流式細(xì)胞術(shù)FlowCytometryFCM描述

1、1、流式細(xì)胞儀(Flow Cytometer):是集光電子物 理，光電測(cè)量，計(jì)算機(jī)，細(xì)胞熒光化學(xué)，單抗 技術(shù)為一體的高科技細(xì)胞分析儀。 2、流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry):利用流式細(xì)胞 儀對(duì)處于快速流動(dòng)的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參 數(shù)、快速（每秒可達(dá)1000-10000個(gè)）的定量分 析和分選（純度可達(dá)99%以上）的技術(shù)。 基本概念基本概念 流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu) 激光光源及光束形成系統(tǒng)激光光源及光束形成系統(tǒng) 流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng)：透鏡、濾光片、小孔，聚焦光源，光學(xué)系統(tǒng)：透鏡、濾光片、小孔，聚焦光源， 收集不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。收集不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。

2、信號(hào)檢測(cè)與分析：光電倍增管（信號(hào)檢測(cè)與分析：光電倍增管（PMT）、補(bǔ)償）、補(bǔ)償 電路。熒光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并將信號(hào)放大。電路。熒光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并將信號(hào)放大。 存儲(chǔ)、顯示、分析系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)。存儲(chǔ)、顯示、分析系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)。 細(xì)胞分選系統(tǒng)細(xì)胞分選系統(tǒng) 流式免疫分型技術(shù)要點(diǎn) 標(biāo)本的獲取和運(yùn)輸 標(biāo)本的制備和染色 儀器的校準(zhǔn)和質(zhì)控 流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)獲取與儲(chǔ)存 FCM的主要測(cè)定指標(biāo) FSC, SSC, FL1, FL2, FL3 (FL4) 其中： FSC：反映細(xì)胞的大小 SSC：反映細(xì)胞內(nèi)顆粒性 FCM標(biāo)記方法 單標(biāo)： 一種單抗/tube: FL1, FSC, SSC（三參數(shù)） 雙標(biāo)： （兩種單抗/

3、tube）：FL1, FL1, FSC, SSC（四參 數(shù)） 三/四標(biāo)： （三種單抗/tube）（四種單抗/tube）： FL1-FL3/4, FSC, SSC 熒光素種類 FITC(異硫氰酸熒光素）：綠色 530nm PE（藻紅蛋白）：橙黃色 575nm PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白）：深紅色 675nm PI(碘化丙啶）：橙紅色 620nm n488nm波長(zhǎng)的氬離子激光激發(fā) APC(別藻蘭蛋白）：紅色 660nm n630nm波長(zhǎng)的氦氖激光或紅色二極管激光激發(fā) q PE最強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原 q FITC最便宜，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原，適 用范圍廣 q biotin-avidin不適合 弱抗

4、原的檢測(cè) 抗體的選擇抗體的選擇 數(shù)據(jù)顯示方式 單參數(shù)直方圖 雙參數(shù)二維點(diǎn)圖 等高圖 二維密度圖 三維圖 流式常見圖形流式常見圖形 (Histogram Plot) 流式細(xì)胞的主要信息流式細(xì)胞的主要信息:Fluorescence FL1 FL2 FL3 FL4 最常用的標(biāo)記方法是熒光素分子標(biāo)記最常用的標(biāo)記方法是熒光素分子標(biāo)記 的抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合的抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合 流式常見圖形流式常見圖形 (Histogram Plot) 適用于：?jiǎn)螀?shù)分析適用于：?jiǎn)螀?shù)分析 流式常見圖形流式常見圖形 (Dot Plot) 適用于：多參數(shù)分析適用于：多參數(shù)分析 第二節(jié)第二節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的科研應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的科

