臨床免疫學(xué)免疫球蛋白檢測及應(yīng)用.doc

第十七章免疫球蛋白檢測及應(yīng)用本章考點(diǎn)1.免疫球蛋白（Ig）的概述2.Ig測定及臨床意義3.M蛋白的檢測及意義4.冷球蛋白測定第一節(jié)免疫球蛋白的概述 一、概念1.免疫球蛋白（Ig）：是一組具有抗體活性和（或）抗體樣結(jié)構(gòu)的球蛋白。Ig由漿細(xì)胞產(chǎn)生，存在于血液和體液（包括組織液和外分泌液）中，也可作為抗原受體表達(dá)于B細(xì)胞表面，稱為膜表面免疫球蛋白。多數(shù)Ig具有抗體活性，可以特異性識別和結(jié)合抗原，并引發(fā)一系列生物學(xué)效應(yīng)。2.抗體：是機(jī)體在抗原刺激下，由漿細(xì)胞合成分泌產(chǎn)生的具有與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，即具有免疫功能的球蛋白?？贵w是生物學(xué)功能上的概念，免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)上的概念。所有的抗體均是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體。二、免疫球蛋白的化學(xué)結(jié)構(gòu)1.Ig的基本結(jié)構(gòu)：Ig分子由4條肽鏈借鏈間二硫鍵連接組成，即2條相同的重鏈（H）和2條相同的輕鏈（L）和幾對二硫鍵連接成一個基本單位。稱為單體。IgG、IgE、IgD及多數(shù)血清型IgA皆為單體，分泌型IgA為雙體，IgM為五聚體。免疫球蛋白分子H鏈的N端14處氨基酸的種類和順序隨抗體特異性不同而各不相同，稱為可變區(qū)（VH區(qū)）；H鏈C端其余部分的氨基酸，在種類和順序上彼此間差別不大，稱為穩(wěn)定區(qū)或恒定區(qū)（CH區(qū)）。L鏈N端的一半為可變區(qū)（VL區(qū)），其余一半為恒定區(qū)（CL區(qū)）。2.功能區(qū)：Ig分子的H鏈與L鏈各區(qū)段可通過鏈內(nèi)二硫鍵折疊成彼此相似球狀結(jié)構(gòu)，擔(dān)負(fù)特定免疫學(xué)功能，稱為功能區(qū)。L鏈有兩個功能區(qū)，稱為VL、CL。IgG、IgA的重鏈有一個VH和三個CH（CH1、CH2、CH4）功能區(qū)。IgM、IgD、IgE的重鏈有一個VH和四個CH（CH1、CH2、CH3、CH3）功能區(qū)。各功能區(qū)的功能各異，VH和VL是抗原結(jié)合部位；CL、CH是遺傳標(biāo)記所在；CH2有補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)；CH3能固定組織細(xì)胞；CH3和CH4還參加型變態(tài)反應(yīng)。3.Ig的水解片段：Ig分子可被許多蛋白酶水解，產(chǎn)生不同的片段。免疫學(xué)研究中常用的酶是木瓜蛋白酶和胃蛋白酶。用木瓜蛋白酶水解IgG分子，可將其裂解為三個片段，即兩個完全相同的抗原結(jié)合片段Fab和一個可結(jié)晶片段Fc。用胃蛋白酶水解IgG分子，可將其裂解為一個大分子F（ab）2片段和若干無活性小分子多肽片段pFc。三、免疫球蛋白的血清型1.同種型：同種系間所有正常個體都具有的Ig抗原特異性，稱同種型。Ig同種型抗原特異性具有種屬特異性。同種型抗原決定簇存在于Ig恒定區(qū)。根據(jù)Ig重鏈或輕鏈恒定區(qū)同種型抗原決定簇的不同，可將Ig分為若干類、亞類型和亞型：（1）類和亞類：根據(jù)Ig重鏈恒定區(qū)的結(jié)構(gòu)不同和抗原特異性的不同，可將Ig分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類。同一類免疫球蛋白分子重鏈恒定區(qū)抗原特異性又有差異又可分成亞類，如IgG可分為IgGl、IgG2、IgG3、IgG4；IgM可分為IgMl、IgM2；IgA可分為IgAl、IgA2。（2）型和亞型：根據(jù)輕鏈恒定區(qū)肽鏈抗原特異性的不同，各類Ig可分為和兩型。2.同種異型：同種不同個體間Ig結(jié)構(gòu)和抗原性的差異稱同種異型。主要反映在免疫球蛋白分子上重鏈和輕鏈恒定區(qū)上一個或數(shù)個氨基酸的行不同。與同種型的區(qū)別在于，同種異型的特異性只存在于同種的某些個體中，而同種型的特異性則普遍存在同一物種的所有個體。3.獨(dú)特型：同一個體內(nèi)，不同B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的免疫球蛋白分子V區(qū)具有不同的抗原特異性，由此而區(qū)分的型別稱為獨(dú)特型。獨(dú)特型的抗原決定簇可在異種、同種異體以及自體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生相對應(yīng)的抗體，稱為抗獨(dú)特型抗體。獨(dú)特型和抗獨(dú)特型抗體將整個抗體組成一個網(wǎng)絡(luò)，稱獨(dú)特型網(wǎng)絡(luò)。獨(dú)特性網(wǎng)絡(luò)在免疫應(yīng)答的調(diào)控中起重要調(diào)控作用。