細(xì)胞工程與環(huán)境

細(xì)胞工程摘要細(xì)胞工程即在細(xì)胞水平上應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科的理論和技術(shù)。構(gòu)建環(huán)境工程菌、抗污染型植物以及基于抗體的環(huán)境治理等技術(shù)越來越廣泛地應(yīng)用到環(huán)境治理當(dāng)中。本文簡(jiǎn)要介紹了細(xì)胞工程、細(xì)胞融合、細(xì)胞固定化的基本概念及其在環(huán)境治理中國(guó)內(nèi)外的應(yīng)用狀況，并提出展望。關(guān)鍵詞細(xì)胞工程；細(xì)胞融合；細(xì)胞固定化；ABSTRACTCELLENGINEERINGISAPPLICATIONOFCELLBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGYDISCIPLINESTHEORYANDTECHNOLOGYATTHECELLULARLEVELBUILDENVIRONMENTENGINEERINGBACTERIA,ANTIPOLLUTIONPLANTSANDENVIRONMENTALPROTECTION,BASEDONANTIBODYTECHNOLOGY,AREMOREANDMOREWIDELYUSEDINENVIRONMENTALGOVERNANCETHISPAPERBRIEFLYINTRODUCESTHECELLENGINEERING,CELLFUSION,THEBASICCONCEPTSOFTHEIMMOBILIZEDCELLSANDITSAPPLICATIONINENVIRONMENTALGOVERNANCE,BOTHINSIDEANDOUTSIDECHINAANDPUTFORWARDTHEPROSPECTKEYWORDSCELLENGINEERINGCELLFUSIONIMMOBILIZATION1構(gòu)建環(huán)境工程菌11細(xì)胞融合在外界因素誘導(dǎo)劑或促融劑的作用下，兩個(gè)或兩個(gè)以上的異源種、屬間細(xì)胞或原生質(zhì)體相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合并形成雜種細(xì)胞的現(xiàn)象稱為細(xì)胞融合CELLFUSION1。以細(xì)胞融合技術(shù)為首的多種細(xì)胞工程技術(shù)如細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞固定化等技術(shù)越來越廣泛地應(yīng)用到環(huán)境治理當(dāng)中。原生質(zhì)體融合技術(shù)作為高頻重組的有效方法和遺傳學(xué)研究工具，打破了不同物種間屬間、門間進(jìn)行基因重組的天然障礙，為把多個(gè)不同親本優(yōu)良性狀進(jìn)行融合提供了一個(gè)有利手段，并擴(kuò)大了重組幅度，成為一種新的微生物育種技術(shù)1。原生質(zhì)體融合技術(shù)由于可以構(gòu)建生物新品種，同時(shí)又不屬于“轉(zhuǎn)基因生物”，不產(chǎn)生基因污染和安全性問題，會(huì)在微生物降解污染物的應(yīng)用方面越來越廣，越來越受到重視，尤其環(huán)境污染越來越嚴(yán)重的今天，更顯示出其他技術(shù)無法比擬的優(yōu)越性2。12固定化固定化細(xì)胞技術(shù)是指將微生物固定在載體上使其高度密集并保持生物活性功能，在適宜的條件下還可增殖以滿足應(yīng)用之需的生物技術(shù)；它利用某些化學(xué)或物理手段將游離細(xì)胞定位于限定的區(qū)域，使其保持活性并可反復(fù)利用3。2004年，有人嘗試了用改進(jìn)的PVA硫酸鹽包埋法進(jìn)行固定化藻細(xì)胞，用該法制得的固定化小球機(jī)械強(qiáng)度高，透光性和傳質(zhì)性能較好，能滿足藻細(xì)胞光合作用和微生物生長(zhǎng)的要求，可用于營(yíng)養(yǎng)物濃度較高的城市生活污水處理體系，是一種具有發(fā)展?jié)摿Φ男滦凸潭ɑ⑸锓椒?。用此固定化方法得到的蛋白核小球藻和活性污泥共固定體系對(duì)含高濃度氮、磷的廢水有良好的處理效果，而且無需額外的預(yù)處理過程4。2010年，劉望才等進(jìn)行了新型固定化方法生物處理含酚廢水的研究5。