抗球蟲藥耐藥性 與新抗球蟲藥開發(fā)應(yīng)用

抗球蟲藥耐藥性與新抗球蟲藥開發(fā)應(yīng)用 喬彥良 博士 技術(shù)總監(jiān) 山東信得科技股份有限公司 雞球蟲病 由艾美耳屬 Eimeria 的多種單細(xì)胞寄生蟲引起的嚴(yán)重危害雞生長發(fā)育的一種疾病 發(fā)病率50 70 死亡率20 30 嚴(yán)重時(shí)高達(dá)80 在各種雞病中 球蟲病發(fā)生率最高 占1 6 1 5 全世界每年因球蟲病造成的經(jīng)濟(jì)損失多達(dá)20億美元 抗球蟲藥的年消費(fèi)為3 2億美元 抗球蟲藥對(duì)于減輕雞球蟲病的危害起到了極大的作用 但球蟲幾乎對(duì)所有使用過的抗球蟲藥物都有耐藥蟲株出現(xiàn) 球蟲耐藥性的產(chǎn)生 導(dǎo)致抗球蟲藥使用年限縮短 防治失敗或效果不佳 引起臨床或亞臨床雞球蟲病 造成很大的經(jīng)濟(jì)損失 雞球蟲耐藥性 1939年之前 尚無治療球蟲病的有效藥物 不存在耐藥性問題1939年Levine發(fā)現(xiàn)磺胺類藥物對(duì)雞球蟲病有效以來 化學(xué)療法才成為防治球蟲病的主要手段 由于當(dāng)時(shí)未意識(shí)到耐藥蟲株的出現(xiàn) 故曾認(rèn)為球蟲與細(xì)菌不同 是不易產(chǎn)生耐藥性的生物 1945年在美國從野外分離出懷疑有耐藥性的蟲株 1954年又從野外分離出對(duì)包括磺胺類在內(nèi)的數(shù)種藥物有明顯耐藥性的蟲株 60年代 對(duì)多種藥物有耐藥性的蟲株開始出現(xiàn) 即使對(duì)新藥 在1 2年內(nèi)就可獲得耐藥性 70年代開始 新藥的開發(fā)速度已開始趕不上耐藥蟲株出現(xiàn)的速度 1963年 世界衛(wèi)生組織的專門委員會(huì)定義耐藥性為 寄生蟲蟲株在使用使同種寄生蟲殺滅或抑制其繁殖的藥物濃度下仍有繁殖的能力 抗球蟲藥分類 1干擾蟲體生物膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物離子載體類抗生素是目前應(yīng)用最廣泛的抗球蟲藥 如莫能菌素 鹽霉素 拉沙里菌素 馬杜拉霉素 海南霉素等 離子載體類抗生素能穿過細(xì)胞膜 影響離子轉(zhuǎn)運(yùn) 這些藥物在子孢子或裂殖子等穿入宿主細(xì)胞之前被吸收 可與Na K Ca2 Mg2 等在蟲體內(nèi)起重要作用的陽離子結(jié)合形成脂溶性絡(luò)合物 協(xié)助陽離子進(jìn)入蟲體內(nèi) 導(dǎo)致生物膜兩邊的Na K Ca2 Mg2 等陽離子梯度變化 破壞細(xì)胞內(nèi)外的正常離子平衡 使細(xì)胞內(nèi)外形成滲透壓差 大量水分進(jìn)入 使蟲體細(xì)胞破裂死亡 抗球蟲藥分類 2 影響輔酶吸收和合成的藥物磺胺類是第一個(gè)被廣泛用于防治球蟲病的藥物 磺胺類通過阻斷葉酸合成途徑阻止球蟲的正常發(fā)育 磺胺類藥物的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)與對(duì)氨基苯甲酸相似 可與氨基苯甲酸競(jìng)爭二氫葉酸合成酶 同時(shí)還可抑制二氫葉酸合成酶的活性 妨礙二氫葉酸的合成 最終影響核蛋白的合成 從而抑制了球蟲細(xì)胞的生長發(fā)育 具有相似機(jī)制的藥物還有 乙氧酰胺苯甲酯 乙胺嘧啶 二甲氧甲基芐胺嘧啶 OMP 三甲氧芐胺嘧啶 TMP 等 氨丙啉的化學(xué)結(jié)構(gòu)與硫胺素 VB1 相似 是硫胺的拮抗劑 其抗球蟲作用可能是競(jìng)爭性的抑制蟲體硫胺攝取而導(dǎo)致硫胺缺乏 妨礙蟲體內(nèi)的糖代謝過程 從而抑制了球蟲的發(fā)育 雙間硝苯二硫 Ni trophenide 主要抑制甘露醇 1 磷酸脫氫酶的活性 妨礙甘露醇循環(huán) 從而阻斷卵囊孢子化過程中的能量來源而起到抑制球蟲的作用 抗球蟲藥分類 3抑制蟲體線粒體功能的藥物喹諾啉類通過阻斷蟲體線粒體的電子轉(zhuǎn)運(yùn) 抑制柔嫩艾美耳球蟲的呼吸作用 使球蟲不能正常發(fā)育 實(shí)驗(yàn)表明 喹諾啉類在電子轉(zhuǎn)動(dòng)鏈中的作用位點(diǎn)位于輔酶Q與細(xì)胞色素b之間 氯羥吡啶也影響球蟲電子轉(zhuǎn)運(yùn)過程 但與喹諾啉類的作用機(jī)制不同 這可能是作用位點(diǎn)不同所致 球蟲線粒體的電子轉(zhuǎn)運(yùn)存在兩種不同終端氧化酶的生化途徑 一條途徑對(duì)低濃度的癸氧喹酯敏感 其可能存在一對(duì)癸氧喹酯具有高親和力的位點(diǎn) 另一條生化途徑終止于細(xì)胞色素氧化酶 氯羥吡啶可能作用于這條生化途徑 抗球蟲藥分類 4 作用于蟲體類質(zhì)體的藥物地克珠利和妥曲珠利可在不對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生影響的藥物濃度下 使蟲體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張并空泡化 它們還可抑制球蟲磷酸合成中心PS 