5、研應(yīng)用 分析群體細(xì)胞分析群體細(xì)胞 所需時(shí)間短所需時(shí)間短 多參數(shù)分析多參數(shù)分析 定性或定量定性或定量 流式應(yīng)用常見范圍流式應(yīng)用常見范圍 細(xì)胞大小細(xì)胞大小 細(xì)胞的顆粒度細(xì)胞的顆粒度 細(xì)胞表面分子：細(xì)胞表面分子：CD 系列系列 細(xì)胞漿內(nèi)分子：胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞漿內(nèi)分子：胞內(nèi)細(xì)胞因子 細(xì)胞核內(nèi)分子：細(xì)胞核內(nèi)分子：P53 細(xì)胞功能檢測(cè)：細(xì)胞周期、凋亡細(xì)胞功能檢測(cè)：細(xì)胞周期、凋亡 抗體標(biāo)記的方法抗體標(biāo)記的方法 抗體的選擇抗體的選擇 首選直接標(biāo)記抗體首選直接標(biāo)記抗體 熒光分子熒光分子 PE最強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原最強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原 FITC最便宜，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原最便宜，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原 間接標(biāo)記：間接標(biāo)記

6、：適用范圍廣適用范圍廣, biotin-avidin不適不適 合弱抗原的檢測(cè)合弱抗原的檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)對(duì)照的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)照的設(shè)計(jì) 空白對(duì)照：空白對(duì)照：ALL 陰性對(duì)照：陰性對(duì)照：常用同型抗體對(duì)照常用同型抗體對(duì)照 單色分析：設(shè)同型抗體對(duì)照單色分析：設(shè)同型抗體對(duì)照 多色分析：同型對(duì)照，單陽性對(duì)照多色分析：同型對(duì)照，單陽性對(duì)照（用于儀器校正）（用于儀器校正） 陽性對(duì)照：陽性對(duì)照：檢測(cè)陰性時(shí)檢測(cè)陰性時(shí) 空白對(duì)照和陰性對(duì)照的比較：空白對(duì)照和陰性對(duì)照的比較： 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理 單細(xì)胞懸液的制備：胰酶消化單細(xì)胞懸液的制備：胰酶消化 抗體或標(biāo)記分子的染色：抗原抗體反應(yīng)抗體或標(biāo)記分子的染色：抗原抗體反應(yīng) 非

7、特異結(jié)合的去除：洗滌和封閉非特異結(jié)合的去除：洗滌和封閉 封閉：血清和同型抗體封閉：血清和同型抗體 流式檢測(cè)應(yīng)用實(shí)例流式檢測(cè)應(yīng)用實(shí)例 凋亡凋亡 細(xì)胞內(nèi)分子檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)分子檢測(cè) 凋亡檢測(cè)凋亡檢測(cè)-每一步都有檢測(cè)試劑盒每一步都有檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞周期細(xì)胞周期 G1 M G2 S Quiescent cells G0 細(xì)胞周期不能區(qū)分凋亡與死亡細(xì)胞細(xì)胞周期不能區(qū)分凋亡與死亡細(xì)胞 Sub-G0/G1 peaks - PI staining Caspases Annexin V Assay建議用于懸浮細(xì)胞建議用于懸浮細(xì)胞 Annexin V Assay能夠區(qū)分死亡與凋亡能夠區(qū)分死亡與凋亡 流式流式“TUNEL

8、” Intracellular Cytokine-Protocol SORTING（細(xì)胞分選）（細(xì)胞分選） DIMER X antigen specific T cell assay method for monitoring cellular response CBA(Cytometric Bead Array) Traditional Analysis - Percent positive Determination of the CD4 PE ABC on lymphocytes 1 10 100 1000 10000 Linear Fluorescence in FL2 10 2 10

9、3104 cell and bead neg lymph FL2; (49,000 ABC) Molecules PE per Bead 105 第三節(jié)第三節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用 白血病免疫分型白血病免疫分型 HLA-B27: 強(qiáng)直性脊柱炎強(qiáng)直性脊柱炎 淋巴細(xì)胞亞群淋巴細(xì)胞亞群 造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)：造血干細(xì)胞移植造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)：造血干細(xì)胞移植 網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞 PNH診斷（診斷（CD55、CD59） 血小板活化試驗(yàn)血小板活化試驗(yàn) 流式細(xì)胞白血病免疫分型流式細(xì)胞白血病免疫分型 流式細(xì)胞的免疫分型流式細(xì)胞的免疫分型 是白血病分型的重要指標(biāo)是白血病分型的重要指標(biāo) FAB標(biāo)準(zhǔn)，形

