確。4.在接種操作的過程中，不正確的是()a。要將接種環(huán)灼燒滅菌b.取下

17、棉塞后要將試管口灼燒滅菌c.將接種環(huán)伸入試管內，先接觸長菌多的部位d.接種后還要將管口滅菌加塞答案c解析接種環(huán)伸入試管內后先接觸培養(yǎng)基斜面頂端或其他無菌體的培養(yǎng)基部位,待接種環(huán)冷卻后再接觸長菌部位。5。下圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為12345。下列操作方法正確的是(）a。操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌b。劃線操作須在火焰上進行c。在5區(qū)域中才可以得到所需菌落d。在12345區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌答案d解析在每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應是在火焰上灼燒，接種時劃線操作在火焰邊進行；在5個區(qū)域中，只要有單個活細菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落。一題多變（1)

18、平板劃線法所用培養(yǎng)基屬于什么培養(yǎng)基？答案瓊脂固體培養(yǎng)基。(2）如何確認制備的培養(yǎng)基是否合格？答案將一個未接種的培養(yǎng)基同接種培養(yǎng)基一起培養(yǎng)，若未接種的培養(yǎng)基無菌落生長，說明制備的培養(yǎng)基合格，否則需要重新制備。（3）如果培養(yǎng)基上長出的菌落相互重疊，則說明存在什么問題？答案說明劃線不充分，應該重新操作。（4）在第二區(qū)域內劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于哪里？答案接種環(huán)上的菌種直接來源于上次(第一區(qū)中)劃線的末端。1。下圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖,其中甲、乙、丙依次指(）a.安全閥、排氣閥、壓力表b。排氣閥、安全閥、壓力表c.安全閥、排氣閥、溫度表d。排氣閥、安全閥、溫度表答案a解析根據(jù)教材p8圖高

19、壓蒸汽滅菌鍋結構示意圖，可判斷甲、乙、丙分別為安全閥、排氣閥、壓力表。2.在培養(yǎng)基的配制過程中,具有如下步驟，其正確的順序為（）溶化調ph加棉塞包扎分裝稱量a。 b.c. d.答案b解析上述步驟中，培養(yǎng)基的配制順序為稱量溶化調ph分裝加棉塞包扎。3.下列有關平板劃線操作的敘述，不正確的是（)a.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物b。每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種c.在第二區(qū)域內劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液d.劃線結束后，灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者答案c解析平板劃線操作中，接種環(huán)挑取

20、菌種前灼燒的目的是避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物，以后每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線后殘留的菌種。劃線結束仍需灼燒接種環(huán)，是為了能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。從第二次劃線開始,每次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端。4.下列依次表示倒平板、接種的位置，以及劃線法接種的路徑示意圖，其中錯誤的是（）答案d解析倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，防止空氣中的雜菌污染,故a正確;接種時,左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙,右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內，故b正確；劃線時要從上一

21、次劃線的末端開始進行，讓菌種來源于上一次劃線末端，故c正確，d錯誤。5。下表所示為某微生物培養(yǎng)基的配方，請回答下列問題：成分含量nano33 gk2hpo41 gkcl0.5 gmgso47h2o0.5 gfeso40.01 gc6h12o630 gh2o1 000 ml青霉素0。1萬單位（1)按照物理性質,該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。（2)該培養(yǎng)基中的碳源是_。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都溶化后分裝前,要進行的是調整ph和_,倒平板時，一般需冷卻至_左右，在_附近操作。答案(1)液體（2)c6h12o6滅菌50 酒精燈火焰解析(1）培養(yǎng)基中沒有加入瓊脂，是液體培養(yǎng)基。(2）c6h12o6為微生物提供

22、碳源，培養(yǎng)基在分裝前要調整ph和滅菌,倒平板時,一般需冷卻至50 左右,在酒精燈火焰附近操作。課時作業(yè)學考達標1.在微生物的實驗室培養(yǎng)中，下列各項操作不需要在無菌條件下進行的是（)a。配制培養(yǎng)基 b。倒平板c.接種 d。培養(yǎng)答案a解析配制培養(yǎng)基時不需要無菌操作，因為配制后的培養(yǎng)基需要進行高壓蒸汽滅菌。2。下列關于滅菌和消毒的敘述中，不正確的是()a.滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細胞、芽孢和孢子b.消毒和滅菌實質上是相同的c.接種環(huán)用灼燒法滅菌d.常用的滅菌方法有加熱法、過濾法、紫外線法、化學藥品法答案b解析消毒是指用較為溫和的物理學或化學方法殺滅物體上絕大多數(shù)微生物的方法,而滅菌則是指采用

23、強烈的物理學或化學方法使物體內外所有的微生物永遠喪失生長和繁殖能力的方法,二者實質上不同。3。將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37 恒溫箱的目的是（）a.對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用b.對比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌c.沒必要放入未接種的培養(yǎng)基d.為下次接種時再使用答案b解析通過設計對照實驗，目的是為了檢測培養(yǎng)基制備是否成功,即是否生有雜菌。4。下列有關倒平板操作錯誤的是()a。將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上b.使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰c.將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上d.等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置答案c解析倒平板時，培養(yǎng)皿的蓋不能完全打開。5。在微生物的實驗室

24、培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是()a.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌b。接種純種細菌c。在適宜條件下培養(yǎng)d。防止外來雜菌的入侵答案d解析將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌只是無菌技術的一個方面，不代表無菌技術的全部，a錯誤;接種純種細菌是獲得純凈培養(yǎng)物的前提，b錯誤；接種方法和培養(yǎng)條件不能防止雜菌的污染,c錯誤;防止外來雜菌的入侵是獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵，d正確.6。在平板劃線操作中，錯誤的是(）a。將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅b。將燒紅的接種環(huán)在火焰旁邊冷卻c。接種環(huán)在平板上的劃線位置是隨機的d.在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過火焰答案