四、免疫球蛋白的生物學(xué)活性抗體是具有雙功能的分子，它既可特異性結(jié)合抗原，又可獨(dú)立誘發(fā)或執(zhí)行一系列生物學(xué)效應(yīng)，由抗體分子不同部位分別執(zhí)行。1.與抗原結(jié)合作用：抗體分子在結(jié)合抗原時，其Fab片段的V區(qū)與抗原決定簇的立體結(jié)構(gòu)（構(gòu)象）必須吻合，特別與高變區(qū)的氨基酸殘基直接有關(guān)，且兩者所帶電荷也應(yīng)相互對應(yīng)。所以抗原-抗體的結(jié)合具有高度特異性。盡管某些氨基酸殘基在肽鏈的氨基酸順序上相距很遠(yuǎn)，但由于肽鏈沿功能區(qū)長軸平行方向往返折疊，使它們能緊密接近，形成一雙層排布的凹型或袋狀包圍抗原的活性部位，雙層間存在許多疏水氨基酸側(cè)鏈?？贵w分子與抗原的相互作用靠各種非共價力，如氫鍵、靜電引力和范德華力等，是一種可逆性反應(yīng)。抗體與抗原結(jié)合后抗體Fc段變構(gòu)產(chǎn)生其他生物效應(yīng)。天然Ig分子不能起這種作用。但在無抗原作用時，某些物理處理（如加熱、凝聚等）也可模擬Ig分子構(gòu)象的變化而起激活效應(yīng)機(jī)制的作用。2.補(bǔ)體活化作用：補(bǔ)體Clq與游離Ig分子結(jié)合非常微弱，而與免疫復(fù)合物中的IgG或IgM（經(jīng)典途徑）或凝聚Ig（替代途徑）結(jié)合則很強(qiáng)。Clq與IgG Fc段的CH2功能區(qū)起反應(yīng)，其結(jié)合位點(diǎn)在3個氨基酸側(cè)鏈上。所有IgG亞類的單獨(dú)Fc片段對Clq具同樣的親和性；但完整蛋白則主要是IgG1和IgG3才能結(jié)合Clq而激活補(bǔ)體的經(jīng)典途徑；IgG2激活補(bǔ)體能力較差；IgG4、IgA不能通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體。這可能與它們的鉸鏈區(qū)結(jié)構(gòu)對Clq結(jié)合的影響有關(guān)；IgM激活補(bǔ)體能力最強(qiáng)；IgG最少需兩個緊密并列的分子才能有效地激活Clq；而IgM單個分子在結(jié)合抗原后即可激活補(bǔ)體。3.親細(xì)胞作用：IgG分子能與細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合。不同類別的免疫球蛋白可與不同的細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生不同免疫效應(yīng)。IgG Fc段與單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合產(chǎn)生調(diào)理作用；與NK細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮ADCC效應(yīng)；與胎盤膜細(xì)胞Fc受體結(jié)合能使IgG穿過胎盤合胞體滋養(yǎng)層。IgA Fc段與單核細(xì)胞或中性粒細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合，也可發(fā)揮調(diào)理作用。IgE Fc段與嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板等表面受體結(jié)合，當(dāng)再遇相應(yīng)抗原時，可引起型超敏反應(yīng)。4.調(diào)理作用：（1）通過C3受體進(jìn)行；（2）通過激活的C3和吞噬細(xì)胞的C3受體相結(jié)合促進(jìn)吞噬；（3）經(jīng)補(bǔ)體旁路非特異激活C3后進(jìn)行。5.膜傳遞作用五、免疫球蛋白的特點(diǎn)五類免疫球蛋白雖都有結(jié)合抗原的共性，但它們在分子結(jié)構(gòu)、體內(nèi)分布、血清水平及生物活性等方面也各具特點(diǎn)。1.IgG：IgG為標(biāo)準(zhǔn)的單體分子，含1個或更多的低聚糖基團(tuán)，電泳速度最慢，是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，具有吞噬調(diào)理作用、中和毒素作用、中和病毒作用、介導(dǎo)ADCC、激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，并可透過胎盤傳輸給胎兒。IgG合成速度快，分解慢，半衰期長，在血中含量最高，約占整個Ig的75%；各亞類所占的比例大約為：IgG1 60%70%，IgG2 15%20%，IgG3 5%l0%，IgG41%7%，各亞類的比例隨著年齡及遺傳背景而變化，同時各亞類的生物學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)也不盡相同。2.IgM：IgM為五聚體，是Ig中分子量最大者。分子結(jié)構(gòu)呈環(huán)形，含一個J鏈，各單體通過鏈倒數(shù)第二位的二硫鍵與J鏈互相連接。IgM凝集抗原能力比IgG大得多，激活補(bǔ)體的能力超過IgGl000倍，當(dāng)有補(bǔ)體存在時，具有吞噬調(diào)理作用。