黃芪甲苷對柯薩奇B組3型病毒感染乳鼠心肌細(xì)胞及病毒性心肌炎乳鼠心肌細(xì)胞的.docVIP

黃芪甲苷對柯薩奇B組3型病毒感染乳鼠心肌細(xì)胞及病毒性心肌炎乳鼠心肌細(xì)胞的 黃芪甲苷對柯薩奇組型病毒感染乳鼠心肌細(xì)胞及病毒性心肌炎乳鼠心肌細(xì)胞的修復(fù)作用觀察楊秀華?肖云峰?劉天龍?劉小玲?張勇?楊宏昕?劉小雷(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院?呼和浩特?呼倫貝爾職業(yè)技術(shù)學(xué)院?內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院?內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院)摘要:目的觀察黃芪甲苷(?)對柯薩奇組型病毒(?)感染的乳鼠心肌細(xì)胞和病毒性心肌炎()乳鼠心臟的修復(fù)作用?并探討其可能作用機制?方法分離培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞?測算對乳鼠心肌細(xì)胞的最大無毒濃度()?取乳鼠心肌細(xì)胞分為正常對照組、病毒對照組、組?病毒對照組和組分別用的病毒感染心肌細(xì)胞?組分為五個亞組?細(xì)胞長至單層細(xì)胞時?分別加入、.、./的?當(dāng)病毒對照組中以上的細(xì)胞出現(xiàn)病變時結(jié)束培養(yǎng)?法觀察各組細(xì)胞存活情況(以值表示)?收集各組細(xì)胞上清液?全自動生化分析儀檢測乳酸脫氫酶()、肌酸磷酸激酶()含量?只小鼠分為正常對照組、模型對照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組?每組只?除正常對照組外?其余各組小鼠均腹腔注射的病毒液./只?建立動物模型?接種病毒時?高、中、低劑量組分別給予、/的灌胃?正常對照組、模型對照組每日予.羧甲基纖維素鈉/灌胃?各組均灌胃?灌胃第脫頸椎處死小鼠?取心肌組織?觀察心肌組織病理學(xué)變化?全自動生化分析儀檢測各組小鼠血清中、含量?結(jié)果與空白對照組比較?病毒對照組及組各亞組細(xì)胞值降低(均.)?與病毒對照組比較?及組各亞組細(xì)胞值降低(均.)?與正常對照組比較?病毒對照組心肌細(xì)胞、含量升高(均.)?與病毒對照組比較?、/的組心肌細(xì)胞、含量降低(均.)?與空白對照組比較?病毒對照組心肌組織排列紊亂?淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞出現(xiàn)介導(dǎo)的炎性浸潤、心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯出血水腫甚至壞死?組不同劑量心肌組織排列紊亂情況輕?淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞出現(xiàn)介導(dǎo)的炎性浸潤、心肌細(xì)胞輕微出血水腫?心肌組織壞死以點狀炎癥和壞死灶為主?與空白對照組比較?模型對照組心肌細(xì)胞、含量升高(均.)?與模型對照組比較?高、中、低劑量組心肌細(xì)胞、含量降低(均.)?結(jié)論對感染的心肌細(xì)胞和乳鼠心肌細(xì)胞均具有明顯的保護(hù)作用?其機制可能為降低、含量?關(guān)鍵詞:黃芪甲苷?心肌細(xì)胞?心肌酶?病毒性心肌炎?柯薩奇組型病毒:./.:.文獻(xiàn)標(biāo)志碼:()基金項目:國家自然科學(xué)基金資助項目()?內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生計生科研計劃項目()?通信作者簡介:劉小雷(:.)?(?):()()()?.().?.?.?.?./?.().?山東醫(yī)藥年第卷第期()().?.?(./).?/?./.?.?(.).?(.).?(.).?/(.).?.?.?(.).?(.).:?病毒性心肌炎(?)是最常見的感染性心肌炎?引起的病毒主要是腸道病毒和上呼吸道感染病毒?其中以柯薩奇組型病毒()最為常見?近年來?的發(fā)病率呈上升趨勢?尤其是兒童、青壯年發(fā)病率較高?發(fā)病初期常見發(fā)熱、全身酸痛、胸痛、疲倦等一般病毒感染癥狀?因此常因誤診不被患者所重視而延誤病情?嚴(yán)重感染可導(dǎo)致心力衰竭、心源性休克甚至猝死?乳酸脫氫酶()和肌酸磷酸激酶()是診斷的標(biāo)志性心肌酶?目前的臨床治療主要以對癥治療、提高機體的免疫力及抗病毒治療為主?目前尚無統(tǒng)一安全有效的抗藥物?黃芪甲苷()是從蒙古黃芪根莖中提取分離的主要活性成分?具有補氣升陽、益衛(wèi)固表、托毒生肌、利水消腫等功效?