李賢玉等用CACL2作為固化劑，采用化學(xué)交聯(lián)法研究制備聚乙烯醇PVA固定化微生物凝膠，獲得了具有較高力學(xué)強(qiáng)度和通透性的PVA凝膠小球用于污水處理。所得到的凝膠小球的保留率及強(qiáng)度較高，通透性較好6。另外，有學(xué)者比較了固定化狀態(tài)和懸浮狀態(tài)的工程菌的降解效果，發(fā)現(xiàn)固定化工程菌的降解活性較后者明顯降低，其比降解速率大約僅為后者的20?？疾旃潭ɑこ叹L(zhǎng)期運(yùn)行的效果，發(fā)現(xiàn)其降解活性保存良好，工程菌穩(wěn)定性大大提高，未出現(xiàn)固定化細(xì)胞溶漲、破碎現(xiàn)象。固定化后，工程菌的比降解速率雖然比懸浮工程菌降低了，但固定化工程菌更適用于長(zhǎng)期運(yùn)行的廢水處理系統(tǒng)7。傳統(tǒng)的未固定化處理的工程菌在活性污泥處理系統(tǒng)中流失嚴(yán)重，一些研究表明，采用基因工程菌的生物強(qiáng)化技術(shù)可以顯著提高系統(tǒng)的處理效率，擴(kuò)大底物利用范圍，提高系統(tǒng)的抗沖擊負(fù)荷的能力8。采用固定化基因工程菌強(qiáng)化處理與傳統(tǒng)活性污泥處理串聯(lián)工藝，實(shí)現(xiàn)對(duì)高濃度高負(fù)荷污水的生物強(qiáng)化處理，避免出現(xiàn)大量工程菌流失的現(xiàn)象，同時(shí)在固定化顆粒的表面以及淺層均觀察到了大量工程菌菌體，固定化顆粒的表面還出現(xiàn)了生物膜和菌膠團(tuán)9。13工程菌的實(shí)際應(yīng)用131難降解有機(jī)污染物難降解有機(jī)污染物是指幾乎不能被微生物降解，或降解所需時(shí)間非常長(zhǎng)，已不可能被利用來控制該有機(jī)物對(duì)環(huán)境的危害的那些有機(jī)化合物，如鹵代脂肪烴、鹵代酯、單環(huán)芳香化合物、酚和甲酚類、鄰苯二甲酸酯、多環(huán)芳香烴、氮代化合物、多氯聯(lián)苯、有機(jī)氯蟲劑、有機(jī)磷殺蟲劑、氨基甲酸酯殺蟲劑和除草劑等10，生物可利用性低，其工程菌的構(gòu)建主要包括以下兩個(gè)方面11其一，工程菌代謝途徑的改造，單一的代謝途徑很難把POPS徹底降解，污染物降解到完全礦化一般需要不同層次的降解酶的共同作用，即共代謝降解作用。其二，工程菌構(gòu)建的細(xì)胞融合技術(shù)，將能夠產(chǎn)生生物表面活性劑（可以降低多環(huán)芳烴在環(huán)境中的毛細(xì)管張力和提高其在水中的溶解性，使多環(huán)芳烴從固相轉(zhuǎn)移到水相）的細(xì)菌與高降解菌進(jìn)行融合，從而增加了環(huán)境生物對(duì)POPS的利用率。該工程菌構(gòu)建的應(yīng)用具有重要的研究?jī)r(jià)值，很多學(xué)者在多個(gè)領(lǐng)域進(jìn)行了研究和探索。（1）苯酚廢水采用雙親滅活原生質(zhì)體融合技術(shù)選育的一株高效苯酚降解菌株，比出發(fā)菌株降解苯酚能力提高20，能降解苯酚的最高濃度達(dá)到1800MGL1。以海藻酸鈉為載體，將高效苯酚降解菌進(jìn)行固定化，固定化細(xì)胞能降解苯酚的最高濃度提高為2200MGL1，比游離菌體的降酚能力約提高2212。（2）農(nóng)藥殘留許多農(nóng)田受到農(nóng)藥殘留的污染往往是有機(jī)磷和有機(jī)氯類農(nóng)藥的混合污染。將有機(jī)磷水解酶基因的質(zhì)粒導(dǎo)人降解有機(jī)氯的工程菌中，構(gòu)建了能夠同時(shí)降解有機(jī)磷和有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留生物降解的工程菌。通過在大腸桿菌表面表達(dá)有機(jī)磷水解酶，使酶與底物充分接觸提高了全細(xì)胞降解活性。同時(shí)，該工程菌通過融合綠色熒光蛋白發(fā)出的熒光以便于該工程菌在線監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用13。酯酶B1是有機(jī)磷抗性庫蚊體內(nèi)產(chǎn)生的一類水解酶,它能有效的水解有機(jī)磷、有機(jī)氯、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯等四大類農(nóng)藥。