血型中天然凝集素和冷凝集素的抗體類型是IgM；不能通過胎盤，新生兒臍血中若IgM增高，提示有宮內(nèi)感染。在感染或疫苗接種以后，最先出現(xiàn)的抗體是IgM；在抗原的反復(fù)刺激下，可通過Ig基因的類轉(zhuǎn)換而轉(zhuǎn)向IgG合成。當(dāng)分泌物中IgA缺陷時，IgM也和IgA一樣可結(jié)合分泌片而替代IgA，IgM也是B細(xì)胞上的主要表面膜Ig，作為抗原受體而引發(fā)抗體應(yīng)答。其血中含量約占血清Ig總量6%l0%。半衰期短，出現(xiàn)早，消失快，組織穿透力弱。0.1M2-巰基乙醇能破壞IgM，但不破壞IgG，是分別測定IgM、IgG的簡單方法。3.IgA：IgA可分為血清型和分泌型。大部分血清IgA為單體，其他為雙聚體或多聚體。占血清中免疫球蛋白總量的10%20%。血清型IgA主要為單體，以無炎癥形式清除大量的抗原，這是對維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的非常有益的免疫效應(yīng)。分泌型IgA（SIgA）為雙聚體，每一SIgA分子含一個J鏈和一個分泌片。SIgA性能穩(wěn)定，在局部濃度大，能抑制病原體和有害抗原粘附在黏膜上，阻擋其進(jìn)入體內(nèi)，同時也因其具有調(diào)理吞噬和溶解作用，構(gòu)成了黏膜第一線防御機(jī)制；母乳中的分泌型IgA提高了嬰兒出生后46個月內(nèi)的局部免疫屏障，常稱為局部抗體。4.IgD：IgD分子結(jié)構(gòu)與IgG非常相似，有明顯的鉸鏈區(qū)，其蛋白質(zhì)高度糖基化。IgD性能不穩(wěn)定，血清中含量很低，占全部免疫球蛋白的0.2%左右，可作為B細(xì)胞表面的抗原受體。5.IgE：IgE為單體結(jié)構(gòu)，分子量大于IgG和單體IgA，含糖量較高，鏈有6個低聚糖側(cè)鏈。正常人血清中IgE水平在5類Ig中最低，僅為0.10.9mgL。IgE水平與個體遺傳性和抗原質(zhì)量密切相關(guān)，因而其血清含量在人群中波動很大。在特應(yīng)性過敏癥和寄生蟲感染者血清中IgE水平升高；IgE不能激活補(bǔ)體及穿過胎盤，但它的Fc段能與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的受體結(jié)合，介導(dǎo)型變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生，因此又稱親細(xì)胞抗體。第二節(jié)免疫球蛋白的測定及臨床意義 一、IgG、IgA、IgM的測定1.方法：有單向瓊脂擴(kuò)散法、速率散射比濁法等。2.臨床意義（1）Ig降低：一種或多種Ig水平減少，分為原發(fā)性和繼發(fā)性。見于各種先天性或獲得性免疫缺陷病。繼發(fā)性常與免疫抑制劑應(yīng)用、射線、蛋白質(zhì)丟失、營養(yǎng)不良等有關(guān)。也可見于細(xì)胞毒藥物治療后。（2）Ig升高：多克隆性增高，見于各種慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等；也見于寄生蟲疾病、結(jié)節(jié)病等。單克隆性增高，又稱M蛋白增高，主要見于免疫增殖性疾病，如多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病、輕鏈病，原發(fā)性巨球蛋白血癥等。二、IgD的測定1.方法：有單向瓊脂擴(kuò)散法、ELISA等。2.臨床意義：IgD的生物學(xué)功能未全闡明。其增高可見于多發(fā)性骨髓瘤等。三、IgE的測定1.方法：目前檢測方法有多種，包括ELISA、間接血凝試驗、放射免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析、免疫熒光測定法等。2.臨床意義（1）IgE增高：見于IgE型多發(fā)性骨髓瘤、特應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎、過敏性鼻炎、寄生蟲感染、熱帶嗜酸粒細(xì)胞增多癥、SLE、RA及某些霉菌病等。（2）IgE減低：一般無意義?？梢娪谠l(fā)性無丙種球蛋白血癥、惡性腫瘤及細(xì)胞毒藥物治療后。第三節(jié)異常免疫球蛋白的檢測及臨床意義 一、單克隆免疫球蛋白的測定1.單克隆免疫球蛋白的概念：單克隆免疫球蛋白（monoclonal Ig），又稱M蛋白，是B細(xì)胞或漿細(xì)胞單克隆異常產(chǎn)生的一種在氨基酸組成及順序上十分均一的異常免疫球蛋白。2.方法（1）血清蛋白區(qū)帶電泳：血清（或尿液）標(biāo)本中不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)可明顯分開形成不同的區(qū)帶，與正常的電泳圖譜進(jìn)行比較，可發(fā)現(xiàn)患者的血清蛋白區(qū)帶電泳圖譜上有一濃縮的集中帶，即M區(qū)帶。圖 血清蛋白電泳顯示單克隆免疫球蛋白增高與多克隆免疫球蛋白增高的圖形區(qū)別多克隆免疫球蛋白病 高球蛋白血（癥）12NNN單克隆免疫球蛋白病單克隆異常球蛋白血（癥）在1、或區(qū)帶出現(xiàn)單克隆峰，多克隆免疫球蛋白正常或降低（2）免疫球蛋白的分類與鑒定，分類可分為IgM、IgA、IgE、IgG；和輕鏈的鑒定則利用電泳或免疫擴(kuò)散。