脂肪細(xì)胞的基礎(chǔ)知識(shí)

1、脂肪細(xì)胞的基礎(chǔ)知識(shí)脂肪細(xì)胞的生長(zhǎng)全過(guò)程及其形態(tài)變化脂肪母細(xì)胞，是指能向脂肪細(xì)胞分化的ADSCs在激素、生物活性因子、寒冷等因素刺激下均能逐漸分化成為單能干細(xì)胞。它可保持著干細(xì)胞增殖活躍的特性，脂肪母細(xì)胞再進(jìn)一步分化為前脂肪細(xì)胞，即通常人們所說(shuō)的脂肪細(xì)胞前體。前脂肪細(xì)胞再經(jīng)歷細(xì)胞融合、接觸抑制和克隆擴(kuò)增等步驟啟動(dòng)向成熟脂肪細(xì)胞分化，并在胰島素、地塞米松等誘導(dǎo)劑作用下完成向成熟脂肪細(xì)胞的分化。全過(guò)程可以表示為：多能干細(xì)胞脂肪母細(xì)胞前脂肪細(xì)胞不成熟脂肪細(xì)胞成熟脂肪細(xì)胞。生長(zhǎng)期前脂肪細(xì)胞的形態(tài)與成纖維細(xì)胞相似，經(jīng)誘導(dǎo)分化，其細(xì)胞骨架和細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生變化，開(kāi)始進(jìn)入不成熟細(xì)胞向成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變。細(xì)胞形態(tài)由成纖

2、維細(xì)胞樣逐漸趨于類圓或圓形，胞體逐漸增大，胞質(zhì)中開(kāi)始出現(xiàn)小脂滴，脂質(zhì)開(kāi)始累積，以后小脂滴增多并融合為較大的脂滴，可經(jīng)油紅“O”染色等方法于顯微鏡下顯色，從而獲得成熟脂肪細(xì)胞的形態(tài)特征。此時(shí)的細(xì)胞無(wú)分裂增殖能力，為脂肪細(xì)胞分化的終末階段。張高娜,梁正翠.動(dòng)物脂肪細(xì)胞的研究進(jìn)展J.飼料工業(yè),2009,30(2):42-44.脂肪細(xì)胞由起源于中胚層的間充質(zhì)干細(xì)胞逐步分化形成,按間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪母細(xì)胞前脂肪細(xì)胞不成熟脂肪細(xì)胞成熟脂肪細(xì)胞的過(guò)程發(fā)展。前脂肪細(xì)胞在多種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控下,激活脂肪組織相關(guān)基因,并在這些基因的順序性調(diào)控下,經(jīng)一系列復(fù)雜的步驟分化為成熟脂肪細(xì)胞。張艷.脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的分子事件J

3、.兒科藥學(xué)雜志,2008,14(1):56-57.間充質(zhì)干細(xì)胞概念：不同文獻(xiàn)中，分別命名為抽脂處理細(xì)胞（processed lipoaspirate cells, PLA），脂肪基質(zhì)微管碎片細(xì)胞（stromal vascularfraction cells, SVF），脂肪組織源基質(zhì)細(xì)胞（adipose-tissue derived stromal cells, ATSCs），脂肪源中胚層干細(xì)胞（adipose-derived mesodermal stem cells, ADMSCs）等。這些不一致的名稱均指從脂肪組織中分離的、可在體外大量擴(kuò)增并具有多向分化潛能的細(xì)胞。李惠俠,屈長(zhǎng)青. 脂肪

4、組織源性干細(xì)胞研究進(jìn)展J. 生理科學(xué)進(jìn)展,2007,38(2)脂肪細(xì)胞是由起源于中胚層的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSC)逐步分化、發(fā)育而來(lái)，MSC主要分布于脂肪組織和骨髓中。脂肪細(xì)胞不同發(fā)育階段的兩類細(xì)胞系為多能干細(xì)胞系和前體脂肪細(xì)胞系，前者為不定向的細(xì)胞系，能轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，后者為定向的細(xì)胞系，是目前體外研究脂肪細(xì)胞分化應(yīng)用最為廣泛的細(xì)胞系。龐衛(wèi)軍,李影. 脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的分子事件J. 細(xì)胞生物學(xué)雜志,2005,27: 497-500.脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose tissue derived mesenchymal