酯酶B1基因在原核細(xì)胞中有兩種表達(dá)形式，一種是非融合表達(dá)，另一種是融合表達(dá)，為進(jìn)一步提高工程菌的酯酶活性，為其應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐創(chuàng)造條件，筆者研究了酯酶B1基因在大腸桿菌中的融合高效表達(dá)，獲得轉(zhuǎn)解毒酶基因工程菌，并對(duì)其進(jìn)行固定化研究，結(jié)果表明固定化工程菌株對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥有高效降解能力。這將為清除有機(jī)磷農(nóng)藥污染提供一些幫助14。有機(jī)磷農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛使用，但是其高毒、高殘留等不利因素也給人類健康和生態(tài)環(huán)境帶來巨大威脅。冰核活性細(xì)菌的分離鑒定，從植物凍傷組織中分離到一株具有冰核活性的細(xì)菌；利用丁香假單胞菌的冰核蛋白N末端作為錨定單元構(gòu)建了表面展示有機(jī)磷水解酶大腸桿菌基因工程菌，比文獻(xiàn)報(bào)道的大腸桿菌細(xì)胞表面展示的有機(jī)磷水解酶的最高酶活性高13倍；將融合基因連接到廣宿主表達(dá)載體PYMBP上，轉(zhuǎn)化到野生型惡臭假單胞菌進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得最大全細(xì)胞酶活性15。132重金屬發(fā)展生物降解性能好、環(huán)保和可持續(xù)的工程菌對(duì)重金屬的去除具有重大意義，土著菌的改造尤其是關(guān)鍵16，發(fā)展生物降解性能好、環(huán)保和可持續(xù)工程菌的關(guān)鍵見圖1。土著工程菌金屬平衡的基因在生物和非生物環(huán)境生存的能力金屬螯合劑和轉(zhuǎn)運(yùn)基因環(huán)境可持續(xù)的生物修復(fù)能力提高降低風(fēng)險(xiǎn)的基因金屬吸收的調(diào)節(jié)基因生物可降解酶圖1發(fā)展生物降解性能好、環(huán)保和可持續(xù)工程菌的關(guān)鍵國(guó)外很多學(xué)者在這方面進(jìn)行了深入的研究，有關(guān)工程菌修復(fù)重金屬的實(shí)例很多，見表1。表1國(guó)外有關(guān)工程菌修復(fù)重金屬的實(shí)例16細(xì)菌基因表達(dá)重金屬修復(fù)引用真氧產(chǎn)堿桿菌RALSTONIAEUTROPHACH34金屬硫蛋白METALLOTHIONEINCD2實(shí)驗(yàn)室小試VALLSETAL2000抗輻射球菌DEINOCOCCUSRADIODURANSSTRAINSHG抗性基因HG來自于核武器的放射性廢物BRIMETAL2000大腸桿菌、莫拉克斯氏菌屬ESCHERICHIACOILANDMORAXELLASP表達(dá)EC20CD和HG實(shí)驗(yàn)室小試BAEETAL2001,2003大腸桿菌菌株ECOLISTRAIN有機(jī)汞制劑ORGANOMERCURIALLYASEHG印度地理位置獨(dú)特的地區(qū)MURTAZAETAL2002熒光假單胞菌PFLUORESCENS4F39NI轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)NI實(shí)驗(yàn)室小試LOPEZETAL2002生根瘤菌屬M(fèi)ESORHIZOBIUMHUAKUII植物螯肽合成酶PHYTOCHELATINSYNTHASE,PCSCD2稻田實(shí)驗(yàn)SRIPRANGETAL2003B3惡臭假單胞菌株P(guān)PUTIDASTRAIN鉻酸鹽還原酶CHROMATEREDUCTASECR細(xì)菌培養(yǎng)物及其懸浮液ACKERLEYETAL2004大腸桿菌菌株ECOLISTRAIN金屬調(diào)節(jié)蛋白METALLOREGULATORYPROTEINARASROVEREXPRESSINGELP153ARAS污染的飲用水和地表水KOSTALETAL2004大腸桿菌ECOLISE5000NI轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)和金屬硫蛋白NI水中NI2的累積DENGETAL2005大腸桿菌ECOLIJM109HG2轉(zhuǎn)運(yùn)和金屬硫蛋白HG實(shí)驗(yàn)室小試ZHAOETAL2005