顯微鑒定的基本操作技能

1、第三章 顯微鑒定的基本操作技能,第一節(jié) 顯微標本片的制作,一、組織透化劑及應(yīng)用： 1、組織透化劑：使細胞組織內(nèi)含物溶解除去或透明清晰、色素氧化退色、皺縮細胞壁膨脹透明的試劑。 2、作用：（1）浸潤作用。 （2）溶解、分解或氧化作用,3、常見的透化劑：（1）水合氯醛的特點：能滲入組織細胞內(nèi)，使干燥而皺縮的細胞發(fā)生膨脹；能溶解多數(shù)組織內(nèi)含物；對觀察草酸鈣結(jié)晶極為適宜；不加熱可立刻觀察菊糖。,（2）氫氧化鉀（氫氧化鈉）溶液的特點：（1）5%水溶液為強力透化劑；能迅速溶解除去淀粉和蛋白質(zhì)，且能使細胞壁膨脹，作用持久；對纖維素性細胞壁組織有解離作用；透化后需將其洗去；常用于解離組織標本片。,二、組織封藏

2、劑及應(yīng)用： 1、組織封藏劑：能保持原制片要求，利于組織和細胞形狀、顏色和內(nèi)含物觀察的溶液。,2、作用：保持原制片要求。 3、常見的封藏劑：（1）蒸餾水加酚、苯甲酸、樟腦等防霉。 特點： 能保持原形、原色，對皺縮的細胞壁可恢復(fù)原狀態(tài)； 用蒸餾水裝片可觀察淀粉粒； 可使黏液溶解，并破壞糊粉粒。,（2）稀甘油加入酚等防霉。 特點： 保持2 3天； 用稀甘油裝片可觀察糊粉粒、淀粉粒、油滴、樹脂等； 可在透化后滴加，以防水合氯醛析出結(jié)晶。,三、顯微標本片： 1、粉末標本片：以粉末裝片，粉末有細度要求。 2、表面標本片：3、切片標本片：中藥鑒定中最多的一類。 4、解離組織標本片。,四、粉末標本裝片： 1、

3、暫時性粉末標本片：暫時性的，用完之后就洗掉的，載玻片、蓋玻片可重復(fù)使用。 過程：（1）粉末加封藏劑、蓋蓋玻片、清潔、觀察。,（2）粉末加水合氯醛溶液加熱透化三次，加稀甘油封藏、蓋蓋玻片、清潔、觀察。 2、永久性粉末標本片：做法較復(fù)雜，一般我們在外面購買的就是永久性裝片，只要不損壞，可以一直看。,五、表面標本片：主要用于葉片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮的表面特征觀察。 1、整體封藏法：取材料剪取正反2小片，加水合氯醛加熱透化3次，加稀甘油封藏，蓋蓋玻片，清潔，觀察。 2、表皮撕離法：適用于較厚的葉片、萼片、花瓣等。,六、切片制片法：此類與粉末裝片用得最多，有橫切和縱切。 1、機器切片法：生活中很少用

4、，只有生產(chǎn)廠家大量生產(chǎn)時運用。,2、徒手切片法：實驗室常用此法。（1）材料的預(yù)處理：清潔，（除去非藥用部分，選取合適切片部分。）切成適當大小的塊，軟化。,軟化方法： 在吸濕器中放置12 24h。 過硬，水浸或煮12h。 特硬，高壓鍋煮20min。如天麻。 過軟，浸入高濃度乙醇中20min。,軟化注意事項： 需觀察糊粉粒、黏液、菊糖等水可溶性的物質(zhì)的，不可與水接觸。 需觀察揮發(fā)油、樹脂等，不能與高濃度乙醇或其他有機溶劑接觸。,（2）材料的分割：切薄片。 （3）材料的挾持：方便切片，常用胡蘿卜、馬鈴薯。 （4）徒手切片刀：雙面和單面，雙面切較柔軟，單面切較硬，單面應(yīng)用較多。,（5）持刀方法：右手持