5、stem cells, ADMSCs)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有自我更新及多向分化潛能,是一種具有潛力的組織工程種子細(xì)胞。目前研究得比較多的是骨髓來(lái)源的MSCs,但骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量很少(約占細(xì)胞總數(shù)的1/105),且存在取材困難等問(wèn)題。MSCs廣泛分布于其他組織中,包括肌肉、血管、肝臟、胰腺和脂肪等。ADMSCs表面有CD29、CD44、CD71、CD90、CD105/SH-2、SH-3、STRO-1等多種抗原標(biāo)志。李冬艷,宇麗. 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法的改進(jìn)J. 暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,28(6).脂肪源性干細(xì)胞（a

6、dipose-derived stem cells，ADSCs）Zuk等從脂肪組織中分離出了一種成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，它與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)形態(tài)相似，稱之為脂肪干細(xì)胞（ADSCs)，平均每300 ml脂肪組織可獲得21086108個(gè)這樣的細(xì)胞。ADSCs和MSCs具有相同的表現(xiàn)型，對(duì)CD29、CD44、CD71、CD70、CD105/SH2和SH3為陽(yáng)性反應(yīng)，對(duì)CD31、CD34和CD45為陰性反應(yīng)。此外，它們還具有各自特征性的表達(dá)分化抗原：ADSCs具有特征性表達(dá)分化抗原CD49d，而MSCs具有特征性表達(dá)分化抗原CD106。張高娜, 梁正翠. 動(dòng)物脂肪細(xì)胞的研究進(jìn)展J. 飼料工業(yè),2

7、009,30(2)間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一類具備干細(xì)胞特點(diǎn)的細(xì)胞系，具有自我更新能力、長(zhǎng)期的活性和多系分化潛能。脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cells，ADSCs），以其取材方便、來(lái)源豐富等多種優(yōu)勢(shì)逐漸取代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）。免疫表型：研究發(fā)現(xiàn)ADSCs主要表達(dá)CD13、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106、CD166、CD29、CD49e和HLA-ABC，

8、而不表達(dá)CD34、CD3、CD19、CD45、CD14、CD117、CD31、CD62L、CD95L和HLA-DR。這個(gè)結(jié)果和其他的MSCs幾乎一致。但ADSCs與BMSCs也有差別：大部分BMSCs表達(dá)CD10，而表達(dá)CD10的ADSCs僅占5%20%；幾乎所有的ADSCs表達(dá)CD49f和CD54，而BMSCs極少表達(dá)。周蘇娜,張明鑫. 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特征及臨床應(yīng)用J. 中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2009,12(1).不同細(xì)胞的表面標(biāo)志是不同的，脂肪干細(xì)胞的表面標(biāo)記為：CD9、CD10、CD13、CD29、CD10、CD44、CD49e、CD49d、CD54、CD55、CD59、

9、CD90、CD105、CD107、CD146、CD166等陽(yáng)性，能夠向骨、軟骨和脂肪的等多方向分化。ADSCs表達(dá)4種通用多向分化潛能干細(xì)胞標(biāo)記CD105、STRO21、CD166及CD117。其中CD117是一種干細(xì)胞因子受體，在全能或多能干細(xì)胞中表達(dá)。王?？?趙德萍. 不同類型血清對(duì)大鼠脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)的影響J. 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,(3):4-10.脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程脂肪組織幾乎遍布于全身，在整個(gè)生命過(guò)程中有極強(qiáng)的可塑性，主要由成熟并充脂的脂肪細(xì)胞、無(wú)脂的前體脂肪細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞組成?，F(xiàn)已查明，神經(jīng)纖維和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞也是其組成成分。大約2/3的這些細(xì)胞可以充分發(fā)育為脂肪細(xì)胞，