大腸桿菌菌株ECOLISTRAIN絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的高表達(dá)NI和CO實(shí)驗(yàn)室小試FREEMANETAL2005氧化亞鐵硫桿菌株ACIDITHIOBACILLUSFERROOXIDANSSTRAINHG離子轉(zhuǎn)運(yùn)基因表達(dá)HG實(shí)驗(yàn)室小試SASAKIETAL2005惡臭假單胞菌PPUTIDA06909金屬結(jié)合肽的表達(dá)EC20CD多重金屬污染地WUETAL2006假單胞菌屬PSEUDOMONASK62表達(dá)HG轉(zhuǎn)運(yùn)和有機(jī)汞制劑HG污染地的水銀KIYONOANDPANHOU2006大腸桿菌菌株ECOLISTRAINPCS基因表達(dá)SPPCSCD2微生物吸附劑對(duì)CD的去除KANGETAL2007大腸桿菌ECOLIJM109CD轉(zhuǎn)運(yùn)和金屬硫蛋白NAMELYM4CD水中CD的去除DENGETAL2007大腸桿菌菌株ECOLISTRAIN金屬硫蛋白MTAS來自于細(xì)菌培養(yǎng)物SINGHETAL2008大腸桿菌菌株ECOLISTRAINASS腺苷甲硫氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因AS來自于細(xì)菌培養(yǎng)物YUANETAL2008熒光假單胞菌OS8大腸桿菌甲基纖維素1061MERR/CADC/ZNTR/PMER/PCADA/PZNTACD,ZN,HG,PBBONDARENKOETAL2008假單胞菌屬PSEUDOMONASK62MEREPROTEINENCODEDBYTRANSPOSONTN21BROADHGTRANSPORTERHG細(xì)胞膜外KIYONOETAL2009無色桿菌屬ACHROMOBACTERSPAO22HG還原酶基因表達(dá)HG污染地的生物修復(fù)NGETAL2009莢膜甲基球菌屬M(fèi)ETHYLOCOCCUSCAPSILATUSBATHCRRGENESFORCRVIREDUCTASEACTIVITY還原酶活性CRVICELLASSOCIATEDCRREMOVALINLABORATORYCONDITIONSHASINETAL2010CAULOBACTERCRESCENTUSJS4022/P7236HRSAA6HISFUSIONPROTEINCDPATELETAL2010鞘氨醇單胞菌芽孢桿菌屬SPHINGOMONASDESICCABILISANDBACILLUSIDRIENSISSTRAINSOVEREXPRESSIONOFARSMGENEAS實(shí)驗(yàn)室小試LIUETAL2011枯草桿菌BSUBTILISBR151PT0024LUMINESCENTCDSENSORSCD土壤污染LVASKETAL2011133飲用水的凈化生物膜深度處理飲用水源苯并芘方法，融合白腐真菌、土著細(xì)菌YZ、釀酒酵母三個(gè)親株真核原核細(xì)胞的原生質(zhì)體，通過基因在同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的重組整合，構(gòu)建獲得基因工程菌用所述特效菌。生物膜反應(yīng)器深度處理飲用水源苯并芘的方法是基因工程菌劑引入裝有活性炭載體的柱狀反應(yīng)器中，悶曝馴化掛膜使基因工程菌在活性炭載體上形成生物膜；之后將飲用水源水引入反應(yīng)器中，調(diào)試處理之后進(jìn)入穩(wěn)定處理運(yùn)行階段17。2抗污染型植物土壤中重金屬的污染治理通常是將從金屬污染的土壤提取金屬并把它轉(zhuǎn)移和去除。抗污染型植物的開發(fā)與增強(qiáng)其金屬吸收、積累和耐毒性等性能的研究意義非凡。細(xì)胞工程對(duì)于發(fā)展理想的植物修復(fù)的植物，提高金屬積累能力至關(guān)重要18。構(gòu)建抗污染型植物的細(xì)胞工程技術(shù)，主要包括原生質(zhì)體培養(yǎng)、體細(xì)胞雜交和體細(xì)胞無性系變異19。原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交是植物細(xì)胞工程的核心技術(shù)之一，為克服植物遠(yuǎn)緣雜交不親和性，創(chuàng)造新的種質(zhì)資源，實(shí)現(xiàn)植物遺傳轉(zhuǎn)化和進(jìn)行細(xì)胞學(xué)的基礎(chǔ)研究提供了重要的技術(shù)支撐。