甘蔗生理生化測定指標(biāo).doc

此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 土壤含水量的測定 1 土壤速效氮 磷 鉀的測定 2 一 土壤速效 N 的測定 堿解擴(kuò)散法 2 二 土壤速效 P 的測定 4 三 土壤速效 K 的測定 NH4OAC浸提 火焰光度計(jì)測定法 5 土壤有機(jī)質(zhì)測定 稀釋熱法 6 光合作用強(qiáng)度測定 8 1 LI 6400 測定系統(tǒng)測定植物光合 8 2 TPS 1 光合作用測定系統(tǒng)操作方法 10 葉綠素含量的測定 11 植物組織中自由水和束縛水含量 相對(duì)含水量的測定 13 植物根系活力的測定 TTC 法 16 植物傷流液中糖和氨基酸的鑒定 18 膜透性的測定 20 植物組織中丙二醛含量的測定 20 脯氨酸含量的測定 22 過氧化物酶活性的測定 25 過氧化氫酶活性的測定 26 硝酸還原酶的測定 29 酸性 中性轉(zhuǎn)化酶 30 植物組織中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定 33 考馬斯亮藍(lán) G 250 染色法 33 植物組織中可溶性糖含量的測定 蒽酮比色法 34 葉片全 N P K 的測定 36 一 樣品的消化 36 二 葉片 N P K 的測定 37 葉片全 N 的測定 37 葉片全 P 的測定 38 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 葉片全 K 的測定 39 土壤含水量的測定土壤含水量的測定 一 基本原理 用取土鉆從田間取來土樣 在 100 105 恒溫條件下 烘烤到干燥狀 態(tài) 并用烘干前后的重量求出土樣的含水量占烘烤土樣多采用電熱恒溫干 燥箱 它能控制適宜的烘烤溫度 因此測定結(jié)果比較準(zhǔn)確 使用較廣 但 缺點(diǎn)是測定時(shí)間長 有的使用紅外干燥箱 雖然縮短了烘土?xí)r間 但因溫 度較高 容易影響測定精度 采用簡易加熱設(shè)備的 則因烘烤溫度不易控 制 精度較差 稱重烘干法是人工取土 勞動(dòng)強(qiáng)度較大 又不能定點(diǎn)觀測 土壤濕度的連續(xù)變化 往往某些有機(jī)質(zhì)在此溫度時(shí)能逐漸分解而失重或氧 化而增重 因此 用此法只能測得近似的水分含量 由于該法的準(zhǔn)確度和 精密度通常已達(dá)到土壤分析的要求 故測定土壤水分仍以烘箱法為準(zhǔn) 二 儀器設(shè)備 鋁盒 土鉆 天平 坩堝鉗 干燥器 電子天平 分析天平 電熱式 恒溫箱 三 測定步驟 1 在野外土壤水分觀測點(diǎn)用土鉆取樣裝入鋁盒 取濕土重量一般以 30 50g 為宜 太少容易產(chǎn)生太大誤差 每個(gè)觀測點(diǎn)應(yīng)作三次重復(fù) 2 稱鋁盒重 取有編號(hào)的鋁盒一個(gè) 洗凈 放入恒溫箱中 敞開蓋子 在 105 110 烘干 30 分鐘 用坩堝鉗取出放在干燥器中蓋好蓋子 冷卻到室 溫 大約 20 分鐘 在分析天平上稱重 然后再烘 20 分鐘稱重 直到恒重 為止 此為鋁盒重 W1 3 取代表性樣品約 15 20 克裝入鋁盒 在室內(nèi)將裝有土樣的鋁盒稱重 在 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 電子天平上用一張小紙稱風(fēng)干土壤樣品 并將土壤平鋪上述已知重鋁盒中 蓋上蓋子 在分析天平上稱量出鋁盒加濕土的質(zhì)量 W2 每個(gè)樣品至少重 復(fù)三次 4 揭開鋁盒蓋 放入烘箱中 在 105 下烘至恒重 6 8h 用坩堝鉗從烘箱 中取出鋁盒 蓋好盒蓋后放入底部有 CaCl2的干燥器中約 30 分鐘 如無干 燥器則可放入磁盤或木盤中待至不太燙手時(shí)稱質(zhì)量 然后 再將樣品放入 烘箱中烘烤 2 3 小時(shí) 馬上在分析天平上稱重稱量 即鋁盒加烘干土的重 量 W3 一直到前后兩次稱量相差不超過 0 05 克時(shí)為止 三 結(jié)果計(jì)算 以烘干土壤為基礎(chǔ)水分的百分?jǐn)?shù) 23 31 W W 100 W W 土壤含水量 以風(fēng)干土壤為基礎(chǔ)水分的百分?jǐn)?shù) 23 21 W W 100 W W 土壤含水量 式中 W2 濕土 鋁盒重 g W3 烘干士 鋁盒重 g W1 鋁盒重 g 土壤速效氮 磷 鉀的測定土壤速效氮 磷 鉀的測定 一 土壤速效 N 的測定 堿解擴(kuò)散法 1 原理 用 1 0N 氫氧化鈉水解土壤樣品 使土壤潛在有效氮 轉(zhuǎn)化為氨 氣狀態(tài) 不斷逸出 由硼酸吸收 用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定 然后計(jì)算出水解性氮的 含量 2 儀器及試劑配制 主要儀器 擴(kuò)散皿 半微量滴定管 恒溫箱 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 試劑配制 1 1 0N 氫氧化鈉 稱取化學(xué)純氫氧化鈉 40 克 用水解溶解后冷卻定容 1 升 2 硼酸指示劑液 稱取硼酸 H3BO3 20 克加水 900 毫升稍稍加熱溶 解 冷卻 加混合指示劑 0 099 克溴甲酚綠和 0 066 克甲基紅溶于 100 毫 升乙醇中 20 毫升 然后以 0 1N 氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至紅紫色 PH 約 5 0 最后加入水稀疏至 1000 毫升 使溶液混合均勻 貯存于塑料瓶中 3 0 005mol L 1 2H2SO4 標(biāo)準(zhǔn)溶液 量取 H2SO4 化學(xué)純 2 83mL 加蒸餾水稀釋至 5000mL 然后用標(biāo)準(zhǔn)堿或硼酸標(biāo)定之 此為 0 020mol L 1 2H2SO4 標(biāo)準(zhǔn)溶液 再將此標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確地稀釋 4 倍 即得 0 005mol L 1 2H2SO4 標(biāo)準(zhǔn)液 4 堿性膠液 取阿拉伯膠 40 0g 和水 50mL 在燒杯中熱溫至 70 80 攪拌促溶 約 1h 后放冷 加入甘油 20mL 和飽和 K2CO3水溶液 20mL 攪 拌 放冷 離心除去泡沫和不溶物 清液貯于具塞玻瓶中備用 3 操作步驟 取通過 60 號(hào)篩的風(fēng)干樣品 2 00 克于擴(kuò)散皿外室 水平的輕輕旋轉(zhuǎn)擴(kuò)散 皿 使樣品鋪平 在擴(kuò)散皿內(nèi)室加入 2 硼酸指示劑液 2 毫升 然后在擴(kuò)散 皿外室邊緣涂上堿性甘油 蓋上毛玻璃 并旋轉(zhuǎn)數(shù)次 以使毛玻璃與皿邊 完全粘住 再慢慢轉(zhuǎn)開毛玻璃的一邊 使擴(kuò)散皿漏出一條縫 迅速加入 1 