黃芪具有增強免疫、強心降壓、降血糖、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤等功效?可用于冠心病、心絞痛等疾病的治療?目前關(guān)于治療的效果相關(guān)報道較少?年月年月?我們分別觀察了對感染的乳鼠心肌細(xì)胞及乳鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用?并分析其可能作用機制?材料與方法.細(xì)胞、藥物及儀器級新生乳鼠?由內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心提供?許可證編號:(蒙)?級昆明種雄性小鼠只?體質(zhì)量?由內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心提供?實驗動物生產(chǎn)許可證號:(蒙)?人宮頸癌細(xì)胞株由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院楊秉呼博士惠贈?細(xì)胞株由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所惠贈?()毒株由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所惠贈?(?中國藥品生物制品檢定所)?測定試劑盒(?南京建成生物工程研究所)?試劑盒(?南京建成生物工程研究所)?.對感染的乳鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用觀察.病毒擴增及病毒滴度()檢測病毒擴增取細(xì)胞株培養(yǎng)于培養(yǎng)瓶中?當(dāng)長成單層細(xì)胞時加入病毒液?吸附后棄上清?加全培養(yǎng)基?在孵箱中培養(yǎng)?于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)?當(dāng)細(xì)胞變?yōu)閱蝹€細(xì)胞并發(fā)生部分破裂時?終止培養(yǎng)?反復(fù)凍融次?最終完全釋放病毒顆粒時移入離心管?離心?收集上清液?保存?zhèn)溆?檢測取細(xì)胞用全培養(yǎng)基將病毒液稀釋?濃度范圍為山東醫(yī)藥年第卷第期稀釋度?將已長成單層細(xì)胞的培養(yǎng)液棄去?接種不同濃度的病毒液?記錄細(xì)胞病變()的孔數(shù)?以達(dá)“”以上為陽性?以最高稀釋度不再出現(xiàn)為終點?用法計算?得病毒的為.?即能夠使細(xì)胞發(fā)生的病毒濃度為/?最終選擇作為正式實驗的接種濃度?.原代乳鼠心肌細(xì)胞分離與培養(yǎng)取新生乳鼠?乙醇消毒?迅速剪取心臟心尖處?將心臟均勻剪成約的組織塊?棄上清?加入.胰酶輕輕吹打?消化?加入.胰酶及.型膠原酶的混合液?消化?吸取上清液轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷玻璃瓶中?的/培養(yǎng)基終止消化?重復(fù)上述步驟?共消化次?目篩網(wǎng)去除大量組織?離心?/培養(yǎng)基重懸細(xì)胞?、孵箱中培養(yǎng)?差速貼壁?將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至另一培養(yǎng)瓶中?繼續(xù)培養(yǎng)?細(xì)胞達(dá)到融合狀態(tài)時開始后續(xù)實驗?倒置顯微鏡下可見培養(yǎng)時細(xì)胞基本全部貼壁?細(xì)胞呈圓形、梭形及多角形?大多數(shù)都已伸出偽足?邊界清晰可見?并且有自發(fā)性節(jié)律性搏動?培養(yǎng)細(xì)胞伸出偽足并相互觸及交織成網(wǎng)?逐漸形成細(xì)胞簇?并且同步搏動?搏動頻率次/?培養(yǎng)日細(xì)胞搏動頻率逐漸達(dá)到高峰(次/)?免疫組化染色后乳鼠心肌細(xì)胞染色為陽性?胞質(zhì)內(nèi)存有棕黃色絲狀物質(zhì)?細(xì)胞純度達(dá)以上?.對乳鼠心肌細(xì)胞的最大無毒濃度()測算取乳鼠心肌細(xì)胞分為正常對照、(濃度分別為、/)?每組每個濃度個復(fù)孔?分別將不同濃度藥物加入到已長成單層細(xì)胞的孔板中?、培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?高濃度對細(xì)胞的毒性較大?表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變?出現(xiàn)脫落、死亡?隨著濃度的降低?對心肌細(xì)胞的毒性反應(yīng)也逐漸減弱?當(dāng)達(dá)到無毒濃度時?給藥的細(xì)胞和正常對照細(xì)胞的沒有明顯的區(qū)別?顯微鏡下記數(shù)的孔數(shù)?當(dāng)不再變化時?用法測算的為/?為/?.