課題2　土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù).doc

班級： 姓名： 東港三中2013級高二生物選修一課題2導(dǎo)學(xué)案2.2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)主備人： 審核人： 使用時(shí)間：2015.4【三維目標(biāo)】知識(shí)與技能：理解培養(yǎng)基的選擇及配制方法；分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)。過程與方法：“以問題為中心”探究式教學(xué)模式，通過小組合作探究，學(xué)生展示，教師點(diǎn)撥。情感與價(jià)值觀：關(guān)注生活中的實(shí)際問題，培養(yǎng)解決問題的能力?！緦W(xué)習(xí)重難點(diǎn)】重點(diǎn)：培養(yǎng)基的配置方法難點(diǎn)：細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法【自主預(yù)習(xí)】根據(jù)教材完成練習(xí)冊15頁自主學(xué)習(xí)空間課題背景：1、尿素CO(NH2)2重要的農(nóng)業(yè)氮肥。只能被土壤中細(xì)菌分解為NH3才能被植物吸收利用。2、 CO(NH2)2 + H2O 細(xì)菌脲酶 CO2 +2NH3【合作探究】探究點(diǎn)一：篩選菌株實(shí)例-耐高溫DNA聚合酶的尋找：美國科學(xué)家布魯克（1966年）-在美國黃石公園的一個(gè)熱泉中發(fā)現(xiàn)耐熱細(xì)菌。這說明尋找菌株要到期相應(yīng)的 中尋找。(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于 生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí) 或 其他微生物生長。 (2)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許 種類的微生物生長，同時(shí) 和 其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)1、該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？ 碳源：: 氮源： 2、此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌？為什么？ 根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng) 微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng) ；的微生物.加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。思考與討論：篩選菌株的培養(yǎng)基KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g瓊脂 15.0g 例 1 ：土壤中的細(xì)菌能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣梢环N ()A尿素酶 B脲酶 C蛋白酶 D肽酶例2 ：在培養(yǎng)基中加入尿素(惟一氮源)，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于 ()A選擇培養(yǎng)基 B固體培養(yǎng)基 C液體培養(yǎng)基 D半固體培養(yǎng)基 探究點(diǎn)二：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目測定微生物數(shù)量的常用方法有 和 。1.稀釋涂布平板法-活體計(jì)數(shù)法（1）原理：當(dāng)樣品的 足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè) 。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。（2）操作方法：稀釋涂布平板 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。（3）統(tǒng)計(jì)原則 、選 30300 個(gè)菌落的平板統(tǒng)計(jì)。 、每個(gè)稀釋度取3個(gè)平板取其平均值。（4）統(tǒng)計(jì)結(jié)果： 每克樣品中的菌株數(shù)= 。C:某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)； V:所用稀釋液的體積； M:稀釋倍數(shù)。思考與討論：1、1個(gè)菌落代表幾個(gè)活菌？2、統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)和實(shí)際活的細(xì)菌數(shù)相等么？為什么？3、如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？2顯微鏡直接計(jì)數(shù)利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)算一定容積內(nèi)微生物數(shù)量。優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)微生物實(shí)際數(shù)目缺點(diǎn)： 3設(shè)置對照設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中 對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的 。例 3 ：某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)平均值為234，那么每克樣品中菌落數(shù)是（稀釋液體積為0.1ml） （ ）A、2.34108 B、 2.34109 C、234 D、23.4 例 4 ：用來判斷培養(yǎng)基是否起到對照作用要設(shè)置的對照是 （ ） A、未接種的選擇培養(yǎng)基 B、未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（全營養(yǎng)）C、接種了的選擇培養(yǎng)基 D、接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（全營養(yǎng)）探究點(diǎn)三：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求：綜合考慮，周密細(xì)致一、實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣-樣品的稀釋-制備培養(yǎng)基-涂布平板-微生物的培養(yǎng)與觀察-菌落計(jì)數(shù)二、實(shí)驗(yàn)操作：（一）土壤取樣 1、土壤是天然培養(yǎng)基 - 其微生物數(shù)量 、種類 。 2、土壤取樣： 取樣的位置：土壤中7090是細(xì)菌。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤層的 處中分布著絕大多數(shù)的細(xì)菌。從肥沃、濕潤的土壤中取樣。應(yīng)先 3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的 中。 （1）、測細(xì)菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液。（二）樣品稀釋 （2）、測放線菌：一般用103、104、105稀釋液。（3）、測真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液。 稀釋過程：在火焰旁將10g土樣加入盛有90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(體積為250 mL)，充分搖勻，吸取上清液 ，轉(zhuǎn)移至盛有 的生理鹽水的無菌大試管中，將土樣以1、101、102 依次等比稀釋至107稀釋度。 稀釋原則：確保平板上的菌落數(shù)在 之間。（三）制備培養(yǎng)基：準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基，將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯 選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為 ，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。1、 接種：依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107103稀釋度的順序分別吸取 進(jìn)行平板涂布操作。每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基、1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 2、培養(yǎng)：細(xì) 菌：3037，12d；（四）微生物的培養(yǎng)與觀察 放線菌: 2528, 57d； 霉 菌: 2528, 34d。 3、觀察：將涂布好的培養(yǎng)皿放在30溫度下培養(yǎng)，及時(shí)觀察記錄。 （五）細(xì)菌的計(jì)數(shù) 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出 ，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。提示：1、在一定的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出相同而穩(wěn)定的菌落特征。2、關(guān)注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等，是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。思考與討論：1、 為什么分離不同的微生物要選擇不同的稀釋度？2、 實(shí)驗(yàn)中，稱取土壤稀釋土壤都需要在火焰旁操作，為什么？3、本實(shí)驗(yàn)還有哪些需要注意要無菌操作的？ 4、土壤稀釋過程中，試管較多，怎么防止混淆？涂布平板由怎么防止？【內(nèi)化提升】1、通常用來作為菌種鑒定的重要依據(jù)是A菌落 B細(xì)菌形態(tài) C細(xì)菌體積 D細(xì)菌結(jié)構(gòu)2、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)能分解尿素的細(xì)菌，指示劑的顏色是A藍(lán)色 B紅色 C黑色 D棕色3、分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對培養(yǎng)基的要求是加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽A B C D4、在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，下列不屬于厭氧細(xì)菌生存環(huán)境的是A土壤深層 B人或動(dòng)物體內(nèi)寄生 C真空 D池塘淤泥5、測定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，而測定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是A細(xì)菌個(gè)體小，真菌個(gè)體大 B細(xì)菌易稀釋，真菌不易稀釋C細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多 D隨機(jī)的，沒有原因6、實(shí)驗(yàn)測定鏈霉素對3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂塊平板上畫3條等長的平行線（3條線均與下圖中的鏈霉素帶接觸），將平板置于37條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析以下敘述，不正確的是 A鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長 B鏈霉素對結(jié)核菌比對霍亂菌更有效C鏈霉素對結(jié)核菌比對傷寒菌更有效 D鏈霉素可以用于治療傷寒病人【高考鏈接】（2009、安徽）下列是關(guān)于“檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是