的重要組成成分D1蛋白質(zhì)的功能 D1蛋白質(zhì)與低氧狀態(tài)的電子傳遞有關(guān) 有可能提供蟲體氧自由基 使其更容易侵入宿主細(xì)胞 抗球蟲藥分類 5 抑制核酸合成的藥物核苷類似物 如氟腺嘌呤等嘌呤類抗球蟲藥 主要影響蟲體對(duì)嘌呤核嘧啶的利用 最終使核酸合成減少 使蟲體的生長繁殖受阻 磺胺類藥物可通過抑制嘌呤和嘧啶的合成 使核酸合成障礙而發(fā)揮抗球蟲作用 耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制 細(xì)胞 亞細(xì)胞水平 球蟲受到抗球蟲藥的作用 其內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生一系列變化 線粒體發(fā)生膜性漩渦或形成髓鞘樣結(jié)構(gòu) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 高爾基體含水量增加 細(xì)胞膜及核膜模糊或破損 而在同樣的藥物濃度下 耐藥蟲株因蟲細(xì)胞膜和細(xì)胞器已發(fā)生結(jié)構(gòu)或功能的改變 能夠全部或部分抵御藥物對(duì)其造成的損傷 不能造成死亡而生存下來 耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制 代謝水平 在藥物長期作用下 球蟲改變了代謝途徑 用其它的代謝方式代替原來的代謝方式 避開了抗球蟲藥的作用位點(diǎn) 球蟲通過代謝變化 降解或破壞藥物的分子結(jié)構(gòu)或功能基團(tuán) 從而使藥物失去作用 球蟲通過代謝途徑變化對(duì)其本身進(jìn)行修飾加工 并且調(diào)動(dòng)自我防御機(jī)制 延緩或抑制藥物侵入其內(nèi)部 從而使藥物失去其應(yīng)有的活性 耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制 分子水平 細(xì)胞的遺傳物質(zhì)是DNA DNA復(fù)制時(shí) 由于某種原因造成個(gè)別堿基配對(duì)不準(zhǔn) 發(fā)生基因突變 導(dǎo)致遺傳信息的微弱改變 當(dāng)突變發(fā)生在處于新的不利于生物生存或繁殖的環(huán)境中時(shí) 就有助于生物體對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)球蟲在抗球蟲藥物存在條件下 有些突變個(gè)體反而對(duì)球蟲生存和繁殖有利 而沒有突變的個(gè)體則會(huì)被抑制或殺滅 經(jīng)過多次這樣的過程 就產(chǎn)生了對(duì)球蟲藥的耐藥性 耐藥性的特點(diǎn) 耐受高濃度抗球蟲藥 對(duì)絕大多數(shù)抗球蟲藥來說 在防治雞球蟲病時(shí) 球蟲一旦對(duì)某種藥物產(chǎn)生了耐藥性 它便可耐受其連續(xù)使用濃度的4 8倍 甚至更高的濃度 此時(shí)再提高藥物濃度 它又可耐受此濃度的4 8倍甚至更高的濃度 而實(shí)際生產(chǎn)上這一濃度足以對(duì)雞群本身造成毒害作用 喹啉類藥物曾為防治雞球蟲病的優(yōu)良藥物 任何一種喹啉類化合物以40mg kg劑量連續(xù)使用 可完全抑制球蟲的增殖 然而獲得耐藥性后 即使是用1000mg kg以上的劑量也完全無效 甘德培等在獲得了對(duì)氯嗪苯乙氰的有效濃度 0 125mg kg 的耐藥蟲株后 很容易就誘導(dǎo)了高出該濃度10倍量濃度的抗藥蟲株 耐藥性的特點(diǎn) 具有多重耐藥性 雞球蟲具有對(duì)兩種或兩種以上化學(xué)性質(zhì)各異 作用方式不同的抗球蟲藥同時(shí)或先后產(chǎn)生耐藥性的能力 這種多重耐藥性不僅可在實(shí)驗(yàn)室通過耐不同單一藥物的蟲株之間進(jìn)行雜交獲得 而且從田間分離的蟲株也同時(shí)具有對(duì)2 4種藥物的耐受性 報(bào)道過對(duì)氨丙啉 氯羥吡啶 癸氧喹酯 尼卡巴嗪耐受的蟲株 報(bào)道過一株柔嫩艾美耳球蟲對(duì)氨丙啉輕度抗藥 對(duì)氯羥吡啶中度抗藥 對(duì)馬杜拉霉素和氯苯胍中度或完全抗藥 在河北秦皇島地區(qū)分離的6種艾美耳球蟲對(duì)馬杜拉霉素和鹽霉素輕度抗藥 對(duì)拉沙里菌素和氨丙啉中度抗藥 對(duì)球痢靈和常山酮重度抗藥 耐藥性的特點(diǎn) 具有交叉耐藥性 雞球蟲的交叉耐藥性主要表現(xiàn)在 當(dāng)球蟲對(duì)某種抗球蟲藥物產(chǎn)生耐藥性的同時(shí) 也會(huì)對(duì)從來未接觸過的同類藥物產(chǎn)生耐藥性 這種耐藥性往往出現(xiàn)于化學(xué)結(jié)構(gòu)相似 作用機(jī)理相近的藥物之間 報(bào)道過對(duì)單價(jià)離子載體抗球蟲藥失去敏感性的蟲株 對(duì)除馬杜拉霉素外的其他單價(jià)離子載體類抗球蟲藥也耐受 而對(duì)二價(jià)的拉沙里菌素敏感 證實(shí)作用機(jī)理不同的化學(xué)藥物地克珠利和妥曲珠利之間無交叉耐藥性 