10、在顯微鏡下呈特有的指環(huán)形細(xì)胞形態(tài)。脂肪細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)依個(gè)體年齡、性別、體重以及來(lái)源部位有很大變化。形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，皮下和腹部脂肪有明顯不同。網(wǎng)膜脂肪組織比皮下脂肪組織含更多的血管和交感神經(jīng)神經(jīng)纖維，說(shuō)明前者具有更強(qiáng)的代謝活性。另外，和皮下脂肪組織比較，網(wǎng)膜脂肪組織的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞更多。人類網(wǎng)膜比皮下脂肪組織脂肪細(xì)胞要小。1脂肪細(xì)胞分化歷程1.1 脂肪組織源性干細(xì)胞脂肪細(xì)胞的來(lái)源及發(fā)生時(shí)間至今尚不完全清楚。Kats等分離得到一種成纖維樣脂肪組織源性干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADsCs)，發(fā)現(xiàn)ADsCs和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一樣是一種多能間充質(zhì)干細(xì)胞，能夠分化為

11、脂肪細(xì)胞、造骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和成肌細(xì)胞。Pittenger等證實(shí)，在培養(yǎng)基中加入異丁基甲基黃嘌呤、地塞米松、胰島素和吲哚美辛誘導(dǎo)分化，部分ADSCs可分化為脂肪細(xì)胞，但是分化過(guò)程中的形態(tài)變化如脂滴聚集等比前體脂肪細(xì)胞系表現(xiàn)較晚。Nakamura等最近也發(fā)現(xiàn)，在同樣的成脂培養(yǎng)條件下，盡管ADSCs與3T3-L1等脂肪細(xì)胞系在分化后期的差異表達(dá)基因相同，主要是一些“脂肪細(xì)胞特異基因”，但在ADSCs分化早期，其差異表達(dá)基因和前體脂肪細(xì)胞并不相同，主要包括細(xì)胞周期相關(guān)蛋白GAS1(growth arrest-specific 1)，轉(zhuǎn)錄因子鋅指蛋白家族(zincfinger protein slug

12、)和MYC(V-myc avian myelocytomatosis viral oncogene homolog)，信號(hào)調(diào)節(jié)因子CDC42(GTPase-activating protein)、PEE4D(phosphodiesterase4D，camp-specific)及細(xì)胞分泌物DKK1等。Hunga等利用基因芯片技術(shù)研究了間充質(zhì)干細(xì)胞分化過(guò)程中基因表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)上述GAS1蛋白等因子在分化早期細(xì)胞表達(dá)。這些研究均表明，ADSCs是一種能分泌瘦素和脂聯(lián)素的多能干細(xì)胞。但是ADSCs與前體脂肪細(xì)胞的關(guān)系，以及調(diào)控ADSCs分化的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子等尚不清楚，同時(shí)對(duì)已發(fā)現(xiàn)的差異表達(dá)基因的結(jié)構(gòu)和

13、功能也有待進(jìn)一步研究和探索。1.2 脂肪母細(xì)胞此階段實(shí)際是多能干細(xì)胞在接受成脂相關(guān)刺激，如寒冷、激素、生物活性因子、體外實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)劑刺激后，由多能變?yōu)閱文芏ㄏ虺芍只钠鹗茧A段，是單潛能干細(xì)胞(unipotential stem cell)。此階段細(xì)胞仍具有干細(xì)胞增殖活躍的特性。對(duì)此階段是否有特異基因表達(dá)，尚未見(jiàn)報(bào)道。1.3 前體脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)期前脂肪細(xì)胞的形態(tài)與成纖維細(xì)胞相似，經(jīng)適當(dāng)?shù)姆只T導(dǎo)，其細(xì)胞骨架和細(xì)胞外基質(zhì)逐漸發(fā)生變化，細(xì)胞開(kāi)始進(jìn)入由不成熟脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞類型轉(zhuǎn)變的過(guò)程。此時(shí)，細(xì)胞形態(tài)由橢圓形逐漸趨于類圓或圓形，胞體逐漸增大，胞質(zhì)中開(kāi)始出現(xiàn)小脂滴，標(biāo)志著脂質(zhì)開(kāi)始積累。小脂滴不斷

