第二章_藥物的雜質檢查

.,第二章生物藥物的雜質檢查,.,藥物的純度要求,指藥物純凈程度，反映了藥物質量的優(yōu)劣，含有雜質是影響藥物純度的主要因素。,.,雜質是指：1.有毒副作用的物質2.本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質3.本身無毒副作用，也不影響藥物的穩(wěn)定性和療效，但影響藥物的科學管理的物質,.,一、雜質的來源與種類（一）雜質的來源,1.生產過程中引入,（1）原料、反應中間體及副產物,（2）試劑、溶劑、催化劑類,（3）生產中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質,.,例：阿斯匹林由水楊酸乙?；频?.,制劑過程中可能產生新物質,.,1在藥物生產過程中引入雜質的途徑為A.原料不純或部分未反應完全的原料造成B.合成過程中產生的中間體或副產物分離不凈造成C.需加入的各種試劑產生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金屬器皿及裝置等引入雜質E.由于操作不妥，日光曝曬而使產品發(fā)生分解引入的雜質,.,2.貯藏過程中產生,水解、氧化、分解、異構化、晶形轉變、聚合、潮解和發(fā)霉等,.,易發(fā)生水解反應的結構：,酯、內酯、酰胺、鹵代烴、苷類等,易發(fā)生氧化反應的結構：,醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等,.,（二）雜質的種類,藥物中的雜質按來源分為,1.一般雜質：如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘渣等。一般雜質其檢查方法收載在中國藥典的附錄中。,.,2.特殊雜質：指某一個或某一類藥物的生產或貯藏過程中引入的雜質，如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質檢查方法收載在中國藥典正文各藥品的質量標準中。,.,（三）藥物的純度與化學試劑的純度,藥物的純度考慮雜質的生理作用，藥品只有兩個等級：合格或不合格?；瘜W試劑有很多等級，如基準試劑、優(yōu)級純（GR）、分析純（AR）、化學純（CP）、色譜純、光譜純。,.,例.臨床所用藥物的純度與化學品及試劑純度的主要區(qū)別是A.所含雜質的生理效應不同B.所含有效成分的量不同C.所含雜質的絕對量不同D.化學性質及化學反應速度不同E.所含有效成分的生理效應不同,.,二、雜質的限量檢查,指藥物中允許雜質存在的最大量，通常用百分之幾或百萬分之幾來表示。砷-10ppm重金屬-50ppm,.,雜質量雜質限量雜質量,藥品合格,藥品不合格,.,（一）藥物的雜質檢查法,1.對照法限量檢查法（LimitTest）特點：不需知道雜質的準確含量,靈敏度法,對照法,比較法,.,操作:平行試驗比較兩比色管的顏色或濁度,判斷雜質限量是否符合規(guī)定.,管2（對照管）,管1（樣品管）,取限度量的待檢雜質對照品配成的對照溶液,與一定量供試品配成的供試品溶液在相同條件下處理,比較反應結果,判斷供試液中所含雜質限度是否符合規(guī)定.,標準對照法,.,2.靈敏度法,系指在供試品溶液中加入試劑，在一定反應條件下，不得有正反應出現。特點：不需對照品,.,3.比較法,與空白比較：含量測定法：測定雜質的絕對含量，如測定吸收度、pH值等。特點：不需對照品,.,.,（二）雜質限量的計算,.,.,1檢查某藥物中的砷鹽，取標準砷溶液2ml（每1ml相當于1g的As）制備標準砷斑，砷鹽限量為0.0001，應取供試品的量為A.0.20gB.2.0gC0.020gD.1.0gE.0.10g,.,已知：c1g/ml1106g/mlV2mlL0.0001%,.,2檢查維生素C中的重金屬時，若取樣量為1.0g，要求含重金屬不得過百萬分之十，問應吸取標準鉛溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC2mlD.1mlE.20ml,.,.,.,.,.,.,第三節(jié)雜質檢查的原理,.,檢查方法：,一、利用藥物和雜質在物理性質上的差異二、利用藥物和雜質在化學性質上的差異,.,一、利用藥物和雜質在物理性質上的差異,（一）臭味及揮發(fā)性的差異（二）顏色的差異（三）溶解行為的差異（四）旋光性質的差異（五）對光吸收性質的差異（六）吸附或分配性質的差異,.,（一）臭味及揮發(fā)性的差異,藥物（特別是揮發(fā)性藥物）中如存在具有特殊氣味的雜質，可以由氣味判斷該雜質的存在。