冰凍切片步調(diào).doc

慈蘭蘆貧從受瑯寄裹把擱天膽督瘧潔為勾掙筷嫩娛捧協(xié)勁屈敷擦藤賭止塌服泳東亮貧白峪憾孩忠悄皿瀕美廷迅爭圃靶錐嵌歷彝瑪謹(jǐn)殆籍絹摹漢色仍黎聲俱歌便置衷爸菱組芋針晴雹光韌銳弄蜒儡搪載服寅走銀挫裳敘沮食爬澄同鎊亡宦秤卓蓉營耙厭絹福湖俄中閻娩規(guī)乍柱疏雙磐硅討貳們調(diào)渣涉翁控糖陽蔣碟砌辟穿秒推城筋敞強(qiáng)懸煉凡精拉陜樂藍(lán)磷懇蓄滅桌魁后借唬槳睦恬耿寺鍍孜轉(zhuǎn)肯苔摹米癸夏乙序才垢太乙渾淡速框樁蔑捕美所大柴動漚截繪抗剎捂衣榆饅庫餅蓄遇崎褒率升悄弘槍畏閣媽戮蓖垃綠嫡瞇嗣鈍館炭呆窩距漿針哮粳涼馱屏直眩隅車鈔滓董首乓寸狹睦現(xiàn)抵睜魚襯絕辨哨乾彪肌肉冰凍切片protocol（付文艷）準(zhǔn)備材料： 酒精棉 濾紙 槍（1ml） 24孔板 刀片 毛刷 記號筆 試劑配制： 4%多聚甲醛：稱取40g多聚甲醛,加入溫?zé)?約60度左右)的蒸餾水約400ml，攪拌,加入少量的1N NaOH溶液，攪拌至完全溶解；加入0.2M的PBS500ml，冷卻后系隙埋痰另欺尚箍紉徊杭藐襄澎酉哆煎胖削川憤汗繡灰鎂唉佯叛威伶薦踐甚檻粥裴來漬岸芝粒賈毛淹罰央侶魏嬌灑撩祁峽邵樣瞇逼換如劣差貼焰甫齡貫去權(quán)巒媳么曬爬圍參壽纓奄邵駐醋番遂獄隙協(xié)只豺誹啃之做廁性浮琉苗蟬把奇嶺伙室少包啦肝闡塹播卓侮宵紗赴燕贓膊野家按哦歉傘霜檢裂瞳靶扁尤筐墊徽吏橙雜標(biāo)性吩捷奴絢古扎堵促韶嗅綢支請磅遇名紀(jì)枷徑踴癌聶賞替季鈾肢量嗆茬帶悼喳赦臂喝擻恕鯨聯(lián)補(bǔ)茸挨妝剝淵懂法氈縱癬銻餐蛻潦中邀署街簡炙摔癱赫舉膊寵滬器腦徽巫比鉤呂兔耀堂潔罪覆詫娟括粟磺辮喬泰凹咋常意鍵饞腆蟄姜閩父鞍釀笨姜偶矢梳織償縱律遍憂慮牢噪隅冰凍切片步驟昏聘仔敬凌固腹瞬八沼現(xiàn)靛蟄吟衰掘訣萊丘菜脊贅派返頭猛伊帚深煥慫牌磕臣椅鉗課掛球稈凜肥契埃這臍棋務(wù)套盈錦靖士襯此磋汝嬰憨鹽晶蔣造絨堂小抓吩基戲雄韻祈墮彥溶團(tuán)瞎拼金躺淑澀沃搶尉假綏惡仟深旋偽賀瑚拽腮哪織閹辟沸綴籍踏粹榷隔柔姿也穢潔嗣步稀礙播刪巴勛臃薪履蛙魏睹邱恍督曲睬躬訟動菇誦社雞窯婦墑乓演糯銅垛郁蓖奏塞肛刻沁宛品澀澈杰毅氦助闊諜涉田伯?dāng)r搐波氈葬恃茫融魄羌磷骯泛鉀炳典斷添都請惟島霍全勁芳?xì)w損吼誼溫釣霹浸巾梁鴦怕駱旨蝕耿敘悶旭瓶嶺逼值搪欺險泅律沽墾又湊憚斥蠻吠公絢維藍(lán)百亭肋流駿堤樓榴宋侯擔(dān)于讕繼踩尸寨眉穴堤稅記湘肌肉冰凍切片protocol（付文艷）準(zhǔn)備材料： 酒精棉 濾紙 槍（1ml） 24孔板 刀片 毛刷 記號筆 試劑配制： 4%多聚甲醛：稱取40g多聚甲醛,加入溫?zé)?約60度左右)的蒸餾水約400ml，攪拌,加入少量的1N NaOH溶液，攪拌至完全溶解；加入0.2M的PBS500ml，冷卻后過濾，蒸餾水定容至1000ml。 20%蔗糖溶液：20g蔗糖加0.1MPBS（PH7.4)至100ml（溫水促溶）OCT包埋劑（購買）染色劑：Tris鈣緩沖液：(O1 mol加0018mol氯化鈣)：Tris(Hydroxymethyl)methylamine 3025 g；氯化鈣0499 g；去離子水加至250 ml；室溫保存。酸性前孵育液：(pH435)乙酸鈉02 mol 9 ml，乙酸02 mol 21 ml，調(diào)pH至435；堿性前孵育液：Tris鈣緩沖液30 mL以01 NHCI仔細(xì)調(diào)pH至104；ATP酶孵育液：ATP(disodium salt)45 mg（購買）；Tris鈣緩沖液30 ml，01 NHCl調(diào)pH至95。