加入的感染心肌細(xì)胞存活情況觀察及細(xì)胞上清液中、檢測取乳鼠心肌細(xì)胞分為正常對照組、病毒對照組、組?將密度為/的心肌細(xì)胞接種于孔板中?孵箱內(nèi)培養(yǎng)?病毒對照組和組分別用的病毒感染心肌細(xì)胞?共培養(yǎng)棄去含有病毒的培養(yǎng)液?組分為五個亞組?分別加入、.、./的?顯微鏡下每日觀察?當(dāng)病毒對照組中以上的細(xì)胞出現(xiàn)病變時結(jié)束培養(yǎng)?每孔加入液(./)?培養(yǎng)?吸棄原培養(yǎng)液?每孔加入?振搖?于酶標(biāo)儀處讀取光密度值(值)?根據(jù)每組細(xì)胞的值計算細(xì)胞存活率?實驗重復(fù)次?取平均值?收集各組細(xì)胞上清液?采用全自動生化分析儀對處理樣本進(jìn)行檢測?檢測指標(biāo)為、?實驗重復(fù)次?取平均值?.對小鼠心臟的保護(hù)作用觀察.小鼠分組及給藥方法采用隨機數(shù)字表法將只小鼠分為正常對照組、模型對照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組?每組只?除正常對照組外?其余各組小鼠均腹腔注射病毒液./只?建立動物模型?小鼠接種病毒時?高、中、低劑量組分別給予、/的灌胃?正常對照組、模型對照組每日予.羧甲基纖維素鈉/灌胃?各組均灌胃?灌胃第脫頸椎處死各組小鼠?.各組小鼠心肌組織病理形態(tài)觀察處死各組小鼠后留取心肌組織?沿左心室長軸切開?用甲醛固定后石蠟包埋切片?染色?觀察各組心肌細(xì)胞、心肌組織病理學(xué)改變?.各組小鼠血清中、測定將麻醉小鼠眼眶取血?靜置?用/?離心取血清?采用全自動生化分析儀對處理好的樣本進(jìn)行檢測?檢測指標(biāo)為、?實驗重復(fù)次?取平均值?.統(tǒng)計學(xué)方法采用.統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理?計量資料以?表示?組間比較采用檢驗?.為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義?結(jié)果.加入的感染的心肌細(xì)胞值比較空白對照組、病毒對照組細(xì)胞值分別為.、.?、.、./的組細(xì)胞值分別為.、.、.、.、.?與空白對照組比較?病毒對照組及組各亞組細(xì)胞值降低(均.)?與病毒對照組比較?及組各亞組細(xì)胞值升高(均.)?.加入的感染的心肌細(xì)胞細(xì)胞上清液山東醫(yī)藥年第卷第期、含量比較空白對照組感染的心肌細(xì)胞、含量分別為(.)、(.)/?病毒對照組感染的心肌細(xì)胞、含量分別為(.)、(.)/?.、.、/的組心肌細(xì)胞含量分別為(.)、(.)、(.)、(.)、(.)/?含量分別為(.)、(.)、(.)、(.)、(.)/?與正常對照組比較?病毒對照組心肌細(xì)胞、含量升高(均.)?與病毒對照組比較?、/的組心肌細(xì)胞、含量降低(均.)?.加入的小鼠心肌組織病理形態(tài)模型對照組及低、中劑量組分別死亡、只?與空白對照組比較?病毒對照組心肌組織排列紊亂?淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞出現(xiàn)介導(dǎo)的炎性浸潤、心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯出血水腫甚至壞死?組不同劑量心肌組織排列紊亂情況輕?淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞出現(xiàn)介導(dǎo)的炎性浸潤、心肌細(xì)胞輕微出血水腫?心肌組織壞死以點狀炎癥和壞死灶為主?.加入的小鼠血清、含量測定結(jié)果比較見表?與空白對照組比較?模型對照組心肌細(xì)胞、含量升高(均.)?與模型對照組比較?高、中、低劑量組心肌細(xì)胞、含量降低(均.)?表各組乳鼠心肌細(xì)胞、含量(/?)組別空白對照組.模型對照組.低劑量組.中劑量組.高劑量組.討論中藥黃芪是豆科黃芪屬植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根?史載于?神農(nóng)本草經(jīng)?中?具有顯著的補氣升陽、益衛(wèi)固表、托毒生肌、利水消腫等功效?根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明?黃芪具有增強免疫、強心降壓、降血糖、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤的功效?臨床上可用于冠心病、心絞痛、病毒性心肌炎等疾病的治療中?目前?黃芪己被列入我國衛(wèi)生行政部門制定的有關(guān)病毒性心肌炎常規(guī)治療方案中?本研究中所用的是從蒙古黃芪中分離純化的主要活性成分?