二十種常見實驗動物模型.doc

.二十種常見實驗動物模型一、缺鐵性貧血動物模型缺鐵性貧血（iron deficiency anemia，IDA）是體內(nèi)用來合成血紅蛋白（HGB）的貯存鐵缺乏，HGB合成減少而導(dǎo)致的小細(xì)胞低色素性貧血，主要發(fā)生于以下情況：（1）鐵需求增加而攝入不足，見于飲食中缺鐵的嬰幼兒、青少年、孕婦和哺乳期婦女。（2）鐵吸收不良，見于胃酸缺乏、小腸粘膜病變、腸道功能紊亂、胃空腸吻合術(shù)后以及服用抗酸和H2受體及抗劑等藥物等情況。（3）鐵丟失過多，見于反復(fù)多次小量失血，如鉤蟲病、月經(jīng)量過多等。IDA是一種多發(fā)性疾病，據(jù)報道，在多數(shù)發(fā)展中國家，約2/3的兒童和育齡婦女缺鐵，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的預(yù)防和治療具有重要的意義。在這些研究中，缺鐵性貧血的動物模型（Animal model of IDA），又是實施研究的基礎(chǔ)工具。常見的IDA動物模型的構(gòu)建技術(shù)如下：實驗動物：一般選用SD大鼠，4周齡，雌雄不拘，體重65g左右，HGB130g/L。建模方法：低鐵飼料加多次少量放血法。低鐵飼料一般參照AOAC配方配制，采用EDTA浸泡處理以去除飼料中的鐵，飼料中的含鐵量是誘導(dǎo)SD大鼠形成缺鐵性貧血模型的關(guān)鍵，現(xiàn)有研究表明，飼喂含鐵量15.63mg/Kg的飼料35天，SD大鼠出現(xiàn)典型IDA表現(xiàn)，而飼喂含鐵40.30mg/Kg的飼料SD大鼠出現(xiàn)缺鐵，但并不表現(xiàn)貧血癥狀。建模時一般采用去離子水作為動物飲水，以排除飲水中鐵離子的影響。少量多次放血主要用于模擬反復(fù)多次小量失血導(dǎo)致的鐵丟失，還可以加速貧血的形成。放血一般在低鐵飼料飼喂2周后進(jìn)行，常用尾靜脈放血法，11.5ml/次，2次/周。模型指標(biāo)：（1）HGB100g/L；（2）血象：紅細(xì)胞體積較正常紅細(xì)胞偏小，大小不一，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，MCV減小、MCHC降低；（3）血清鐵（SI）降低，常小于10mol/L，血清總鐵結(jié)合力（TIBC）增高，常大于60mol/L。需要指出的是，以上模型不能用于鐵吸收不良相關(guān)IDA的防治研究。根據(jù)具體的研究需要，也可以適當(dāng)調(diào)整建模方法。二、白血病動物模型用免疫耐受性強(qiáng)的人類胎兒骨片植入重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)小鼠皮下，出于人類造血細(xì)胞與造血微環(huán)境均植入小鼠，建立具有人類造血功能的SCID小鼠模型稱為SCIDhu小鼠。再將髓系白血病患者的骨髓細(xì)胞植入SCIDhu小鼠皮下的人類胎兒骨片內(nèi)，植入的髓系白血病細(xì)胞選擇性生長在SCIDhu小鼠體內(nèi)的人類造血微環(huán)境中，即為人類髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴細(xì)胞功能聯(lián)合缺陷，這種小鼠能接受人類器官移植物。造模方法： (1) SCID-hu小鼠：CB-17 scid/scid 繁殖的近交小鼠(SCID)，68周齡時用抗生素處理。在無菌條件下，從1923 妊娠周齡的胎兒取出股骨和脛骨，剪成5mm mml mm的骨片，植入SCID小鼠皮下，并從每個胎兒供體制備胸腺細(xì)胞用于檢測同種異體HLA。 (2) 白血病細(xì)胞注射：急性髓性白血病患者骨髓細(xì)胞(0.42) 104個活細(xì)胞(常用凍存解凍后的細(xì)胞)懸浮于含10胎牛血清的PM1640培養(yǎng)液20 d,用微注射器將細(xì)胞懸液直接注射人68周前植入SCID-hu小鼠的人胎骨片內(nèi)。選擇移植骨與白血病細(xì)胞的供體是HLA同種異型，便于追蹤人肋骨移植片中細(xì)胞的來源。