25、c解析接種環(huán)灼燒及接種前后試管口要通過火焰，其目的是為了防止雜菌污染,將接種環(huán)先冷卻再接種可以避免高溫燙死菌種，因此a、b、d都是正確的；在平板上劃線時，要劃三至五條平行線,而不是隨機劃線，因此c項錯誤.高考提能7。防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應用微生物的前提。下列敘述錯誤的是（)a。實驗室里可以用紫外線或化學藥物進行消毒b.接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌c。在實驗室中，切不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防止被微生物感染d。使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環(huán)境答案b解析為防止雜菌污染，研究和應用微生物時應進行消毒和滅菌,實驗

26、室可以用紫外線或化學藥物進行消毒，a項正確；接種環(huán)、接種針等金屬用具,直接在酒精燈火焰的充分燃燒層即外焰部位灼燒滅菌,b項錯誤;在實驗室中,切不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防止被微生物感染，c項正確;使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理,以免污染環(huán)境，d項正確。8.下列關于平板劃線操作正確的是(）a。使用已滅菌的接種針、培養(yǎng)皿，在操作過程中不再滅菌b。打開含菌種的試管,需通過火焰滅菌，取出菌種后，需馬上塞上棉塞c。將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內，劃三至五條平行線即可d.最后將平板倒置，放在培養(yǎng)箱中答案d解析在平板劃線時，已滅過菌的接種針在每次劃線后，都必須用灼燒滅菌法滅菌，以

27、防雜菌污染，a錯誤；盛有菌種的試管在打開或重新塞棉塞前，都需通過火焰灼燒滅菌，b錯誤；接種時用帶有微生物的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面分區(qū)劃線,不能將沾有菌種的接種環(huán)伸入平板內,c錯誤；平板凝固后，須將平板倒置，d正確。9.下圖為實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯誤的是(）a。步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行b。步驟中，待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋c。步驟中,每次劃線前后都需對接種環(huán)進行灼燒處理d.劃線接種結束后，將圖平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)答案b解析培養(yǎng)與純化大腸桿菌的過程中需要在酒精燈的火焰旁進行，故a正確；步驟中倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，故b錯誤；步驟接

28、種時,每次劃線前后都要對接種環(huán)進行灼燒處理,故c正確；劃線接種結束后，將平板倒置后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，防止冷凝水污染培養(yǎng)基，故d正確.10。接種是微生物培養(yǎng)和微生物選擇的必要步驟之一.下列關于接種的敘述中，不正確的是（)a.接種通常在酒精燈火焰附近進行b。接種之前要對接種環(huán)進行灼燒滅菌c.接種指無菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作d。接種時接種環(huán)要將培養(yǎng)基的表面劃破答案d解析為了保證無菌操作，整個接種過程都需要在酒精燈火焰旁進行,故a、b、c均正確；接種時接種環(huán)不能劃破培養(yǎng)基的表面，故d錯誤.11.下表是某種微生物培養(yǎng)基的配方表，請據(jù)表回答下面的問題：牛肉膏蛋白胨nacl瓊脂蒸餾水0。5 g1 g0

29、。5 g1 g200 ml（1)此培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分有五類，其中蛋白胨提供的營養(yǎng)物質是_。(2)在培養(yǎng)基制備過程中,各種成分溶化后分裝前，必須的操作是_。(3)在農業(yè)生產研究上，常需要進行微生物的培養(yǎng)和計數(shù)。如圖是利用_法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步_分散到培養(yǎng)基的表面。為達到這一目的，操作上應注意：_ (至少答兩項）.答案（1)碳源、氮源、維生素(2)調節(jié)ph（3)平板劃線稀釋每次劃線前要灼燒接種環(huán)；冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃；首尾區(qū)不重疊（任選兩項）解析微生物培養(yǎng)基含有碳源、氮源、水和無機鹽等營養(yǎng)物質,培養(yǎng)基制備過程中各種成分溶化后分裝前，必須調節(jié)ph。12。下圖顯示微生物的接種實驗中

30、的一些步驟，回答下列問題：（1）圖中接種工具的名稱是_.（2）解釋步驟和的操作：步驟中，為何要將接種工具灼燒至變紅?_.步驟中，為何要將接種工具冷卻？_。(3)圖示接種方法的目的是_。答案（1）接種環(huán)（2）殺滅接種環(huán)上可能引起污染的微生物避免燙死接種物(3）使接種物逐漸稀釋，經培養(yǎng)后獲得單個菌落解析(1)圖中所用的接種工具是接種環(huán)。（2）步驟中，將接種工具灼燒至變紅的目的是殺滅接種環(huán)上可能引起污染的微生物；步驟中,將接種工具冷卻的目的是避免燙死接種物。（3)圖示接種方法是平板劃線法，目的是使接種物逐漸稀釋，經培養(yǎng)后獲得單個菌落。13.請回答下列關于大腸桿菌培養(yǎng)的問題：（1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中

31、,除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件.由于該細菌具有體積小、結構簡單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料.(2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行_（消毒、滅菌）;操作者的雙手需要進行清洗和_（消毒、滅菌)；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質變性,還能_。(3）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是_.(4）若用大腸桿菌進行實驗，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經過_處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。答案(1)溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短（2)滅菌消毒損傷dna的結構（3)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產生（4）滅菌真題體驗14。（2015江蘇，19)做“微生物的分離與培養(yǎng)實驗時，下列