0N 氫氧化鈉 5 毫升于擴(kuò)散皿外室 立即用毛玻璃蓋好 水平輕輕旋轉(zhuǎn)擴(kuò) 散皿 使溶液與土壤充分混勻 用橡皮筋固定 隨后小心的放入 40 度的恒 溫箱中 24 小時(shí)取出 以 0 01N 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定擴(kuò)散皿內(nèi)室硼酸溶液吸收 的氨量 終點(diǎn)是由藍(lán)綠色轉(zhuǎn)變紅紫色 記下所用的標(biāo)準(zhǔn)酸量 V 4 計(jì)算結(jié)果 3 cV V Nmg kg10 m A 1 0 14 0 堿解氮 含量 式中 c 0 005mol L 1 2H2SO4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 V 樣品滴定時(shí)用去 0 005mol L 1 2H2SO4 標(biāo)準(zhǔn)溶液體積 mL V0 空白試驗(yàn)滴定時(shí)用去標(biāo)準(zhǔn)液體積 mL 14 0 氮原子的摩爾質(zhì)量 g mol 1 W 樣品質(zhì)量 g 103 換算系數(shù) 二 土壤速效 P 的測定 鮑士旦主編 土壤農(nóng)化分析 第三版 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 2000 12 74 83 中性和石灰性土壤速效磷的測定 0 5M 碳酸氫鈉法 1 原理 石灰性土壤由于大量游離碳酸鈣存在 不能用酸溶液提取有效磷 一 般用碳酸鹽的堿溶液 由于碳酸根的同離子效應(yīng) 碳酸鹽的堿溶液降低碳酸 鈣的溶解度 也就降低了溶液中鈣的濃度就有利于磷酸鈣鹽的提取 同時(shí) 碳酸鹽的堿溶液 也降低了鋁和鐵的活性 有利于磷酸鋁和磷酸鐵的提取 2 儀器及試劑配制 主要儀器 往復(fù)振蕩機(jī) 分光光度計(jì) 試劑配制 1 0 5M 碳酸氫鈉浸提液 溶解 42 0 克碳酸氫鈉于 800 毫升水中 以 0 5N 氫氧化鈉調(diào)節(jié)浸提液 pH 至 8 5 此溶液暴于空氣可因失去 CO2而使 pH 增高 可于液面加一層礦物油保存 貯存超過一個(gè)月 應(yīng)檢查 pH 是否 改變 2 無磷活性炭 活性炭常常含有磷 應(yīng)做空白試驗(yàn) 檢查有無磷存在 含磷較多 須用 2N HCl 浸泡過夜 用蒸餾水多次后 再用 0 5M 碳酸氫鈉 浸泡過夜 在平瓷漏斗上抽氣過濾 每次用少量蒸餾水沖洗多次 并檢查 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 到無磷為止 含磷較少可直接用碳酸氫鈉處理即可 3 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱取 105 烘干過 4 8 小時(shí)的分析純 KH2PO4 0 2197 克于小燒杯中 以少量水溶解 將溶液全部洗入 1000 毫升的容量 瓶中 然后加 H2SO4 5 毫升 用水定容至刻度搖勻 此溶液為磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 50 g mL P 吸取 50 毫升此溶液稀釋至 500 毫升 即溶液為磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 5 g mL P 4 7 5N 硫酸鉬銻貯存液 A 5g L 1酒石酸氧銻鉀溶液 取酒石酸氧銻鉀 0 5g 溶解于 100mL 水 中 B 鉬酸銨 硫酸溶液 稱取鉬酸銨 10g 溶解于 450mL 水中 緩慢地 加入 153mL 濃 H2SO4 邊加邊攪 再將上述 A 溶液加入到 B 溶液中 最 后加水至 1L 充分搖勻 貯于棕色瓶中 此為鉬銻抗混合液 5 鉬銻抗混合顯色劑 于 100 毫升鉬銻貯存液中 加入 1 5 克左旋抗壞 血酸 此試劑有效期 24 小時(shí) 宜用前配制 3 操作步驟 稱取通過 20 目篩的風(fēng)干樣品 5 00 克于 200 毫升三角瓶中 加入 0 5M 碳酸氫鈉溶液 100 毫升 再加一角勺無磷活性炭 塞緊瓶塞 在振蕩機(jī)上 振蕩 30 分鐘 立即用無磷濾紙過濾 濾液承接于 100 毫升三角瓶中 立 即用無磷濾紙過濾 濾液承接于 100mL 三角瓶中 吸取濾液 10mL 含磷 量高時(shí)吸取 2 5 5 0mL 同時(shí)應(yīng)補(bǔ)加 0 5M 碳酸氫鈉浸提液至 10mL 于 150mL 三角瓶中 再用滴定管準(zhǔn)確加入蒸餾水 35mL 然后移液管加入鉬 銻抗試 5mL 搖勻 放置 30min 后 用 880nm 或 700nm 波長波長進(jìn)行比色 以空白液的吸收值為 0 讀出待測液的吸收值 A 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別取 5 P g mL 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 0 1 2 3 4 5mL 于 150mL 三角瓶 中 再加入 0 5M 碳酸氫鈉 10mL 準(zhǔn)確加水使各瓶的總體積達(dá)到 45mL 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 搖勻 最后加入鉬銻抗試劑 5mL 混勻顯色 同待測液一樣進(jìn)行比色 繪 成標(biāo)準(zhǔn)曲線 最后溶液中磷的濃度分別為 0 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 g mL 4 計(jì)算結(jié)果 3 V mg kg1000 m 10 ts k A 1 土壤中有效磷 P 含量 式中式中 p 由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出 P 的質(zhì)量濃度 g mL V 顯色時(shí)定容體積 ts 為分取倍數(shù) 即浸提液總體積與顯色對(duì)吸取浸提液體積之比 m 風(fēng)干土質(zhì)量 g k 將風(fēng)干土換算成烘干土質(zhì)量的系數(shù) 103將 g 換算成 mg 三 土壤速效 K 的測定 NH4OAc 浸提 火焰光度計(jì)測定法 1 原理 以 NH4OAc 作為浸提劑與土壤膠體陽離子起交換作用 NH4OAc 浸提劑常用火焰光度計(jì)直接測出 為了抵消 NH4OAc 的干擾影響 標(biāo)準(zhǔn)鉀 溶液也需要用 1N NH4OAc 配制 2 儀器及試劑配制 主要儀器 火焰光度計(jì) 往返式振蕩機(jī) 試劑配制 1 1N 中性醋酸銨溶液 稱取化學(xué)純醋酸銨 77 09 克加水稀釋 定容至 近 1L 用 HOAc 或 NaOH 調(diào)至 PH7 0 然后稀釋至 1 升 2 鉀的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確稱取烘干 