白血病細(xì)胞的體內(nèi)傳代：將已生長有白血病細(xì)胞的骨移植片再制備細(xì)胞懸液，取(0.52)106個活細(xì)胞，注入第2個SCID-hu受體小鼠的移植骨片內(nèi)。處理小鼠MHC-I(主要組織相容性復(fù)合體I類)抗原的單抗，直接與染料熒光素異硫氰化物或藻紅蛋白結(jié)合，用流式細(xì)胞儀將細(xì)胞分類并分析細(xì)胞來源。 胎骨植入后23周時，骨片內(nèi)有壞死與纖維化，CFUGM與BFUE減少，未見造血中心；移植45周時，骨片內(nèi)出現(xiàn)由淋巴系與未成熟的髓系細(xì)胞組成的造血中心；68周后，植入胎骨片結(jié)構(gòu)與正常胎兒造造血骨髓類似，并能維持正常造血達(dá)20周。用ME43(人類細(xì)胞抗原的特異抗體)與Ly5.1(小鼠血細(xì)胞的特異抗體)檢測，植入骨片的細(xì)胞中人類細(xì)胞占70以上，而小鼠細(xì)胞僅占520。胎兒骨片內(nèi)的人類基質(zhì)細(xì)胞可刺激人的造血干細(xì)胞的增殖與分化，以維持正常造血。將人的急性髓性白血病細(xì)胞注入SCID-hu小鼠的一塊胎骨片內(nèi)，46周后，胎兒骨片內(nèi)的正常造血細(xì)胞被急性白血病細(xì)胞的增殖所取代，而且還選擇性地轉(zhuǎn)移到植入的其他胎骨片內(nèi)。該模型是人類白血病細(xì)胞生長在小鼠體內(nèi)的人類造血微環(huán)境中，因此能更精確地用來研究人類自血病發(fā)病機(jī)制與對新療法的評價，是目前研究白血病的最佳動物模型。該模型的建立原理與方法也適用于其他白血病與惡性腫瘤動物模型的建立。但應(yīng)注意植入小鼠的胎兒骨片與成人骨艙造血釘些不同。三、支氣管哮喘動物模型支氣管哮喘是一種由肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和T細(xì)胞等參與的慢性氣道炎癥，伴有氣道反應(yīng)性增高及結(jié)構(gòu)重建的疾病。對于敏感的人群，這種炎癥引起喘鳴反復(fù)發(fā)作、呼吸困難、胸悶和咳嗽，尤其好發(fā)于夜間或清晨。這些癥狀常與廣泛而有變動的氣道阻塞相關(guān)，也可因氣道對某些刺激物反應(yīng)性增高而發(fā)生。國內(nèi)目前使用的動物模型多數(shù)是卵蛋白致敏的豚鼠哮喘模型,卵蛋白作為致敏原進(jìn)入動物體后，其可溶性抗原成分可以刺激機(jī)體產(chǎn)生IgE抗體，使機(jī)體致敏。當(dāng)動物再次接觸卵蛋白時，由IgE介導(dǎo)發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，使炎癥細(xì)胞脫顆粒，釋放活性化學(xué)物質(zhì)，作用于支氣管引起哮喘。實驗對象：雄性豚鼠建模方法：1抓取豚鼠，腹腔注射10%卵清蛋白1ml/只致敏（由實驗技術(shù)室老師在實驗進(jìn)行前15天預(yù)先注射）。 2致敏后第15天，霧化吸入1%卵清蛋白（最好是當(dāng)天配制）60s激發(fā)，觀察動物呼吸和一般情況，有無咳嗽、呼吸加深加快、煩躁不安等癥狀。隨后繼續(xù)吸入1030min，直至出現(xiàn)上述癥狀為止。 3.把動物放入含5g鈉石灰的缺氧瓶中，用凡士林涂在瓶塞周圍，塞緊瓶塞，連通水銀檢壓計。記錄時間和室內(nèi)溫度，每隔3min記錄水銀面刻度1次，直至動物死亡。記錄死亡時間，計算出耗氧率。 4.迅速從缺氧瓶中取出動物，仰臥固定在大鼠手術(shù)臺上。在頸部正中做切口，用止血鉗分離氣管周圍組織，下面穿線備用。在氣管甲狀軟骨下作倒“T”字型切口，插入連接三通管的氣管插管并結(jié)扎固定。 5.用注射器抽取生理鹽水4ml，從氣管插管的三通管處注入肺部，改變豚鼠體位，盡可能使生理鹽水沖洗到每一肺葉。然后回抽，收集支氣管肺泡灌洗液。 6.將收集到的BALF放入小試管，2000r/min5min離心。棄去上清，用1ml生理鹽水重新溶解沉淀，并輕輕搖晃混勻，進(jìn)行白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)。 觀察指標(biāo)： 1.觀察動物呼吸情況和一般狀況，有無呼吸加深加快、咳嗽、呼吸困難和煩躁不安等。 2.BALF中白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)。 