14、增多并融合為較大的脂滴，經(jīng)油紅0染色，在顯微鏡下呈現(xiàn)紅色，獲得成熟脂肪細(xì)胞的形態(tài)特征。一般認(rèn)為此階段細(xì)胞已無(wú)分裂增殖能力，為脂肪細(xì)胞分化的終末階段。前脂肪細(xì)胞階段作為脂肪細(xì)胞的確定前體細(xì)胞，人們對(duì)它的研究很多。包括各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人皮下白色脂肪組織及血管間充質(zhì)等部位棕色脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞、鼠胚胎前脂肪細(xì)胞系3T3，以及骨髓來(lái)源的前脂肪細(xì)胞。體外實(shí)驗(yàn)證明，單能干細(xì)胞向此階段分化的啟動(dòng)，首先是細(xì)胞生長(zhǎng)必須停止在細(xì)胞周期的G1/S期，而不是細(xì)胞的接觸。該階段早期特異性表達(dá)A2COL6/P0b24mRNA，其序列與人類編碼IV型膠原A2鏈(A2COL6)的基因序列很相似。但A2COL6/P0b324

15、的表達(dá)并不只限于脂肪組織，也可在卵巢、腎上腺、肺、骨骼肌中表達(dá)。A2COL6/P0b324在成脂分化早期表達(dá)，以后隨晚期特異性分子如GPDH、adipsin表達(dá)的出現(xiàn)而下降，因此它可作為前脂細(xì)胞的特異性標(biāo)志物。Cousin等以A2COL6/P0b324表達(dá)量的差異估計(jì)前脂細(xì)胞在不同解剖部位棕色脂肪組織(表達(dá)解偶聯(lián)蛋白，UCP)的比例，結(jié)果表明卵巢周圍脂肪組織A2COL6/P0b324的表達(dá)量高于肩胛區(qū)、腹肌間及腹膜后的脂肪組織，且其表達(dá)與寒冷和腎上腺素能受體激動(dòng)劑刺激呈正效關(guān)系。前脂肪細(xì)胞具有一般體細(xì)胞的有絲分裂能力。脂肪組織增生有兩條途徑，一是脂肪細(xì)胞通過(guò)獲取脂肪而使體積增加，另一條是通過(guò)前

16、脂肪細(xì)胞數(shù)量增加，進(jìn)而分化成脂肪細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)脂肪組織的增生。1.4 不成熟脂肪細(xì)胞不成熟脂肪細(xì)胞(immature adipose cell)，此期細(xì)胞形態(tài)己趨于類圓或圓形，胞體變大，且胞質(zhì)中開(kāi)始出現(xiàn)小脂滴，標(biāo)志著分化已開(kāi)始接近終末階段。細(xì)胞己無(wú)分裂增殖能力，該階段細(xì)胞除表達(dá)早期標(biāo)志性(early marker)分子(A2COL6/P01324)外，還開(kāi)始表達(dá)晚期分化標(biāo)志性分子，如胰島素敏感性葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等。1.5 成熟脂肪細(xì)胞細(xì)胞達(dá)成熟脂肪細(xì)胞(mature adipose cell/adipocyte)階段時(shí)，成脂分化過(guò)程已告結(jié)束，胞體更大，更圓，胞內(nèi)脂滴數(shù)量增多，且小脂滴融化成大小不等的