耐藥性的特點(diǎn) 具有遺傳性和相對(duì)穩(wěn)定性 耐藥性的產(chǎn)生是球蟲群體中突變個(gè)體多次重復(fù)選擇的結(jié)果 球蟲在其生活周期的后期進(jìn)行有性生殖 形成卵囊 耐藥性也世代相傳 耐藥性的檢測(cè)方法 1雞體實(shí)驗(yàn)法將供試藥物按一定的比例與飼料均勻混合后飼喂幼雛 經(jīng)過一定時(shí)間后接種球蟲 通過某些指標(biāo)或標(biāo)準(zhǔn)來判斷球蟲的耐藥性 目前采用的判定標(biāo)準(zhǔn)有卵囊產(chǎn)量 病變計(jì)分 相對(duì)增重率 最適抗球蟲活性百分率 糞便計(jì)分 抗球蟲指數(shù)等 2同工酶分析測(cè)定法利用測(cè)定耐藥蟲株與敏感蟲株同工酶譜間的差異或測(cè)定耐藥蟲株與標(biāo)準(zhǔn)耐藥蟲株同工酶譜的相似性來進(jìn)行判定 這種方法首先是確定某種藥物耐藥蟲株的特異性同工酶譜 再將現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定的蟲株的同工酶譜與之比較 根據(jù)其差異是否顯著來判定球蟲對(duì)藥物敏感與否 3超微結(jié)構(gòu)比較法產(chǎn)生耐藥性的蟲株 能成功躲避藥物的作用 其超微結(jié)構(gòu)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的變化 以避開藥物作用的位點(diǎn) 在電鏡下觀察柔嫩艾美耳球蟲對(duì)馬杜拉霉素的敏感株與耐藥株的超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)敏感株在藥物作用下132棒狀體消失 微線體的數(shù)量減少或消失 耐藥株無異常反應(yīng) 對(duì)莫能菌素產(chǎn)生耐藥性的柔嫩艾美耳球蟲的子孢子可表達(dá)分子量分別為50KDa和31 4KDa兩種蛋白質(zhì) 而對(duì)莫能菌素敏感的柔嫩艾美耳球蟲的子孢子不表達(dá)這兩種蛋白質(zhì) 耐藥性的檢測(cè)方法 耐藥性的檢測(cè)方法 4RAPD測(cè)定法以PCR為基礎(chǔ)的基因分析方法 稱之為隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA RAPD 該方法用單一或多個(gè)隨機(jī)核苷酸序列作為引物 對(duì)基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增 避免了PCR特異性引物設(shè)計(jì)上的困難 尤其在對(duì)未知樣本的鑒定方面 顯示了其獨(dú)特的特點(diǎn) 作為一項(xiàng)新的技術(shù)和工具 可用于球蟲種的分子診斷 基因圖譜以及遺傳多樣性等的研究 5細(xì)胞和雞胚培養(yǎng)法雞球蟲的體外細(xì)胞培養(yǎng)和雞胚培養(yǎng)技術(shù)用于球蟲耐藥性的研究 利用細(xì)胞模型和雞胚模型測(cè)定藥物對(duì)球蟲的最小抑制濃度 MIC 和藥物對(duì)雞胚的最小毒性濃度 MTC 以觀察球蟲的抗藥性 從而篩選藥物 耐藥性的獲得 對(duì)具有預(yù)防或治療效果的藥物 采用一定方法 經(jīng)過傳代球蟲 實(shí)驗(yàn)性地使球蟲獲得耐藥性 根據(jù)耐藥性產(chǎn)生的時(shí)間和強(qiáng)度等 預(yù)測(cè)該藥物在野外有效使用的期限 這種方法稱為耐藥性的獲得 耐藥性的獲得方法一種是Weppelman法 在推薦使用藥物濃度下大劑量感染球蟲卵囊的方法 一種是藥物濃度遞增法 以低于使用推薦劑量的藥物濃度開始誘導(dǎo) 逐步提高濃度 多次繼代后獲得抗藥性蟲株 耐藥性獲得的應(yīng)用 盡管目前在實(shí)驗(yàn)室條件下獲得抗藥性蟲株與現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際中抗藥性蟲株的產(chǎn)生存在差異 但二者之間有一定的關(guān)系 且目前仍未有標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方法用于預(yù)測(cè)新型抗球蟲藥抗藥性蟲株出現(xiàn)的速度 可通過實(shí)驗(yàn)室中某藥物耐藥性的獲得 來判斷該藥物的耐藥性產(chǎn)生的可能性及其在生產(chǎn)中多久會(huì)產(chǎn)生耐藥性 可用于耐藥性產(chǎn)生機(jī)制的研究 為進(jìn)一步在分子水平研究球蟲耐藥性提供材料 以便建立耐藥蟲株的基因圖譜和特異性同工酶譜 作為藥物交叉耐藥性的檢測(cè)手段之一 要證明兩藥物之間是否存在交叉耐藥性的最好辦法是分離一種艾美耳球蟲蟲株 鑒定它對(duì)兩種受試藥物均表現(xiàn)敏感 然后在嚴(yán)密條件下誘導(dǎo) 使它對(duì)其中一種藥物產(chǎn)生耐藥性 再檢測(cè)獲得耐藥性的株對(duì)另一種藥物是否也同時(shí)產(chǎn)生了耐藥性 如果也產(chǎn)生了耐藥性則說明對(duì)兩藥具有交叉耐藥性 