重組活疫苗ppt課件

重組活疫苗,1,重組活疫苗,2,重組活疫苗,重組活疫苗,指使用重組DNA技術(shù)克隆并表達保護性抗原基因，利用表達的抗原產(chǎn)物，或重組體本身制成的疫苗。其原理是將外源性目的基因（保護性抗原基因）插入已知的病毒或細菌的弱毒株或疫苗株的基因組中致使基因獲得高效的表達，但不影響原弱毒株或疫苗株的生存與繁殖。,重組活疫苗,3,基因缺失活疫苗,基因缺失活疫苗使用分子生物學技術(shù)去除與毒力有關(guān)的基因獲得的缺失突變毒株制成的疫苗。優(yōu)點：有突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復；是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。,重組活疫苗,4,基因工程載體疫苗,基因工程載體疫苗是指利用微生物做載體，將保護性抗原基因重組到微生物體中，使用能表達保護性抗原基因的重組微生物制成的疫苗。,重組活疫苗,5,優(yōu)點：疫苗多為活疫苗，重組體用量少，抗原不需純化，載體本身可發(fā)揮佐劑效應增強免疫效果缺點：曾感染過腺病毒或者接種過痘苗的人，對載體微生物已具有免疫力，使之接種后不易繁殖，因而影響免疫效果。,重組活疫苗,6,重組痘苗病毒,重組質(zhì)粒,痘苗病毒dna,外源抗原基因,病毒dna,重組活疫苗,7,重組活疫苗,8,構(gòu)建痘苗病毒活疫苗所必需的條件,1.外源基因應是連續(xù)的2.外源基因必須在痘苗病毒基因組的安全位點處插入3.必須在上述安全點的基因片段內(nèi)建表達載體4.具有細胞內(nèi)同源重組的適宜條件5.必須有一種簡便易行的重組痘苗病毒的選擇方法6.插入外源基因的容量2540kb,重組活疫苗,9,病毒性載體痘病毒載體皰疹病毒載體桿狀病毒載體腺病毒載體RNA病毒,細菌性活載體卡介苗大腸桿菌傷寒桿菌沙門氏菌,重組活疫苗,10,痘病毒載體,宿主范圍廣、增殖滴度高、穩(wěn)定性好、基因組容量大、含多個非必需區(qū)基因，易于構(gòu)建和分離重組病毒，適于插入多個外源基因(40kb)，對插入的外源基因有較高的表達水平?？乖苑€(wěn)定，免疫原性持久，能夠同時誘發(fā)體液和細胞免疫，相對安全。痘苗病毒在種痘后局部反應較大，在人接種后有百萬分之一發(fā)生全身性發(fā)痘和種痘后腦炎等并發(fā)癥傾向。禽類痘病毒，由于用該病毒接種哺乳動物后，可以引起頓挫型感染，但卻可以持續(xù)表達外源基因，并且不影響再次接種。（雞痘病毒）,重組活疫苗,11,腺病毒載體,人Ad2和Ad5：外源基因容量為20kb左右。E3：病毒復制的非必須區(qū)，允許插入的外源基因的最大長度為4.0Kb。外源基因一般不需要加基因表達調(diào)控元件，利用腺病毒本身的調(diào)節(jié)元件，即外源基因可插在E3啟動子后,在感染早期有效表達。HIV-1、狂犬病毒E1：為病毒復制必須區(qū)。缺失E1區(qū)的人腺病毒必須在特殊的工程細胞中（比如293細胞系（人胚腎細胞）或非缺失的腺病毒輔助下才能復制增殖，因此稱為病毒缺陷型載體。,重組活疫苗,12,腺病毒的優(yōu)點,腺病毒比較安全。腺病毒的靶細胞范圍廣:復制分裂細胞、非復制分裂細胞。腺病毒容易制備，對熱不敏感，高滴度增殖。腺病毒可以在腸道及呼吸道繁殖，能誘導粘膜免疫，能制成藥囊經(jīng)口服途徑接種以預防消化道及呼吸道感染。