費(fèi)林試劑熱滴定定糖法

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告題目：斐林試劑熱滴定定糖法姓名：余振洋學(xué)號：200900140156同組者：張剛剛系年級：09 級生科 3 班時(shí)間：2011/5/14一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?初步掌握斐林試劑熱滴定定糖法的原理和方法。2正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點(diǎn)。二、【實(shí)驗(yàn)原理】還原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的單糖和某些二糖(如：乳糖、麥芽糖)。在堿性溶液中，還原糖能將金屬離子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)還原，而糖本身被氧化成各種羥酸類化合物。該特性常用于糖的定性和定量測定。斐林試劑由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.1 g/mL 的氫氧化鈉溶液和硫酸銅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.05 g/mL 的溶液，

2、還有酒石酸鉀鈉配制而成的。它與可溶性的還原性糖(葡萄糖、果糖和麥芽糖)在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。因此，斐林試劑常用于鑒定可溶性的還原性糖的存在與否。本實(shí)驗(yàn)采用費(fèi)林試劑熱滴定法，費(fèi)林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和次甲基藍(lán)(氧化還原指示劑)；乙液含氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。當(dāng)甲、乙兩溶液混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡(luò)合物。三、【試驗(yàn)器材】125 毫升堿滴定管。2移液管(5、10 毫升)3100 毫升容量瓶4100 毫升錐形瓶5滴管6點(diǎn)滴板7水浴鍋8電爐9玻璃棒，燒杯，分

3、析天平四、【實(shí)驗(yàn)試劑】1費(fèi)林試劑(定量)：A費(fèi)林甲液：稱取 15 克硫酸銅(CuSO4 5H2O)和 0.05 克次甲基藍(lán)，溶于 1000 毫升水中。B費(fèi)林乙液：稱取 50 克酒石酸鉀鈉、54 克氫氧化鈉和 4 克亞鐵氰化鉀溶于 1000 毫升水中。2標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（1mg/ml）：稱取葡萄糖(預(yù)先在 105烘干，恒重)1 克，用少量蒸餾水溶解后加入 8 毫升濃鹽酸(防止微生物生長)，再用蒸餾水定容至 1000 毫升。36M 鹽酸溶液。410%氫氧化鈉溶液。5碘液。6PH114 試紙。五、【實(shí)驗(yàn)操作】1總糖的提取準(zhǔn)確稱取面粉 1 克，加入 6N 鹽酸 10ml，蒸餾水 15ml，混勻。沸水浴加

4、熱半小時(shí)后，取出幾滴水解液用碘液檢查水解是否完全，若已經(jīng)水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后用 10% 氫氧化鈉中和至中性溶液，定容至 100 毫升，過濾。準(zhǔn)確吸取該濾液 10ml，移入 100 毫升容量瓶內(nèi)并定容至刻度，即為測定總糖的樣品液。2空白測定準(zhǔn)確吸取費(fèi)林甲、乙液各 5ml 和蒸餾水 5ml 放入 100ml 的錐形瓶中，再用滴定管加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液，混勻后放在石棉網(wǎng)上加熱，應(yīng)使瓶內(nèi)溶液在 2 分鐘內(nèi)達(dá)到沸騰，以每滴 12 滴的速度由滴定管滴入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液直至藍(lán)色消失變成黃色且在 30s 內(nèi)顏色又變成深紅色為止。沸騰前加入的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量與沸騰后滴定時(shí)所用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量的總和，就是

5、測定空白時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液毫升數(shù)(V1)，平行操作 3 次，直至所得的平均數(shù)與各組的差值0.05ml。3總糖樣品的測定準(zhǔn)確吸取樣品液 5ml 放于 100ml 錐形瓶內(nèi)，加入費(fèi)林甲液、乙液各 5ml，混勻，然后按測定空白同樣操作進(jìn)行滴定，記下耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)（V2），平行操作 3 次，直至所得的平均數(shù)與各組的差值0.05ml。4計(jì)算(V1-V2) 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度(克/毫升) 稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)%=100稱取的樣品量(克)5式中：V1 為測定空白時(shí)耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液毫升數(shù)。V2 為測定總糖時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。六、【注意事項(xiàng)】1. 菲林試劑一般應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，因?yàn)殪沉衷噭┘缀挽沉?/p>