藥物敏感性的恢復(fù) 就某一耐藥性蟲株而言 其耐藥性是相對(duì)穩(wěn)定的 但對(duì)球蟲群而言 其對(duì)某一藥物的敏感性是可以恢復(fù)的 在一個(gè)球蟲群中 在5年或更長時(shí)間內(nèi)不接觸有關(guān)藥物的情況下 耐藥性是可以消失的 在耐藥性蟲株中引入大量的藥物敏感株 在沒有藥物作用下 耐藥性可以消除 原因是不用藥的情況下 敏感株占優(yōu)勢(shì)地位 耐藥性的延緩或解決措施 合理用藥 到目前為止 用于抗球蟲的藥物多達(dá)50余種 根據(jù)各藥特點(diǎn)以及田間耐藥性產(chǎn)生情況 合理應(yīng)用這些抗球蟲藥物 可延緩耐藥性的產(chǎn)生 延長藥物的使用年限 聯(lián)合用藥 在同一個(gè)飼養(yǎng)期內(nèi)并用兩種或兩種以上抗球蟲藥 通過藥物間的協(xié)同作用 即可延緩耐藥蟲株產(chǎn)生 增強(qiáng)藥效 又可擴(kuò)大抗球蟲譜 克球粉 莫能菌素 地克珠利 氨丙啉 氯苯胍 呋喃唑酮聯(lián)合使用 其效果強(qiáng)于每藥單獨(dú)使用 穿梭用藥 在同一飼養(yǎng)期內(nèi) 換用兩種或三種性質(zhì)不同的抗球蟲藥 具體實(shí)施時(shí) 要在球蟲病高發(fā)階段使用高效抗球蟲藥 低發(fā)階段使用低效抗球蟲藥 為了避免蟲株對(duì)所用的藥物同時(shí)產(chǎn)生耐藥性 雞場(chǎng)應(yīng)有計(jì)劃地更換穿梭用藥方案 輪換用藥 季節(jié)性地或定期變換用藥 每隔3個(gè)月或半年改換一種抗球蟲藥 目的是避免耐藥性蟲株出現(xiàn) 但不要改用作用機(jī)理和作用峰期相同的藥物 以免產(chǎn)生交叉耐藥性或變換用藥后效果不明顯 耐藥性的延緩或解決措施 2新藥研制隨著生物化學(xué) 細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等技術(shù)的發(fā)展 對(duì)藥物和球蟲的研究取得較大的進(jìn)展 藥物作用機(jī)制和球蟲耐藥機(jī)制的闡明 為新藥的開發(fā)提供了思路 Allcocco等研究了雙間硝基苯二硫 Nitrophenide 的作用機(jī)制 指出可研制新藥作用于球蟲的甘露醇循環(huán)來控制球蟲病 球蟲的生物學(xué)特征以及蟲體內(nèi)酶功能的研究也為球蟲病的防治找到了新的方法 Williams認(rèn)為艾美耳屬球蟲的三種酶可能成為化學(xué)治療的靶點(diǎn) 尤其是羥丁酸脫氫酶的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了脂肪酸的抗球蟲活性 耐藥性的延緩或解決措施 營養(yǎng)添加劑的抗球蟲作用許多學(xué)者嘗試著從飼料添加劑入手來防治球蟲病 以解決耐藥性問題 Kettunen 2001 認(rèn)為甜菜堿能保護(hù)腸絨毛以抗球蟲的感染或損害 Giannenas 2003 報(bào)道了牛至油有較好的抗柔嫩艾美耳球蟲的作用 中草藥的開發(fā)中草藥以其長時(shí)間應(yīng)用不易產(chǎn)生耐藥性 毒副作用小 并有促進(jìn)生長等優(yōu)點(diǎn) 已成為解決球蟲耐藥性的一大突破口 繆德年 2002 等實(shí)驗(yàn)了青蒿 苦參 大黃 地榆等中藥配成的復(fù)方制劑與馬杜拉霉素 地克珠利等化學(xué)藥物配合時(shí)的抗球蟲效果 得出中西藥配合應(yīng)用即可提高中藥復(fù)方的藥效 又能降低西藥劑量 馬春全 1999 認(rèn)為階段性的應(yīng)用中藥和西藥是治療雞球蟲病的有效方法 并可促進(jìn)肉雞生長 新型抗球蟲原料藥物癸氧喹酯介紹 山東信得科技股份有限公司生產(chǎn) 一 介紹 英文名稱 Decoquinate化學(xué)名稱 癸氧喹酯 6 癸氧基 7 乙氧基 4 羥基喹啉 3 羧酸乙酯結(jié)構(gòu)式 分子式 C24H35NO5分子量 417 55 性狀 淺褐色或類白色結(jié)晶粉末 無臭 易溶于乙醇 不溶于水 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 熔點(diǎn)242 246 純度 98 溶液澄清度無色澄清灼燒殘?jiān)?0 1 重金屬 以Pb計(jì) 0 001 砷 以As計(jì) 0 0002 氯化物 以Cl計(jì) 0 01 乙氧亞甲基 0 01 銨鹽 以NH4計(jì) 0 02 二 藥理作用 1 作用機(jī)制癸氧喹酯在球蟲的無性繁殖階段發(fā)揮作用 癸氧喹酯進(jìn)入子孢子細(xì)胞后 通過干擾DNA合成而阻止其發(fā)育 2 該藥物的活性高峰期是球蟲子孢子期 周期第1天 在接觸球蟲第一天開始飼喂加藥飼料才能獲得最大效果 避免家禽腸道受到損害 由于抗球蟲作用明顯 多推薦用于肉用仔雞 該藥吸收量少 毒性低 組織殘留少 肉用仔雞飼料中可全期添加 用于預(yù)防球蟲病 作用特點(diǎn) 3 藥代動(dòng)力學(xué) 癸氧喹酯吸收快 在1小時(shí)內(nèi)即可達(dá)到抗球蟲的有效濃度 