在藥典中被作為黃芪質(zhì)量檢測標(biāo)志物?現(xiàn)代研究表明?具有抗炎、抗氧化?、抗病毒、增強免疫力等藥理作用?原代乳鼠心肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)?是將出生天乳鼠心臟組織剪碎?用特定濃度的消化酶進(jìn)行消化?使心肌組織變成單個的心肌細(xì)胞?在適宜的體外環(huán)境下?貼壁生長的一種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)?原代乳鼠心肌細(xì)胞在感染病毒后天就可以發(fā)生較明顯的細(xì)胞病變?早期便可以直接損害心肌細(xì)胞?臨床上一般采用檢測心肌酶的表達(dá)水平來間接檢測心肌細(xì)胞的損傷程度?、是診斷病毒性心肌炎的標(biāo)志性心肌酶?在感染的心肌細(xì)胞模型中?由于心肌細(xì)胞受損?細(xì)胞膜通透性升高?胞內(nèi)酶大量釋放進(jìn)入血液中?導(dǎo)致、的活性升高?治療組(、/)明顯減輕?細(xì)胞搏動有力?染色結(jié)果顯示?給藥各濃度組與病毒對照組比較?給藥組的細(xì)胞存活率明顯增高?細(xì)胞搏動較好?形態(tài)正常?兩組間平均值有顯著性差異?故作用于感染的心肌細(xì)胞后?細(xì)胞病變明顯減輕?上清液中的心肌酶的活性明顯降低?差異有統(tǒng)計學(xué)意義?說明可以減輕感染所造成的心肌細(xì)胞損傷?能維持心肌細(xì)胞正常功能?對心肌細(xì)胞具有較好的保護(hù)作用?在感染的小鼠模型中?通過染色法可觀察到感染病毒的小鼠的心肌組織形態(tài)?病毒對照組心肌組織排列紊亂?淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞出現(xiàn)介導(dǎo)的炎性浸潤、心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯出血水腫甚至壞死?給藥組尚可觀察到病灶出現(xiàn)?以點狀炎癥和壞死灶為主?病變程度相對于病毒對照組較輕?能明顯減輕感染的心肌組織病變程度?綜上所述?加入可促進(jìn)感染心肌細(xì)胞的存活?加入的乳鼠心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)輕?對感染的心肌細(xì)胞和乳鼠心肌細(xì)胞均具有明顯的保護(hù)作用?可明顯抑制感染?減輕了感染造成的心肌損傷?其機制可能為通過減少和的釋放、抑制病毒增殖以及對心肌細(xì)胞及心肌組織的保護(hù)作用?但其具體治療機制尚有待于進(jìn)一步研究?參考文獻(xiàn):?.?():.?.().?():.李麗燕?俞金正?沈群?等.黃芪顆粒對病毒性心肌炎模型大鼠心肌細(xì)胞中、表達(dá)的影響.中國藥房?():.山東醫(yī)藥年第卷第期覆膜鎳鈦合金支架管與改良型結(jié)腸液囊管在豬結(jié)腸穿孔修復(fù)中的應(yīng)用對比觀察王純忠?盧峰?仇衛(wèi)健?高小龍?肖慧蓮?謝明霞?楊茂華?區(qū)棟財?劉楚天(廣州市第一人民醫(yī)院?廣州?.江蘇陽普醫(yī)療科技有限公司?南京微創(chuàng)科技有限公司)摘要:目的觀察覆膜鎳鈦合金支架管(?)、改良型結(jié)腸液囊管(?)對結(jié)腸穿孔豬穿孔部位的應(yīng)用修復(fù)效果?方法取頭西藏小型豬制備結(jié)腸穿孔模型?造模后只豬隨機分為組、組?每組頭?造模后即刻組、組分別用與修復(fù)結(jié)腸穿孔部位?分別于治療第、天兩組各取只豬測算結(jié)腸穿孔愈合部位爆破壓()?取結(jié)腸穿孔部位腸壁組織檢測直腸穿孔愈合部位羥脯氨酸()含量?結(jié)果治療第、天組結(jié)腸穿孔愈合部位分別為(.)、(.)、(.)?組分別為(.)、(.)、(.)?隨治療時間延長組、組結(jié)腸穿孔愈合部位逐漸升高(均.)?治療第、天組結(jié)腸穿孔愈合部位含量分別為(.)、(.)、(.)/?組分別為(.)、(.)、(.)/?隨治療時間延長組、組結(jié)腸穿孔愈合部位含量逐漸升高(均.)?結(jié)論、修復(fù)后的結(jié)腸穿孔豬穿孔愈合情況均較好?關(guān)鍵詞:覆膜鎳鈦合金支架管?改良型結(jié)腸液囊管?結(jié)直腸穿孔?結(jié)腸穿孔?結(jié)腸穿孔修復(fù)?爆破壓?羥脯氨酸:./.:文獻(xiàn)標(biāo)志碼:()?(?):()().?.?宣麗穎?陶謝鑫?趙雅君?等.黃芪總黃酮對柯薩奇病毒感染乳鼠心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及蛋白和縫隙連接蛋白的作用.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志?():.王小霞?劉晶?劉天龍?等.黃芪