（3）免疫電泳：將區(qū)帶電泳和免疫擴(kuò)散結(jié)合起來的一種免疫學(xué)分析法，血清標(biāo)本先經(jīng)區(qū)帶電泳將各種蛋白成分分離開，繼而用各種特異性抗血清進(jìn)行免疫擴(kuò)散，根據(jù)M蛋白在免疫電泳中所形成的特殊沉淀弧，觀察其電泳轉(zhuǎn)移位置與抗原特異性，可將M蛋白的免疫球蛋白類型和其輕鏈型加以鑒定。（4）免疫固定電泳：類似免疫電泳，將待測血清標(biāo)本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后于其上覆蓋抗或輕鏈或各類重鏈的抗血清濾紙，當(dāng)抗體與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結(jié)合后，便形成復(fù)合物而沉淀，再漂洗、染色，呈現(xiàn)濃而狹窄的著色區(qū)帶，可判斷單克隆免疫球蛋白的輕鏈和重鏈型別。3.臨床意義：M蛋白的增高可見于免疫增殖性疾病等。二、冷球蛋白的檢測及臨床意義1.冷球蛋白的特性：冷球蛋白（cryoglobulin）是一種異常免疫球蛋白，當(dāng)溫度降至4時，發(fā)生沉淀，故稱之為冷球蛋白。2.臨床意義：冷球蛋白陽性見于：骨髓瘤，原發(fā)性巨球蛋白血癥，慢性淋巴細(xì)胞白血?。活愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病，傳染性單核細(xì)胞增多癥，惡性腫瘤等。習(xí)題84 關(guān)于免疫球蛋白的生物學(xué)功能，正確的是A.與抗原特異性結(jié)合B.激活補(bǔ)體C.通過胎盤和粘膜D.介到ADCCE.親細(xì)胞作用答疑編號500734170201正確答案A、B、C、D、E習(xí)題85 關(guān)于IgG的特征，正確的是A.唯一能通過胎盤的抗體B.介導(dǎo)ADCCC.有3個亞類D.是再次免疫應(yīng)答產(chǎn)生的主要抗體E.可引起、型超敏反應(yīng)答疑編號500734170202正確答案A、B、D、編號：Q/ZDJ-SC質(zhì) 量 手 冊第A版章 節(jié)00目 錄共2頁第1頁第0次修改第十八章循環(huán)免疫復(fù)合物檢測及應(yīng)用本章考點(diǎn)1.抗原特異性CIC2.非抗原特異性CIC免疫復(fù)合物（immune complex，IC）：即抗原抗體復(fù)合物。IC的抗原成分包括：細(xì)胞膜；細(xì)胞膜受體；細(xì)胞內(nèi)成分；微生物；組織成分；蛋白或多肽成分。循環(huán)免疫復(fù)合物（circulating immune complex，CIC）：循環(huán)免疫復(fù)合物主要指血液中免疫復(fù)合物，對循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測近年來受到廣大臨床醫(yī)師和實驗室工作者的重視。根據(jù)形成免疫復(fù)合物的Ag-Ab的已知或未知的將CIC分為兩大類，前者為抗原特異性免疫復(fù)合物（如乙型肝炎的HBsAg-抗-HBs，甲狀腺球蛋白抗原-抗甲狀腺球蛋白抗體形成的免疫復(fù)合物等）；后者為非抗原特異性免疫復(fù)合物（如腎小球腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等）。非抗原特異性免疫復(fù)合物的檢測應(yīng)用較廣泛，方法也較多?？乖禺愋匝h(huán)免疫復(fù)合物分為單特異性循環(huán)免疫復(fù)合物（已知抗原及其相應(yīng)抗體組成的特異性循環(huán)免疫復(fù)合物），雙特異性循環(huán)免疫復(fù)合物（指對組成特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的抗原、抗體和補(bǔ)體中某兩種成分組合明確的特異性循環(huán)免疫復(fù)合物）。第一節(jié)抗原特異性CIC測定1.單特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測方法：胰蛋白酶解離法等。2.雙特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測方法：捕獲法ELISA，包被抗C3抗體法等。第二節(jié)非抗原特異性CIC測定及應(yīng)用非抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測不考慮免疫復(fù)合物中抗原性質(zhì)，只檢測免疫復(fù)合物的總量。檢測非抗原特異CIC的方法應(yīng)用較多，建立的檢測方法也比較多，根據(jù)檢測原理不同，將其檢測技術(shù)大致歸納為理化檢測技術(shù)、補(bǔ)體參與技術(shù)、抗球蛋白檢測技術(shù)和細(xì)胞技術(shù)等。檢測方法的評價標(biāo)準(zhǔn)：高度敏感性；簡便可作常規(guī)應(yīng)用；相對特異性，能檢出各種抗體類型和分子大小的循環(huán)免疫復(fù)合物；重復(fù)性好；試驗前不需對標(biāo)本進(jìn)行滅活或特殊處理。