105 4 6 小時(shí) 的分析純 KCl 0 1907 克溶于水中 定溶至 1 升 即含 K100 g mL 然后分別準(zhǔn)確吸取此 100 g mL K 標(biāo)準(zhǔn)液 0 2 5 5 0 10 0 15 0 20 0 40 0mL 放入 100mL 容量瓶中 用 1N 中性醋 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 酸銨溶液定容 即得 0 2 5 5 10 15 20 40 g mL K 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 3 操作步驟 稱取通過 1 毫米篩孔的風(fēng)干土 5 00 克于 100 毫升三角瓶中 加入 50 毫升 1N 中性 NH4OAc 溶液 塞緊橡皮塞 振蕩 30min 用干的普通定性 濾紙過濾 濾液盛于小三角瓶中 同鉀標(biāo)準(zhǔn)系列溶液一起在火焰光度計(jì)上 測定 記錄其檢流計(jì)上的讀數(shù) 然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其濃度 4 結(jié)果計(jì)算 1 1 V mg kgg mL W 土壤速效鉀 待測液 式中 V 加入浸提液毫升數(shù) W 樣品烘干重 克 土壤有機(jī)質(zhì)測定 稀釋熱法 土壤有機(jī)質(zhì)測定 稀釋熱法 一 原理 稀釋熱法 水合熱法 是利用濃硫酸和重鉻酸鉀迅速混和時(shí)所產(chǎn)生的 熱來氧化有機(jī)質(zhì) 以代替外加熱法中的油浴加熱 操作更加方便 由于產(chǎn) 生的熱 溫度較低 對(duì)有機(jī)質(zhì)氧化程度較低 只有 77 二 儀器及試劑配制 儀器 試劑 1 1mol L 1 6K2Cr2O7 溶液 準(zhǔn)確稱取 K2Cr2O7 分析純 105 烘干 49 04g 溶于水中 稀釋至 1L 2 0 4mol L 1 6 K2Cr2O7 的基準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱取 K2Cr2O7 分析 純 在 130 烘 3h 19 613g 于 250mL 燒杯中 以少量水溶解 將全部洗 入 1000mL 容量瓶中 加入濃 H2SO4約 70mL 冷卻后用水定容至刻度 充 分搖勻備用其中含硫酸濃度約為 2 5mol L 1 2 H2SO4 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 3 0 5mol LFeSO4溶液 稱取 FeSO4 7H2O140 溶于水中 加入濃 H2SO415mL 冷卻稀釋至 1L 或稱取 Fe NH4 2 SO4 6H2O196 1g 溶 解于含有 200mL 濃 H2SO4的 800mL 水中 稀釋至 1L 此溶液的準(zhǔn)確濃度 以 0 4mol L 1 6 K2Cr2O7 的基準(zhǔn)溶液標(biāo)定之 即準(zhǔn)確分別吸取 3 份 0 4mol L 1 6 K2Cr2O7 基準(zhǔn)溶液各 25mL 于 150mL 三角瓶中 加入鄰啡 羅琳指示劑 2 3 滴 或加 2 羧基代二苯胺 12 15 滴 然后用 0 5mol LFeSO4溶液滴定至終點(diǎn) 并計(jì)算出 FeSO4的準(zhǔn)確濃度 硫酸亞鐵 FeSO4 溶液在空氣中易被氧化需重新配制或以標(biāo)準(zhǔn)的 K2Cr2O7溶液每天 標(biāo)定之 4 鄰啡羅琳指示劑 稱取鄰啡羅琳 GB1293 77 分析純 1 485g 與 FeSO4 7H2O0 695g 溶于 100mL 水中 5 濃硫酸 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 土樣的測定 準(zhǔn)確稱取 0 5000g 土壤樣品于 500mL 的三角瓶中 然后準(zhǔn)確加入 1mol L 1 6K2Cr2O7 溶液 10mL 干土壤樣品中 轉(zhuǎn)動(dòng)瓶子使之混合均勻 然后加濃 H2SO420mL 將三角瓶緩緩轉(zhuǎn)動(dòng) 1min 促使混合以保證試劑與 土壤充分作用 并在石棉板上放量約 30min 加水稀釋至 250mL 加 3 4 滴鄰啡羅琳指示劑 用 0 5mol LFeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至近終點(diǎn)時(shí)溶液顏色 由綠變成暗綠色 逐滴加入 FeSO4直至生成磚紅色為上 用同樣的方法做 空白測定 不加土樣 2 結(jié)果計(jì)算 c VV3 0 1 33 g kg1000 3 1 0 10 土壤有機(jī)質(zhì) 1 724 烘干土重 式中 1 33 為氧化校正系數(shù) c 為 0 5mol LFeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃 度 V0 空白滴定用體積 mL V 樣品滴定用去體積 mL 10 3將 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 mL 換算為 L 3 0 1 4 碳原子的摩爾質(zhì)量 g mol 1 724 土壤有機(jī)碳 換成土壤有機(jī)質(zhì)的平均換算系數(shù) 光合作用強(qiáng)度測定光合作用強(qiáng)度測定 1 LI 6400 測定系統(tǒng)測定植物光合測定系統(tǒng)測定植物光合 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 LI 6400 是一種開放型光合作用測定系統(tǒng) 即從進(jìn)氣口進(jìn)入儀器主機(jī) 的氣體經(jīng)主機(jī)頭部一分為二 25 進(jìn)入?yún)⒖細(xì)怏w紅外分析儀 75 進(jìn)入樣品 氣體紅外分析儀 然后氣體各自排出儀器 在光合作用測定過程中 有兩種光源可供選擇 一是自然光 用透明葉 室 二是自動(dòng)光源 為紅光 此時(shí)將葉室的透明部分換成含產(chǎn)生光的部分 用自動(dòng)光源時(shí)需事先設(shè)定程序 用自動(dòng)光源測定時(shí)可測定植物的最大光合 作用 Amax 即達(dá)到光飽和點(diǎn)時(shí)的光合作用 以及光合作用光照強(qiáng)度曲線 測定時(shí) 儀器根據(jù)參考?xì)怏w與葉室氣體 CO2濃度差 氣體流速 葉面 積等參數(shù)計(jì)算光合作用或呼吸作用速率 根據(jù)參考?xì)怏w與葉室氣體 H2O 濃 度差 氣體流速 葉面積等參數(shù)計(jì)算蒸騰速率 根據(jù)參考?xì)怏w H2O 與葉室 H2O 濃度與蒸騰速率計(jì)算葉面水分總導(dǎo)度 又據(jù)此以葉片兩面的氣孔密度 比率計(jì)算水分氣孔導(dǎo)度即氣孔導(dǎo)度 