3天后濃度達(dá)到高峰水平 在牛 羊分別給予末標(biāo)記的癸氧喹酯5天和7天后 用14C標(biāo)記的癸氧喹酯單劑量給牛 羊靜注 1 5小時(shí)后血漿中放射物達(dá)到峰值 癸氧喹酯在大鼠體內(nèi)有部分代謝 產(chǎn)生3種代謝產(chǎn)物 不能測(cè)定出其結(jié)構(gòu) 在反芻動(dòng)物體內(nèi) 僅確定有兩種代謝產(chǎn)物 而且所占比例比大鼠的低 反芻動(dòng)物的主要排泄途徑為糞 其次為尿 在綿羊 尿中排泄出總劑量的36 有35 在24小時(shí)內(nèi)排出 在3天內(nèi)尿中癸氧喹酯及代謝產(chǎn)物完全排出 三 臨床試驗(yàn) 1 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院索勛等研究人員用癸氧喹酯 6 預(yù)混劑 40mg kg 30mg kg 20mg kg飼料混飼經(jīng)柔嫩艾美耳球蟲蒙頓株人工接種的AA肉仔雞 并與馬杜霉素進(jìn)行比較觀察結(jié)果表明 癸氧喹酯抗球蟲指數(shù)大于180 屬于高效藥物 在各劑量癸氧喹酯組雞的糞便和盲腸中均沒有檢查到球蟲卵囊 說明沒有耐癸氧喹酯的突變蟲株 三 臨床試驗(yàn) 2 山東信得科技委托青島農(nóng)業(yè)大學(xué)鄒明博士進(jìn)行臨床試驗(yàn) 三 臨床試驗(yàn) 3 韓森等 2007 選擇目前生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛的抗球蟲藥物馬度米星銨 尼卡巴嗪 乙氧酰胺苯甲酯和甲基鹽霉素與癸氧喹酯對(duì)比 檢測(cè)在人工感染條件下幾種藥物的抗球蟲效果 并對(duì)4種抗球蟲藥物進(jìn)行比較 以抗球蟲指數(shù) ACI 作為藥物治療效果的綜合評(píng)定指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)果綜合抗球蟲指數(shù)依次為癸氧喹酯組194 53 尼卡巴嗪 乙氧酰胺苯甲酯組189 87 甲基鹽霉素組165 42 馬度米星銨組190 15 在糞檢時(shí)鹽霉素組可看到卵囊 尼卡巴嗪 乙氧酰胺苯甲酯組和馬度米星銨組僅見極少的卵囊 癸氧喹酯組與健康組未見卵囊 糞便計(jì)分以鹽霉素組最高 馬度米星銨組和尼卡巴嗪乙氧酰胺苯甲酯組次之 癸氧喹酯組最低 根據(jù)抗球蟲效力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) ACI 160 抗球蟲效力低 160 ACI 180 抗球蟲效力中等 180 ACI 抗球蟲效力高 試驗(yàn)結(jié)果顯示 癸氧喹酯抗球蟲指數(shù) ACI 大于190 屬于高效抗球蟲藥物 且與同樣屬于高效抗球蟲藥物的馬度米星銨相比 具有無可比擬的安全性 四 癸氧喹酯使用狀況 20世紀(jì)70年代以來 癸氧喹酯就已經(jīng)在許多國家廣泛用于禽的球蟲病的防治 但一直沒有在中國使用 2006年美國雅來公司在中國首先上市銷售癸氧喹酯以來 引起了人們高度重視和廣泛關(guān)注 原因如下 1 首次在中國使用 無抗藥性 是最理想的輪換用藥 殺滅球蟲 促進(jìn)生長 改善著色 具有優(yōu)異的抗球蟲效果和促生長表現(xiàn) 2 在球蟲生活史的早期開始發(fā)揮作用 且持續(xù)作用時(shí)間最長 3 抗球蟲譜廣 對(duì)危害最大的6種禽球蟲都有良好的效果 4 穩(wěn)定性好 在適宜的溫度和濕度條件下 癸氧喹酯可在4年內(nèi)保持品質(zhì)穩(wěn)定 美國藥典已經(jīng)收錄了1 10 癸氧喹酯預(yù)混劑 目前在我國已有包括山東信得科技股份有限公司等廠家在生產(chǎn)癸氧喹酯原料藥 國內(nèi)市場(chǎng)上常用的制劑為6 癸氧喹酯預(yù)混劑 混飼 每噸飼料中添加27 2g 以癸氧喹酯計(jì) 尚有癸氧喹酯可溶性粉 混飲 每噸飲水中添加13 6g 以癸氧喹酯計(jì) 一般連用7 14天 癸氧喹酯聯(lián)合用藥方案 為了提高抗球蟲效果 減少抗藥性的產(chǎn)生 可以采取聯(lián)合用藥 在球蟲病早期 無性繁殖期 采用癸氧喹酯 地克珠利或妥曲珠利 癸氧喹酯 馬度米星 癸氧喹酯 氯羥吡啶等聯(lián)合用藥可以發(fā)揮藥物協(xié)同作用 增強(qiáng)殺滅效果 同時(shí)可使每種藥物使用劑量減少1 2 在球蟲病全期 可采用癸氧喹酯 磺胺喹噁啉鈉 癸氧喹酯 磺胺氯吡嗪鈉等聯(lián)合用藥方案 使無性繁殖期和有性繁殖期的球蟲均可同時(shí)得到抑制和殺滅 五 使用說明 適應(yīng)癥 用于預(yù)防由各種球蟲 變位 柔嫩 巨型 堆型 毒害和布氏等 引起的雞球蟲病 用法與用量 美國 日本 歐盟均批準(zhǔn)使用 混飼每1000kg飼料雞20 40g 以癸氧喹酯計(jì) 連用7 14天 不良反應(yīng) 無 配伍 與目前中國允許使用的獸藥飼料添加劑無任何配伍禁忌 注意事項(xiàng) 產(chǎn)蛋雞禁用 不能用于含皂土的飼料中 停藥期 5日貯存 陰涼 