主要存在的問題：目前尚無一種對所有種類的循環(huán)免疫復(fù)合物均能有效檢測的方法；不同方法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物原理各異，檢測結(jié)果有時不相關(guān)；大多數(shù)方法易受非特異性原因造成的Ig聚合物或非免疫因素抵抗補(bǔ)體活性等各種因素的干擾；目前尚無理想的標(biāo)準(zhǔn)化措施。一般而言，臨床上CIC總量變化并不是診斷疾病或觀察病情的敏感指標(biāo)。所以要提高CIC的檢測水平，除需提高方法的敏感性和穩(wěn)定性外，還應(yīng)重點(diǎn)提高抗原特異性CIC的檢測水平。第十九章補(bǔ)體檢測及應(yīng)用本章考點(diǎn)1.概述2.補(bǔ)體的活化途徑3.有關(guān)補(bǔ)體測定的試驗4.補(bǔ)體測定的應(yīng)用補(bǔ)體是存在于人和脊椎動物正常新鮮血清及組織液中的一組具有酶樣活性的球蛋白。補(bǔ)體系統(tǒng)是補(bǔ)體加上其調(diào)節(jié)因子和相關(guān)膜蛋白共同組成一個反應(yīng)系統(tǒng)，稱為補(bǔ)體系統(tǒng)。補(bǔ)體系統(tǒng)參與機(jī)體的抗感染及免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)病理性反應(yīng)，是體內(nèi)重要的免疫系統(tǒng)和放大系統(tǒng)。第一節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)的組成和性質(zhì) 一、命名根據(jù)l968年WH0命名委員會對補(bǔ)體系統(tǒng)進(jìn)行了統(tǒng)一命名。參與補(bǔ)體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的先后順序分別稱Cl、C2、C9。Cl由Clq、Clr、Cls三種亞單位組成；補(bǔ)體系統(tǒng)旁路激活途徑及調(diào)節(jié)因子中另一些組分以英文大寫字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子等；補(bǔ)體調(diào)節(jié)成分多以其功能進(jìn)行命名，如C1抑制物、C4結(jié)合蛋白、衰變加速因子等；補(bǔ)體活化后的裂解片段以該成分的符號后面加小寫英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或復(fù)合物在其符號上劃一橫線表示，如、，滅活的補(bǔ)體片段在其符號前面加英文字母i表示，如iC3b等；對補(bǔ)體受體以其結(jié)合對象命名，如CLrR、C5Ar、對C3片段受體則用CRl、CR2CR4表示。二、分類構(gòu)成補(bǔ)體系統(tǒng)包括30余種活性成分，按其性質(zhì)和功能可以分為三大類：1.在體液中參與補(bǔ)體活化級聯(lián)反應(yīng)的各種固有成分；2.以可溶性形式或膜結(jié)合形式存在的各種補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白；3.結(jié)合補(bǔ)體片段或調(diào)節(jié)補(bǔ)體生物效應(yīng)的各種受體。三、理化性質(zhì)補(bǔ)體的大多數(shù)組分都是糖蛋白，且多屬于球蛋白，約占血清球蛋白總量的l0%；Clq，C8等為球蛋白；Cls，C9為球蛋白。正常血清中各組分的含量相差較大，C3含量最多，C2最低。各種屬動物間血中補(bǔ)體含量也不相同，豚鼠血清中含有豐富的補(bǔ)體，故實驗室多采用豚鼠血作為補(bǔ)體來源。補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響，如加熱、機(jī)械振蕩、酸堿、酒精等均可使其失活；在010下活性只保持34天，冷凍干燥可較長時間保持其活性；加熱5630min可使血清中絕大部分補(bǔ)體組分喪失活性，稱為滅活或滅能。第二節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)的活化與調(diào)控 一、補(bǔ)體系統(tǒng)的活化補(bǔ)體系統(tǒng)的各組分在體液中通常以非活性狀態(tài)、類似酶原的形式存在，當(dāng)受到一定因素激活，才表現(xiàn)出生物活性。補(bǔ)體的激活途徑主要有兩種，即經(jīng)典途徑和替代途徑，此外尚有MBL（甘露糖結(jié)合凝集素）途徑。經(jīng)典途徑和替代途徑兩種途徑的啟動過程不一致，但經(jīng)典途徑的激活可以導(dǎo)致替代途徑的活化，反之則不行。補(bǔ)體的其他激活途徑即甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑，簡稱MBL途徑。此途徑開始于急性期蛋白與病原體的結(jié)合，而不是抗原復(fù)合物形成。1.經(jīng)典途徑：經(jīng)典途徑是以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑，補(bǔ)體C1C9共11種成分全部參與的激活途徑。