臨床科研選題與科研設計ppt課件

.,臨床科研選題與科研設計（做科研型醫(yī)生）,中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所北京協(xié)和醫(yī)學院基礎醫(yī)學院,.,以幾個案例作例子來闡述,Idea（新鮮）（創(chuàng)新點）Design如何(從哪幾方面)來驗證，它們的邏輯關系Methods（邏輯，內(nèi)在聯(lián)系）,.,新發(fā)SLE患者（創(chuàng)新點）調(diào)節(jié)性T細胞的研究(表面標志CD25與轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達、細胞的抑制作用、其臨床意義）國外的SLE患者絕大多數(shù)有激素或細胞毒藥物治療的經(jīng)歷,案例一,.,自身免疫應答靶抗原的的“暴露”或形成（隱蔽抗原）微生物感染激活自身反應性淋巴細胞（分子模擬）協(xié)同刺激分子的異位表達多克隆淋巴細胞的非特異性活化（超抗原）免疫調(diào)節(jié)紊亂（包括調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量減少或功能減弱）其它,自身免疫病發(fā)病的免疫學因素,.,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（其抑制功能需Foxp3轉(zhuǎn)錄因子表達）,調(diào)節(jié)性T細胞,.,案例一涉及的3項研究,研究新發(fā)SLE患者周圍血中CD4+T細胞的CD25與FoxP3表達，及Glucocorticosteroid/cyclophosphamide治療對CD25與FoxP3在CD4+T細胞表達的影響。研究對象為24例新發(fā)活動期SLE患者、20例新發(fā)非活動期SLE患者、21例年齡性別相合的正常志愿者。分離周圍血的單個核細胞，用流式細胞儀檢測CD4T細胞CD25與FoxP3的表達。發(fā)現(xiàn)FoxP3在新發(fā)SLE患者CD4+CD25+T細胞的表達下降，在CD4+CD25-T細胞的表達增強。還檢測了Glucocorticosteroid與cyclophosphamide治療對FoxP3在CD4+CD25+和CD4+CD25-T細胞表達的影響,第1項研究：ReductionofFoxp3levelsinCD4+CD25highTcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus.ClinExpImmunol.2008;153(2):182-7.,.,研究新發(fā)SLE患者周圍血CD4+CD25-Foxp3+T細胞的臨床意義檢測10例活動期、11例非活動期新發(fā)SLE患者、及11例健康志愿者。用流式細胞儀分析Foxp3與CD25在CD4T細胞的表達。分離CD4+CD25+與CD4+CD25-T細胞，檢測它們對T細胞增殖的影響。G檢測CD4+CD25-T細胞與其他臨床指標（如抗dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI）的相關性這個故事并不復雜，內(nèi)容較簡單，文內(nèi)僅2張圖與1個表格。但創(chuàng)新點明顯，文章發(fā)表于AnnRheumDis.2008;67(7):1037-40.Impactfector7.188。,第2項研究：ClinicalsignificanceofincreasedCD4+CD25-Foxp3+Tcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus,.,第3項研究:AreCD4+CD25Foxp3+cellsinuntreatednew-onsetlupuspatientsregulatoryTcells?ArthritisResTher2009;11(5):R153,研究新發(fā)SLE患者周圍血中的CD4+CD25-Foxp3+T細胞與CD4+CD25+Foxp3+T細胞表面表達的分子及分泌的細胞因子有何不同，及CD4+CD25-Foxp3+T細胞有否抑制。檢測22例新發(fā)SLE患者。用流式細胞儀分析比較CD4+CD25-Foxp3+細胞與CD4+CD25+Foxp3+T細胞表面標志子表達及細胞因子表達的差異。