霉菌的培養(yǎng)及形態(tài)觀察實驗報告

1、山東大學(xué)實驗報告題目：霉菌的培養(yǎng)及形態(tài)觀察2017年11月6日姓名：丁志康一、目的要求1. 學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。2. 了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。二、基本原理霉菌可產(chǎn)生復(fù)什分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲， 由繁殖菌絲產(chǎn)生抱子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及抱子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依 據(jù)。霉菌菌絲和抱子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗的多（約為3-10卩m）,常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍鏡即可觀察。觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有下列三種：1. 直接制片觀察法：是將培養(yǎng)物置于乳酸石碳酸棉藍(lán)染色液中，制成霉菌制

2、片鏡檢。用此染色制成的霉菌制片的特點是：細(xì)胞不變形；具有防腐作用，不易干燥，能保持較長時間；能防止抱子飛散；染 色的藍(lán)色能增強(qiáng)反差。必要時，還可用樹膠封固，制成永久標(biāo)本長期保存。2 載玻片培養(yǎng)觀察法：用無菌操作將培養(yǎng)基瓊脂薄層置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，霉菌 就在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內(nèi)沿蓋玻片橫向生長。培養(yǎng)一定時間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置顯 微鏡下觀察。這種方法既可以保持霉菌自然生長狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期培養(yǎng)物。3 玻璃紙培養(yǎng)觀察法：玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將 霉菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，霉菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時，揭下玻璃紙

3、，固定在載玻片上 直接鏡檢。這種方法既能保持霉菌的自然生長狀態(tài)，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。本次試驗使用的是第二種方法，即載玻片培養(yǎng)觀察法。三、器材1、菌種：曲霉，青霉，根霉和毛霉培養(yǎng) 2-5d的馬鈴薯斜面培養(yǎng)物。2、培養(yǎng)基：土豆瓊脂培養(yǎng)基。3、溶液或試劑：蒸餾水。4、 儀器或其他用具：無菌吸管，平皿，載玻片，蓋玻片，U形玻棒，解剖針，解剖刀，鑷子，95%乙 醇以及顯微鏡等。四、操作步驟（1 ）、培養(yǎng)小室的滅菌：在平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一 U 形玻棒，其上放一潔凈載玻片和兩塊蓋玻片，蓋上皿蓋、包扎后于121T滅菌30min, 烘干備用。（2）、瓊脂塊的制作：取已滅菌的馬鈴

4、薯瓊脂培養(yǎng)基 67mL注入另一滅菌平皿 中，使之凝固成薄層。用解剖刀切成0.51cm2的瓊脂塊，并將其移至上述培養(yǎng)室 中的載玻片上（每片放兩塊，如右圖）。（3）、接種：用尖細(xì)的接種針挑取少量的抱子接種于瓊脂塊邊緣上，用無菌鑷 子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。（接種量要少，盡可能將分散的抱子接種在瓊脂塊邊緣上，否則培養(yǎng)后菌絲過于稠密影響觀察。)(4) 、培養(yǎng)：先在平皿的濾紙上加10mL左右滅菌的純凈水(用于保持平皿內(nèi)的濕度)，蓋上皿蓋，28C 培養(yǎng)。(5) 、鏡檢：根據(jù)需要可以在不同的培養(yǎng)時間內(nèi)取出載玻片置于低倍鏡下觀察，必要時換高倍鏡。五、實驗結(jié)果1.實驗照片()你主要根據(jù)那些形態(tài)特征來區(qū)分上述四種

5、霉菌？相對較白；根霉的菌落氣生菌到黑色小點；青霉的菌落相對較小, 菌絲：毛霉與根霉菌絲無隔，而青霉與黑曲霉的菌絲有隔。 菌落：毛霉的菌落氣生菌絲極發(fā)達(dá),延伸范圍大，菌絲蓬絲也很發(fā)達(dá)，K 在菌落表面氣生菌絲不發(fā)達(dá)，顏色呈青綠色，邊緣青白色；黑曲霉的菌落也相對較小，氣生菌絲不發(fā)達(dá)色呈 黑褐色或棕褐色 菌種特征：青霉的抱子囊呈帚狀，抱子為一連串的分生抱子；黑曲霉的抱子囊為球形，分生抱子 分布在抱子囊外，且黑曲霉在繁殖菌絲與營養(yǎng)菌絲連接處常有一膨大的足細(xì)胞；毛霉與根霉的抱子囊 都為球形，但根霉具有假根，而毛霉沒有。(2)根據(jù)載玻片培養(yǎng)觀察法的基本原理，你認(rèn)為上述操作過程中的哪些步驟可以根據(jù)具體情況做一

6、些 改進(jìn)或可用其他的代替方法？ 實驗中為了保濕在平皿中加入的是無菌水，但是用 20%的甘油保濕效果會更好，用量也更少，不 易灑出，建議用甘油替代無菌水保濕。 培養(yǎng)用的瓊脂塊需要足夠薄才利于觀察，這對實驗者對平板中培養(yǎng)基量的把握的要求比較高，建 議可以改成涂層法，即用滴管吸取少量未凝固的培養(yǎng)基滴加到載玻片上，之后均勻涂抹開，涂出兩個區(qū) 域代替兩片瓊脂塊，凝固后接種并蓋上蓋玻片。(3)你認(rèn)為在顯微鏡下，細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？ 大?。哼@四者在顯微鏡下大小有顯著差異，酵母菌與霉菌很大，低倍鏡就可見，放線菌較小，需要 高倍鏡，而細(xì)菌必須在油鏡下才可看見。 形態(tài)：霉菌與放線菌在顯微鏡下看到的都是纏繞的菌絲體，而酵母菌看到的是一個個卵圓形的個體,細(xì)菌則形態(tài)多樣，大多為球狀、桿狀、螺旋狀、鏈狀等。七、附：馬鈴薯培養(yǎng)基1000mL配料表馬鈴薯：