乙醇、冰醋酸、苯酚、氟烷、濃過氧化氫如麻醉乙醚異臭檢查，控制原料乙醇中引入的雜醇油以及乙醛和過氧化物等雜質。方法為：取供試品10ml，置于瓷蒸發(fā)皿中，使自然揮發(fā)，揮散完畢后，不得有異臭。,.,（二）顏色的差異,某些藥物自身無色，但從生產中引入了有色的有關物質，或其分解產物有顏色。(維生素C）,（三）溶解行為的差異,有的藥物可溶于水、有機溶劑或酸、堿中，而其雜質不溶；反之，雜質可溶而藥物不溶。葡萄糖（中間產物-糊精）溶于熱乙醇，糊精不溶,.,（四）旋光性質的差異,測定旋光度可以用來區(qū)別不同的藥物，檢查雜質的含量。利用的是供試品與其特殊雜質在比旋度上的差異。舉例：維生素C溶液（0.10g/ml)+20.5_+21.5,本身沒有旋光性的藥物，雜質有，則可以通過限定藥物溶液的旋光度值來控制相應雜質的量,.,旋光度：光學活性物質的液體或溶液使平面偏振光的振動面旋轉的角度。以“+”表示右旋；以“-”表示左旋。比旋度t:偏振光透過長1dm且1ml中含有1g旋光物質的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度。,=tcl/100,中國藥典規(guī)定使用鈉光譜的D線（589.3nm）測定藥物在特定溶液中的旋光度。,.,（五）對光吸收性質的差異,藥物和雜質的結構不同，因而對光吸收的性質往往有差異。分光光度法的優(yōu)點：靈敏度高，簡便，儀器已較普及，因此在藥物的雜質檢查中應用日益廣泛。1.紫外分光光度法2.原子吸收分光光度法3.紅外分光光度法4.熒光分析法,.,1.紫外分光光度法,當雜質在某一波長處有最大吸收，而藥物在此無吸收時，可以通過控制供試品溶液在此波長處的吸收度來控制雜質的量。舉例：規(guī)定葡萄糖注射液在284nm波長處的吸收度不得過0.32，即可控制其雜質5-羥甲基糠醛的量。頭孢噻吩在237nm處規(guī)定吸收度范圍0.65-0.72，測定值偏大則說明未有效除去噻吩乙酸；測定值偏小則說明產品降解。,.,.,例:腎上腺素中腎上腺酮的檢查,.,若藥物在紫外區(qū)有明顯吸收，而雜質吸收很弱或沒有吸收，可以根據吸收度大小限制雜質的量。規(guī)定供試品吸收度的上下限幅度，可在一定程度上控制產品的純度。,頭孢噻吩在237nm處規(guī)定吸收范圍0.65-0.72，237nm的吸收特征是噻吩乙?；a生的，測定值偏大則說明未有效除去噻吩乙酸；測定值偏小則說明產品降解。,.,3.紅外分光光度法,在雜質檢查中主要用于藥物中無效或低效晶型的檢查。甲硝咪唑C晶型在662cm-1處有較強吸收，其無效A晶型在640cm-1處有較強吸收。當供試品中含有A晶型時，在上述二波數處的吸收度比值將發(fā)生改變。,.,R=D1/D2R=D1/D2,.,（六）吸附或分配性質的差異,1.薄層色譜法2.紙色譜法3.高效液相色譜法4.氣相色譜法簡便、快速，靈敏度高,.,1、薄層相色譜法（TLC)設備簡單，操作簡便，分離速度快，靈敏度和分辯率較高）雜質對照品法）自身對照法）雜質對照品法與自身對照法聯用）對照藥物法5）靈敏度法（不允許有雜質斑點）,.,（1）雜質對照品法,適用于已知雜質并能制備雜質對照品的情況。要求供試品與所檢雜質對顯色劑所顯的顏色應相同，顯色靈敏度也應相同或相近。方法：根據限量，取供試品溶液和限度量的雜質對照品溶液，分別點樣于同一硅膠薄層板上，展開、定位、檢查，供試品中所含雜質的斑點，不得超過相應雜質的對照斑點。,.,.,（2）供試品自身對照法,適用于雜質的結構不能確定，或無雜質對照品的情況。方法：將供試品溶液按限量要求稀釋至一定濃度作為對照溶液，與供試品溶液分別點加于同一薄層板上，展開、定位、檢查。供試品溶液所顯雜質斑點不得深于對照溶液所顯示斑點顏色。,.,.,.,（4）對照藥物法,當無適合的雜質對照品，尤其是供試品顯示的雜質斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照物中所含待檢雜質需符合限量要求，且穩(wěn)定性好。,.,.,此外，少數藥物還利用試驗條件下顯色劑對雜質的檢測限來控制其限量。