多殺菌素的高效液相色譜法測定

1、多殺菌素的高效液相色譜法測定農藥第42卷第10-(2003)27多殺菌素的高效液相色譜法測定張苑,金志華,林建平,wr沛霖(浙江大學材料與化工學院生物工程研究所.杭州310027)摘要采用高效液相色譜法對sacvharpolysporasg.,su發(fā)酵液中多殺茸素含量進行測定.本方法的相對標準偏差為0.11%.變異系數(shù)為0.15%.線性相關系數(shù)為0.99916.平均回收率為96.94%.關鍵詞多殺茵素高效液相色譜分析多殺菌素是由刺糖多孢菌(saccharpolpora,腳)產生的大環(huán)內酯類生物殺蟲劑【】j.它具有高效,低毒,對環(huán)境友好等優(yōu)點,是一種綠色廣譜殺蟲劑.兼具生物農藥的安全性和化學合成

2、農藥的快速效果【3.4】.本文采用高效液相色譜法對s.spinosa發(fā)酵液中多殺菌素含量進行了定量分析,該方法快速,準確,重復性好,適合于發(fā)酵液中多殺菌素含量的測定,也可用于產品質量控制.1儀器和試劑1.1儀器agilend1100高效液相色譜儀;ph計phs一25數(shù)顯(0.01級)(上海雷磁精密儀器廠);電子天平(bp190smax200gd=0.1mg);臺式離心機tdl802b(上海安亭科學儀器廠);超聲波清洗器;微孔濾膜(f型0.45/m,天津自動科學儀器公司).1.2試劑甲醇(色譜純,上?；瘜W試劑研究所);乙腈(色譜純.中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司);超濾水(自制);多殺菌素標準品(

3、含量99%)o2色譜工作條件色譜柱:agilend0213nucleosil1005c185/zm,2504.0mm;檢測器:紫外光度檢測器.波長250nm;流動相:甲醇/乙腈/水=45/45/10(v/v),含有0.05%的乙酸鈉:流速:1.0ml/min;進樣量:201;柱溫:室溫.3實驗方法3.1標準溶液的配制準確稱取多殺菌素標樣0.025g,加入10ml甲醇.并反復振蕩,使標樣完全溶解,離心.上清液用0.45/m的濾紙過濾,即可用于hplc測定.3.2試樣溶液的配制取1oral發(fā)酵液樣離心,棄去上清液,向沉淀中添加10ml甲醇.并反復振蕩.使多殺菌素完全溶解.再次離心,用0.45/zm

4、的濾紙過濾上清液.即可用于hplc測定.3.3測定方法在上述色譜工作條件下.待儀器基線穩(wěn)定后,連續(xù)注入數(shù)針標準溶液.計算各針相對響應值的重復性.待相鄰兩針的響應值變化小于1.5%后.按照標準溶液,樣品溶液,樣品溶液,標準溶液的順序進行高效液相色譜分析.采用外標法對樣品進行定量分析.多殺菌素含量(mg/i)按下列公式進行計算:x:jp,12式中:a.為標準溶液中多殺菌素的峰面積平均值a:為樣品溶液中多殺菌素的峰面積平均值p為標樣中多殺菌素的含量(mg/l)4結果與討論4.1色譜條件的確定據(jù)文獻報道【?和實驗對比篩選,確定了檢測波長,流動相配比,色譜柱,流速等條件.在此條件下能快速,靈敏,準確地進

5、行定量分析,標樣和發(fā)酵液樣品的hplc圖見圖1和圖2.(多殺菌素a的出峰時間為9.389min,多殺菌素d的出峰時間為10.940min)圖1多殺菌素標樣膏效液相色譜圖(多殺菌素a的出峰時問為9.403rain,多殺菌素d的出峰時間為10.972min)圖2多殺菌素發(fā)酵液膏效液相色譜圖28pesticidesv01.42no.10(2003)4.2分析方法的線性相關性測定多殺菌素標準品分別配制成50,125,250,500,1000,1250rag/l六種不同濃度的標準溶液,在要求的色譜條件下進行相同體積的進樣,以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標作圖可得一直線(圖3).考察峰面積area(mau*