體細(xì)胞無性系變異是指植物體細(xì)胞在植物組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的變異。利用人工誘變創(chuàng)造體細(xì)胞無性系變異，已成為植物細(xì)胞工程育種的重要技術(shù)。人工誘變方法包括物理誘變C射線、X射線、中子、電子束、離子束、激光、紫外線、空間環(huán)境、化學(xué)誘變甲基磺酸乙酯、秋水仙素、疊氮化鈉、平陽霉素、5BU、EB等和生物誘變轉(zhuǎn)座子插入突變、跳躍基因等。構(gòu)建抗污染型植物的細(xì)胞工程在實(shí)際植物細(xì)胞工程的應(yīng)用見表2。表2在不同植物中利用轉(zhuǎn)基因的方法增強(qiáng)其對(duì)重金屬的吸收18金屬植物方法參考文獻(xiàn)BRASSICANAPUS歐洲油菜EXPRESSIONOFBACTERIALACCDEAMINASEGENEACC脫氨酶基因表達(dá)的細(xì)菌STEARNSETAL2005NIARABIDOPSIS擬南芥EXPRESSIONOFNICOTIANAMINESYNTHASECDNA煙草胺合成酶的表達(dá)的互補(bǔ)PIANELLIETAL2005BRASSICAJUNCEA芥菜OVEREXPRESSIONOFGAMMAGLUTAMYLCYSTEINESYNTHETASEANDGLUTATHIONESYNTHETASE谷氨酰半胱氨酸合成酶、谷胱甘肽合成酶的高效表達(dá)BENNETTETAL2003REISINGERETAL2008ARABIDOPSIS擬南芥OVEREXPRESSIONOFARABIDOPSISPHYTOCHELATINSYNTHASEATPCS1擬南芥植物螯合肽合成酶的高效表達(dá)LEEETAL2003CDARABIDOPSIS擬南芥EXPRESSIONOFYEASTABCTRANSPORTERFAMILYMEMBER,YCF1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白酵母的表達(dá)SONGETAL2003ARABIDOPSIS擬南芥EXPRESSIONOFYEASTABCTRANSPORTERFAMILYMEMBER,YCF1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白酵母的表達(dá)SONGETAL2003BRASSICAJUNCEA芥菜OVEREXPRESSIONOFAYEASTCADMIUMFACTOR1YCF1一個(gè)鎘因子酵母的表達(dá)BHUIYANETAL2011APBBRASSICAJUNCEA芥菜OVEREXPRESSIONOFATPBINDINGCASSETTEABCTRANSPORTERGENEATATM3蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)基因的高效表達(dá)BHUIYANETAL2011BNICOTIANATABACUM煙草EXPRESSIONOFYEASTMETALLOTHIONEINCUP1GENE金屬硫蛋白CUP1基因酵母的表達(dá)THOMASETAL2003POPULUSALBA白楊樹EXPRESSIONOFPSMTA1GENEFROMPISUMSATIVUM豌豆BALESTRAZZIETAL2009CUARABIDOPSIS擬南芥EXPRESSIONOFYEASTCOPPERDEPENDENTTRANSCRIPTIONFACTORACE1銅依賴轉(zhuǎn)錄因子酵母XUETAL2009ARABIDOPSISOVEREXPRESSIONOFZNINDUCEDFACILITATOR1ZIF1鋅誘導(dǎo)HAYDONANDCOBBETT2007BRASSICAJUNCEA芥菜OVERPRODUCTIONOFTHEGGLUTAMYLCYSTEINESYNTHETASEANDGLUTATHIONESYNTHETASE谷氨酰半胱氨酸、谷胱甘肽合成酶BENNETTETAL2003ZNNICOTIANATABACUM煙草OVEREXPRESSIONOFGLYOXALASEPATHWAYENZYMES醛酮變位酶通道酶SINGLAPAREEKETAL2006HGARABIDOPSIS擬南芥EXPRESSIONOFBACTERIALGAMMAGLUTAMYLCYSTEINESYNTHETASEGENEUNDERCONTROLOFASTRONGCONSTITUTIVEACTINREGULATORYSEQUENCEA2一個(gè)強(qiáng)大的肌動(dòng)蛋白監(jiān)管序列控制下細(xì)菌合成酶基因LIETAL2005NICOTIANATABACUM煙草EXPRESSIONOFPPKGENESPECIEDBACTERIALPOLYPHOSPHATEPOLYP多磷酸鹽細(xì)菌NAGATAETAL2006NICOTIANATABACUM煙草EXPRESSIONOFAMODIFIEDBACTERIALHGREDUCTASE,MERAGENE修改后的汞細(xì)菌還原酶HEATONETAL2005ARABIDOPSIS擬南芥EXPRESSIONOFBACTERIALGAMMAGLUTAMYLCYSTEINESYNTHETASEGENEUNDERCONTROLOFASTRONGCONSTITUTIVEACTINREGULATORYSEQUENCEA2一個(gè)強(qiáng)大的肌動(dòng)蛋白監(jiān)管序列控制下細(xì)菌合成酶基因LIETAL2005BRASSICAJUNCEA芥菜OVEREXPRESSIONOFATPSULFURYLASE硫酸化酶WANGELINEETAL2004ASBRASSICANAPUS歐洲油菜EXPRESSIONOFENTEROBACTERCLOACAE陰溝腸桿菌UW41AMINOCYCLOPROPANE1CARBOXYLATEACCDEAMINASE脫氨酶EC41994GENENIEETAL20023基于抗體的環(huán)境污染治理技術(shù)本文采用碳二亞胺縮合方法合成了軟海綿酸與不同蛋白載體偶聯(lián)物，分別用作免疫抗原和包被抗原，免疫BALB/C鼠，采用細(xì)胞融合技術(shù)，制備了抗腹瀉性貝毒主要成份軟海綿酸的1種多克隆抗體、2種單克隆抗體，研究了應(yīng)用這些抗體發(fā)展建立軟海綿酸的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)和膠體金標(biāo)記免疫層析檢測(cè)技術(shù)20。建立了水中硝基苯胺測(cè)定的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，精密度和準(zhǔn)確度均符合殘留測(cè)定的要求。該方法可用于地下水、地表水、飲用水等不同水樣硝基苯胺的檢測(cè)。與HPLC方法比較，本方法的主要優(yōu)點(diǎn)在于不需要復(fù)雜的樣品前處理，水樣可直接用于檢測(cè)，不需要昂貴的儀器設(shè)備21。4展望采用紫外誘變與原生質(zhì)體融合聯(lián)用的方法對(duì)好氧反硝化菌株進(jìn)行育種22。首次利用PEG細(xì)胞融合技術(shù)構(gòu)建融合子菌株，降解處理印染廢水23。都為細(xì)胞工程的發(fā)展提供了廣闊的前景。參考文獻(xiàn)1趙志強(qiáng),鄭小林,張思杰等細(xì)胞融合技術(shù)J生物學(xué)通報(bào),2005,401040412盧靜,黨志,郭楚玲PAHS降解菌的細(xì)胞融合及降解菲的性能研究J第六屆全國(guó)環(huán)境化學(xué)大會(huì),20083楊意東,趙麗君高濃度有機(jī)廢水固定化生物處理技術(shù)的研究J給水排水,20004黃國(guó)蘭,王媛,孫紅文等固定化藻菌共生系統(tǒng)及其脫硫除磷作用研究Z國(guó)家科技成果,20045劉望才,金誼,高浩其等新型固定化方法生物處理含酚廢水的研究Z國(guó)家科技成果,20086李賢玉,葉林污水處理用聚乙烯醇凝膠的制備及結(jié)構(gòu)與性能研究A2009年全國(guó)高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集（下冊(cè)）C,20097謝珊,劉俊新,李琳等利用基因工程菌BL21處理有機(jī)磷混合農(nóng)藥廢水的研究J環(huán)境工程學(xué)報(bào),20088BOONN,TOPEM,VERSTRAETEW,ETALBIOAUGMENTATIONASATOOLTOPROTECTTHESTRUCTUREANDFUNCTIONOFANACTIVATEDSLUDGEMICROBIALCOMMUNITYAGAINSTA3CHLOROANILINESHOCKLOADJAPPLIEDANDENVIRONMENTALMICROBIOLOGY,200