10、態(tài)學(xué)和免疫表型結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)，形態(tài)學(xué)和免疫表型結(jié)合 適合于白血病的分型診斷，但不適合用適合于白血病的分型診斷，但不適合用 于確診是不是白血病。于確診是不是白血病。 Minimal residual diseases (MRD) FCM應(yīng)用 1、細(xì)胞增殖周期測(cè)定和DNA倍體分析 2、凋亡檢測(cè) 3、免疫功能的檢測(cè) 4、血液學(xué)應(yīng)用 5、HLA-B27的檢測(cè)：用于診斷強(qiáng)直性脊柱炎。 6、其他：溶液中細(xì)胞因子的測(cè)量。 7、細(xì)胞分選 細(xì)胞增殖周期測(cè)定和DNA倍體分析 1）細(xì)胞增殖周期：分為G0、G1、S、G2、M期。S期是DNA合成期，在S期 內(nèi)，DNA進(jìn)行復(fù)制，使細(xì)胞的DNA含量由2倍體（2C 46條染色體）

11、變?yōu)?倍 體（4C）。G1和G2期為DNA合成前、后間期，此期無DNA的合成，但RNA和 蛋白質(zhì)進(jìn)行合成。M期為有絲分裂期，在此期一個(gè)細(xì)胞分裂為2個(gè)細(xì)胞。 細(xì)胞內(nèi)的92條染色體分裂成2組46條染色體，使每個(gè)細(xì)胞內(nèi)具有46條染色 體。在M期分裂成兩個(gè)子細(xì)胞之前，G2和M期細(xì)胞的DNA含量均為恒定的4C 。M期以后部分細(xì)胞進(jìn)入G1期，繼續(xù)進(jìn)行增殖，部分細(xì)胞進(jìn)入G0期，即靜 止期，不再繼續(xù)增殖。因此，F(xiàn)CM分析一個(gè)群體細(xì)胞峰DNA倍體與細(xì)胞周 期時(shí)，將DNA含量直方圖分為三部分，即G0/G1,S,G2/M期三個(gè)細(xì)胞峰。 G0/G1和G2/M細(xì)胞峰DNA的含量成正態(tài)分布，S期細(xì)胞峰則是一個(gè)加寬的正 態(tài)

12、分布。 2）利用DNA的熒光染料，如PI （Propidium iodide碘化丙啶），與細(xì)胞 內(nèi)的DNA結(jié)合，可反映細(xì)胞內(nèi)DNA含量。 采用DNA直方圖顯示。具有2C DNA含量 細(xì)胞為G0/G1期細(xì)胞，4C DNA含量細(xì)胞 為G2/M期細(xì)胞，DNA含量介于兩者之間 的細(xì)胞為S期細(xì)胞。 3）DNA倍體：主要比較G0/G1期細(xì)胞DNA含量 的變化。用DNA指數(shù)（DI）表示。 DNA指數(shù)=測(cè)量樣本G0/G1期DNA含量/正常人 淋巴細(xì)胞G0/G1期DNA含量 以正常人淋巴細(xì)胞作為對(duì)照。 正常細(xì)胞DNA指數(shù)為1.00，DNA指數(shù)1，為 超2倍體，1為亞2倍體，兩者可統(tǒng)稱為非整 倍體。非整倍體細(xì)胞中

13、腫瘤的特異性標(biāo)志，實(shí) 體腫瘤中出現(xiàn)頻率較高。 第四節(jié) 凋亡檢測(cè) 1）FCM-DNA檢測(cè)（DNA亞G1峰的檢測(cè)）：利用PI染 色，檢測(cè)具有亞G1期DNA含量的細(xì)胞比例，代表凋亡 細(xì)胞數(shù)。其原理為在凋亡過程中，細(xì)胞內(nèi)核酸酶的釋 放，將DNA降解，分解成小的片段，在標(biāo)本制備中的 固定處理時(shí)，細(xì)胞膜的完整性被破壞，使細(xì)胞內(nèi)降解 的DNA片段從細(xì)胞內(nèi)流出，造成總體DNA含量減少， 成為亞2倍體。注：檢測(cè)的凋亡細(xì)胞數(shù)代表晚期的凋亡 細(xì)胞比例，且易受標(biāo)本中的死細(xì)胞和碎片的干擾，影 響結(jié)果的準(zhǔn)確性。 可參看文章： http:/ http:/ n2）DNA鏈損傷“TUNEL”法 n3）Annexin-V-FIT

