GB 29709-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中氮哌酮及其代謝物殘留量的測定 高效液相色譜法

G 中華人民共和國 國 家標(biāo)準(zhǔn) 9709 2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物 性食品 中 氮哌酮及 代謝物 多 殘留 的測定 高效液相色譜法 in （電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)） 2013布 2014施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 物性食品中氮哌酮及 代謝物 多殘留 的測定 高效液相色譜法 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑和材料 . 5 儀器和設(shè)備 . 6 試料的制備與保存 . 料的制備 . 品的保存 . 7 測定步驟 . 提取 . 凈化 . 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 . 測定 . 空白試驗(yàn) . 8 結(jié)果計(jì)算與表述 . 9 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 . 敏度 . 確度 . 密度 . 附錄 A . 言 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。 動物性食品中氮哌酮及 代謝物殘留量的測定 高效液相色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物性 食品 中氮哌酮及 代謝物氮哌醇?xì)埩袅繖z測的制樣和高效液相色譜測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬的肌肉、皮 +脂 、 肝臟 和 腎臟 組織 中氮哌酮及 代謝物氮哌醇?xì)埩袅康?檢測 。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件， 其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié) 議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。 3 原理 試料中殘留的氮哌酮及 代謝物，用乙腈萃取，正己烷除脂， 凈化，高效液相色譜測定，外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 以下 所用試劑，除特別注明者外均為分析純；水為符合 6682 規(guī)定的一級水。 氮哌酮、氮哌醇標(biāo)準(zhǔn)品 ： 含量 98%。 乙腈： 色譜純 。 正己烷 濃氨水 甲醇 乙酸銨 甲酸 相萃取柱： 60 相當(dāng)者 。 2%的甲酸水溶液 ：取甲酸 2 用 水 溶解并 稀釋至 100 5%的氨化甲醇： 取氨水 5 甲醇 溶解并 稀釋至 100 5 乙酸銨溶液： 取 乙酸銨 g，用水溶解 并 稀釋至 1 000 濾膜 過濾。 1 mg/準(zhǔn)貯備液： 精密 稱取 氮哌酮 和 氮哌醇標(biāo)準(zhǔn)品 各 10 別 于 10 瓶中，用甲醇溶解并 稀釋至刻度 ，配成濃度為 1 mg/標(biāo)準(zhǔn)貯備液。 以下 避光保存，有效期 3 個月。 1 g/合 標(biāo)準(zhǔn)工作液 ： 分別 精密 量取 1 mg/哌酮 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 和 氮哌醇 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 各 0.1 于 100 瓶中， 用甲醇稀釋 至刻度 ，配制 成濃度為 1 g/混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 。 以下 避光保存，有效期 3 個月。 5 儀器和設(shè)備 高效液相色譜儀： 配紫外檢測器 。 分析天平 ： 感量 1 g。 天平： 感量 g。 冷凍高速離心機(jī) 氮?dú)獯蹈裳b置 旋渦混合器 固相萃取裝置 超聲波清洗機(jī) 均質(zhì)機(jī) 離心管 濾膜： m。 6 試料的制備與保存 料的制備 取新鮮或冷凍空白組織、供試組織，去除筋膜，絞碎，并使均質(zhì)。 取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試 試料 。 取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白 試料 。 取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn) 工作 液，作為空白添加試料。 品的保存 以下保存。 7 測定步驟 提取 稱取試料（ 5g， 于離心管中， 加乙腈 10 渦混合 1 聲 2 5 000 r/心 5 上清液， 殘?jiān)?中 加乙腈 10 復(fù) 提取 一次，合并兩次上清液 。 于 40 水浴旋轉(zhuǎn)蒸干。 用 2%甲酸水溶液 5 解 殘余物，加 正己烷 4 混勻， 5 000 r/心 5 正己烷層 液 ，備用。 凈化 依次 用甲醇 3 3 2%甲酸水溶液 3 化， 取備用液過柱 ，控制流速小于1 mL/用 2%甲酸水 3 甲醇 3 洗 ， 抽干， 用 5%氨化甲醇 4 脫。 收集洗脫液，于40 氮?dú)獯蹈桑?用 流動相 1.0 解 殘余物 ，旋渦混勻， 供高效液相色譜法測定 。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量 取 1 g/合標(biāo)準(zhǔn)工作液 適量，用甲醇 稀釋 ，配制 成濃度 為 10、 20、 50、 100、 200、500 和 1 000 g/L 的系列 混合 標(biāo)準(zhǔn) 溶液 。 每個濃度重復(fù) 3 次， 供高效液相色譜測定， 以測得峰面積 平均值 為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 測定 譜條件 色譜柱： 250 .6 徑 5 m） ，或相當(dāng)者； 流動相： 乙腈 +5 乙酸銨溶液 （ 50+50， v/v） ； 流速： 1 mL/ 紫外檢測波長： 250 柱溫： 40 ， 進(jìn)樣量： 50 L。 定 法 取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算 。 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中 氮哌酮和氮哌醇 響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。 在上述色譜條件下， 標(biāo)準(zhǔn) 溶液 和空白添加 試樣 溶液 的高效液相色譜圖 見附錄 A。 空白試驗(yàn) 除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。 8 結(jié)果計(jì)算與表述 試料中 氮 哌酮 和 氮哌醇 殘留量（ g/按下式計(jì)算 單點(diǎn)校準(zhǔn)： 或標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)：由 b， 求得 a和 b，則 式中： X 供試 試料中 相應(yīng)的 氮哌酮 及代謝物 殘留量， g/ A 試樣中 相應(yīng)的 氮哌酮 及代謝物 峰 的 面積； 標(biāo)準(zhǔn)工作液中 相應(yīng)的 氮哌酮 及代謝物 峰 的 面積； 標(biāo)準(zhǔn)工作液中 相應(yīng)的 氮哌酮 及代謝物的 濃度， g/L； C 供試試料 溶液中 相應(yīng)的 氮哌酮 及代謝物的 濃度 ， g/L； V 溶解殘余物所用流動相 體積， m 供試試料 質(zhì)量， g。 注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 敏度 本方法的檢測限 為 2 g/定量限 為 5 g/ 確度 本方法在肌肉、皮 +脂 組織 5 60 g/肝 臟 和腎 臟組織 5 100 g/加濃度水平上的 回收率 為 60%