醫(yī)院檢驗(yàn)中心VMA操作規(guī)程

1、醫(yī)院檢驗(yàn)中心 VMA操作規(guī)程 試劑：Reagent B1M Tris75ml550mReagent C0.2N 醋酸鈉沖洗液l550mReagent 10.2N 醋酸鈉微柱緩沖液lReagent 24M碳酸鉀緩沖液30mlReagent 32 瓶、每瓶 0.4 克 NaIO4Reagent 42 瓶、每瓶 2.5 克 Na2S2O5VMA標(biāo)準(zhǔn)1瓶樹脂柱50 支另外試劑乙醇（分析純）1N 乙酸： 57.1ml 冰醋酸+D.water 至 1000ml試劑準(zhǔn)備 :NalO4 溶液：4%Reaent 3+10ml D.water 2-8C 穩(wěn)定 2周Na2S2O5溶液:10% Reagent 4+2

2、5ml D.water 2-8C穩(wěn)定2周VMA標(biāo)準(zhǔn)液:1N乙酸5ml加至VMA標(biāo)準(zhǔn)瓶中濃度為1.2mgVMA/ml 2- 8C穩(wěn)定4周，-20C穩(wěn)定3月收集標(biāo)本前 3 天、病人禁食香蕉、 香草、巧克力、 咖啡、 茶及呋喃嘧啶類藥物、包括 2,5 一二羥基苯甲酸和 2,5 一二羥基苯乙酸。收集：干凈容器，加入 15ml 20%HCI(或12ml 25%HCI)作穩(wěn)定劑重要：調(diào)整標(biāo)本PH值1.53.5注意：用尿液質(zhì)控必須用 0.1N HCl溶解,若用D.water則需加 10ul6N HCl/2.0 ml操作步驟 :A. 在第一次操作分析前須完整仔細(xì)閱讀操作手冊(cè)B. 讓所有試劑和標(biāo)本到達(dá)室溫C.

3、在非常熟練之前 , 所有試驗(yàn)必須雙份D. 為有良好的實(shí)驗(yàn)操作 , 每次操作須攜帶質(zhì)控操作過程 :1. 準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn) :Tube 1:standard So: Oul(=Omg VMA/L) +2.0mlurineTube 2:standard S1:25ul(=15mg VMA/L)+2.0mlurine2. 吸 2.0ml 標(biāo)本和質(zhì)控到標(biāo)記的試管中。3. 用試劑B調(diào)至PH大約5.57.5(PH指示紙)接近或超 過PH7.5時(shí)會(huì)出現(xiàn)混濁，加少許1N乙酸全懸浮，讓樹脂下沉（避免氣泡），去帽、除滴頭，讓 柱完全在架上下流。5. 加標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控、標(biāo)本到相應(yīng)的柱中，讓其完全流經(jīng)， 去除洗出液。6. 轉(zhuǎn)移柱子

4、到相應(yīng)試管中（16X 160mm ,每柱中加10mlReagent1 收集洗出液 , 去除過濾柱。7. 每管準(zhǔn)備測(cè)定和空白 , 測(cè)定和空白管加 2.0ml 洗出液。8. 加 0.2ml Reagent 2 到每管中 , 混勻 35秒。9. 每支測(cè)定管加 0.1ml Reagent 3, 每支空白管加0.2ml Reagent 4, 充分混勻。10. 37 C水浴 3011. 未冷卻測(cè)定管中直接加 0.2ml Reagent 4, 空白管中加 0.1ml Reagent 3 充分混勻 .測(cè)定:在360nm波長(zhǎng)以D.water為空白測(cè)出吸光度在 380nm波長(zhǎng)以 D.water 為空白測(cè)出吸光度計(jì)

5、算:a Eso(380)=Eso(380) - EBo(380) Eso(360)=Eso. (360)-EBo(360) Es1(380)=Es1(380) - EB1(380) Es1(360)=Es1(360)-EB1(360) Et(380)=Et(380)-EBt(380)Et(360)=Et(360)-EBt(360)bNet Eso= Eso(360) - Eso(380)Net Es1 = Es1(360) - Es1(380)Net Et= Et(360) - Et(380 )cCorr.Es1=Nets1-Netsod VMAt(mg/L)=15mg/corr.Es1 x

6、NetEtMgVMA/24h = mgVMA/L 24h 尿量正常范圍 :mg VMA/24h:1-8 mg VMA/24h VMASo: Oul 標(biāo)準(zhǔn) +2.0ml 尿液S1: 25ul 標(biāo)準(zhǔn) +2.0ml 尿液用B試劑調(diào)整每管2.0ml尿液的PH:5.5-7.5,出現(xiàn)混加少許 1N 乙酸搖動(dòng)使柱完全懸浮 , 脂下降 （無氣泡 ）, 去帽, 去滴頭相應(yīng)標(biāo)本加入柱中 , 余液用 3ml D.water 沖洗加入 +10ml Reagent C到柱中 , 完全流經(jīng) , 去除洗出液移柱至相應(yīng)管中 +10ml Reagent 1. 收集洗出液 , 去除柱每管均設(shè)定測(cè)定和空白 , 且每管加 2.0ml 洗出液“B” 和 “T” +0.2ml Reagent 2 混勻 3-5 秒JTB