6、試劑乙混合后會(huì)因酒石酸有一定的還原性而自發(fā)地緩慢產(chǎn)生氧化亞銅沉淀；2. 總糖的提取步驟中，面粉應(yīng)在液體加入三角瓶之后再加入，因?yàn)檫@樣可以使面粉更容易解，沸水浴 30min 后檢查是否水解完全，若未則應(yīng)繼續(xù)加熱；3. 用酚酞作指示劑時(shí)用 10%氫氧化鈉調(diào) PH 至 7，應(yīng)先計(jì)算大概需加入氫氧化鈉溶液的體積，然后在接近拐點(diǎn)處應(yīng)一滴一滴甚至半滴半滴的加，因?yàn)榇颂幫蛔兒艽螅苊饧尤霘溲趸c過量后再用鹽酸調(diào) PH，因?yàn)檫@會(huì)使得葡萄糖溶液變得粘稠；4. 空白滴定中一定以每滴 1-2 秒的速度由滴定管滴入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液直至藍(lán)色變成黃色且在 30s 內(nèi)顏色又變成深紅色為止；5全部滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下快速進(jìn)行

7、，一般應(yīng)在 3 分鐘內(nèi)完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。加入該液的數(shù)量，應(yīng)在正式滴定前的預(yù)備滴定試驗(yàn)時(shí)確定，同時(shí)練習(xí)掌握操作條件6. 平行三次后所得的平均數(shù)與各組的差值0.05ml。七、【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】1數(shù)據(jù)表一斐林試劑熱滴定定糖樣品管及空白管數(shù)據(jù)空白測定樣品測定123123菲林甲液/ml555555菲林乙液/ml555555樣品液/ml555蒸餾水/ml555V1（V2）/ml7.0157.0406.9833.2713.2453.289平均值/ml7.0133.268V1V2/ml3.7452計(jì)算(V1-V2) 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度(克/毫升) 稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)%

8、=100稱取的樣品量(克)5（7.013-3.268）110-31000= 1001.00255= 74.7所以，根據(jù)實(shí)驗(yàn)和計(jì)算得出，面粉中的糖含量為 74.7。八、【結(jié)果分析及討論】分析：從資料上得知，一般面粉的糖含量都在70以上，高的甚至可以達(dá)到8090，而我們組的試驗(yàn)結(jié)果為74.7，同時(shí)和其他小組的試驗(yàn)結(jié)果相對比，我們的數(shù)值也應(yīng)該算是較低的。據(jù)分析，造成我們測得糖含量偏低的原因可能有：1) 面粉未完全水解成為葡萄糖，則自然最終測得的結(jié)果偏低；2）水解后的葡萄糖溶液未調(diào)至中性，而這會(huì)影響斐林試劑的作用，則最終給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來一定誤差；3）在定容葡萄樣樣液時(shí)，容量瓶內(nèi)液體沒有搖勻，則導(dǎo)致局部濃度過低或過高，造成最終測定結(jié)果偏低或偏高；4) 在滴定測V2時(shí)，整個(gè)滴定過程并沒有完全沸騰的狀態(tài)下快速進(jìn)行，導(dǎo)致糖被不斷的還原和氧化，而使滴定終點(diǎn)延后，即V2值偏大，導(dǎo)致最終計(jì)算出的糖含量偏低；5) 同理，在滴定測V1時(shí)，由于操作不當(dāng)，導(dǎo)致滴定結(jié)果提前，即V1值偏小，也會(huì)導(dǎo)致最終計(jì)算出的糖含量偏低。討論：經(jīng)驗(yàn)一：在做空白測定時(shí)，有了第一組的滴定所用標(biāo)準(zhǔn)葡糖糖溶液用量后，在做第二組測定時(shí)，可以先一次性地提前滴入一定量的葡萄糖液，從而可以縮短滴定時(shí)間。經(jīng)驗(yàn)二：在滴定過程中，應(yīng)注意在顏色由藍(lán)色變?yōu)樽仙珪r(shí)，應(yīng)減慢滴速，當(dāng)顏色變?yōu)橥咙S色時(shí)，立即停止加入葡萄糖，顏色會(huì)