串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在新生兒篩查上的應(yīng)用.ppt

串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在新生兒篩查方面的應(yīng)用,新生兒篩查的必要性,遺傳代謝病多是罕見(jiàn)病，種類(lèi)繁多，約4000種，常見(jiàn)的500種以上，單一病種發(fā)病率低,總體發(fā)病率1/3000-5000新生兒篩查：及早治療可預(yù)防疾病的發(fā)作，減輕癥狀提高患兒生存質(zhì)量，減少傷殘產(chǎn)前診斷：預(yù)防殘疾兒童的出生，提高出生人口素質(zhì)臨床篩查及診斷：明確診斷，減輕癥狀，挽救生命，減少醫(yī)療糾紛,串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢(shì),特異性：檢測(cè)分子量，內(nèi)標(biāo)定量顯著降低假陽(yáng)性率敏感性：明顯降低假陰性率高通量：一次可以檢測(cè)幾十種小分子物質(zhì)（30-50多種疾病），一臺(tái)儀器每天檢測(cè)500600個(gè)樣品，每個(gè)標(biāo)本2-3分鐘采血簡(jiǎn)單，可以寄送,串聯(lián)質(zhì)譜能篩查哪些疾病,氨基酸氨基酸障礙疾病?；鈮A有機(jī)酸及脂肪酸代謝障礙疾病溶酶體病及腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良SCID（重癥聯(lián)合免疫缺陷）比較成熟臨床應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大半乳糖血癥、糖原累積癥、Wilson病及線粒體腦肌病等等不能篩查,測(cè)定方法,目前使用LCMSMS技術(shù)主要檢測(cè)的氨基酸及?；鈮A，可分別作為氨基酸代謝異常、脂肪酸代謝異常和有機(jī)酸代謝異常等疾病的判斷指征,前處理方法一般LCMSMS新生兒篩查血片的前處理方法可根據(jù)是否進(jìn)行衍生化反應(yīng)分為衍生化法和非衍生化法兩大類(lèi)，兩種前處理方法在各實(shí)驗(yàn)室或檢測(cè)機(jī)構(gòu)均有使用，具體操作細(xì)節(jié)可能有所不同，其大致流程如下衍生化法,原材料采購(gòu)與初加工部門(mén),生產(chǎn)產(chǎn)品的車(chē)間,動(dòng)力供應(yīng)部門(mén),4,2,3,非衍生化法,衍生化法比較精確，但步驟繁瑣，且目標(biāo)化合物易分解；非衍生化法步驟簡(jiǎn)單，成本低，適合檢測(cè)大量樣本，但不夠精確。,液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)原理,新生兒串聯(lián)質(zhì)譜篩查使用四極桿質(zhì)譜，該類(lèi)串聯(lián)質(zhì)譜由四極桿質(zhì)量分析器、碰撞室、四極桿質(zhì)量分析器組成。待測(cè)化合物離子化后產(chǎn)生相應(yīng)前體離子，前體離子經(jīng)碰撞室發(fā)生誘導(dǎo)碰撞解離產(chǎn)生產(chǎn)物離子碎片，導(dǎo)入檢測(cè)器產(chǎn)生強(qiáng)度信號(hào)。,LC-MS/MS檢測(cè)到的離子流圖,島津液相串聯(lián)質(zhì)譜,島津公司針對(duì)新生兒篩查工作專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)了NeonatalSolution新生兒篩查軟件，配合強(qiáng)大的LabSolutions工作站，為新生兒篩查工作提供完整的方法建立、數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)分析及自動(dòng)準(zhǔn)確度管理工具，可便捷、高效處理、分析、管理大批量新生兒篩查數(shù)據(jù)。,經(jīng)過(guò)NeonatalSolution的處理，自動(dòng)得到各組分的計(jì)算結(jié)果，根據(jù)預(yù)設(shè)的限值，自動(dòng)使用各種顏色標(biāo)注超出限值的結(jié)果。,利用MALDI-TOF-MS檢測(cè)嬰兒遺傳疾病,利用飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)基因是近年來(lái)的新技術(shù)，它對(duì)某些基因突變型遺傳疾病檢出率較高，與傳統(tǒng)常用基因檢測(cè)方法相比，具有檢測(cè)位點(diǎn)多、覆蓋率高、高通量等特點(diǎn)，能夠滿(mǎn)足臨床要求，為患兒未來(lái)的婚育、用藥及提早干預(yù)提供了積極有效的遺傳指導(dǎo)意義。,什么是MALDI-TOF-MS,MALDI-TOF-MSMatrix-AssistedLaserDesorptionIonizationTimeofFlightMassSpectrometry基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜,這項(xiàng)技術(shù)是由是由島津制作所的田中耕一先生和美國(guó)科學(xué)家約翰芬恩一起發(fā)明的，二人也因此項(xiàng)發(fā)明贏得了2002年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng),原理,sampleplate,sampleplate,Laser,sampleplate,+,+,MALDI與其他的電離方式不同，樣本在基質(zhì)的保護(hù)下幾乎不受傷害?；|(zhì)在激光的照射下吸收了激光的能量，電離氣化，樣本接受了基質(zhì)電離放出的質(zhì)子從而帶電，這樣樣本分子在基質(zhì)氣相的包裹下，進(jìn)入下一步驟。使用MALDI電離出的生物大分子是真正“活”著的生物大分子。,應(yīng)用,因MALTI-TOF-MS具有的檢測(cè)位點(diǎn)多、覆蓋率高、高通量等特點(diǎn)，無(wú)錫市婦幼保健醫(yī)院已經(jīng)為新生兒篩查應(yīng)用此技術(shù)做出了試驗(yàn)。醫(yī)院選擇了2796例新生兒為研究對(duì)象，采集足跟血并提取基因組DNA，針對(duì)中國(guó)人群特點(diǎn)，進(jìn)行4個(gè)基因(GJB2，CJB3，SLC26A4和12srRNA)20個(gè)突變位點(diǎn)的基因突變檢測(cè)，先通過(guò)PCR擴(kuò)增出目的基因片段，然后通過(guò)飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)，檢出耳聾基因突變新生兒158例，攜帶率為565。由此可證明MALDITOFMS對(duì)非綜合征型耳聾患者的突變檢出率較高。,雖然該技術(shù)具有高效、快速、判讀簡(jiǎn)易和準(zhǔn)確性高的檢測(cè)特點(diǎn)，有望成為一種極具潛力的耳聾基因診斷和篩查工具，但成本相對(duì)較高，且不能檢測(cè)到其他未知突變，所以有所局限，但在其他領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用，如質(zhì)量檢測(cè)方向的蛋白、肽鏈的檢測(cè)，還有DNA探針、引物的鑒定，檢測(cè)。,引用文章,無(wú)錫地區(qū)新生兒耳聾基因的MALDITOFMS篩查分析-中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志2015年2月基于質(zhì)譜的DNA序列測(cè)定進(jìn)展-