鹽酸阿米替林，一定濃度點樣于硅膠G薄層板上，以氯仿：甲苯展開，噴甲醛-硫酸顯色，紫外燈下檢視，除主斑點外，不得顯其他斑點。,.,.,2.紙色譜法,用于極性較大物質的分離、分析。有時也用于檢查放射性藥物注射液中的放射化學雜質。方法：類似于薄層色譜法中的供試品自身對照法。,.,3、高效液相色譜法分離效能高，專屬性強和檢測靈敏度高，可準確測量各組分的峰面積）內標法）外標法）不加校正因子的主成分自身對照法）加校正因子的主成分自身對照法）峰面積歸一化法,.,1.內標法：內標法測定供試品中某個雜質或主成分含量。先以雜質對照品測定其校正因子，然后測定供試品中雜質的含量。,.,.,.,2.外標法：測定供試品中某個雜質或主成分的含量，用于有雜質對照品或雜質對照品易制備的情況。,.,.,3.不加校正因子的主成分自身對照法將供試溶液稀釋成一定濃度，作為對照液。分別取供試品溶液和對照品溶液進樣，將供試品溶液中各雜質峰面積及其總和，與對照液主成分峰面積比較，以控制供試品中雜質的量。特點：1）簡單方便，無須對照品。2）適用于雜質與主成分峰面積相差懸殊時的雜質檢查3）忽略了各雜質與主成分的響應值可能不同。,.,.,4.加校正因子的主成分自身對照法：精密稱取雜質對照品和待測成分對照品各適量，配制測定雜質校正因子的溶液，進樣，記錄色譜圖，計算雜質的校正因子。此校正因子可直接載入各品種正文，用于校正雜質的實測峰面積，準確計算雜質含量。,.,.,.,.,5.峰面積歸一化法：測量各雜質峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的各色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分率，粗略測量供試品中雜質的含量。特點：1）不需對照品，簡便易行。2）記錄圖譜的時間應為主峰保留時間的整數倍。3）通常只能粗略考察供試品的雜質含量。,.,.,.,4、氣相色譜法）峰面積歸一化法）內標法3）外標法,.,（二）化學法利用藥物和雜質在化學性質上的差異,（一）酸堿性的差異（二）氧化還原性的差異（三）雜質與一定試劑反應產生沉淀（四）雜質與一定試劑反應產生顏色（五）雜質與一定試劑反應產生氣體（六）藥物經有機破壞后檢查雜質,.,二、利用藥物和雜質在化學性質上的差異,（一）酸堿性的差異利用雜質的酸、堿性。規(guī)定消耗滴定液的體積、規(guī)定PH值范圍、指示劑法,（二）氧化還原性的差異利用藥物與雜質之間的氧化還原電位的差異進行檢查。,（三）雜質與一定試劑反應產生沉淀,.,（四）雜質與一定試劑反應產生顏色根據限量要求，規(guī)定：一定反應條件下不得產生某種顏色；供試品在相同條件下呈現的顏色不得超過雜質對照品相應顏色；供試品在一定的條件下的吸收度不得過一定值。,（五）雜質與一定試劑反應產生氣體砷、硫、碳酸鹽、氨或胺鹽、氰化物,.,（六）藥物經有機破壞后檢查雜質含環(huán)狀結構的有機藥物中磷、硫、鹵素及硒等雜質；不溶藥物等。,.,氧瓶燃燒法（Oxygenflaskcombustionmethod）,將藥物放入充滿氧氣的密閉的燃燒瓶中燃燒，使待測元素從有機結合狀態(tài)轉變成無機離子，被事先裝在瓶內的吸收液吸收，成為穩(wěn)定的溶液狀態(tài)，然后采用適當方法進行測定用于含鹵素、硫、氮、硒等元素的有機藥物的鑒別、檢查和含量測定,.,儀器裝置,.,操作方法：,稱樣將樣品直接置無灰濾紙上稱量。吸收液水-NaOH（含碘、氯藥物）例鹽酸胺碘酮、甲狀腺粉、甲狀腺片水-NaOH-H2O2（含溴、含硫藥物）水（含氟藥物）硝酸溶液（含硒藥物）燃燒分解操作（通O212min，燃燒）,.,注意,防爆，燃燒瓶應洗滌干凈氧氣要充足，燃燒應完全測定含氟藥物應用石英燃燒瓶,.,.,.,.,一般雜質的檢查,.,第四節(jié)、一般雜質的檢查方法,一）、一般雜質檢查規(guī)則,藥品檢驗操作標準規(guī)定：1.遵循平行操作原則,.,（1）儀器的配對性如納氏比色管應配對，刻度線高低相差不超過2mm，砷鹽檢查時導氣管長度及孔的大小要一致（2）對照品與供試品的同步操作,.,2.正確的取樣及供試品的稱量范圍1g不超過2%，1g不超過1%,3.正確的比色、比濁方法,4.檢查結果不符合規(guī)定或在限度邊緣時應對供試管和對照管各復查二份,.,1、原理：中國藥典對氯化物的檢查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定標準氯化鈉溶液在相同的條件下生成的氯化銀渾濁液比較，濁度不得更大。