其倒數(shù)即為氣孔阻力 根據(jù)氣孔水分導(dǎo) 度 葉片兩面氣孔密度比率 葉面邊界層阻力計(jì)算氣孔對(duì) CO2的導(dǎo)度 最 后 據(jù)氣孔 CO2導(dǎo)度 蒸騰速率 參考?xì)怏w CO2濃度 光合速率計(jì)算胞間 CO2濃度 Ci LI 6400 能夠測定的植物光合與水分生理指標(biāo)有 凈光合 呼吸 速 率 蒸騰速率 總氣孔導(dǎo)度 氣孔導(dǎo)度或氣孔阻力 胞間 CO2濃度等 性能指標(biāo)性能指標(biāo) LI 6400 主要性能指標(biāo)有 工作溫度 0 50 相對(duì)濕度 10 80 92 時(shí)儀器拒絕工作或停機(jī) CO2 紅外分析儀測定范圍 0 3000 molmol 1 分辨 率 0 1 molmol 1 在 0 1500 molmol 1之間誤差為 5 molmol 1 1500 3000 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 之間為 10 molmol 1 H2O 紅外分析儀測定范圍為 0 7kPa 或露點(diǎn)溫度 Dew point 40 分辨率 0 001kPa 誤差 0 006kPa 光感應(yīng)器測定范圍為 0 3000 molm 2S 1 分辨率 1 molm 2s 1 誤差 7 基本操作要點(diǎn)基本操作要點(diǎn) 一 對(duì) LI 6400 測定系統(tǒng)調(diào)零 1 開機(jī)預(yù)熱 20 分鐘 2 進(jìn)入 Open 開機(jī) 狀態(tài) 按 f3 鍵 進(jìn)入 Calibration 標(biāo)定 狀態(tài) 3 將 CO2去除劑 堿石灰 和水分干燥劑 均在主機(jī)左 側(cè) 上方的開關(guān)徹底打開 逆時(shí)針方向 這樣氣流經(jīng) CO2去除劑和水分干燥 劑后 變成無 CO2和 H2O 的空氣進(jìn)入紅外分析部位 4 選擇 FlowRateZero 流 速調(diào)零 調(diào)氣體流速為 0 以電信號(hào) 1mVmin 1為準(zhǔn) 用熒屏左右的上下 紅色箭頭鍵調(diào)節(jié) 下同 5 選擇 IRGAZero 紅外氣體分析儀調(diào)零 首先調(diào) CO2為零 再調(diào) H2O 為零 用 f1 f2 f3 功能鍵調(diào)之 要求 CO2達(dá)到 0 1Lmolmol 1 H2O 0 01mmolmol 1 6 完成上述步驟后 將 CO2去除劑 和 H2O 干燥劑開關(guān)徹底關(guān)閉 順時(shí)針方向 說明書上未提及此步驟 然后 將探頭上進(jìn)入樣品分析室的塑料管 帶黑色環(huán)者 打開 并與標(biāo)準(zhǔn) CO2鋼瓶塑 料管連接 7 選擇 IRGASpan 紅外氣體分析儀調(diào)跨度 然后分別調(diào) CO2 A 和 CO2 B 參考?xì)怏w和樣品氣體 CO2紅外分析儀 下同 用上下箭頭調(diào)節(jié) 直至與標(biāo)準(zhǔn)氣體 CO2 濃度相差 1Lmolmol 1 以內(nèi) 8 完成上述標(biāo)定后 選 擇 StoreFlowRate 流速調(diào)零存盤 和 StoreZero SpanInformation 紅外分析儀 調(diào)零 調(diào)跨度存盤 存儲(chǔ)標(biāo)定參數(shù) 這樣儀器即可在標(biāo)定的狀態(tài)下工作 二 測定 1 在 Open 狀態(tài)下 按 f4 鍵 進(jìn)入 New Measurement 測定 狀態(tài) 按數(shù)字 2 后用 f4 設(shè)定溫度 與環(huán)境溫度不要相差太大 用 f5 設(shè)置光強(qiáng) 2 打開葉室 夾 住被測植物葉片 使葉在葉室內(nèi)的方向與其著生方向一致 用自動(dòng)光源時(shí)不必 作此要求 3 待熒屏上 CO2 A CO2 B H2O A H2O B 光合作用 蒸騰 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 作用等顯示的數(shù)據(jù)基本穩(wěn)定后 約需 3 分鐘 記錄數(shù)據(jù) 4 記錄數(shù)據(jù)在新的 測量模式下按 1 f1 打開一個(gè)文件 輸入文件名 記錄號(hào) 當(dāng)進(jìn)行下一 片葉測定時(shí) 用 remark 功能鍵重新做記錄 5 按數(shù)字 1 觀察儀器測定和存 儲(chǔ)數(shù)據(jù)的次數(shù) 待完成給定的次數(shù)后 按 f3 關(guān)閉文件 進(jìn)行下次測定 6 當(dāng)所有的植物都測完以后 把儀器帶回實(shí)驗(yàn)室 LI 6400 與 PC 微機(jī)兼容的 軟件 將其裝入計(jì)算機(jī)后可通過電纜將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)入計(jì)算機(jī) 2 TPS 12 TPS 1 光合作用測定系統(tǒng)操作方法光合作用測定系統(tǒng)操作方法 1 連接葉室 氣路 R A 與主機(jī)上的接口 R A 對(duì)應(yīng)連接 2 打開主機(jī)電源時(shí)顯示的第一個(gè)菜單是主菜單 1 REC 測定與記錄 2 校正 3 數(shù)據(jù)輸出 4 清除內(nèi)存 5 時(shí)鐘校正 6 診斷 按 1 選擇葉室 1 標(biāo)準(zhǔn)葉室 2 通用型葉室 按 2 1REC 記錄類型 A 用內(nèi)部時(shí)鐘設(shè)置時(shí)間進(jìn)行自動(dòng)記錄 M 按 Record 鍵 進(jìn)行手動(dòng)記錄 按 1 鍵可以在 A 和 M 之間轉(zhuǎn)換 2INT 每次記錄的時(shí)間間隔 FLO 葉室氣體的流量 Y N 1 LIGHT 設(shè)置 SUN 為自然光 LAMP 為人工光源 2 LEAF AREA 輸入夾入葉室內(nèi)的實(shí)際葉面積 以 cm2為單位 Y N 1P 是小區(qū)號(hào) 用戶輸入 用于識(shí)別不同處理的測定記錄 R 是記錄號(hào) 如果改變小區(qū)號(hào) 記錄號(hào)重新設(shè)置為 01 FREE RECORDS nnn 存儲(chǔ)器能夠存儲(chǔ)測定結(jié)果的數(shù)量 Y 進(jìn)入測定菜單狀態(tài) 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 C 為參比 CO2濃度 nnn 為分析氣與參比氣 CO2濃度差值 Q 為量 子通量密度 H 為參比水蒸氣壓 nn n 為分析氣與參比氣水蒸氣壓之 間的差值 T 為葉室溫度 X X 轉(zhuǎn)換鍵 E 蒸騰速率 mmol m 2 s 1 G 氣孔導(dǎo)度 mmol m 2 s 1 T 葉片溫度 A 凈光合速率 mol m 2 s 1 正值為凈光合速率 負(fù)值為 呼吸速率大于光合速率 CI 細(xì)胞間隙 CO2濃度 在測定狀態(tài)下按 1 2 3 返回到設(shè)置菜單 1 用于改變記錄方式 2 用于 改變光源或葉面積 3 用于改變小區(qū)號(hào) 修改完畢 返回測定狀態(tài) 按 Y 鍵 3 選擇待測葉片夾入同化室 給以適當(dāng)?shù)墓庹?