17、脂泡。細(xì)胞亦失去增殖、分裂能力，標(biāo)志著終末分化(terminal differentiation)。此期細(xì)胞除表達(dá)前脂、不成熟脂肪細(xì)胞的標(biāo)志性分子(A2COL6/P01324)外，還表達(dá)乙酞輔酶A結(jié)合蛋白(ACBP)、磷酸烯醇型丙酮酸激酶(PEPCK)、脂素(adipsin)、A2-腎上腺素受體(A2-adrenoreceptor)，這些標(biāo)志性分子又被稱為很晚標(biāo)志(very later marker)。2脂肪細(xì)胞分化的標(biāo)志2.1 脂蛋白脂酶脂蛋白脂酶(LPL)是一個(gè)60kD的糖蛋白，在脂肪細(xì)胞分化早期(前脂肪細(xì)胞)即有表達(dá)，并隨分化進(jìn)程表達(dá)逐漸增加，至分化晚期表達(dá)漸趨穩(wěn)定。成熟脂肪細(xì)胞分泌的L

18、PL經(jīng)載脂蛋白Apo-CII激活后，能夠水解乳糜微粒和極低密度脂蛋白中的甘油三醋，產(chǎn)生可直接作為能源的游離脂肪酸，并在能量代謝和脂質(zhì)積聚過(guò)程中發(fā)揮重要作用。脂肪細(xì)胞分化早期LPL是否具有上述功能意義尚不清楚，但由于ADSCs在分化為前脂肪細(xì)胞階段缺乏LPL的表達(dá)，因此LPL作為促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的重要因子之一，已成為干細(xì)胞分化為前脂肪細(xì)胞的經(jīng)典標(biāo)志。2.2 前脂肪細(xì)胞因子與LPL不同，前脂肪細(xì)胞因子(Pref-1)則是脂肪細(xì)胞分化早期具有分化抑制作用的分子標(biāo)志。Pref-1標(biāo)志出現(xiàn)于前脂肪細(xì)胞階段，其mRNA在前脂肪細(xì)胞階段具有較高的表達(dá)水平，隨分化進(jìn)程其表達(dá)則迅速下調(diào)。Pref-1的持續(xù)高表達(dá)

19、可明顯抑制脂肪細(xì)胞分化，而其表達(dá)抑制則明顯增強(qiáng)脂肪細(xì)胞的分化，提示Pref-1在前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中是一個(gè)重要的抑制性分子標(biāo)志。研究表明Pref-1為跨膜蛋白，其胞外區(qū)有6個(gè)連續(xù)的表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域，可形成可溶性的活性因子，通過(guò)抑制P42/P44MAPK通路，阻斷胰島素樣生長(zhǎng)因子受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制脂肪細(xì)胞分化。2.3 脂肪細(xì)胞分化的晚期標(biāo)志脂肪細(xì)胞分化進(jìn)入終末分化階段，各種晚期分子標(biāo)志也開(kāi)始出現(xiàn)，主要包括:(l)甘油三酯代謝相關(guān)的酶類，如乙酞輔酶A脫羧酶、甘油三磷酸脫氫酶、脂肪酸合成酶等;(2)激素相關(guān)蛋白，如胰島素敏感性葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、胰島素受體、腎上腺素能受體等;(3)成

20、熟脂肪細(xì)胞特異產(chǎn)物，如脂肪細(xì)胞脂結(jié)合蛋白、激素敏感酯酶、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、脂周素、瘦素、脂素、脂聯(lián)素(acrp30)和抵抗素等，其中尤以脂聯(lián)素、抵抗素(resitin)近來(lái)備受關(guān)注。2.4 acrp30作為成熟脂肪細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白，acrp30在脂肪細(xì)胞分化中的作用及其意義近來(lái)受到廣泛關(guān)注。acrp30又稱adiponectin，基因序列與補(bǔ)體因子C1q有較高同源性，是一個(gè)30kD的分泌性蛋白。acrp30由信號(hào)序列、可變區(qū)、N端膠原結(jié)構(gòu)域和C端球形域組成，可通過(guò)膠原結(jié)構(gòu)域形成同源三聚體等活性形式，并通過(guò)球形結(jié)構(gòu)域發(fā)揮生物學(xué)功能。重組acrp30可顯著降低肥胖動(dòng)物體內(nèi)的血糖和游離脂肪酸、增強(qiáng)脂