Cl-AgCl（微量時渾濁）,稀HNO3,AgNO3,二）、氯化物檢查法,.,對照法,.,A、取一定量供試品產生AgCl(渾濁）,依法處理,稀HNO3AgNO3,同上處理,B、取一定量標準NaCI液同上（標準NaCI濃度C=0.01mgCI-/ml）（如A濁度比B小則本項合格）。,.,供試品,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,標準溶液,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,暗處放置5min(避免AgCl分解),.,（二）檢查方法藥典附錄除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml（溶液如顯堿性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，應濾過；置50ml,.,納氏比色管中，加水使成約40m1，搖勻，即得供試溶液。另取各藥品項下規(guī)定量的標準氯化鈉溶液，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，搖勻，即得對照溶液。,.,于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0m1，用水稀釋使成50m1，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，即得。,.,結果觀察方法暗處放置5min(避免AgCl分解),.,（三）測定條件,1.標準NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所顯渾濁梯度明顯，相當于標準NaCl溶液58ml。,2.反應需在硝酸酸性條件下進行，且以50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜。,.,A、AgCI不溶于HNO3可在HNO3中產生最好的乳化渾濁；B、加速AgCI的產生；C、防止產生Ag20，Ag3PO4,Ag2CO3因為這些溶于HNO3這樣就可以防止CO32-OH-，PO43-干擾。,.,3.試劑：硝酸銀,5.避光、暗處放置5分鐘后比濁，因氯化銀見光易分解。,4.供試液和對照液稀釋后，再加硝酸銀溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀。,.,6.比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。,7.平行操作原則。,.,（四）干擾及排除,1.若供試品有色，需經處理后方可檢查。,（1）內消色法：倍量法，即先去除被測物，再加入標準溶液，使成對照，這樣對照液與供試液顏色相同。,（2）外消色法：如高錳酸鉀中氯化物的檢查，可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。,.,A、如：（有色）取兩分等量供試品：a、一份做供試液（A管）依法檢查b、另一份AgCI濾液（B管加入規(guī)定量的標準NaCI溶液作為對照管）。,加稀HNO3,過濾,B、用濾紙過濾時，濾紙中如含有氯化物，可預先用含有硝酸的水溶液洗凈后使用。,AgNO3,.,2.當有其它干擾物質存在時，必需在檢查前除去（1）碘中氯化物的檢查（2）碘化物中氯化物的檢查（3）溴化物中氯化物的檢查,.,3.不溶于水的有機藥物,（1）加水振搖，過濾，取濾液進行檢查。,（2）加熱，放冷，過濾，取濾液進行檢查。,（3）溶于有機溶劑如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后進行檢查。,.,4.有機藥物中有機氯雜質的檢查，具體情況，具體分析。,方法：必須使結狀態(tài)的氯變?yōu)橛坞x狀態(tài)的氯。有機破壞的方法：,.,.藥物中氯化物雜質檢查，是使該雜質在酸性溶液中與硝酸銀作用生成氯化物渾濁，所用的稀酸是（）A.硫酸B.硝酸C.鹽酸D.醋酸E.磷酸,.,例1.中國藥典（2000年版）規(guī)定，檢查氯化物雜質時，一般取用標準氯化鈉溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（）A.