除了抗原抗體復(fù)合物外，還有許多因子可激活此途徑，如非特異性凝集的Ig、細(xì)菌脂多糖、一些RNA腫瘤病毒、雙鏈DNA、胰蛋白酶、纖溶酶、尿酸鹽結(jié)晶、C-反應(yīng)蛋白等。經(jīng)典活化途徑可人為地分成識別、活化和膜攻擊3個階段。2.替代途徑：替代途徑又稱旁路途徑。它與經(jīng)典途徑的不同之處主要是越過C1、C4和C2，直接激活補(bǔ)體C3，然后完成C5C9的激活過程；參與此途徑的血清成分尚有B、D、P、H、I等因子。替代途徑的激活物主要是細(xì)胞壁成分，如內(nèi)毒素、某些蛋白水解酶、IgG4、IgA聚合物等。替代途徑是通過研究C4缺陷而仍保持補(bǔ)體系統(tǒng)活化的患者而發(fā)現(xiàn)的。二、補(bǔ)體活化的調(diào)控補(bǔ)體系統(tǒng)被激活后，進(jìn)行系統(tǒng)有序的級聯(lián)反應(yīng)，從而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，參與機(jī)體的防御功能。如果補(bǔ)體系統(tǒng)活化失控，可形成過多的膜攻擊復(fù)合物而產(chǎn)生自身損傷，或過多的炎癥介質(zhì)造成病理效應(yīng)。正常機(jī)體的補(bǔ)體活化處于嚴(yán)密的調(diào)控之下，從而維持機(jī)體的自身穩(wěn)定。1.補(bǔ)體的自身調(diào)控：補(bǔ)體激活過程中生成的某些中間產(chǎn)物非常不穩(wěn)定，成為補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)的重要自限因素。此外只有細(xì)胞表面形成的抗原抗體復(fù)合物才能觸發(fā)經(jīng)典途徑，而旁路途徑的C3轉(zhuǎn)化酶則僅在特定的物質(zhì)表面才具有穩(wěn)定性，故正常機(jī)體內(nèi)一般不會發(fā)生過強(qiáng)的自發(fā)性補(bǔ)體激活反應(yīng)，補(bǔ)體系統(tǒng)自身調(diào)控的作用在于維持機(jī)體自身的穩(wěn)定性；2.調(diào)節(jié)因子的作用：體內(nèi)存在多種可溶性膜結(jié)合的補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子，它們以特定方式與不同的補(bǔ)體成分相互作用，使補(bǔ)體的激活與抑制處于精細(xì)的平衡狀態(tài)，調(diào)節(jié)蛋白的缺失有時是造成某些疾病發(fā)生的原因。目前發(fā)現(xiàn)的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白有十余種，按其作用特點(diǎn)可分為三類：l）防止或限制補(bǔ)體在液相中自發(fā)激活的抑制劑；2）抑制或增強(qiáng)補(bǔ)體對底物正常作用的調(diào)節(jié)劑；3）保護(hù)機(jī)體組織、細(xì)胞免遭補(bǔ)體破壞作用的抑制劑。第三節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)的生物活性 補(bǔ)體是機(jī)體重要的免疫效應(yīng)系統(tǒng)之一。補(bǔ)體系統(tǒng)活化可以溶解細(xì)胞，在活化過程中產(chǎn)生的中間復(fù)合物及某些片段也具有多種多樣的生物活性，所以補(bǔ)體系統(tǒng)對機(jī)體的作用是多方面的，既可參與機(jī)體的防御效應(yīng)和自身穩(wěn)定，亦可引起免疫損傷。1.溶細(xì)胞作用：不論何種途徑活化，補(bǔ)體系統(tǒng)都能對其粘附的細(xì)胞產(chǎn)生溶解作用。補(bǔ)體的溶細(xì)胞反應(yīng)不僅可以抗菌，也可抵抗其他微生物及寄生蟲的感染。另一方面，補(bǔ)體也常常引起病理性反應(yīng)，如異型輸血時的溶血反應(yīng)、自身免疫病時細(xì)胞損傷等；2.免疫復(fù)合物的清除：補(bǔ)體在活化過程中生成的中間產(chǎn)物，對抗原抗體復(fù)合物有很強(qiáng)的親和力，可共價結(jié)合到免疫復(fù)合物上，然后通過補(bǔ)體的其他效應(yīng)對免疫復(fù)合物產(chǎn)生抑制或清除作用。常通過以下幾種方式對免疫復(fù)合物的清除：1）吞噬調(diào)理作用；2）免疫粘附作用；3）免疫復(fù)合物抑制作用；3.炎癥介質(zhì)作用：補(bǔ)體是機(jī)體重要的炎癥介質(zhì)之一，可通過過敏毒素作用、趨化作用、激肽樣作用等多種途徑引起炎癥；4.中和與溶解病毒作用：其機(jī)理可能是阻止病毒對易感細(xì)胞的吸附和穿入，并可能干擾病毒在細(xì)胞中的增殖。第四節(jié)補(bǔ)體的合成與代謝 1.補(bǔ)體編碼基因：補(bǔ)體成分十分復(fù)雜，各編碼基因分散在不同的染色體上，補(bǔ)體成分的許多蛋白質(zhì)分子具有同分異構(gòu)現(xiàn)象，顯示其遺傳多態(tài)性。幾乎所有補(bǔ)體蛋白均為單位點(diǎn)常染色體等顯性遺傳。