6、rain)與濃度amt(mg/l)的關系.從圖3得到多殺菌素hpic分析法的回歸方程area=15.481*amt+321.7,相關系數(shù)r=0,99916.多殺菌素濃度在501250mg/1.范圍內,峰面積與多殺菌素濃度之間都有良好的線性相關性.maum;n20000l50001000050000050010001500mg/i圖3多殺菌素hpic分析法峰面積與多殺菌素含量線性相關性曲線4.3分析方法的精密度測定以處理好的發(fā)酵液為樣品,用本方法進行六次重復測定,結果多殺菌素hpi.c分析法的相對偏差為0.11%,變異系數(shù)為0.15%,說明本方法的重復性良好.4.4分析方法的準確度測定采用標準添

7、加法,在已知含量的樣品中添加?一定量的已知標準品,在上述液相色譜條件下進行6次重復測定,測得平均回收率為96.94%.參考文獻(1kirstha.michelkh,myndersejs.a1.discovery.isolation.andstructureelucidationofafamilyofstrcturauyunique.fer.mentationderivedtetracyclicmacrolides.in:bakerdr,fenyesjg.steffensjj.(eds.)synthesisandchemistryofarochemi.cals,americanchemicals

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9、藥的范例.世界農藥.2001,23(1);2428(5】westsd.turnerlg.determinationofspintyaynsanditsmetabolite.sincitruscropsandorangeprocessedcommoditiesbyhplcwithuvdetection.j.agric.food.chem.,2000.48(2):366726】westsd.yehi.t.turnerlg,et口f.determinationofspinosynsanditsmetabolitesinfoodandenvironmentalmatrices.1.highperfor

10、manceliquidchromatographywithultravioletde.tection.j.agric.food.chem.,2000.48(11):51315l37determinationofspinosynsbyhplczhangyuan,jinzhihua,linjian/nng,cenpeilin(instituteofbioengineering,collegeofmaterialsscienceandchemicalengineering,zhianguniversity.hangzhou310027.china)abstract:quantitativeanaly

11、sisofspinosynsbyhpi.cwithnucleosilci8columnatuv250nmwasintroduced.theresultshowsthattherelativestandarddeviation.thecoefficientsofvariation,thelinearcorre.1ationandtheaveragerecoverywere0.11%.0.15%.0.99916and96.94%respectively.keywords:spinosyns.hpic,analysis.收稿日期:2002.12.7歡迎訂閱2004年<河北化工>雜志200

12、4年<中國化學化工文摘>征訂啟事<河北化工>為化工綜合性技術期刊r由河北省化學工業(yè)研究院和河北省化學工業(yè)技術情報中心站主辦,國內外公開發(fā)行,國內統(tǒng)一刊號cn131058/tq,國際標準刊號issn10035096.本刊為大16開64頁碼,雙月刊,逢雙月20日出版.國內訂價8.5o元/本.全年51元(舍郵寄費).郵發(fā)代號18333.國內可通過全國各地郵局征訂或直接向編輯部匯款訂閱.<河北化工>主要報道化工新成果,新工藝,新產品,新設備和先進經驗及行業(yè)發(fā)展方向,動態(tài),市場信息等.<河北化工>常年承辦廣告業(yè)務(廣告經營許可證13010241300007

13、),封面用紙為157g銅版紙,設計,印刷精美.歡迎來人,來電,來函聯(lián)系廣告.地址:石家莊市建華南大街18號郵編:050031電話;10311l5051579傳真:03i1l5051096email:hgbjb163.tom戶名:河北省石油化學工業(yè)技術情報中心站帳號:0402022409221000187開戶行:工商行石家莊建華辦事處聯(lián)系人:趙健<中國化學化工文摘>是中國化工信息中心主辦的針對化學化工科技文獻方面的檢索期刊,是檢索全國化學化工發(fā)展現(xiàn)狀的主要工具.近年來,本刊不斷加大對化學化工期刊及高校的報道力度;合并了原<化工科技資料目錄>增加了對國內化工圖書,會議文獻及高校碩博士論文的報道;并以分冊的形式報道國內化工專利.<中國化學化工文摘>為月刊(另附主題,作者索引),大16開本,年訂價360元.刊號cn113163/tq,issn10048235.本刊自辦發(fā)行.本刊承接廣告業(yè)務,歡迎企事業(yè)單位刊登廣告,宣傳企業(yè)產品