使檢查反應完全B.藥物中含氯化物的量均在此范圍C.加速反應D.所產生的濁度梯度明顯E.避免干擾,.,例2.采用硝酸銀試液檢查氯化物時，加入硝酸使溶液酸化的目的是（）A加速生成氯化銀渾濁反應B消除某些弱酸鹽的干擾C消除碳酸鹽干擾D消除磷酸鹽干擾E避免氧化銀沉淀生成,.,例3.當采用比濁法檢查氯化物雜質時，若藥物本身有顏色而干擾檢查的話，應該選用的處理方法為（）A內消色法B外消色法C比色法D差示比濁法E差示可見分光法,.,例4.若要進行高錳酸鉀中氯化物的檢查，最佳方法是（）A.加入一定量氯仿提取后測定B.氧瓶燃燒C.倍量法D.加入一定量乙醇E.以上都不對,.,例5.下列哪些條件為藥物中氯化物檢查的必要條件（）A.所用比色管需配套B.稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C.避光放置5分鐘D.用硝酸銀標準溶液做對照E.在白色背景下觀察,.,三）、硫酸鹽檢查法,（一）原理對照法藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質中生成硫酸鋇白色渾濁，與一定量標準硫酸鉀溶液在相同條件生成的渾濁比較，濁度不得更大。,.,（二）測定條件,1.標準K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所顯渾濁梯度明顯，相當于標準K2SO4溶液15ml。,2.反應需在鹽酸酸性條件下進行，且以50ml供試溶液中含稀鹽酸2ml為宜。,.,3.試劑：氯化鋇,5.比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。,4.供試液和對照液稀釋后，再加氯化鋇溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀。,.,若供試品有色，也可用內消色法即倍量法處理。,（三）干擾及排除,.,例：藥物中硫酸鹽檢查時，所用的標準對照液是（）A.標準氯化鋇B.標準醋酸鉛溶液C.標準硝酸銀溶液D.標準硫酸鉀溶液E.以上都不對,.,三、鐵鹽檢查法,1.原理對照法,（一）硫氰酸鹽法ChP（2000）、USP（24）,鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子，再與一定量標準鐵溶液用同法處理后所呈的顏色比較，顏色不得更深。,.,.,.,2.檢查方法藥典附錄除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml，移置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成,.,35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻；如顯色，立即與標準鐵溶液一定量制成的對照溶液（取各藥品項下規(guī)定量的標準鐵溶液，置50ml納氏比色管中，,.,加水使成25ml，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻）比較，即得。,.,3.測定條件,（1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸鐵銨）配制標準鐵貯備液（加入硫酸防止Fe3+的水解），標準鐵溶液臨用前稀釋而成，標準鐵溶液10gFe3+/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+顯色梯度明顯，一般取標準鐵溶液1.05.0ml,.,（2）反應需在鹽酸酸性條件下進行，且以50ml供試溶液中含稀鹽酸4ml為宜。,（3）試劑：硫氰酸銨。加過量硫氰酸銨，使反應向正反應方向進行。,（4）檢查Fe2+和Fe3+。,.,（5）鐵鹽檢查時，加氧化劑氧化Fe2+為Fe3+。加過硫酸銨可氧化Fe2+為Fe3+，同時可防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。加硝酸后加熱也可氧化Fe2+為Fe3+。,.,（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下觀察。,.,4.