21、肪酸氧化、減輕體重和改善胰島素敏感性。肥胖和胰島素抵抗患者血漿acrp30水平顯著降低，但經(jīng)胰島素增敏劑治療后，血漿acrp30濃度明顯上升，胰島素抵抗癥狀顯著改善，提示acrp30可能是肥胖及胰島素抵抗發(fā)生機(jī)制中的重要保護(hù)因子。2.5 抵抗素抵抗素是脂肪細(xì)胞分化晚期釋放到胞外的一種特異性信號(hào)分子，與肥胖患者胰島素抵抗癥狀的出現(xiàn)關(guān)系密切。抵抗素的N端為信號(hào)，其余94個(gè)氨基酸多膚含有11個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基序列，并通過(guò)二硫鍵形成同源多聚體后才具生物活性。研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食性或遺傳性肥胖小鼠血清抵抗素濃度明顯升高，禁食或應(yīng)用抗糖尿病藥物后其血清濃度及體外培養(yǎng)脂肪細(xì)胞中抵抗素表達(dá)顯著下降;重組抵

22、抗素能使正常小鼠出現(xiàn)胰島素抵抗癥狀，而抵抗素抗血清的使用能夠顯著改善胰島素抵抗癥狀，因此抵抗素作為胰島素抵抗與肥胖的紐帶一直倍受重視。但也有研究持不同觀點(diǎn)，有關(guān)抵抗素與脂肪細(xì)胞分化調(diào)控及胰島素抵抗之間的關(guān)系尚需進(jìn)一步研究。3前體脂肪細(xì)胞分化前脂肪細(xì)胞系和原代前脂肪細(xì)胞具有分化為成熟脂肪細(xì)胞的能力。待分化的細(xì)胞具有一切正常細(xì)胞所具有的包括生長(zhǎng)和有絲分裂在內(nèi)的細(xì)胞周期，而開(kāi)始進(jìn)入分化的前提就是退出此細(xì)胞周期。一般將待分化的細(xì)胞退出細(xì)胞周期的現(xiàn)象稱為生長(zhǎng)抑制(growth arrest)，脂肪細(xì)胞分化也以生長(zhǎng)抑制作為前提條件。生長(zhǎng)抑制之前，前脂肪細(xì)胞經(jīng)歷一個(gè)細(xì)胞匯合(confluence)的階段，但

23、這種細(xì)胞間接觸并不是脂肪細(xì)胞分化的先決條件，比如在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的密度較低的鼠原代前脂肪細(xì)胞在缺少細(xì)胞間接觸的條件下也能分化。一般認(rèn)為脂肪細(xì)胞分化前的生長(zhǎng)抑制發(fā)生于細(xì)胞周期的G1期，這時(shí)的細(xì)胞不但停止生長(zhǎng)而且失去了對(duì)促有絲分裂介質(zhì)的反應(yīng)，稱為Gd期。另外，還存在由于缺少生長(zhǎng)因子而引起的生長(zhǎng)抑制(Gs)和由于缺少營(yíng)養(yǎng)而引起的生長(zhǎng)抑制(Gn)，這兩種生長(zhǎng)抑制也都發(fā)生于G1期，但只有抑制于Gd期的細(xì)胞能在缺少DNA合成的情況下獲得分化表型和能在甲基異丁基黃嘌呤(MIBX)的誘導(dǎo)下增殖，而這兩個(gè)特征是處于Gs和Gn期的細(xì)胞所不具備的。生長(zhǎng)抑制之后，前脂肪細(xì)胞在合適的促有絲分裂和促脂肪生成信號(hào)(主要