干燥處密封保存有效期 三年 小結(jié) 癸氧喹酯是全球唯一被日本 歐盟 美國 中國政府批準(zhǔn)使用的化學(xué)型抗球蟲藥 與目前中國允許使用的獸藥飼料添加劑無任何配伍禁忌 毒性低 耐受性好 使用推薦量的80倍仍安全 代謝快 停藥3天后 各組織中殘留藥物濃度低于1 10 6 綜上所述 癸氧喹酯作為一種新型低毒廣譜抗球蟲藥物 具有廣闊的市場(chǎng)前景 新型抗球蟲原料與制劑藥物海南霉素介紹 山東信得科技股份有限公司國內(nèi)外總代理 一 海南霉素概述 中國科學(xué)院上海藥物研究所于1960年開始先后從我國土壤中分離到C 1329 W 341和AC 705三株相似鏈霉素菌 從其代謝產(chǎn)物中 發(fā)現(xiàn)一種生物活性物質(zhì)對(duì)球蟲有很強(qiáng)的作用 隨后進(jìn)行了多方面研究 證明該活性物質(zhì)是一種新的多醚類天然活性化合物 命名為 海南霉素 其化學(xué)結(jié)構(gòu)雖與美國1986年申請(qǐng)的專利LL C232016抗生素相同 但未見開發(fā)和應(yīng)用報(bào)導(dǎo) 我國對(duì)此進(jìn)行長期深入研究開發(fā) 取得成功 于1993年獲一類新獸藥證書 93年新獸藥證字第02號(hào) 獲高新技術(shù)產(chǎn)品博覽會(huì)金獎(jiǎng) 是我國唯一的原創(chuàng)性抗球蟲藥 也是國內(nèi)外離子載體類抗球蟲新藥 二 介紹 分子式 C47H80O15 H2O 分子量 884 性狀 本品為白色或類白色粉末 無臭 無味 在甲醇 乙醇或氯仿中極易溶解 在丙酮 醋酸 乙酯或苯中易溶 在助劑石油醚中極微溶解 水中不溶 抗菌譜 對(duì)革蘭氏陽性菌有廣泛的抗菌譜 對(duì)厭氧菌等真菌有抗菌作用 對(duì)革蘭氏陰性菌不顯活性 三 海南霉素對(duì)球蟲的作用機(jī)理 海南霉素鈉 FCD 98 是一種一元羧酸離子裁體類抗球蟲藥 其分子以環(huán)狀結(jié)構(gòu)象存在 在溶液狀態(tài)下分子二個(gè)末端 羧酸梭基與叔基 形成H鍵 眾多氧原子集中于中心位置 形成一個(gè)離子撲獲陷阱 Iontrapping 當(dāng)進(jìn)入球蟲細(xì)胞 干涉細(xì)胞膜內(nèi)K 及Na 離子之正常運(yùn)轉(zhuǎn) 使大量的K 及Na 進(jìn)入細(xì)胞 隨后為平衡滲透壓 大量的水分進(jìn)入球蟲細(xì)胞 引起腫脹 為了排除細(xì)胞內(nèi)多余的K 及Na 球蟲細(xì)胞耗盡了能量 仍無法排除 最后使球蟲細(xì)胞因耗盡能量且過度腫脹死亡 因其獨(dú)特的殺球蟲機(jī)理 與一般化學(xué)合成類抗球蟲藥不同 較難產(chǎn)生抗藥性 海南霉素抗球蟲作用過程 海南霉素可完全阻斷柔嫩 毒害 堆型 布氏 巨型 和緩 早熟艾美耳等七種球蟲的生命周期 可以有效的預(yù)防和治療各種艾美耳球蟲引起的單獨(dú)和混合感染 在球蟲的生活周期 海南霉素有三個(gè)殺死球蟲的階段 子孢子階段 第一世代裂殖子及第二世代裂殖子 海南霉素殺死球蟲的主要時(shí)期是子孢子階段 在球蟲未侵入雞腸上皮細(xì)胞之前將其殺死 因而可以最大限度的避免球蟲對(duì)雞的生產(chǎn)造成損失 少數(shù) 漏網(wǎng) 未被殺死的子孢子 繼續(xù)發(fā)育 海南霉素仍能在第一世代裂殖子及第二世代裂殖子時(shí)發(fā)揮作用 將其殺死 使排出體外的球蟲卵囊數(shù)目減少至最低 避免重復(fù)感染 牛羊飼料中添加海南霉素鈉 FCD 98 使瘤胃微生物菌群改變 瘤胃發(fā)酵向丙酸類型轉(zhuǎn)化 丙酸比例增加 飼料能量利用率提高 同時(shí)蛋白分解菌受抑制 脫氨基酶活性下降 瘤胃中飼料蛋白降解減少 增加微生物蛋白合成 促進(jìn)牛 羊體重增長 海南霉素對(duì)牛羊促增長 1 抗球蟲活性高 抗球蟲指數(shù)在181 196之間 屬于高效范圍 2 抗球蟲作用廣泛 藥效好 實(shí)驗(yàn)證明 FCD 98對(duì)七種球蟲均有效果 3 使用安全 長期使用無不良反應(yīng) LD50為46 71mg kg 屬于安全性很高的飼料添加劑 4 無殘留 長期使用不產(chǎn)生蓄積 停藥7天后 機(jī)體檢查無藥物殘留 5 對(duì)耐藥球蟲敏感 與現(xiàn)有抗球蟲藥物無交叉耐藥性 對(duì)耐藥球蟲同樣敏感 四 特性 6 質(zhì)量穩(wěn)定性好 室溫條件下長期儲(chǔ)存 含量及外觀穩(wěn)定 確保使用有效 7 低劑量 預(yù)防量為5ppm 治療量為7 5ppm 遠(yuǎn)低于鹽霉素 50 70ppm 和莫能菌素 90 110ppm 與馬杜拉霉素相當(dāng) 而馬杜拉6ppm以上即有明顯毒性 9 提高飼料轉(zhuǎn)化率 促進(jìn)肉雞增重 提高飼料報(bào)酬率 10 促進(jìn)牛 羊等反芻動(dòng)物的增長 被稱為 長肉素 11 使用成本低 五 海南霉素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1 