檢測CD4+CD25+Foxp3+T細胞對T細胞增殖有否調(diào)節(jié)作用。,.,新發(fā)SLE患者其它免疫細胞有什么特點新發(fā)其它自身免疫病免疫細胞有什么特點新發(fā)其它自身免疫病其它免疫學指標有什么特點,從案例一能得到的啟發(fā),.,案例二新型抗流感藥DAS181的研發(fā),.,A型流感病毒的生活周期,.,已批準上市的抗流感藥物M2離子通道阻滯劑鹽酸金剛乙胺（1993年美國FDA批準上市）金剛烷胺（1966FDA年批準為預防藥，1976年確認其為治療藥）神經(jīng)胺酸酶（NA）抑制劑達菲（1999年美國FDA批準上市）扎那米韋（1999年5月首先在澳大利亞獲準上市）,除了毒副作用外，主要的問題是流感病毒產(chǎn)生抗藥性，因為病毒基因突變,.,研發(fā)中的抗流感藥物,.,流感病毒的NA與HA相互作用感染靶細胞,Neu5Ac(2,3)-Gal與Neu5Ac(2,6)-Gal分子就是流感病毒的受體。人流感病毒主要識別(2,6)-Gal唾液酸，禽流感病毒與馬流感病毒主要識別(2,3)-Gal唾液酸。流感病毒的HA與細胞表面含(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal唾液酸的糖蛋白相結合。人呼吸道上皮細胞的唾液酸主要是(2,6)-Gal型，但也有(2,3)-Gal型，所以禽流感病毒也能感染人，盡管感染效率不高。NA的作用是破壞HA的受體。它酶切呼吸道黏膜上諸如mucin等潛在抑制性分子的唾液酸，從而使之滅活，促進病毒在呼吸道傳播;酶切病毒感染細胞表面的唾液酸，促進子代病毒釋出，以助于病毒傳播。HA的受體結合作用和NA的受體破壞作用相互相成，維持平衡，于病毒復制和傳播十分重要。,呼吸道上皮細胞,唾液酸,流感病毒,HA,NA,.,以往有報道，體外實驗中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染細胞。因此學者欲研制一種融合蛋白，由唾液酸酶與能錨定于人呼吸道上皮細胞的蛋白組成。,DAS181的分子模式,.,報道已從微生物和真核細胞分離出15種底物特異性和酶動力學各異的唾液酸酶。從中選擇A.viscosus唾液酸酶的催化功能域。其理由為：底物特異性廣；催化活性最大；人免疫系統(tǒng)對其耐受，因為人正?？谇缓臀改c道細菌也產(chǎn)生此唾液酸酶。,DAS181抗流感病毒作用的研究（細胞、小鼠與雪貂模型）,.,DAS181的創(chuàng)新點,靶點在宿主細胞上，能避免產(chǎn)生病毒耐藥廣譜抗流感病毒藥物（A,B型流感、流感病毒耐藥株、副流感病毒）能酶切SA2,3Gal和SA2,6Gal，也能酶切SA2,8Gal。因此，對現(xiàn)有流感毒株、未來毒株、及重組變異毒株均有效吸入給藥，生物利用度高藥物作用持續(xù)時間較長：至少2天（MDCK),至少7天（HAE)，用于預防和治療均可,.,案例三：與IgA腎病發(fā)病機制相關,.,聚糖（glycan),.,核酸、蛋白質(zhì)、聚糖和脂是所有細胞的4種基本大分子核酸鏈基本上由4種核苷酸組成肽鏈基本上由23種氨基酸組成糖鏈十分復雜脂質(zhì)按生物學功能可分為三類：儲存脂質(zhì)（包括甘油三脂和蠟）結構脂質(zhì)（構成生物膜脂雙層的磷脂）活性脂質(zhì)（類固醇和萜）,.,案例四：幾個病案分析及其它,XXX等（301醫(yī)院）：不明原因發(fā)熱的病因分布及臨床特征2000年1月至2009年1月在301醫(yī)院內(nèi)科住院且符合不明原因發(fā)熱的患者816例，病因分布，臨床特征，老年患者與非老年患者之間的比較。XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：結石性急性膽管炎的治療1998.1-2008.12急診的急性膽管炎患者426例，隨著介入技術（急性行經(jīng)皮經(jīng)肝膽道穿刺引流術）和內(nèi)鏡技術（急性行經(jīng)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影）的進展，急性膽管炎患者由急診手術經(jīng)保守治療或介入治療轉(zhuǎn)為擇期手術，可以大大減少手術并發(fā)癥發(fā)生率，降低手術死亡率。XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：胰腺實性假乳頭狀瘤的CT診斷及鑒別診斷對14例病理確診的胰腺實性假乳頭狀瘤患者的CT資料作CT診斷及鑒別診斷(無功能性胰島細胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊腫）分析XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：細針穿刺技術在乳腺癌手術治療中的應用價值2004.1-2009.1北京協(xié)和醫(yī)院初診考慮乳腺癌可能性大的530例女性患者作細針穿刺細胞學（FNAC）檢查。FNAC檢查陽性325例，直接行乳腺癌根治術，術后組織病理學檢查均為乳腺癌。FNAC檢查陰性205例，開放活檢術，術后組織病理學檢查137例乳腺癌，68例非乳腺癌。表明FNAC有助于對懷疑乳腺癌者選擇適當?shù)男g式。,以中國醫(yī)學科學院學報2011年第1期上的幾篇論文為例,.,病案分析加檢驗科檢測指標也能發(fā)SCI文章,2009,.,確定“點”，要有新意要有正常對照和其它對照（如陽性對照）分析的指標不能單一，分析要有層次正確的統(tǒng)計處理最好能結合一點實驗室檢測,病案分析中需注意的幾點,.,藥劑科的人員一般做藥代動力學和生物效性等的試驗較多,.,對藥劑師科研工作的建議,與臨床大夫密切合作參與新藥研制有效制劑的開發(fā)（如協(xié)和醫(yī)院的健腦合劑等）做一點藥物作用機理的研究,.,科研工作中尚需注意的幾點,每一步都要走得踏實，要核實試劑和儀器是否OK（以本人做PCR檢測及研制PSA試劑盒失敗為例說明）,表位可分成兩類：線性表位（linear，指肽鏈上由一段序列相連續(xù)的氨基酸殘基所形成的抗原表位）和構象表位（conformation，指多肽或多糖鏈上由空間位置相鄰，而序列上不相連續(xù)的氨基酸殘基或多糖殘基所形成的抗原表位）,.,嚴格實驗操作，做好實驗記錄（包括病案記錄）隨時分析實驗結果，適時對研究目的和技術路線作調(diào)整,.,愛因斯坦有關如何做科學研究的名言,Onepercentinspirationandninetyninepercentperspiration,靈感來自哪里?臨床實踐與文獻。要找到和明確什么是你研究的“點”（創(chuàng)新最關鍵）。IdeaDesign(切實可行的技術路線,從哪幾方面說明這個“點”，它們的邏輯順序怎樣）Methods。需要多一點分子生物學、免疫學、細胞生物學等的知識，需多讀文獻。,.,如何寫科研論文,明確什么是這篇論文的“點”。確定論文的題目。畫制圖表（論文的核心）材料與方法查閱文獻引言（包括問題的提出（背景、假設），回答了什么問題，創(chuàng)新點）討論（簡單小結本研究的發(fā)現(xiàn)，與其他學者研究的比較，本創(chuàng)新發(fā)現(xiàn)的意義，其它，等等）摘要,.,ClinicalsignificanceofincreasedCD4+CD25-Foxp3+Tcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus,題目,以前述案例一（2）為例,.,實驗結果（圖表的制作）,Fig1.CD4+CD25+Foxp3+andCD4+CD25-Foxp3+TcellsinSLEpatientsandnormalcontrols,Fig2.TheexpressionofCD127byCD4+Tcellsubpopulation,.,材料與方法（可以參考他人的文章）,.,前言,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞在SLE發(fā)病中作用的的報道不甚一致，且尚無在新發(fā)SLE患者研究的報道Foxp3表達不只限于CD4+CD25+T細胞（Treg），作者以往研究觀察到新發(fā)SLE患者CD4+CD25-Foxp3T細胞頻率增高CD4+CD25-Foxp3+T細胞有什么臨床意義,（包括問題的提出（背景、假設），回答了什么問題，創(chuàng)新點）,.,討論,有關CD4+CD25+Treg細胞在SLE患者周圍血中狀況的報道不盡相同。這可能與各種免疫抑制劑使用相關。本文報道了在新發(fā)SLE所做的研究。對CD4+CD25-Foxp3+T細胞