編碼人C4、C2、B因子的基因在第6對染色體短臂上，與MHC的基因相鄰，命名為類組織相容性基因；與C3、C4反應(yīng)的許多調(diào)節(jié)蛋白的基因被組合在一起，在第一對染色體上形成一個超基因家族，此家族編碼的蛋白有：H因子、C4bp、DRF、CRI、CR2等。2.補(bǔ)體合成的器官及細(xì)胞：盡管一些器官和組織產(chǎn)生不同補(bǔ)體成分，但產(chǎn)生補(bǔ)體的主要器官是肝臟，主要細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。3.補(bǔ)體的代謝平衡：補(bǔ)體成分在血液中可被蛋白酶直接降解，病理情況下補(bǔ)體的代謝速率反映了補(bǔ)體的激活程度，補(bǔ)體活化后的酶解片段迅速失活，并很快從循環(huán)中消除，沉著于細(xì)胞表面及組織中被消耗或分解。如C3在C3轉(zhuǎn)化酶作用下，生成C3a和C3b，C3降解為iC3b，再降解為C3c、C3dg。最后降解為C3d和C3g。第五節(jié)補(bǔ)體總活性測定 （一）實驗原理補(bǔ)體最主要的活性是溶細(xì)胞作用。特異性抗體與紅細(xì)胞結(jié)合后可激活補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分滲入，引起紅細(xì)胞腫脹而發(fā)生溶血。補(bǔ)體溶血程度與補(bǔ)體的活性相關(guān)，但非直線關(guān)系。在一個適當(dāng)?shù)摹⒎€(wěn)定的反應(yīng)系統(tǒng)中，溶血反應(yīng)對補(bǔ)體的劑量依賴呈一特殊的S形曲線。如以溶血百分率為縱坐標(biāo)，相應(yīng)血清量為橫坐標(biāo)，可見在輕微溶血和接近完全溶血處，對補(bǔ)體量的變化不敏感。S形曲線在30%70%之間最陡，幾乎呈直線，補(bǔ)體量的少許變動，也會造成溶血程度的較大改變，即曲線此階段對補(bǔ)體量的變化非常敏感。因此，實驗常以50%溶血作為終點(diǎn)指標(biāo)，它比l00%溶血更為敏感，這一方法稱為補(bǔ)體50%溶血實驗即CH50。（二）檢測試劑綿羊紅細(xì)胞；溶血素；稀釋緩沖液。（三）方法評價CH50試驗是測定經(jīng)典途徑總補(bǔ)體溶血活性，所反映的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。方法簡便、快速，但敏感性較低。補(bǔ)體的溶血活性除與試驗中反應(yīng)體積成反比外，還與反應(yīng)所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、鈣鎂濃度、綿羊紅細(xì)胞數(shù)量和反應(yīng)溫度有一定關(guān)系。緩沖液pH和離子強(qiáng)度增高，補(bǔ)體活性下降，雖可穩(wěn)定溶血系統(tǒng)，但過量則反而抑制溶血反應(yīng)，故實驗時對反應(yīng)的各個環(huán)節(jié)應(yīng)嚴(yán)加控制，統(tǒng)一步驟。（四）臨床意義CH50法檢測是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性，所反映的主要是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。如果測定值過低或者完全無活性，首先考慮補(bǔ)體缺陷，可分別檢測C4、C2、C3和C5等成分的含量；嚴(yán)重肝病時血漿蛋白合成能力受損。營養(yǎng)不良時蛋白合成原料不足，也可以不同程度地引起血清補(bǔ)體水平下降。在患系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病時，血清補(bǔ)體水平隨病情發(fā)生變化。疾病活動期補(bǔ)體活化過度，血清補(bǔ)體水平下降；病情穩(wěn)定后補(bǔ)體水平又反應(yīng)性增高。因此補(bǔ)體檢測?？勺鳛樽陨砻庖卟≡\斷或是否有疾病活動的參考指標(biāo)。細(xì)菌感染特別是革蘭陰性細(xì)菌感染時，常因補(bǔ)體旁路途徑的活化過度引起血清補(bǔ)體水平降低。心肌梗死、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊娠等情況下血清補(bǔ)體水平常升高。 第六節(jié)補(bǔ)體結(jié)合試驗補(bǔ)體結(jié)合試驗是用免疫溶血機(jī)制做指示系統(tǒng)，來檢測另一反應(yīng)系統(tǒng)抗原或抗體的試驗。早在1906年Wasseramann就將其應(yīng)用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應(yīng)。1.補(bǔ)體結(jié)合試驗原理、類型：補(bǔ)體結(jié)合試驗中有5種成分參與反應(yīng)，分屬3個系統(tǒng)：1）反應(yīng)系統(tǒng)；2）補(bǔ)體系統(tǒng)；3）指示系統(tǒng)。其中反應(yīng)系統(tǒng)（抗原與抗體）與指示系統(tǒng)（綿羊紅細(xì)胞與溶血素）爭奪補(bǔ)體系統(tǒng)。