干擾及排除,（1）為了提高靈敏度或供試管與對照管色調不一致時，可用正丁醇提取后，分取正丁醇層比色。,（2）具環(huán)狀結構的有機藥物，需經700800熾灼破壞處理后再依法檢查。,（3）干擾離子的影響（陰離子）。,.,（二）巰基醋酸法BP（1998）,原理硫氰醋酸還原Fe3為Fe2，在氨堿性溶液中進一步與Fe2作用生成紅色配位離子，與一定量標準鐵溶液經同法處理后產生的顏色進行比較，以限制鐵的量。,.,對照法,本法靈敏度較高，但試劑較貴,.,例1.中國藥典（2000年版）規(guī)定鐵鹽的檢查方法為（A）A.硫氰酸鹽法B.巰基醋酸法C.普魯士藍法D鄰二氮菲法E.水楊酸顯色法,.,例2.中國藥典（2000年版）規(guī)定，硫氰酸銨法檢查鐵鹽時，加入過硫酸按的目的是（AB）A.使藥物中鐵鹽都轉變?yōu)镕e3+B.防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色C.使產生的紅色產物顏色更深D防止干擾E便于觀察、比較,.,例3.某藥物（黃色）欲進行鐵鹽檢查，應采用下面哪種方法（E）A.倍量法B.微孔濾膜過濾法C.調色法D.600700熾灼殘渣后測定E.以上都不對,.,例4.中國藥典收載的鐵鹽檢查，主要是檢查（D）A.FeB.Fe2+C.Fe3+D.Fe2+和Fe3+E.以上都不對,.,四）、重金屬檢查法以鉛為代表,中國藥典（2000年版）共收載四法。重金屬：在實驗條件下能與硫代乙酰胺或者硫化鈉作用顯色的金屬雜質。銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鎳、鈷、鋅等等,.,（一）第一法硫代乙酰胺法,原理硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸鹽緩沖液）條件下水解，產生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物均勻混懸液，與一定量標準鉛溶液經同法處理后所呈現顏色比較，顏色不得更深。,.,對照法,適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。,.,2.測定條件,（1）用硝酸鉛配制標準鉛貯備液（加硝酸防止Pb2+水解），標準鉛溶液臨用前稀釋而成，標準硝酸鉛溶液10gPb2+/ml，適宜比色范圍為27ml溶液中含1020g的Pb2+。,.,（2）本法用2mlpH3.5的醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為33.5。,（3）顯色劑：從ChP（1990）開始改用硫代乙酰胺做顯色劑。,.,（1）供試品如有色，需經處理后方可檢查。,A.外消色法：在對照管中加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液。,B.內消色法,C.改用第四法，微孔濾膜過濾法,3.干擾及排除,.,（2）若供試品中有微量Fe3+存在，會氧化硫化氫生成單質硫，干擾比色，加入抗壞血酸或鹽酸羥胺（0.51.0g）還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾。,.,（二）第二法熾灼殘渣法,適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機藥物。,500600熾灼后的殘渣，經處理后，依一法檢查。,1.原理對照法,.,2.操作方法,.,含鈉及氟的有機藥物應用鉑坩堝、石英坩堝或硬質玻璃蒸發(fā)皿（因可腐蝕瓷坩堝，帶入大量重金屬）,.,（三）第三法硫化鈉法,適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。,1.原理對照法,.,2.測定條件,（1）NaOH堿性條件下,（2）顯色劑：硫化鈉,.,（四）第四法微孔濾膜法,適用于含25g重金屬雜質及有色供試液的檢查。依一法檢查，結果微孔濾膜過濾后比較色斑。,同第一法使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上(鉛斑)提高檢查的靈敏度.,.,.,重金屬檢查中，加入硫代乙酰胺時溶液控制最佳的pH值是（）A.1.5B.3.5C7.5D.9.5E.11.5,.,微孔濾膜法是用來檢查（）A.氯化物B.砷鹽C.重金屬D.硫化物E.