觀察 CO2值變化 待 CO2值穩(wěn)定后 40 秒左右 按 X 轉(zhuǎn)換鍵 觀察記錄結(jié)果 或按 0 R 存儲(chǔ)測定結(jié)果 一個(gè)葉片的測定結(jié)束 進(jìn)行另一葉片的測定 測定結(jié)束 按 N 鍵返回到主菜單 關(guān)機(jī) 葉綠素含量的測定葉綠素含量的測定 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出版社 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出版社 1992 145 150 基本原理基本原理 根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收 利用分光光度計(jì)在某一特 定波長測定其吸光度 即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量 根據(jù)朗 伯 比爾定律 某有色溶液的吸光度 A 與其中溶質(zhì)濃度 C 和液層厚度 L 成 正比 即 A CL 式中 比例常數(shù) 當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位 液 層厚度為 1cm 時(shí) 為該物質(zhì)的吸光系數(shù) 各種有色物質(zhì)溶液在不同波長 下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得 葉綠素 a 和葉綠素 b 的光譜吸收鋒雖然有明顯的差異 但吸收曲線彼 此又有重疊 這種情況下 可根據(jù) Lambert Beer 定律 通過代數(shù)方法 計(jì) 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對(duì)光密度的影響 最后分別得到兩種組 分的含量 OD1 82 04Ca 9 27Cb 1 OD2 16 75Ca 45 6Cb 2 式中 Ca 為組分 a 葉綠素 a 的濃度 Cb 為組分 b 葉綠素 b 的濃度 將表中數(shù)值代入上式 1 2 經(jīng)整理 得到下式 Ca 0 0127 OD1 0 00269 OD2 Cb 0 0229 OD2 0 00468 OD1 如果把 Ca Cb 的單位從原來的 g L 改為 mg L 則上式可改寫為下列 形式 Ca 12 7 OD1 2 69 OD2 3 Cb 22 9 OD2 4 68 OD1 4 Ct Ca Cb 8 04 OD1 20 29 OD2 5 式中 Ct 為總?cè)~綠素的濃度 單位是 mg L 利用式 3 4 5 可以計(jì)算葉綠素的量 一 材料 儀器設(shè)備及試劑 一 材料 新鮮 或烘干 的植物葉片 二 儀器設(shè)備 1 分光光度計(jì) 2 電子天平 感量 0 01g 3 棕色容 量瓶 4 定量濾紙 5 吸水紙 6 擦鏡紙 三 試劑 96 乙醇 80 丙酮 去離子水或蒸餾水 二 實(shí)驗(yàn)步驟丙酮乙醇水混合液法 丙酮乙醇混合液法 1 取新鮮植物葉片 或其它綠色組織 或干材料 擦凈組織表面污物 剪碎 去掉中脈 混勻 2 稱取剪碎的新鮮樣品0 5g 共2份 放入25mL的容量瓶中 然后加 入乙 醇 丙酮 水 4 5 4 5 1 的提取液到刻度 靜置暗處提取12小時(shí) 準(zhǔn)確稱取0 1左右 放入具塞得三角瓶或刻度試管中 加混合提取液10ml 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 蓋塞 在室溫下 10 30度 暗處提取 直至材料變白 因材料不同需1 8h 對(duì)于少量樣品如需短時(shí)間內(nèi)測定 則應(yīng)將三角瓶或試管放在50 60度 的水浴中快速提取20min 1h即可變白 3 取上清液在663nm和645nm波長下測定光密度 三 計(jì)算方法及公式 V 9mL 葉綠素a含量 W VAA 1000 69 2 7 12 645663 645663 22 90A 4 68A V b 1000W 葉綠素含量 645663 20 2A 8 02A V 1000W 葉綠素總含量 植物組織中自由水和束縛水含量 相對(duì)含水量的測定植物組織中自由水和束縛水含量 相對(duì)含水量的測定 一 原理 自由水未被細(xì)胞原生質(zhì)膠體顆粒吸附而可以自由移動(dòng) 蒸發(fā)和結(jié)冰 也可以作為溶劑 束縛水則被細(xì)胞原生成膠體顆粒吸附而不易移動(dòng) 因而 不易被奪取 也不能作為溶劑 基于上述特點(diǎn)以及水分依據(jù)水勢差而移動(dòng) 的原理 將植物組織浸入高濃度 低水勢 的糖溶液中一定時(shí)間后 自由 水可全部擴(kuò)散到糖液中 組織中便留下束縛水 自由水?dāng)U散到糖液后 相 當(dāng)于增加了溶液中溶劑 便增加了溶液的重量 同時(shí)降低了溶液的濃度 測定降低了的糖液的濃度 再根據(jù)原先已知的高濃度溶液的濃度及重量 可求出濃度降低了的糖液的重量 用濃度降低了的溶液的重量減去原來高 濃度溶液的重量即為植物組織中的自由本的重量 即擴(kuò)散到高濃度溶液中 的水的重量 最后 用同樣的植物組織的總含水量減去此自由水的含量 即是植物組織中束縛水的含量 二 儀器設(shè)備及試劑配制 儀器設(shè)備 阿貝折射儀 分析天平或電子頂載天平 感量 0 1mg 烘箱 干燥器 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 稱量 瓶 打孔器 面積 0 5cm2左右 燒杯 瓷盤 托盤大平 感量 0 1g 量 筒 試劑 重量百分濃度為 60 65 的蔗糖溶液 用托盤天平稱取蔗糖 60 65g 置 燒杯中 加蒸餾水 40 35g 使溶液總重量為 100g 溶解后備用 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 3 周祖貴 黎兆安主編 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 廣西 大學(xué)內(nèi)部資料 2005 5 6 1 植物組織中總含水量植物組織中總含水量的測定 1 取稱量瓶 3 只 三次重復(fù) 下同 依次編號(hào)并分別準(zhǔn)確稱重分別準(zhǔn)確稱重 2 在田間選取生長一致的待測的植物數(shù)株 各選部位 長勢 葉齡 