如先加入反應(yīng)系統(tǒng)和補(bǔ)體，給其以優(yōu)先結(jié)合補(bǔ)體的機(jī)會，如果反應(yīng)系統(tǒng)中存在待測的抗體（或抗原），則抗原、抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補(bǔ)體，再加入指示系統(tǒng)（SRBL與相應(yīng)溶血素），由于反應(yīng)中無游離的補(bǔ)體而不出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗陽性。如待測系統(tǒng)中不存在待檢的抗體或（抗原），則在液體中仍有游離的補(bǔ)體存在，當(dāng)加入指示劑時會出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗陰性。因此補(bǔ)體結(jié)合試驗可用已知抗原來檢測相應(yīng)抗體，或用已知抗體來檢測相應(yīng)抗原。2.補(bǔ)體結(jié)合試驗的臨床應(yīng)用：補(bǔ)體結(jié)合試驗可應(yīng)用在以下幾個方面：1）傳染病診斷，病原性抗原及相應(yīng)抗體的檢測；2）其他抗原的檢測，如腫瘤相關(guān)抗原、血液中的蛋白質(zhì)鑒定，HLA分型等；3）自身抗體的檢測等。補(bǔ)體結(jié)合試驗的優(yōu)點(diǎn)為靈敏度高、特異性強(qiáng)、應(yīng)用面廣、易于普及。缺點(diǎn)為試驗參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁瑣并且要求十分嚴(yán)格，容易出現(xiàn)錯誤。第七節(jié)單個補(bǔ)體成分測定在30多種補(bǔ)體成分中，主要檢測C3、C4、Clq、B因子和Cl酯鎂抑制物。測定方法分為免疫溶血法及免疫化學(xué)法。1.免疫溶血法溶血法主要根據(jù)抗原與其特異性抗體（IgG、IgM型）結(jié)合后可激活補(bǔ)體的經(jīng)典途徑，導(dǎo)致細(xì)胞溶解。該方法中抗原為SRBC，抗體為兔或馬抗SRBC的抗體，即溶血素。將兩者組合作為指示系統(tǒng)參與反應(yīng)。試驗中有兩組補(bǔ)體參與，一組是作為實驗反應(yīng)系統(tǒng)的補(bǔ)體，此類試劑可選用先天缺乏某單一補(bǔ)體成分的動物或人血清，如某些人可天然缺乏C2、豚鼠缺C5、家兔缺C6；也可利用化學(xué)試劑人為滅活正常血清中某種成分制備缺乏該成分的補(bǔ)體試劑，加入致敏SRBC（檢測經(jīng)典途徑補(bǔ)體成分用）或總紅細(xì)胞RRBC（檢測替代途徑補(bǔ)體成分用）指示系統(tǒng)后，此時由于補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)體系中缺乏某種補(bǔ)體成分，不能使補(bǔ)體連續(xù)激活，不發(fā)生溶血。另一組為待測血清中的補(bǔ)體，當(dāng)加入待測血清，使原來缺乏的成分得到補(bǔ)充，補(bǔ)體成分齊全，級聯(lián)反應(yīng)恢復(fù)，產(chǎn)生溶血。溶血程度與待測補(bǔ)體成分活性有關(guān)，仍以50%溶血為終點(diǎn)。免疫溶血法無須特異儀器與設(shè)備，快速，但敏感性較低，影響因素多。該法不是檢測某補(bǔ)體成分的具體含量，而是檢測其活性，在某些需了解該成分活性情況下，本試驗適用。2.免疫化學(xué)法免疫化學(xué)法分為單向免疫擴(kuò)散法、火箭免疫電泳、透射比濁法和散射比濁法。前兩種方法已逐漸趨于淘汰，后兩種方法通過儀器對補(bǔ)體的C3、C4、B因子等單個成分進(jìn)行測定。待測血清標(biāo)本的C3、C4成分適當(dāng)稀釋后與檢測用相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，反應(yīng)介質(zhì)中的PEG可使該復(fù)合物沉淀，儀器對復(fù)合物產(chǎn)生的光散射或透射信號進(jìn)行自動檢測，并換算成所測成分的濃度單位。自動免疫化學(xué)法檢測補(bǔ)體成分方法簡單、特異、重復(fù)性好，可反映所測補(bǔ)體成分的絕對值，并能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化流程管理和質(zhì)控，是當(dāng)前主要檢測方法。第八節(jié)補(bǔ)體測定的應(yīng)用檢測補(bǔ)體的單個成分及補(bǔ)體的活性對于機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能評價，疾病的診斷與治療，流行病學(xué)調(diào)查等均有重要作用。同時根據(jù)補(bǔ)體具有的溶細(xì)胞活性和聯(lián)級反應(yīng)的性質(zhì)，可利用補(bǔ)體作為一種試劑，參與很多實驗反應(yīng)，補(bǔ)體檢測技術(shù)可應(yīng)用于下述情況。1.診斷病原體感染，如華氏反應(yīng)（已淘汰）診斷梅毒螺旋體感染。2.檢測補(bǔ)體的功能，如CH50和AH50試驗。3.補(bǔ)體單個成分及其裂解產(chǎn)物的測定，如Clq、C3、CA、C3a和補(bǔ)體受體的測定等。4.相關(guān)疾病時補(bǔ)體的檢測（1）免疫性疾?。喝缱陨砻庖卟rCl、C2、C3、