氰化物,.,例1.中國藥典(2010年版)重金屬檢查法中，所使用的顯色劑是（）A.硫化氫試液B.硫代乙酰胺試液C.硫化鈉試液D.氰化鉀試液E.硫氰酸銨試液,.,例2.葡萄糖中進行重金屬檢查時，適宜的條件是（）A.用硫代乙酰胺為標準對照液B.用10ml稀硝酸/50ml酸化C.在pH3.5醋酸鹽緩沖溶液中D.用硫化鈉為試液E.結果需在黑色背景下觀察,.,五）、砷鹽檢查法,（一）古蔡法ChP（2000）BP（1998）,金屬鋅與酸作用產生新生態(tài)的氫與藥物中微量砷鹽反應生成具揮發(fā)性的砷化氫,遇溴化汞試紙產生黃色至棕色的砷斑,與同條件下一定量標準砷溶液所生成的砷斑比較,判斷砷鹽的量.,標準砷溶液2ml(1g/ml),1.原理對照法,.,遇HgBr2試紙生成黃色棕色的砷斑，與2ml標準砷溶液在相同條件下生成的砷斑比較。,.,反應式如下：,.,2.操作方法,（1）標準砷斑用2ml標準砷溶液制備。,（2）供試品需經有機破壞，則標準砷溶液應平行操作。,.,古蔡氏法檢砷器,8cm,有孔玻璃旋塞,導氣管,AsH3發(fā)生瓶,溴化汞試紙,醋酸鉛棉花(60mg),HClZn粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液,生成砷斑,吸收硫化氫氣體,.,加鋅粒2g,立即將裝妥的導氣管B密塞與A瓶,置25-40水浴中,反應45分鐘,取出溴化汞試紙,比較砷斑.,導氣管B中裝入醋酸鉛棉球,再于旋塞C的平面上放兩片溴化汞試紙,樣品、對照品分別置于檢砷瓶中,加鹽酸5ml與水21ml,再加2.5%碘化鉀試液5ml與0.3%酸性氯化亞錫試液5滴,在室溫放置10分鐘,2操作,.,1)試劑的作用,a.KI的作用還原劑：As5+As3+,五價砷生成AsH3的反應速度比三價砷速度慢,加入KI使五價砷還原為三價砷后再與活潑氫反應,以增大AsH3的生成速度.,3.討論,.,還原劑(表現在2方面).將五價砷還原為三價砷(As5+As3+),b.酸性SnCl2的作用,.,進而促進AsH3不斷生成,穩(wěn)定的絡離子,.將KI被氧化生成的I2再還原為I-,.,c.PbAc2棉花的作用,排除硫化物的干擾(1mgS2-),.,2)古蔡氏法特點,對含銻藥物中砷鹽的檢查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.,白田道夫法,.,(二)二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag-DDC法)silverdiethyldithiocarbamate,本法不僅用于砷鹽的限量檢查,而且可用作微量砷鹽的含量測定.,.,1.原理,.,用有機堿吸收反應產生的HDDC有利于反應的進行。USP（24）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。,本法適用于含Sb量小于500g的供試品。,.,2.Ag-DDC法的特點,a靈敏度高0.5gAs/30mlb可儀器測定,還可定量1g10g/40mlcSb干擾小，500g銻不干擾,.,.在藥物的雜質檢查中，其限量一般不超過百萬分之十的是（）A.氯化物B.硫酸鹽C.醋酸鹽D.砷鹽E.淀粉,.,.在用古蔡法檢查砷鹽時，導氣管中塞入醋酸鉛棉花的目的是（）A.除去I2B.除去AsH3C.除去H2SD.除去HBrE.除去SbH3,.,砷鹽檢查法中，在檢砷裝置導氣管中塞入醋酸鉛棉花的作用是（）A.吸收砷化氫B.吸收溴化氫C.吸收硫化氫D.吸收氯化氫E.吸收銻化氫,.,.古蔡氏法中，SnC12的作用有（）A.使As5+As3+B.除去H2SC.除去I2D.組成鋅錫齊E.除去其它雜質,.,.AgDDC法檢查砷鹽的原理為：砷化氫與AgDDC吡啶作用，生成的物質是（）A.砷斑B.銻斑C.膠態(tài)砷D.三氧化二砷E.膠態(tài)銀,.,.中國藥典（1995年版）收載的古蔡法檢查砷鹽的基本原理是（）A.與鋅、酸作用生成H2S氣體B.與鋅、酸作用生成AsH3氣體C.產生的氣體遇氯化汞試紙產生砷斑D.比較供試品砷斑與標準品砷斑的面積大小E.比較供試品砷斑與標準品砷斑的顏色強度,.,例8.葡萄糖中砷鹽的檢查，需要的試劑應有（）APb2+標準液BSnCl2試液CKI試液DZnE醋酸鉛棉花,.,例9.Ag-DDC法檢查砷鹽時，加入碘化鉀和酸性氯化亞錫的作用為（）A將As5+還原為As3+B有利于AsH3生成反應C抑制SbH3的生成D形成Zn-Sn齊以均勻而連續(xù)地發(fā)生氫氣E催化加速生成AsH3,.,例10.