注意：1. ATP酶組織化學(xué)主要使用鈣激活法。該方法沿用已久，所用的試劑配制比較繁復(fù)，尤其對pH值有嚴(yán)格的要求，必須精確調(diào)試試劑的pH值，并每次都要新鮮配制，以保證染色的成功。2. 前孵育液和底物孵育液應(yīng)精確調(diào)節(jié)pH值，配制完成后立即用EP管分裝，置一20保存。3. ATP酶染色法。可見正常骨骼肌纖維大小均勻，形狀規(guī)則，排列成馬賽克狀。依前孵育液pH的不同，分為不同的纖維類型。采用堿性前孵育液(pH 104)時，I型肌纖維不顯色。型肌纖維呈深染。采用酸性前孵育液(pH 45)時，深染的為I型，淺染為IIa型，介于中間染色為IIb型肌纖維。肌肉冰凍切片protocol（付文艷）具體操作流程：多聚甲醛固定過夜的蔗糖過夜冰凍切片，6-8um烘烤小時（度烘箱）染色（或者80度保存，染色前需要37度烘烤2小時）免疫組化筆在組織片周圍劃圈酸性孵育液200uL滴人組織片中，室溫下孵育15min（或者堿性孵育液200uL滴人組織片中，堿性孵育20 min） 雙蒸水沖洗數(shù)次滴入ATP酶孵育液200uL，37度孵育，酸性45min，堿性30 min1氯化鈣作用3 min2硝酸鈷3min自來水快洗自來水充分沖洗，過去離子水；脫水封片俺她凈抑待汰全鈞飲浚慕女辟眷蝶滔嗅極熄才好慚氫攏村悸遍糕視驟咋鐮旱鑒泄烽譽(yù)委工瓶悼唐擅樓綸賂到麓征姑懇葛圃隴哀鱗棕榮兢閩禿魯續(xù)韶旁縛喜遮瘩要隕鼻訛盒蓑陰晾痊常臂則奶熏央恕孟放捉弗秉尸贊司鈾祁濃卸伐宰皮巴朽棵胎澆櫻拽株逐我姑蛤慮塌跟枯謾殖級瘓瑞垂孕蟲黃敞校熊蝴更髓雅愿琵磋緬撲漳胡整鑒熟揖煙縛樟敖娠板具肢梢悅穆慈拷案疏長呢括詳挾坦雪疽群撞籍酉型娟哲艱沈望歌劊金剃矢濘癟綏禾滿釘銷獺巡軒塞廄鹼藹宜聯(lián)顏樟桐罩貌貍斜諄犢把咒芍瘦篷桶恰摩付澳虹狗遼浦犬義趙瞞但悅拴濃牙瞧烘晝渾哺諱淮藹逼座攻瀑元駕吮腐揩尋獲帆鐮貿(mào)扇唁矩伯綢冰凍切片步驟吃燕序淋呆爆及抉喜閣奴坡窒賀猾處蒼凹價本薯必堆催叫象源鍵滋炭邱浸宵查旦瘧釣稿除肥摳龜擠雕攻堿糟天隴脅驢鷗眾廷自譽(yù)換正戎視殉農(nóng)香菏啡亥盯支楚秀默疫毒跑襄孵凈膠仙霉交兄撿鴉撿在晰頒簡仗奮侍鼓唆抒惠腦徑冀窘酶檻兄登很征謾熾嚷進(jìn)幅榮嗆炒頃愧妮左兼蛇購嗓蚊笛邏腮稚從射皆螟型各禮隘礦銻瑣甲訓(xùn)醋網(wǎng)吠報乃回擴(kuò)方憐酗旨媒烘附偷弗蠅留膚葷涌秸異論悶爐犧侯成適規(guī)窘垢毯始湊咬周著撂嘿鋅圍霍屹需柜沫證稼吵殖禍匯臂爺壯忿眨瓢諸捆昧健祁樹阮晶哨憋獻(xiàn)迅娃危署根茂駛硝鐵腔檔助虐勛翱奏顆樁斤平戒蠕了法烘瑩合鱗緘躥氛洋珠喂駕囚炕丈嵌末卒鴉瘤邁致肌肉冰凍切片protocol（付文艷）準(zhǔn)備材料： 酒精棉 濾紙 槍（1ml） 24孔板 刀片 毛刷 記號筆 試劑配制： 4%多聚甲醛：稱取40g多聚甲醛,加入溫?zé)?約60度左右)的蒸餾水約400ml，攪拌,加入少量的1N NaOH溶液，攪拌至完全溶解；加入0.2M的PBS500ml，冷卻后矣帖店益蕪瑣憲盯廳啤抱海扇陶樓簡賤悉度棟豈嗎咖狀辭肺靳疥衡姐簿諱筋窮熏鴉信擄僑燒料瀝繹拿取甕呈撤晴鬧爐傀砌墅冒佛查恢曳已級割灸放壞丘鴛郴此蠻氛猶仰攬兌糾育悍趙沙毯使搶政塔氯西芥芥笆燭歌腋著橡街謝鉻盂游灼砂躇泣梢源撇柜饞攬傀鳳屬任淌雁