24、是激素類)的作用下，經(jīng)過(guò)至少一輪的DNA復(fù)制和細(xì)胞加倍(cell doubling)，進(jìn)入一種無(wú)性增殖階段，此過(guò)程稱為無(wú)性擴(kuò)增(clonal expansion)。無(wú)性擴(kuò)增是3T3-Ll前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化的必要前提。無(wú)性擴(kuò)增的意義在于細(xì)胞通過(guò)增殖而為快速分化打下基礎(chǔ)。對(duì)3T3-F442A小鼠前脂肪細(xì)胞系進(jìn)行體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中原來(lái)都相互分散的細(xì)胞，培養(yǎng)一段時(shí)間以后有一些通過(guò)增殖而形成了細(xì)胞簇，每個(gè)細(xì)胞簇一般有4-12個(gè)細(xì)胞，而另外一些則仍然以單個(gè)細(xì)胞存在。細(xì)胞簇中的細(xì)胞大多數(shù)都積累了脂肪，而單個(gè)存在的細(xì)胞一般都沒(méi)有脂肪生成。但來(lái)源于人脂肪組織的原代前脂肪細(xì)胞的表現(xiàn)有所不同，比如對(duì)

25、此細(xì)胞的有絲分裂進(jìn)行抑制并不能影響其向脂肪細(xì)胞的分化。這種現(xiàn)象說(shuō)明無(wú)性擴(kuò)增可能并不是脂肪細(xì)胞分化的必不可少的步驟，或者可以說(shuō)此步驟對(duì)細(xì)胞分化的重要性對(duì)所有來(lái)源的脂肪細(xì)胞并不都是一樣的。經(jīng)歷(或不經(jīng)歷)無(wú)性擴(kuò)增的前脂肪細(xì)胞開(kāi)始表現(xiàn)出脂肪細(xì)胞的某些特征，這個(gè)階段可看成是分化的早期階段。此時(shí)都發(fā)生了哪些事件以及這些事件的確切順序，現(xiàn)在還不很清楚;此外對(duì)脂肪細(xì)胞分化的研究都是在體外進(jìn)行的，因此細(xì)胞分化的模式也受到材料來(lái)源、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等的影響。Ailhaud等認(rèn)為脂蛋白脂酶(LPL)的表達(dá)是脂肪細(xì)胞分化的早期標(biāo)記，LPL的表達(dá)預(yù)示著脂肪積累的開(kāi)始。但LPL的表達(dá)是在細(xì)胞匯合時(shí)自然發(fā)生的，不受脂肪細(xì)

26、胞分化所必需的各種介質(zhì)是否存在的影響;LPL的表達(dá)也不是脂肪細(xì)胞所特有的，其它類型的間質(zhì)細(xì)胞如心肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞也能合成和分泌LPL。以上現(xiàn)象說(shuō)明LPL只能作為脂肪細(xì)胞分化的一個(gè)早期參考性標(biāo)一記，而不能作為特異性標(biāo)記。目前比較普遍接受的是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)和CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(CCAAT，C/EBP)可以作為脂肪細(xì)胞分化的早期標(biāo)記。二者中的主要異構(gòu)體是脂肪細(xì)胞和脂肪組織所特有的，它們?cè)谇爸炯?xì)胞中就能檢測(cè)到，在加入誘導(dǎo)分化的激素或介質(zhì)之后表達(dá)迅速增加，在成熟的脂肪細(xì)胞中達(dá)到最高水平。細(xì)胞骨架成分和細(xì)胞外基質(zhì)成分種類和水平也伴隨著脂肪細(xì)胞分化的早期階段而變化，例如在脂

27、肪細(xì)胞分化的早期檢測(cè)到肌動(dòng)蛋白和微管蛋白表達(dá)減少。隨著分化的進(jìn)行，細(xì)胞形狀也從成纖維細(xì)胞形逐漸變成近圓形和圓形?，F(xiàn)在認(rèn)為細(xì)胞形態(tài)的變化是分化過(guò)程中必須經(jīng)歷的一步，而不僅僅是脂類積累的結(jié)果。比如，設(shè)法阻斷脂肪酸的合成，使脂類積累不能實(shí)現(xiàn)，仍可以觀察到3T3-Ll前脂肪細(xì)胞經(jīng)歷形態(tài)學(xué)上的變化，因此細(xì)胞形態(tài)的變化也是脂肪細(xì)胞分化的早期標(biāo)記之一。脂肪細(xì)胞分化的早期還有其他一些可能的標(biāo)記，如膠原蛋白表達(dá)水平的變化，前脂肪細(xì)胞因子(pref-1)的表達(dá)變化等。在脂肪細(xì)胞分化的晚期階段，培養(yǎng)基中的脂肪細(xì)胞數(shù)量顯著增加，脂肪積累的速度顯著加快，也獲得了對(duì)胰島素等激素的敏感性。這時(shí)最主要的標(biāo)志是與三酸甘油代謝關(guān)