14、C/PI雙染法 n4）線粒體細(xì)胞膜電位的檢測(cè) n5）凋亡相關(guān)基因的檢測(cè)免疫標(biāo)記法 檢測(cè)基因 第五節(jié) 免疫功能的檢測(cè) （1）利用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)，對(duì)PB中淋巴細(xì)胞比例， 及淋巴細(xì)胞中T、B、NK細(xì)胞的比例，及T細(xì)胞亞群進(jìn) 行檢測(cè)。如CD3+（總T細(xì)胞）；CD19+（總B細(xì)胞）， CD3-/（CD16+5（NK細(xì)胞）。3+/CD4+（Th/Ti）： 輔助/誘導(dǎo)；CD3+/CD4+/CD5RA+：nave輔助/誘導(dǎo)T 細(xì)胞；CD3+/CD4+/CD45R0+：記憶性輔助/誘導(dǎo)T細(xì) 胞；D3+/CD8+（Ts/Tc）：抑制/殺傷； CD3+/CD8/45RA+：nave抑制/殺傷T細(xì)胞； CD3+/C

15、D8+/CD45R0+：記憶性抑制/殺傷T細(xì)胞。胞 內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè)：CD4+/IL-4+，Th1細(xì)胞， CD4+/IFN-+。 （2）臨床應(yīng)用：原發(fā)性或繼發(fā)性免疫缺陷病、自身免 疫性疾病、淋巴細(xì)胞增殖病、腫瘤療效觀察與預(yù)后判 斷、移植免疫檢測(cè)等。 第六節(jié) FCMFCM在在血液學(xué)中的應(yīng)用 1）白血病和淋巴瘤的免疫分型，目前對(duì)白血病和淋巴 瘤的診斷，國(guó)際上提出MIC分型，即通過形態(tài)（M）、 免疫分型（I）、細(xì)胞遺傳學(xué)（C）檢測(cè)，對(duì)白血病和 淋巴瘤進(jìn)行綜合診斷，免疫分型是重要的檢測(cè)項(xiàng)目之 一?，F(xiàn)在多應(yīng)用多參數(shù)的流式細(xì)胞術(shù)，不同抗體分別 被幾種熒光素標(biāo)記：第一熒光（FL1）：FITC（異硫氰 酸熒光

16、素，F(xiàn)luorescein isothiocyanate），F(xiàn)L2：PE （藻紅蛋白，Phycoerythrin）FL3：PerCP（多甲藻黃 素葉綠素蛋白，peridinin chlorophyll protein），F(xiàn)L4： APC（別藻蘭蛋白allophycocyanin,） 2）CD34+造血干/祖細(xì)胞的檢測(cè)。主要用于干 細(xì)胞移植及基因治療方面的檢測(cè)。 3）活化血小板及網(wǎng)織血小板的檢測(cè)，在栓塞 性疾病，如腦血管和心肌梗塞的患者，可出現(xiàn) 活化的血小板增多。而血小板減少的患者，如 果出現(xiàn)網(wǎng)織血小板增多，則說明血小板減少的 原因?yàn)檠“迤茐倪^多所致。 4）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）

17、的發(fā)病機(jī)制為X染色體上的PIG-A基因發(fā) 生突變，引起糖化肌醇脂（GPI）錨合成 障礙，使GPI錨連蛋白缺乏，已證實(shí)的 GPI錨連蛋白有10余種，用于PNH診斷的 主要為CD55和CD59兩種，如果在紅細(xì)胞 或WBC上出現(xiàn)CD55或/和CD59的減少， 可診斷為PNH。 5）網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 6）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 第七節(jié) 其他應(yīng)用 溶液中細(xì)胞因子的測(cè)量: 利用吸附有特異性抗體的微球，與溶液 中的細(xì)胞因子結(jié)合，而檢測(cè)溶液中是否 存在該種因子 HLA-B27的檢測(cè)：用于診斷強(qiáng)直性脊柱炎。 第八節(jié) 細(xì)胞分選 FCM可將樣本中所需要的細(xì)胞亞群從群體細(xì)胞 中分離出來，即所謂分選(Sorting)。被測(cè)細(xì)胞

