藥物分析課件第五章分光光度法

1、第五章 分光光度法,藥物分析課件,第五章 分光光度法,考試大綱要求 掌握紫外可見分光光度法的基本原理和測定方 法以及在藥物鑒別、檢查和含量測定中的應用。 熟悉儀器的校正和檢定方法及紫外吸收光譜與物質(zhì)結(jié)構的關系。 熟悉紅外分光光度法的基本原理以及在藥物鑒別、檢查中的應用。 了解紫外分光光度計、熒光光度計和紅外光譜儀的基本結(jié)構。 了解熒光分析法的基本原理和應用,一、紫外可見分光光度法,1原理 當物質(zhì)分子吸收一定波長的光能，分子外層電子或分子軌道電子由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，產(chǎn)生的吸收光譜一般在紫外可見光區(qū)，稱為紫外可見光譜(ultraviolet/visible spectrum, UV/VIS)。 紫

2、外可見光譜為一種分子吸收光譜，吸收波長在200760 nm范圍內(nèi),波長范圍：200400nm稱為紫外光區(qū)，400760nm稱為可見光區(qū)。 光譜產(chǎn)生：是由分子外層價電子躍遷產(chǎn)生的。條件是所提供的輻射能量恰好滿足該吸收物質(zhì)兩能級間躍遷所需的能量。 定量基礎：Lambert-Beer定律,式中A為吸收度，T為透光率，C為溶液濃度，L為液層厚度，E為吸收系數(shù),2儀器,基本組成： 光源 單色器 吸收池 檢測器 數(shù)據(jù)記錄和處理,波長校正：常以汞燈中幾根較強譜線或用氘燈的特定譜線為參照進行校正。 吸收度檢定：用K2Cr2O7的H2SO4溶液進行檢定，在規(guī)定波長處測吸收度。計算與規(guī)定值比較，相對偏差應在1%以

3、內(nèi)。 雜散光檢查：配制一定濃度的NaI和NaNO2溶液，在雜散光影響較顯著的波長處測定透光率，不得大于規(guī)定值,3吸收光譜與物質(zhì)結(jié)構的關系,光譜的特征參數(shù)：max、min、max處的吸收系數(shù)、末端吸收,表5-1電子躍遷的類型,4應用,ChP對吸收度測定要求: (1)對溶劑的要求 (2)空白對照試驗 (3)測定波長確證（在規(guī)定的2nm以內(nèi)） (4)供試品溶液的濃度（使A在0.30.7） (5)儀器的狹縫寬度,UV-ViS的應用,鑒別: 對比吸收光譜特征參數(shù): 核對供試品溶液的max、A是否符合規(guī)定。如鹽酸氯丙嗪的鑒別。 比較吸收度比值的一致性: 吸收峰較多時，可規(guī)定幾個波長處的吸收度比值作為鑒別標

4、準。如兩性霉素B的鑒別。 對比吸收光譜的一致性: 與對照品溶液比較。如已烯雌酚注射液的鑒別,雜質(zhì)檢查,在某波長處,雜質(zhì)有最大吸收,而藥物幾乎無吸收。如地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查、腎上腺素中腎上腺酮的檢查等。 在某波長處，藥物有吸收，而雜質(zhì)吸收弱或無吸收。如頭孢噻吩鈉中噻吩乙酸的檢查,含量測定,對照品比較法 A1/A2=C1/C2 吸收系數(shù)法 A=ECL 計算分光光度法,二、熒光分析法,1原理 熒光 （fluorescence） 當物質(zhì)分子吸收了一定波長的紫外光能之后，基態(tài)電子躍遷到第一激發(fā)態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的電子首先以無輻射的方式下降到第一激發(fā)態(tài)的低能級，而后再回到基態(tài)時，所發(fā)射出的光稱為熒光。由此

5、可見，熒光是一種以光能為激發(fā)源的發(fā)射光，且波長比激發(fā)光波長更長，一般處于可見光區(qū)。熒光現(xiàn)象是物質(zhì)的屬性之一，并非能吸收激發(fā)光的物質(zhì)都能產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,激發(fā)光譜 是熒光強度對激發(fā)波長的關系曲線。 發(fā)射光譜 也稱熒光光譜，是熒光強度對發(fā)射波長的關系曲線。 熒光光譜的形狀與激發(fā)波長無關。熒光光譜與激發(fā)光譜存在鏡像對稱“關系”。 定量依據(jù) 當激發(fā)光的波長、強度、測定用溶劑、溫度等條件一定時，物質(zhì)在低濃度范圍內(nèi)的熒光強度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比,3應用,鑒別 利用藥物顯熒光的特點進行鑒別，如馬來酸麥角新堿的鑒別 利用藥物本身無熒光，但處理后顯熒光的性質(zhì)進行鑒別，如VB1的鑒別 含量測定 對照品比較法，如

6、地高辛片的含量測定,三、紅外分光光度法,1原理 當物質(zhì)分子吸收一定波長的光能，能引起分子振動和轉(zhuǎn)動能級躍遷，產(chǎn)生的吸收光譜一般在2.5m25m或4000 cm-1400cm-1的中紅外光區(qū)，稱為紅外分子吸收光譜簡稱紅外光譜（infrared spectrum，IR）。利用紅外光譜對物質(zhì)進行定性分析或定量測定的方法稱紅外分光光度法,波數(shù)范圍：4000400cm1 光譜產(chǎn)生：是由分子的振動、轉(zhuǎn)動能級躍遷產(chǎn)生,2儀器基本組成,光源 吸收池單色器 檢測器 數(shù)據(jù)記錄和處理 ChP規(guī)定 對儀器波數(shù)的校正用聚苯乙烯薄膜為測試樣品，繪制紅外譜圖；對儀器分辨率有一定的要求,3紅外光譜與結(jié)構的關系,特征區(qū)：40001300cm1；指紋區(qū)：1300400cm1。 注意：特征