一致的有代表性葉數(shù)片 用打孔器鉆取小圓片 50 片 注意避開粗大的葉脈 立即裝到上述稱量瓶中 每瓶隨機(jī)裝入 50 片 蓋緊瓶蓋并精確稱重精確稱重 3 將稱量瓶連同小圓片置烘箱中 105 下烘 15min 以殺死植物組織 細(xì)胞 再于 80 90 下烘至恒重 稱重時(shí)須置干燥器中 持冷卻后稱 設(shè)稱量瓶重量為 W1 稱量瓶與小圓片的重量為 W2 稱量瓶與烘干的小 圓片的重量為 W3 以上重量單位均為 g 下同 則植物組織的總含水量 可按下式計(jì)算 23 21 WW 100 WW 植物組織的總含水量 2 植物組織中自由水含量自由水含量的測定 1 另取稱量瓶 3 個(gè) 編號(hào)并分別準(zhǔn)確稱重 2 用打孔器打取小葉圓片 150 片 植物材料的選取同上 立即隨機(jī) 裝入三個(gè)稱量瓶中 每瓶裝 50 片 蓋緊瓶蓋并立即稱重 3 三個(gè)稱量瓶中各加入 60 65 的蔗糖溶液 5mL 左右 再分別準(zhǔn)確 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 稱重 4 各瓶于暗處置 4 6h 經(jīng)減壓處理后 只需在暗處置 lh 其間不 時(shí)輕輕搖動(dòng) 到預(yù)定的時(shí)間后 充分搖動(dòng)溶液 用 WZS 1 阿貝折射儀分別 測定各瓶糖液濃度各瓶糖液濃度 同時(shí)測定原來的糖液濃度原來的糖液濃度 設(shè)稱量瓶重量為 W1 稱量瓶與小圓片的重量為 W2 稱量瓶與小圓片及 糖液的重量為 W3 糖液原來的濃度為 C1 浸過植物組織后的糖液的濃度為 C2 則植物組織中自由水的百分含量可由下式算出 12 42 2 21 CC WW C 100 WW 植物組織中自由水的含量 3 植物組織中束縛水含量組織中束縛水含量的計(jì)算 植物組織中束縛水的含量 組織中總含水量 組織中自由水含量 4 植物相對(duì)含水量相對(duì)含水量的測定方法 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出 版社 版社 1992 119 120 根據(jù)鄒琦主編的 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 蔗葉取樣 稱鮮重 G1 浸 水 5 6 小時(shí) 取出擦干 稱重 再浸水 1 小時(shí) 取出擦干 稱重 直至樣品 飽和重量近似 得飽和鮮重 G2 然后烘干至恒重 稱干重 G3 按下 式計(jì)算 GG 100 GG 13 23 相對(duì)含水量 自然飽和虧 自然飽和虧 100 相對(duì)含水量 植物根系活力的測定 植物根系活力的測定 TTCTTC 法 法 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出版社 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出版社 1992 142 143 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 一 原理 氯化三苯基四氮唑 TTC 是標(biāo)準(zhǔn)的氧化還原色素 氧化還原電位為 80mv 其氧化態(tài)無色并溶于水 還原態(tài)則是不溶于水的紅色物質(zhì) TTCH 它在空氣中不會(huì)自動(dòng)氧化 相當(dāng)穩(wěn)定 所以可用 TTC 作為脫氫酶 如琥珀 酸脫氫酶 的氫受體 脫氫酶活性與根系活力成正相關(guān) 由紅色生產(chǎn)物質(zhì) 的量 還原力 即可測定根系活力 二 儀器設(shè)備及試劑 儀器設(shè)備 分光光度什 分析天平 感量 0 1mg 電于頂載天平 感量 0 1g 溫箱 研缽 三角瓶 漏斗 量筒 吸量管 刻度試管 試管架 容量瓶 藥勺 石英砂適量 燒杯 試劑 1 乙酸乙酯 分析純 2 次硫酸鈉 Na2S2O4 分析純 粉末 3 1 TTC 溶液 準(zhǔn)確稱取 TTC1 0g 溶于少量水中 定容到 100mL 用時(shí)稀釋至需要的濃度 4 磷酸緩沖液 1 15 mol L pH 7 5 1mol L 硫酸 用量簡取比重 1 84 的濃硫酸 55 mL 邊攪拌邊加 入盛有 500mL 蒸餾水的燒杯中 冷卻后稀釋至 1000 mL 6 0 4mol L 琥珀酸 稱取琥珀酸 4 72g 溶于水中 定容至 100mL 即 成 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 TTC 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 0 4 TTC 溶液 0 2mL 放入 10 mL 容量瓶 加少許 Na2S2O4粉搖勻后立即產(chǎn)生紅色的物質(zhì) 再用乙酸乙酯定容至刻度 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 顯勻 然后分別取此液 0 25mL 0 5mL 1 0mL 1 5mL 2 0mL 置 10mL 容 量瓶中 用乙酸乙酯定容至刻度 即得到含 25 g 50 g 100 g 150 g 200 g 的標(biāo)準(zhǔn)比色系列 以乙酸乙酯為 空白 在 485nm 波長下測定吸光度 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 2 稱取根尖樣品 0 5g 放入 10mL 燒杯中 加入 0 4 TTC 溶液和磷酸 緩沖液的等量混合液 10mL 把根充分浸沒在溶液內(nèi) 在 37 下暗保溫 1 3 h 此后加入 lmol L 硫酸 2mL 以停止反應(yīng) 并準(zhǔn)確計(jì)時(shí) 與此同時(shí)做一 空白實(shí)驗(yàn) 先加入硫酸后加入根樣品 37 下暗保溫 其溶液濃度 操作 步驟同上 3 把根取出 吸干水分后與乙酸乙酯 3 4mL 和少量石英砂一起在研 缽內(nèi)磨碎 以提出紅色物質(zhì) 紅色提取被移入試管 井用少量乙酸乙酯把 殘?jiān)礈於?