18、的任何參數(shù)均可作為分選的依據(jù)。分選的方式 一般有靜電分選和捕獲管分選，分選方式不同 則決定分選的速度，分選純度一般可達(dá)99%以 上。除細(xì)胞分選外還可進(jìn)行染色體分選。 分選的細(xì)胞可用于克隆化培養(yǎng)、原位雜交、 分子生物學(xué)研究等。從孕婦外周血中分離富集 胎兒有核紅細(xì)胞用于產(chǎn)前診斷，染色體分選可 用于基因診斷。 淋巴20-25%: T: 70%, B: 20%, NK:10%; 單核2-6%+ 粒細(xì)胞:40-60% 有核紅:20-25% 正常BM各系細(xì)胞比率 是白細(xì)胞（包括血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞等）是白細(xì)胞（包括血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞等） 在正常分化成熟的不同階段以及活化過程中在正常分化成熟的不同階段以及

19、活化過程中 在這些不同譜系（在這些不同譜系（lineage）細(xì)胞胞漿或細(xì)胞）細(xì)胞胞漿或細(xì)胞 膜表面出現(xiàn)或消失的標(biāo)記，參與機(jī)體重要的膜表面出現(xiàn)或消失的標(biāo)記，參與機(jī)體重要的 生理和病理過程。八十年代在生理和病理過程。八十年代在WHO和國(guó)際和國(guó)際 免疫學(xué)聯(lián)合會(huì)免疫學(xué)聯(lián)合會(huì)(IUIS)組織下，將識(shí)別同一分組織下，將識(shí)別同一分 化抗原的來自不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體歸為化抗原的來自不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體歸為 一個(gè)分化群一個(gè)分化群 CD: cluster of differentiation/ cluster designation 白細(xì)胞分化抗原白細(xì)胞分化抗原 1. 系列交叉系列交叉(cross-linea

20、ge): AML表達(dá)表達(dá)CD2,CD19 2. 表達(dá)不同步表達(dá)不同步(asynchronous): 早期與晚期抗原同時(shí)表達(dá)早期與晚期抗原同時(shí)表達(dá) 3. 表達(dá)量異常表達(dá)量異常(over- or under-expression): 4. 與細(xì)胞大小不匹配與細(xì)胞大小不匹配(abnormal light scatter profile):如大如大CD2+細(xì)胞或小細(xì)胞或小CD13+細(xì)胞細(xì)胞 AL免疫表型特點(diǎn)免疫表型特點(diǎn): 紊亂表型紊亂表型 鑒別淋髓系列鑒別淋髓系列 區(qū)分亞型區(qū)分亞型 雙表型、雜合型雙表型、雜合型 Mo、M7、AUL 提示細(xì)胞遺傳學(xué)異常提示細(xì)胞遺傳學(xué)異常 部分與預(yù)后相關(guān)部分與預(yù)后相關(guān) M

21、DR監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè) AL免疫表型檢測(cè)意義免疫表型檢測(cè)意義 Gating FCM設(shè)門法 FSC/SSC:不能將淋巴、單核及幼稚細(xì)胞 區(qū)分開 CD45/SSC:CD45是WBC抗原,RBC.PLT為 陰性。CD45在成熟細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)，幼稚細(xì) 胞表達(dá)弱。在淋巴，單核及粒細(xì)胞表達(dá) 強(qiáng)度不同。 優(yōu)點(diǎn)：能將淋巴單核及幼稚細(xì)胞區(qū)分 開，特異分析白血病細(xì)胞免疫表型。 R2 R3 R4 R5 R6 正常血細(xì)胞分化發(fā)育過程中免疫標(biāo)志變 化特點(diǎn)以及白血病細(xì)胞免疫標(biāo)志特點(diǎn) 常用各系血細(xì)胞CD抗原 1、T系：CD1-CD8（CD6不用） 2、B系：CD10, CD19-CD24, FMC7 3、髓系：CD11b,CD13-CD

22、16,CD33,CD64 4、干祖：CD34, CD117, CD38, HLA-DR 正常B細(xì)胞標(biāo)志 CD19CD22TdTCd34CD10CD20FMC7CD23DR I期+ II期+-+-/+ III 期 +-+ IV期 +-+ 泛B標(biāo)志：CD19,HLA-DR,cCD79a/CD22 幼稚B標(biāo)志：CD34,TdT,CD10 成熟B標(biāo)志：CD23,FMC7 B-ALL的分型 亞型 CD19CD34TdTCD10CylgSmIg 急性早期B前體細(xì)胞白血 病 Early B-precursor ALL +- 急性前B細(xì)胞白血病 Pre B-ALL +-/+- 急性B細(xì)胞白血病 B-ALL +