海南霉素鈉原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 外觀白色或類白色粉末 無臭含量90 熔點(diǎn)149 155 熔解時(shí)同時(shí)分解比旋度 25至 35 水分不超過5 0 灼燒殘留物小于8 0 重金屬小于20ppm抗球蟲指數(shù)ACL180 196致畸性陰性 2 1 海南霉素鈉預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 本品為海南霉素鈉與麩皮配制而成 海南霉素含量為標(biāo)示量的90 0 110 0 性狀本品為淺褐色粉末干燥失重不超過7 0 粒度應(yīng)能全部通過二號(hào)篩重金屬不得超過20ppm砷鹽不得超過20ppm 五 海南霉素鈉預(yù)混劑抗球蟲使用說明 有效成分 海南霉素鈉含量規(guī)格 每1000克中含海南霉素10克適用動(dòng)物 雞作用和用途 用于防治雞球蟲病用法和用量 混飼 預(yù)防量 每1000千克飼料中添加本品500克 治療量 每1000千克飼料中添加本品750克 注意事項(xiàng) 1 馬屬動(dòng)物禁用 2 禁止與泰妙菌素或竹桃霉素同時(shí)使用 3 蛋雞產(chǎn)蛋期禁用 4 宰前7天停止給藥 儲(chǔ)藏 遮光 密閉 在干燥處保存 有效期 兩年 有效成份 海南霉素鈉含量 90 包裝規(guī)格 0 8個(gè)十億 桶 最新抗原蟲原料藥物咪唑苯脲產(chǎn)品介紹 山東信得科技股份有限公司研制生產(chǎn) 一 概述 咪唑苯脲 Imidocarb 為當(dāng)今國際上公認(rèn)的最佳抗巴貝西蟲藥物 對(duì)多種巴貝西蟲病和無定形體 豬附紅細(xì)胞體等均有很好的治療和預(yù)防療效 由于該藥具有能在體內(nèi)長期殘留的特性及發(fā)現(xiàn)該藥尚可影響梨形蟲傳播者 蜱體內(nèi)蟲體的感染力 因此認(rèn)為該藥尚有很好的預(yù)防作用 可用于家畜梨形蟲病的藥物預(yù)防 尚可用于豬附紅細(xì)胞體病的防治 是目前效果最好的藥物 該藥已廣泛應(yīng)用于世界各地 為國際公認(rèn)的最佳抗梨形蟲藥物 為滿足獸醫(yī)臨床防治梨形蟲病的需要 我們成功地研制了咪唑苯脲 鹽酸咪唑苯脲及丙酸咪唑苯脲 本品作為獸用專用藥 具有用量小 毒性低 使用方便 療程短 耐藥性低等特點(diǎn) 特點(diǎn) 藥物代謝動(dòng)力學(xué) 何宏軒等 2000 報(bào)道鹽酸咪唑苯脲注射液 4mg kg體重劑量 黃牛肌肉注射 藥代動(dòng)力學(xué)主要參數(shù)達(dá)峰時(shí)間Tmax為1 910 0 017h 血藥峰濃度為2 961 0 0673 g mL 吸收相半衰期t 1 2 為0 591h 0 0322h 消除相半衰期t 1 2 為4 678h 0 2655h 咪唑苯脲緩釋劑注射液 4mg kg體重劑量 黃牛肌肉注射 藥代動(dòng)力學(xué)主要參數(shù)達(dá)峰時(shí)間Tmax為11 320h 0 2955h 血藥峰濃度為2 804 g mL 0 0029 g mL 吸收相半衰期t 1 2 為1 643h 0 9960h 消除相半衰期t 1 2 為215 061h 22 2836h 與普通咪唑苯脲注射液相比 咪唑苯脲緩釋劑注射液半衰期延長了210 383h 藥物峰濃度時(shí)間比對(duì)照組延遲了9 410h 藥理學(xué) 鹽酸咪唑苯脲是新型抗血液原蟲病 它能直接作用于蟲體 干擾蟲體糖代謝 抑制DNA的合成 改變蟲體的核數(shù)目和大小 引起核擴(kuò)張 核崩解 胞漿形成空泡 使蟲體失去活性 對(duì)巴貝西蟲和邊緣邊蟲均有效 其一般毒性 劑量 安全范圍 療效都比硫酸喹啉脲和三氮脒為好 且具有預(yù)防作用 應(yīng)用咪唑苯脲治療牛附紅細(xì)胞體病 具有療效高 使用安全方便等優(yōu)點(diǎn) 是目前治療牛附紅細(xì)胞體病的理想藥物 毒理學(xué)與藥物殘留 毒理學(xué) 吳永魁 1992 等報(bào)道鹽酸咪唑苯脲小鼠腹腔注射LD50為84 8 13 5mg kg 鹽酸咪唑苯脲無致突變性 對(duì)骨髓細(xì)胞增殖無抑制作用 對(duì)精子無致畸形性 無致畸胎性 藥物殘留 該藥在畜體內(nèi)存留期較長 何宏軒等 2000 報(bào)道試驗(yàn)黃牛按4mg kg的劑量肌肉注射咪唑苯脲緩釋劑 在用藥后4個(gè)月肝 脾和腎仍能檢出咪唑苯脲 而其它臟器則檢測(cè)不到 Callow等 1970 報(bào)道 咪唑苯脲殘留物對(duì)人體無害 因而認(rèn)為咪唑苯脲在公共衛(wèi)生方面無重要意義 臨床應(yīng)用 自1969年Schmidt等發(fā)現(xiàn)咪唑苯脲對(duì)鼠的駱氏巴貝西蟲有效 隨后相繼證明其對(duì)馬 牛 羊以及犬的巴貝西蟲也有良好的治療和預(yù)防作用 國內(nèi)于1985年合成此藥 經(jīng)臨床應(yīng)用 證明對(duì)馬的努巴貝西蟲病 黃牛的雙芽巴貝西蟲病 水牛的巴貝西蟲病 牛的邊緣邊蟲病 羊的泰勒蟲病 豬和牛的伊氏錐蟲病 