皆移入試管 最后加乙酸乙酯使總量為 10 mL 用分光 光度計(jì)在波長 485nm 下比色 以空白試驗(yàn)作對(duì)照測出吸光度 查標(biāo)準(zhǔn)曲線 即可求出四氮唑還原量 4 結(jié)果計(jì)算 mgg h 四氮唑還原量 單位根鮮重的四氮唑還原強(qiáng)度 根重時(shí)間 修改后計(jì)算公式 時(shí)間 根重 還原量 還原速率 hg gTTC C TT 植物傷流液中糖和氨基酸的鑒定植物傷流液中糖和氨基酸的鑒定 王晶英 敖紅等編 植物生理生化試驗(yàn)技術(shù)與原理 東北林業(yè)大學(xué)出版社 2003 99 101 植物根系是植物吸收水分和礦質(zhì)元素的重要器官 也是許多重要物質(zhì) 的合成和貯存器官 傷流液中含有糖 氨基酸 激素等許多物質(zhì) 傷流量 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 的多少受土壤水分 溫度 通氣狀況等外都因素的影響 也與植株生長 根系發(fā)達(dá)程度及生命活動(dòng)強(qiáng)弱等內(nèi)部因素有關(guān) 因此傷流液的數(shù)量和成分 可作為根系活力強(qiáng)弱的指標(biāo) 一 原理 用蒽酮試劑處理可以鑒定傷流液中糖的存在 并可測定其含量 氨基 酸與茚三酮在水溶液中可發(fā)生顯色反應(yīng) 除脯氨酸與羥脯氨酸外 其他各 種氨基酸顯色的色調(diào)與深淺相差不大 因此利用此應(yīng)應(yīng)可測定植物體氨基 酸的總量 二 儀器設(shè)備及試劑 儀器設(shè)備 分光光度汁 水浴鍋及加熱設(shè)備 引流玻管 移液管 橡 皮管管 刻度試管 刀片 試劑配制 1 蒽酮試劑 10g 蒽酮溶于 1000mL 稀硫酸 由 760mL 比重為 1 84 的硫酸用水稀釋成 1000mL 2 95 乙醇 3 3 茚三酮乙醇溶液 4 500mg L 的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 傷流液的收集 選擇生長健壯大小適合的植株 在離地面 3 5cm 處用刀片切去地上部 分 在地面斷莖上套上橡皮管 將已彎好的引流玻管較短一端套入橡皮管 內(nèi) 較長的一端插入刻度試管中或三角瓶中 整個(gè)過程要防止傷流液漏出 并用塑料薄膜封住管口以免傷流被蒸發(fā)或外界污物進(jìn)入 用時(shí)剪一小口將 引流管插入 收集時(shí)間依具體情況而定 記錄收集傷流液的時(shí)間和傷流液 量 計(jì)算傷流量 mL h 2 傷流液中可溶性糖的鑒定 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 取傷流液 1mL 和 1mL 蒸餾水分別加入兩支干凈試管中 再分別加入蒽 酮試劑 5mL 混勻 沸水浴中煮沸 5 10min 綠顏色出現(xiàn)即表示有糖的存 在 其深淺與糖的含量成正比 3 傷流液中氨基酸總量的測定 1 取 6 支試管按下表 加各種試劑 以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 試劑 123456 500mg l 谷氨酸 ml 00 10 20 30 40 5 3 茚三酮乙醇溶液 ml 0 50 50 50 50 50 5 蒸餾水 ml 1 51 41 31 21 11 0 谷氨酸含量 g 050100150200250 2 再取第七支試管加入傷流液 0 5mL 加蒸餾水 1mL 茚三酮乙醇溶 液 0 5mL 以測定傷流液中氦基酸含量 3 將上述已加好各種試劑的 7 只試管搖勻后 在沸水浴中準(zhǔn)確加熱 10 min 溶液變?yōu)樗{(lán)色 表示有氨基酸存在 取出后立即加入 5mL95 乙 醇 搖勻 冷卻后以乙醇作空白對(duì)照 于 520nm 波長下測定吸光度 4 結(jié)果計(jì)算 g mL 被測出的氨基酸含量 傷流液中氨基酸含量 被測傷流液樣品的體積 膜透性的測定膜透性的測定 周祖貴 黎兆安主編 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 廣西大學(xué)內(nèi)部資料 2005 119 120 一 原理 植物組織受到逆境傷害時(shí) 由于膜的功能受損或結(jié)構(gòu)破壞而使其透性 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 增大 細(xì)胞內(nèi)的各種水溶性物質(zhì)包括電解質(zhì)將有不同程度的外滲 將植物 組織浸入無離子水中 水的電導(dǎo)將因電解質(zhì)的外滲而加大 傷害愈重 外 滲愈多 電導(dǎo)度的增加也愈大 故可用電導(dǎo)儀測定外液的電導(dǎo)度增加值而 得知傷害程度 二 儀器 N 個(gè)三角瓶 蒸餾水 膠頭滴管 電導(dǎo)計(jì) 量筒 抽氣室 電子天平 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 準(zhǔn)確稱取 1 000g 甘蔗葉片 約 1cm2 片 于三角瓶 加 30ml 水 稱 重 帶瓶 葉 水 抽氣 20 分 靜置 20 分 搖勻 測定電導(dǎo)率值 常溫 下電導(dǎo)率值 記電導(dǎo)率單位 煮沸 10 分 冷卻 加水至原總重 W 搖勻 測電導(dǎo)率 2 結(jié)果計(jì)算 100 處理外滲電導(dǎo)率值 電解質(zhì)的相對(duì)外滲率 煮沸后電導(dǎo)率值 100 處理外滲電導(dǎo)率值 對(duì)照電導(dǎo)率值 傷害率 處理煮沸后電導(dǎo)率值 對(duì)照煮沸后電導(dǎo)率值 植物組織中丙二醛含量的測定植物組織中丙二醛含量的測定 周祖貴 黎兆安主編 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 廣西大學(xué)內(nèi)部教學(xué)材料 2005 114 115 趙世杰 植物組織中丙二醛測定方法的改進(jìn) 植物生理學(xué)通訊 1991 30 3 207 210 一 原理 植物器官衰老時(shí) 或在逆境條件下 往往發(fā)生膜脂過氧化作用 丙二 醛 MDA 是其產(chǎn)物之一 通常利用它作為脂質(zhì)過氧化指標(biāo) 表示細(xì)胞膜 脂過氧化程度和植物對(duì)逆境條件反應(yīng)的強(qiáng)弱 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 MDA 在高溫 酸性條件下與硫代巴比妥酸 TBA 反應(yīng)形成在 532nm 波長處有最大光吸收的有色三甲基復(fù)合物 該復(fù)合物的吸光系數(shù)為 155 m mol L cm 并且在 600nm 波長處有最小光吸收 但是測定植物組織 中的 MDA 時(shí)受多種物質(zhì)的干擾 其中最主要的是可溶性糖 糖與 TBA 顯 色反應(yīng)的最大吸收波長在 450nm 在 532nm 處也有吸收 植物受干旱 高 溫 低溫等逆境脅迫時(shí)可溶性糖增大 因此測定植物組織中的 MDA 時(shí)一定 要排除可溶性糖的干擾 此外在 532nm 波長處尚有非特異的背景吸收的影 響也要排除 低濃度的鐵離子能顯著增加 TBA 與蔗糖或 MDA 顯色反應(yīng)物 在 532nm 450nm 處的吸光值 所以在蔗糖 MDA 與 TBA 顯色反應(yīng)中需 要有一定的鐵離子 在 450nm 532nm 600nm 波長處測定吸光值 即可計(jì) 算丙二醛含量 二 儀器設(shè)備及試劑配制 儀器設(shè)備 研缽 試管 可調(diào)加樣器 恒溫水浴鍋 冷凍離心機(jī) 分光光度計(jì) 試劑配制 1 10 三氯乙酸 TCA 稱取 10 0g 三氯乙酸 