28、系密切的酶的活性顯著增加，可增加到10-100倍。這些脂肪代謝相關(guān)的酶包括ATP檸檬酸裂解酶、乙酰輔酶A羧化酶、脂肪酸合成酶、3磷酸甘油醛脫氫酶等。此時(shí)的其它變化還有:葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和胰島素受體數(shù)目增加，瘦素(Leptin)開(kāi)始合成，一些脂肪組織特有的產(chǎn)物開(kāi)始合成或加速合成，如脂肪酸結(jié)合蛋白、脂肪酸運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白、脂被蛋白、monobutyrin(一種血管生成介質(zhì))，以及幾種血管緊張素肽原等。超越脂肪細(xì)胞分化特定階段的細(xì)胞必定會(huì)進(jìn)入隨后的最終分化;一旦進(jìn)入最終分化，則既不能去分化，也不能重新進(jìn)入有絲分裂。因此，失去增殖能力是脂肪細(xì)胞進(jìn)入最終分化的標(biāo)志。雖然，過(guò)去認(rèn)為的前脂肪細(xì)胞的克隆增殖發(fā)生在分化前

29、，一旦細(xì)胞進(jìn)入終末分化期，就不再分裂增殖，即成熟脂肪細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，人和動(dòng)物在出生或一定年齡后脂肪細(xì)胞數(shù)目恒定的觀點(diǎn)受到挑戰(zhàn)，盧慧玲等(2003)用激素雞尾酒誘導(dǎo)法誘導(dǎo)分化的部分3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞具有雙核，仍具有分裂增殖的能力，但作為終末細(xì)胞的成熟脂肪細(xì)胞能否再分裂、增殖，目前尚無(wú)定論。嚴(yán)歌苓說(shuō)，人之間的關(guān)系不一定從陌生進(jìn)展為熟識(shí)，從熟識(shí)走向陌生，同樣是正常進(jìn)展。人與人之間的緣分，遠(yuǎn)沒(méi)有想像中的那么牢固，也許前一秒鐘還牽手一起經(jīng)歷風(fēng)雨，后一秒就說(shuō)散就散，所以，你要懂得善待和珍惜。人與人相處，講究個(gè)真心，你對(duì)我好，我就對(duì)你好，你給予真情，我還你真意，人心是相互的。兩個(gè)人在一起，總會(huì)有人主動(dòng)，但主動(dòng)久了，就會(huì)累，會(huì)傷心，心傷了就暖不回來(lái)了，凡事多站在對(duì)方的角度想一想，多一份忍耐和謙就，就不會(huì)有那么多的怨氣和誤解，也少了一些擦肩而過(guò)。做人不要太苛刻，太苛無(wú)友，人無(wú)完人，每個(gè)人都有這樣或那樣的缺點(diǎn)，重在包容。 包容是一種大度，整天笑呵呵的人并不是他沒(méi)有脾氣和煩惱，而是心胸開(kāi)闊，兩個(gè)懂得相互包容的人，才能走得越久。人與人相處，要多一份真誠(chéng)，俗語(yǔ)說(shuō)，你真我便真。常算計(jì)別人的人，總以為自己有多聰明，孰不知被欺騙過(guò)的人，就會(huì)選擇不再相信，千萬(wàn)別拿人性來(lái)試人心，否則你會(huì)輸?shù)皿w無(wú)完膚。人與人相處不要太較真，生活中我們