5、刀，刀身放平，刀口向切片者。 （6）切片：材料和刀口蘸水，切掉不整齊一段，同左前外方向右內(nèi)方迅速拉切，臂用力。 （7）取片：合乎需要的立即浸入水中。,（8）透化：置載玻片中央加水合氯醛加熱透化。 （9）封藏：加稀甘油封藏，蓋蓋玻片。 （10）清潔觀察。,七、解離組織標本片：薄壁組織點大部分的用氫氧化鉀法；質(zhì)地堅硬，木化組織較多用硝鉻酸法。,1、氫氧化鉀法：供試樣置試管中加氫氧化鉀，加熱，傾去堿液，用水洗，放于載玻片上，用解剖針撕開，加稀甘油，蓋上蓋玻片。,2、供試樣置于試管中，加硝鉻酸試液適量，放置，傾去酸液，加水洗，放于載玻片上，用解剖針撕開，加稀甘油，蓋上蓋玻片。,第二節(jié) 顯微測量法,顯微

6、測量：應(yīng)用顯微鏡測量尺在顯微鏡下測量微細物體的大小。顯微測量尺分為目鏡測微尺和載物臺測微尺。,1、目鏡測量尺：安裝在目鏡內(nèi)的一個測量尺。 2、載物臺測量尺：載玻片中央粘貼的測量尺。,3、兩尺的關(guān)系及應(yīng)用：臺微尺是不變的，每小格10um；目微尺隨目鏡和物鏡的變化而變化。,4、目微尺的標定： （1）將臺微尺放置在載物臺上，目微尺放入目鏡鏡筒內(nèi)。（2）先低倍鏡，將目微尺刻度移至視野中央。（3）旋轉(zhuǎn)目鏡，使兩尺平行。,（4）移動臺微尺，使目微尺零端與臺微尺刻度的某刻度線相重合。 （5）再找兩尺的第二條重合刻度線，數(shù)兩條重合線間兩尺的小格數(shù)，記錄。 （6）計算出目微尺每一格在該物鏡條件下相當?shù)拈L度（um

7、）標定值 =臺微尺小格數(shù)10um/目微尺小格數(shù)。,5、測量方法： （1）將需測量的載玻片放于載物臺上。 （2）用目微尺測量目的物的小格數(shù)，記錄。 （3）計算：實際長度um=測得小格數(shù)標定值,第三節(jié) 顯微繪圖法,顯微繪圖法的方法又分為平描和應(yīng)用顯微描繪器描繪。 一、平描：只憑肉眼描繪 1、根據(jù)觀察到的實物進行繪圖。,2、繪圖的要求： （1）要排列整齊、部位適中、比例恰當。 （2）要做到形狀、比例、倍數(shù)正確。 （3）以點、線表示。,（4）圖中各部分用阿拉伯數(shù)字表示，在圖下端注明標號名稱。 3、繪圖用具：16開白紙或A4白紙。鉛筆。,4、繪圖：圖的類型一般分粉末圖及組織圖。 （1）粉末圖：繪出其粉末

8、特征。（2）組織詳圖：較詳細，需要所有組織全部繪出，較難，一般不繪此種圖。,（3）組織簡圖：以線條表示，清晰，一目了然。實驗室常繪出的圖，但不實用于出版、做研究等。 二、顯微描繪器描繪：分放映裝置和描繪器。,第四節(jié) 常用顯微化學(xué)分析,一、細胞壁性質(zhì)的鑒別： 1、木質(zhì)化細胞壁：加間苯三酚試液，放置，加鹽酸，顯紅色或紫紅色。 2、木栓化或角質(zhì)化細胞壁：加蘇丹試液或紫草試液，微熱，顯橘紅色至紫色。,3、纖維素細胞壁：（1）加氯化鋅碘試液濕潤，放置，再加硫酸溶液，顯藍色或紫色。 4、硅質(zhì)化細胞壁：,二、細胞內(nèi)含物質(zhì)性質(zhì)的鑒別： 1、淀粉粒：（1）加碘試液顯藍色或紫色。（2）用甘油醋酸試液裝片，末糊化的在顯微鏡下顯偏光。,2、菊糖：加a-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并溶解。 3、脂肪油、揮發(fā)油、樹脂：（1）加蘇丹試液或紫草試液，均顯橘紅色到紫紅色。,（2）加90%乙醇，脂肪油和樹脂不溶解，揮發(fā)油溶解。 4、糊粉粒：（1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。,（2）加三硝基苯酚試液，顯黃色。 （3）加硝酸汞試液，顯磚紅色。 5、黏液：（1）加墨汁，黏液呈無色透明塊狀。 （2）加釕紅試液，顯紅色。,6、草酸鈣結(jié)晶：（1）加稀鹽酸溶解而