用蒸餾水定容至 100mL 2 0 6 硫代巴比妥酸 TBA 稱取 TBA0 6g 用 5 三氯乙酸定容 至 100mL 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 取 1 0 g 植物樣品 葉 根 加 10 TCA 3mL 和少量的石英砂 研磨 然后再加入 10 TCA7mL 沖洗研缽 所得勻漿在 4000r min 下離心 15min 2 取上清液 3mL 加 0 6 TBA 3mL 混合后在 100 水浴上煮沸 15min 冷卻后再離心一次 3 分別測定上清液在 450nm 532nm 和 600nm 處的吸光度值 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 四 結(jié)果計(jì)算 由蔗糖 TBA 反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長為 450nm 毫摩爾吸收系數(shù)為 85 4 10 3 MDA TBA 反應(yīng)產(chǎn)物在 532nm 的毫摩爾吸收系數(shù)分別為 7 4 10 3和 155 10 3 532nm 非特異性吸光值可以在 600nm 波長處的吸光 值為代表 按雙組分光度法原理 建立方程組 借此方程組可以求出 MDA 及可溶 性糖濃度 方程組 A450 85 4 10 3 C糖 A532 A600 155 10 3 CMDA 7 4 10 3 C糖 解得 C糖 11 71A450 mmol L CMDA 6 45 A532 A600 0 56A450 mmol L 1 按下式計(jì)算提取液中 MDA 濃度 MDA CmL MDAmol mL 反應(yīng)液的體積 1000 提取液中濃度 L 測定時(shí)提取液用量 2 按下式計(jì)算樣品中 MDA 濃度 1 MDAmolmL MDAmol g FW 提取液中濃度 L 提取液的體積 含量 植物組織鮮重 脯氨酸含量的測定脯氨酸含量的測定 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出版社 張憲政主編 作物生理研究法 農(nóng)業(yè)出版社 1992 205 207 在逆境條件下 旱 鹽堿 熱 冷 凍 植物體內(nèi)脯氨酸的含量顯著 增加 植物體內(nèi)脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性 抗旱性強(qiáng) 的品種往往積累較多酌脯氨酸 因此測定脯氨酸含量可以作為抗旱育種的 生理指標(biāo) 另外 由于脯氨酸親水性極強(qiáng) 能穩(wěn)定原生質(zhì)膠體及組織內(nèi)的 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 代謝過程 因而能降低冰點(diǎn) 有防止細(xì)胞脫水的作用 在植物低溫傷害的 研究中 人們把脯氨酸看作室一種防凍劑或膜穩(wěn)定劑 其實(shí)質(zhì)就是在冰凍 期間 可以防止細(xì)胞由于脫水而引起的傷害 在低溫條件下 植物組織中 脯氨酸增加 可提高植物的抗寒性 因此 亦可作為抗寒育種的生理指標(biāo) 一 原理 在酸性條件下 脯氨酸和茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生穩(wěn)定的紅色產(chǎn)物 該物質(zhì)在 520nm 波長下有一最大吸收峰 可用分光光度計(jì)測定其含量 當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí) 脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中 然后用酸性茚三酮加熱處理后 溶液即成紅色 再用甲苯處理 則色素全 部轉(zhuǎn)移至甲苯中 色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低 在 520nm 波長下 比色測定吸光度 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出 或用回歸方程什算 脯氨酸的含量 二 儀器設(shè)備及試劑 儀器設(shè)備 分光光度計(jì) 研缽 小燒杯 容量瓶 大試管 普通試管 移液管 注射器 水浴鍋 漏斗 溫斗架 濾紙 剪刀 試劑 1 2 5 酸性茚三酮溶液 將 1 25g 茚三酮溶于 30mL 冰醋酸和 20mL6mol L 磷酸 6mol L 磷酸 用 85 的磷酸 36 7ml 定容 100ml 中 攪拌加熱 70 溶解 貯于棕色試劑瓶中于冰箱中保存 2 3 磺基水楊酸 3g 磺基水楊酸加蒸餾水溶溶解后定容至 100mL 3 冰醋酸 4 甲苯 5 100 g mL 脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 在分析天平上精確稱取 25 mg 脯氨 酸 倒入小燒杯內(nèi) 用少量蒸餾水溶解 少量乙醇溶解 然后倒入 250mL 此文檔收集于網(wǎng)絡(luò) 如有侵權(quán) 請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流 容量瓶中 加蒸餾水定容至刻度 此標(biāo)準(zhǔn)液中每毫升含脯氨酸 100 g 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 1 系列脯氨酸濃度的配制 取 7 個(gè) 50mL 容量瓶 分別盛入 100 g mL 脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 0 0 5mL 1 0mL 1 5mL 2 0mL 2 5mL 及 3 0mL 用蒸餾水定容至刻度 搖勻 各瓶的脯氨酸濃度分別為 0 g mL 1 g mL 2 g mL 3 g mL 4 g mL 5 g mL 及 6 g mL 2 取 7 支試管 分別吸取 2mL 系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的脯氨酸溶液及 2mL 冰醋酸和 2mL 酸性茚三酮溶液 每管在沸水浴中加熱 30min 冷卻后各試 管準(zhǔn)確加入 4mL 甲苯 振蕩 30s 靜置片刻 使色素全部轉(zhuǎn)至甲苯溶液 用移液槍輕輕吸取各管上層脯氫酸甲苯溶液至比色杯中 以甲苯溶液為空 白對(duì)照 于 520nm 彼長處進(jìn)行比色 2 樣品的測定 準(zhǔn)確稱取不同處理的植物葉片 0 5g 分別置試管中 然后向各管分別 加入 5mL3 的磺基水楊酸溶液 加塞在沸水浴中提取 10min 提取過程 中要經(jīng)常搖動(dòng) 冷卻后 吸取 2mL 提取液于另一干凈的帶塞試管中 加 入 2ml 水 2mL 冰醋酸及 4mL 酸性茚三酮試劑 每管在沸水浴中加熱 60min 溶液即呈紅色 冷卻后各試管