23、-/+ 正常T細(xì)胞標(biāo)志：根據(jù)在胸腺內(nèi)發(fā)育 階段分類 CD7CD2CD5CD34CD1a CD3c/m CD4CD8 I期+/- II期+-+/- III 期 +-+/+ IV期 +-+/+/-+/- 泛T:CD2,CD5,CD7,cCD3 幼稚T:CD34,TdT,CD1a,CD4/8 成熟T:CD3,CD4,CD8 T-ALL的分類 分型CD7CD2TdTCD3c/m 急性早期T前體細(xì)胞白血病 Early T precursor ALL +-+/- 急性T細(xì)胞白血病 T-ALL +-+/+ T-ALL特點(diǎn)： 1，幼稚T細(xì)胞數(shù)量增多：CD34+,TdT+ 2，泛T標(biāo)志丟失 3，CD4/8雙陽或

24、CD4/8單陽 正常單核細(xì)胞標(biāo)志 全單核細(xì)胞標(biāo)志：CD33,CD13,HLA-DR 幼稚單核細(xì)胞標(biāo)志：CD34,CD117 成熟單核細(xì)胞標(biāo)志：CD14,CD64 HLA- DR CD33CD13CD34CD117CD14CD64 幼稚單 +- 成熟單 +-+ 正常粒細(xì)胞標(biāo)志 cMPOCD1 3 CD34CD11 7 HLA- DR CD33CD11 b CD15CD64CD10 幼稚 粒 + + - 成熟 粒 +-+ 全粒細(xì)胞標(biāo)志：CD13,CD33,Cmpo 幼稚粒細(xì)胞標(biāo)志：CD34,CD117,HLA-DR 成熟粒細(xì)胞標(biāo)志：CD15,CD11b,CD10,CD64 成熟粒、單核細(xì)胞主要區(qū)別

25、 成熟粒細(xì)胞： CD33+ HLA-DR- CD14- CD64+dim 成熟單核細(xì)胞： CD33+ HLA-DR+ CD14+ CD64+ 干祖細(xì)胞標(biāo)志T祖細(xì)胞B祖細(xì)胞髓祖細(xì)胞 CD34+ TdT+- CD117-/+-+ HLA-DR+/-+ CD38+/-+ 診斷白血病主要標(biāo)志： B-ALL: CD34, HLA-DR, CD19, CD10+/-, cCD79a T-ALL: CD34, CD38, CD7, CD2+/-, CD5+/-, cCD3 AML: CD34, CD117, CD33, CD13, cMPO M3: CD34-, HLA-DR- M2: CD19+: t(8

26、, 21) M4/M5: CD14+ M6: GlyA+, CD71+ M7: IIb/IIIa(CD41, CD61)+ 雙表型急性白血病診斷的積分系統(tǒng) (EGIL,1998) 分值 B系 T系 髓系 2 CD79a CD3 MPO * cCD22 anti-TCR/ cIgM anti-TCR/ 1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 DiagnosisCD5CD 10 CD 19 CD 20 CD23CD79bFCM-7CD25CD11c

27、CD 103 SLL/CLL + -+ + +-/+ +/- - Mantal cell lymphoma + -+ + -+- Follicle center lym -+ + + -/+ +/- +/- - Marginal zone lym -+ + -+/- +/- -/+ +- HCL -+ + -+/- +/- +/- + Common phenotyes of B-cell lymphoproliferative disorders FCM標(biāo)記方法 單標(biāo)： 一種單抗/tube: FL1, FSC, SSC（三參數(shù)） 雙標(biāo)： （兩種單抗/tube）：FL1, FL1, FSC, SSC（四參 數(shù)） 三/四標(biāo)： （三種單抗/tube）（四種單抗/tube）： FL1-FL3/4, FSC, SSC 熒光素種類 FITC(異硫氰酸熒光素）：綠色 530nm PE（藻紅蛋白）：