古蔡氏法檢砷，藥典規(guī)定制備標準砷斑時，應取標準砷溶液（）A.1mlB.5mlC.2mlD.依限量大小決定E.以上都不對,.,例11.古蔡氏法檢查所用的溶液是()A.強堿性溶液B.強酸性溶液C.含稀鹽酸10ml/50ml溶液D.含稀硝酸10ml/50ml溶液E.含強氧化劑(硝酸或過硫酸銨)溶液,.,96：96100所含待測雜質的適宜檢測量為A.0.002mgB.0.010.02mgC.0.010.05mgD.0.050.08mgE.0.10.5mg96：96.硫酸鹽檢查法中，50ml溶液中(E)96：97.鐵鹽檢查法中，50ml溶液中(C)96：98.重金屬檢查法中，35ml溶液中(B)96：99.古蔡氏法中，反應液中(A)96：100.氯化物檢查法中，50ml溶液中(D),.,97：106110A.硝酸銀試液B.氯化鋇試液C.硫代乙酰胺試液D.硫化鈉試液E.硫氰酸鹽試液97：106藥物中鐵鹽檢查（E）97：107磺胺嘧啶中重金屬檢查（D）97：108藥物中硫酸鹽檢查（B）97：109葡萄糖中重金屬檢查（C）97：110藥物中氯化物檢查（A）,.,例15雜質檢查中所用的酸是A.稀硝酸B.稀鹽酸C.硝酸D.鹽酸E.醋酸鹽緩沖液1.氯化物檢查法（A）2.硫酸鹽檢查法（B）3.鐵鹽檢查法（B）4.重金屬檢查法（E）5.砷鹽檢查法（D）,.,目的：檢查藥物中酸堿性雜質適用對象：(1)在工藝中使用過酸或堿處理的藥物。(2)對酸堿不穩(wěn)定的藥物,酯類、酰胺類。標準中表述：“酸度”pH低于7.0“堿度”pH高于7.0“酸堿度”pH7.0兩側pH值,六、酸堿度檢查法,.,檢查方法,(1)酸堿滴定法:用消耗滴定液的體積來控制酸堿性雜質量。(2)指示劑法(3)pH值法,.,更精確的pH測試儀器,.,攜帶非常方便的筆式pH計,.,七、溶液澄清度檢查法,檢查藥物中的微量不溶性雜質，用作注射劑的原料藥一般應作此項檢查。,1.檢查方法對照法,.,2.濁度標準液的配制,中國藥典規(guī)定用濁度標準液作為澄清度檢查的標準。,反應原理：烏洛托品在偏酸性條件下水解產生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色渾濁。,.,1.00硫酸肼溶液與10烏洛托品溶液等量混合配制濁度標準貯備液濁度標準原液濁度標準液（5個級號）,.,3.判斷藥典中規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過0.5號濁度標準液。,4.溶劑：水、酸、堿、有機溶劑有機酸的堿金屬鹽類藥物強調用“新沸過的冷水”。,.,檢查方法(Ch.P),室溫供試品溶液等量分別置于配對的比濁用玻璃管中濁度標準液暗室內垂直同置于傘棚燈下照度1000lx水平方向觀察、比較檢查,.,濁度標準液,硫酸肼,烏洛托品,水,*甲醛腙,濁度標準液：貯備液、原液、比濁用液,.,九、溶液顏色檢查法,控制藥物中有色雜質限量的方法。,ChP(2010)采用三種方法檢查。,第一法目視比色法即與標準比色液比較的方法，全波長范圍定性觀察,.,第一法：目視比色法,黃綠色黃色橙黃色橙紅色棕紅色,比色用重鉻酸鉀液,比色用硫酸銅液,比色用氯化鈷液,水,.,觀察方法,.,標準比色液的配制,.,第二法分光光度法單一波長定量,第三法色差計法全波長范圍定量,本法是通過色差計直接測定溶液的透視三刺激值，對其顏色進行定量表述和分析的方法。,測色儀器一般為光電積分型色差計,.,色差值,標準液,供試液,水,第三法：色差計法:,原理：,.,十、易炭化物檢查法,檢查藥物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有機雜質。,方法：H2SO4炭化后與對照液比較。,.,對照液：（1）“溶液顏色檢查”項下的標準比色液；（2）由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配成的對照液；,.,比色：同置白色背景前，平視觀察比較。,（3）高錳酸鉀液,.,檢查不含金屬的有機藥物或揮發(fā)性無機藥物中混入的無機雜質(金屬氧化物或無機鹽類)。1.原理樣品炭化后+H2SO4濕潤700800熾灼至恒重熾灼殘渣（硫酸灰