豬和牛的附紅細(xì)胞體病均有良好的治療作用 豬附紅細(xì)胞體病 宋建臣等 2003 應(yīng)用咪唑苯脲對(duì)自發(fā)感染附紅細(xì)胞體仔豬進(jìn)行治療試驗(yàn) 治療后仔豬紅細(xì)胞附紅細(xì)胞體感染率明顯下降 金升藻等 2007 報(bào)道鹽酸咪唑苯脲治療豬附紅細(xì)胞體病臨床病例 治愈率達(dá)84 附紅細(xì)胞體是豬混合感染性疾病 如無名高熱癥 的重要病原體 在防治豬混合感染性疾病時(shí)要注意對(duì)附紅細(xì)胞體的控制才能收到良好效果 可采用多西環(huán)素 磷酸氯喹 鹽酸咪唑苯脲 拌料或飲水 聯(lián)合用藥 預(yù)防時(shí)連續(xù)用藥2天 治療用藥時(shí)分別在第1天和第3天用藥 二 原料藥介紹 別名 雙咪苯脲英文名稱 Imidocarb化學(xué)名稱 N N 二 3 4 5 雙氫 1H 咪唑 2 基 苯基 脲 二鹽酸鹽結(jié)構(gòu)式 分子式 C19H22Cl2N6O分子量 420 12性狀 本品為白色或類白色粉末 無臭 無味 難溶于水 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 熔點(diǎn) 350 分解 含量 98 0 重金屬 10ppm干燥失重 1 0 灼燒殘?jiān)?0 1 三 使用說明 適應(yīng)癥適用于治療和預(yù)防牛 羊 犬等動(dòng)物由各種巴貝西蟲 梨形蟲 錐形蟲 附紅體細(xì)胞 邊緣邊蟲及泰勒蟲引起的以高熱 貧血 黃疸 心肺機(jī)能障礙等為主要癥狀的疾病 尚可用于豬附紅細(xì)胞體病的防治 用法與用量通過皮下或肌肉注射 用前用滅菌注射用水5ml溶解 100kg體重以上用0 2g 100kg體重以內(nèi)用0 1g 也可拌料應(yīng)用 2 5PPM 不良反應(yīng)動(dòng)物在注射咪唑苯脲后 注射部位可能會(huì)有花生粒大小的小腫塊 并且會(huì)出現(xiàn)流涎多 不安 起臥不定等的現(xiàn)象 均屬正常反應(yīng) 不久即會(huì)自行吸收 注意事項(xiàng)對(duì)牛雙芽巴貝蟲病和牛邊緣邊蟲病重癥或晚期的病例 應(yīng)同時(shí)配合對(duì)癥方法 由于該藥在食用組織中殘留期長 動(dòng)物屠宰前 應(yīng)停藥28d 貯藏 遮光 陰涼處密封保存有效期 二年 動(dòng)物專用頭孢類 頭孢喹肟產(chǎn)品介紹 山東信得科技股份有限公司研制生產(chǎn) 1 概況 頭孢喹肟是德國赫斯特公司 HoechstAG 于二十世紀(jì)八十年代開發(fā)的第四代動(dòng)物專用頭孢類抗生素 于1993年首次批準(zhǔn)上市 英國英特威公司 Intervet 1994年也隨之上市 商品名Cephaguard Cobactan 劑型為混懸液及軟膏 用于牛 豬等的細(xì)菌性疾病的防治 表1頭孢喹肟等對(duì)G 菌的抗菌活性 單位 g mL 2 抗菌活性 表2頭孢喹肟等對(duì)G 菌的抗菌活性 單位 g mL 表3頭孢喹肟等對(duì)埃希氏大腸桿菌 克雷氏伯桿菌抗菌活性 單位 g mL 3 藥動(dòng)學(xué) 3 1吸收與分布頭孢喹肟在牛 馬 豬 羊 狗等各種動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究資料表明 其在消化道的吸收率很低 肌肉注射 皮下注射及乳房灌注時(shí)吸收均迅速 達(dá)峰時(shí)間短 生物利用度較高 各種動(dòng)物在肌肉注射 皮下注射1mg kg bw的頭孢喹肟后 達(dá)峰時(shí)間 tmax 介于0 5 2h之間 達(dá)峰濃度 Cmax 在2 5 3 8 g mL之間 生物利用度 F 高于93 0 頭孢喹肟表現(xiàn)分布容積 Vd 比較低 均在0 2L kg bw左右 頭孢喹肟與血漿蛋白的結(jié)合率也比較低 介于5 15 之間 3 2代謝與排泄以C14標(biāo)記的研究表明 在各種排泄途徑中只發(fā)現(xiàn)了頭孢喹肟的原形藥物 沒有檢測(cè)到其它代謝物 因此其在動(dòng)物體內(nèi)代謝以后 以原形形式存在 頭孢喹肟在鼠 豬 牛 山羊等體內(nèi)的生物半衰期 t1 2 比較短 分別為 0 5 1 2 1 3h和2h 以C14標(biāo)記的研究也表明其在動(dòng)物體內(nèi)代謝以后主要經(jīng)腎隨尿排出體外 在豬 牛體內(nèi)給藥后的4h內(nèi)約有50 80 的藥物經(jīng)腎隨尿排出 24h內(nèi)約有90 的藥物經(jīng)腎隨尿排出 另外 約有5 7 的藥物通過肝臟分泌到膽汁中 隨膽汁排入腸道內(nèi) 4 毒性及殘留 4 1毒性頭孢喹肟的急性毒性作用是很低的 以劑量0 3 2 32 320mg kg bw的頭孢喹肟給狗口服 無明顯的毒性反應(yīng) 以0 25 250 2500mg kg bw的劑量給小白鼠口服 僅劑量為2500mg kg bw的小白鼠出現(xiàn)可見的臨床毒性 但血和尿的常規(guī)檢測(cè)參數(shù)在250mg kg bw的劑量組