T-SPOT的臨床意義.doc

T-spot的臨床意義結(jié)核病目前仍是全球公共衛(wèi)生的主要問題。干擾素釋放試驗(yàn)通過結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞釋放的 干擾素，明確有無結(jié)核分枝桿菌感染，不會(huì)與卡介苗接種和其他環(huán)境分枝桿菌感染產(chǎn)生交叉反應(yīng)，特異度優(yōu)于結(jié)核菌素皮試。目前有兩種商業(yè)化的試劑盒用于體外檢測 干擾素，一種是基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，檢測全血干擾素濃度；另一種是基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)方法檢測結(jié)核分枝桿菌特異性效應(yīng)栽細(xì)胞斑點(diǎn)數(shù)，如結(jié)核感染栽細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)（T-SPOT ），其敏感度優(yōu)于ILISA方法。病原學(xué)檢查是目前結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但兒童痰標(biāo)本不易獲得，且常合并肺外結(jié)核，因此兒童痰細(xì)菌學(xué)檢查陽性的肺結(jié)核患病率僅為12310萬。目前PPD試驗(yàn)作為潛伏結(jié)核感染診斷的主要工具，在成人結(jié)核病患者的檢出率僅為039。BCG接種后PPD常呈陽性反應(yīng)，目前尚無可靠標(biāo)準(zhǔn)區(qū)別出自然結(jié)核桿菌感染與卡介苗接種后的結(jié)素反應(yīng)；同時(shí)機(jī)體對PPD的反應(yīng)程度受機(jī)體免疫系統(tǒng)狀態(tài)的影響。以結(jié)核分枝桿菌特異性抗原ESAT-6和CFP一10抗原為基礎(chǔ)的ELlSPOT試驗(yàn)方法敏感性高、特異性強(qiáng)。國外的大量研究數(shù)據(jù)表明，ELISPOT試驗(yàn)檢測結(jié)核感染的特異性達(dá)95以上，敏感性達(dá)7597，尤其適用于免疫抑制人群、潛伏結(jié)核感染者的診斷。北京兒童醫(yī)院孫琳、趙順英報(bào)道：活動(dòng)性結(jié)核病組中，21例患兒存在活動(dòng)性結(jié)核病癥狀，其PPD試驗(yàn)陽性，隨后行ELISPOT試驗(yàn)陽性19例，臨床可以確診結(jié)核病；另6例患兒PPD試驗(yàn)陰性，而ELISPOT試驗(yàn)陽性5例，其中4例患兒臨床診斷血行播散性重癥結(jié)核病，CD4水平低于正常，推測4例患兒PPD試驗(yàn)陰性可能由于機(jī)體免疫功能低下，機(jī)體遲發(fā)型免疫應(yīng)答減弱所致；這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果也進(jìn)一步驗(yàn)證了ELISPOT方法受機(jī)體免疫功能狀態(tài)影響小，尤其是年幼兒在免疫功能低下或重癥患兒使用免疫抑制劑時(shí)仍具有較理想的敏感性。該結(jié)果為臨床診斷提供了有力證據(jù)，尤其是可以為免疫力降低的PPD陰性結(jié)核病重癥患者的臨床診斷提供診斷依據(jù)。國外研究指出，ELISPOT試驗(yàn)受機(jī)體免疫狀態(tài)影響較小，只有當(dāng)外周血CIM數(shù)小于100細(xì)胞L時(shí)，其敏感性才會(huì)降低。但同時(shí)，在我們研究結(jié)果中也發(fā)現(xiàn)，在27例活動(dòng)性結(jié)核病患兒中有3例為ELISPOT試驗(yàn)陰性，考慮為ELISPOT假陰性結(jié)果(取血量少造成細(xì)胞數(shù)量少、實(shí)驗(yàn)操作誤差等)，此時(shí)應(yīng)該結(jié)合臨床資料綜合分析做出臨床診斷。需要指出的是，病原學(xué)檢測均陰性的27例活動(dòng)性結(jié)核病患者中889ELISPOT陽性，提示該實(shí)驗(yàn)對于肺外結(jié)核或者難以獲取痰標(biāo)本的兒童結(jié)核病患者具有較高的診斷價(jià)值，但仍需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。非結(jié)核性肺疾病組中，8例患兒PPD陽性臨床考慮結(jié)核感染，進(jìn)一步應(yīng)用ELISPOT方法檢測后，僅有1例患兒為陽性，ELISPOT陰性的7例患兒均有卡介苗接種史，且為中等強(qiáng)度反應(yīng)。因此7例PPD陽性患兒臨床應(yīng)首先考慮為卡介苗接種后的交叉反應(yīng)，并定期隨訪排除潛伏結(jié)核感染。1例ELISPOT陽性患兒應(yīng)結(jié)合臨床考慮結(jié)核感染的診斷。該試驗(yàn)結(jié)果與國外研究結(jié)果一致，證明了ELISPOT試驗(yàn)具有較高的特異性，是當(dāng)前健康人群篩查潛伏結(jié)核的較有潛力的新方法。但由于ELISPOT試驗(yàn)存在操作技術(shù)要求高，費(fèi)用昂貴等缺點(diǎn)，限制了其在經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平低的發(fā)展中國家的應(yīng)用。本研究認(rèn)為，當(dāng)l臨床醫(yī)師不能準(zhǔn)確判斷結(jié)核分枝桿菌自然感染和卡介苗接種的PPD陽性結(jié)果時(shí)，或當(dāng)患兒PPD試驗(yàn)陰性，臨床結(jié)合病史、影像學(xué)檢查等綜合分析不能除外結(jié)核病存在時(shí)，ELISPOT試驗(yàn)可以作為一個(gè)重要的輔助診斷工具。因此，在臨床實(shí)際應(yīng)用中將ELISPOT和PPD相結(jié)合應(yīng)是我國目前較為合理、經(jīng)濟(jì)的診斷流程。其他情況也可以引起T-SPOT陽性：（1）自身免疫疾病引起的機(jī)體免疫紊亂，導(dǎo)致T 淋巴細(xì)胞中非特異性IFN- 釋放增多；（2）重癥膿毒癥患者機(jī)體T 淋巴細(xì)胞處于高度活化狀態(tài)，導(dǎo)致T 淋巴細(xì)胞中非特異性IFN-釋放增多；（3）胞內(nèi)病毒或胞內(nèi)細(xì)菌嚴(yán)重感染時(shí)，T 淋巴細(xì)胞處于活化狀態(tài)，也會(huì)導(dǎo)致T 淋巴細(xì)胞中的非特異性INF- 釋放增多?？赡苡绊慣-SPOT 檢測的各項(xiàng)影響因素發(fā)現(xiàn)T-SPOT 結(jié)果與性別、年齡、卡介苗接種史、結(jié)核病接觸史、機(jī)體免疫狀態(tài)和感染部位均無關(guān)，與孫琳等的報(bào)道符合，說明T-SPOT 在兒童結(jié)核