Ad2、Ad5等啟動子較強，能高水平表達外源基因，特別是換以更強的啟動子如CMV早期啟動子后，更可明顯提高外源基因的表達水平。,重組活疫苗,13,皰疹病毒載體,基因組較大，約150kb，含70個編碼基因，其中至少20%的基因是非必需基因，可容納多個外源基因的插入。大多數(shù)皰疹病毒的宿主范圍很窄，其重組病毒的使用不會產(chǎn)生流行病學方面的不良后果(偽狂犬病毒除外)。許多皰疹病毒經(jīng)粘膜途徑感染，構(gòu)建的載體活疫苗可經(jīng)粘膜途徑提呈抗原，誘導特異性粘膜免疫。皰疹病毒作為活載體表達外源基因作為疫苗的研究：單純皰疹病毒、偽狂犬病毒、火雞皰疹病毒、牛皰疹病毒I型、馬皰疹病毒I型、傳染性喉氣管炎病毒,重組活疫苗,14,沙門氏菌活疫苗載體,能運送抗原至腸道淋巴組織，并引起分泌免疫反應，其中分泌性IgA浸潤所有粘膜表面及外分泌腺體的分泌物中。傷寒沙門氏菌在人體、鼠傷寒沙門氏菌在小鼠能在寄主腸道中定居，并在腸道淋巴組織、肝和脾中增殖。沙門氏菌人工突變后，它們?nèi)阅茉谀c道淋巴組織中定居。,重組活疫苗,15,卡介苗,BCG不僅是一種活疫苗,而且還是外源基因的表達載體和較強的免疫佐劑,也是最耐熱的疫苗之一，隨著研究的深入,很多外源蛋白在BCG中獲得表達,有的獲得了較好的免疫效果，是理想的重組菌苗。,重組活疫苗,16,將外源基因?qū)隑CG的途徑1.分枝桿菌噬菌體衍生的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)2.分枝桿菌質(zhì)粒衍生的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)3.同源重組基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng),重組活疫苗,17,多價BCG疫苗可預防艾滋病、肝炎、白喉、破傷風、麻疹和瘧疾等疾病構(gòu)建多價疫苗時，可將A菌的表面抗原與B菌的表面抗原連接，也可用A菌的表面抗原與B菌的內(nèi)部抗原連接，也可將A菌的B細胞表位與B菌的T細胞表位連接，以產(chǎn)生更大的免疫反應。,重組活疫苗,18,重組活疫苗,19,細菌疫苗載體與病毒疫苗載體相比的優(yōu)點,生產(chǎn)相當?shù)土毦d體大多對抗生素敏感可以通過口服和鼻飼接種，方法簡便易行可以攜帶較大的基因片段，易于構(gòu)建多價疫苗具有免疫佐劑的作用，不僅可以刺激全身免疫而且還可以刺激機體的粘膜免疫誘導作用點比較明確，比較安全可靠,重組活疫苗,20,重組疫苗的研究進展,疫苗是最經(jīng)濟有效的預防疾病的醫(yī)學卡介苗（）是分枝桿菌中牛結(jié)核桿菌的一種突變株，它具有的特點可使之發(fā)展成為一種特別有吸引力的重組載體疫苗,重組活疫苗,21,分枝桿菌載體疫苗與其它疫苗相比具有以下特征。產(chǎn)品不需純化，可直接用于免疫保護試驗，免去了蛋白質(zhì)后處理的復雜工序；單次接種即可持續(xù)誘導對“靶抗原”的免疫反應；運用分子生物學手段，通過對不同“靶抗原”的剪切、拼接，可使新型疫苗理想化；分枝桿菌本身是一種強免疫性劑；在人類近個免疫接種者中，證明用于人是安全的。它是推薦的兩種出生時接種的活疫苗之一；在世界范圍內(nèi)分布著接種點；價格低廉、便于保存、適于大量生產(chǎn)。近年