3.測定豚鼠耗氧量。四、感染性休克動物模型常見的感染性休克是由革蘭氏陰性桿菌感染引起并通過大量產(chǎn)生的內(nèi)毒素導(dǎo)致休克。本實驗通過靜脈注射內(nèi)毒素，導(dǎo)致動物急性感染性休克。實驗對象：家兔建模方法：1抓取家兔并稱重，3%戊巴比妥鈉1ml/kg耳緣靜脈麻醉，仰臥固定在家兔手術(shù)臺上。2剪去頸部被毛，作頸正中切口，分離氣管，做氣管插管。分離右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸外靜脈，穿線備用。3. 剪去下腹部被毛，切開皮膚，沿腹白線打開腹腔。暴露膀胱，分離兩側(cè)輸尿管，結(jié)扎尿道口并進(jìn)行膀胱插管，連接上記滴器。打開電腦，啟動BL-420E生物機(jī)能記錄系統(tǒng)，選擇實驗?zāi)K：“泌尿?qū)嶒灐敝械摹坝绊懩蛏傻囊蛩亍?，進(jìn)行每分鐘尿量記滴。 4.從耳緣靜脈注入1肝素1ml/kg，進(jìn)行全身肝素化。 5.在右側(cè)腹直肌旁做縱形切口，鈍性分離肌肉，打開腹腔。將一段游離度較大的回腸袢輕輕拉出，平展于事先已注入37生理鹽水的觀察微循環(huán)的恒溫灌流盒內(nèi)，用顯微鏡觀察腸系膜微循環(huán)。 6.進(jìn)行右側(cè)頸總動脈插管，連接BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)1通道，記錄血壓。 7.進(jìn)行左側(cè)頸外靜脈插管，插管約插入56cm。通過三通管連接壓力傳感器，如果觀察到壓力數(shù)值降為負(fù)值且隨呼吸上下波動，記錄數(shù)值，為中心靜脈壓。三通管另一側(cè)連接靜脈輸液裝置。穩(wěn)定5min,記錄一段正常各項指標(biāo)。 8.靜脈注射精制內(nèi)毒素（Ecoli0111B4）1ml/kg或粗制內(nèi)毒素（滅活的大腸桿菌E）8000億細(xì)菌/kg，觀察并記錄注射后5min、10min、15min、20min、30min、60min各指標(biāo)變化。 9.60min后，快速從靜脈輸入生理鹽水20ml/kg，并在生理鹽水中加入654-25mg/kg，觀察并記錄各指標(biāo)變化。 觀察指標(biāo)： 呼吸頻率與幅度、血壓、皮膚粘膜顏色和小血管、中心靜脈壓、尿量、腸系膜微循環(huán)（包括：微循環(huán)中微血管的流速，口徑和每個低倍鏡視野下開放的毛細(xì)血管數(shù)目）。五、肝硬化動物模型 選體重150-200g的Wistar大鼠，將D-氨基半乳糖配制成10的生理鹽水溶液，用1NNaOH將pH調(diào)節(jié)至7.0,以250mg/kg的劑量行腹內(nèi)注射，每天一次，每周天，約半年左右即可形成肝硬化。在復(fù)制過程中，自股動脈取血作肝功能試驗，包括血清蛋白測定、濁度試驗、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶（LDH）、單胺氧化酶(MAO)、-核苷酸酶(5-NA)、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GT)及膽鹼酯酶。分批處死動物進(jìn)行尸解，觀察腹水，心、肝、脾、肺腎等器官形態(tài),用4甲醛溶液固定,石蠟包埋,切片厚5微米,進(jìn)行HE、網(wǎng)狀纖維（Gordon與Sweet法)、膠原纖維（VanGieson法)及彈力纖維(Weiger法)染色。在采用上述劑量D-氨基半乳糖長期多次注入大鼠腹腔時，動物耐受性較好。逐漸出現(xiàn)進(jìn)食活動減少，有時解稀糖大便，腹部較為膨隆。半年內(nèi)與對照組相比，實驗組體重平均增長顯著延緩。 尸檢時可見腹腔內(nèi)有腹水，0-20ml不等。心、脾、肺、腎、無明顯改變。與對照組相比，早期肝明顯增大、重量增加，色澤較灰黃，以后體積逐漸縮小，質(zhì)地變硬，邊緣較鈍，肝表面可見彌漫性分布的細(xì)顆粒狀結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)大小不一，直徑約為0.5-1.5mm,結(jié)節(jié)間可見彌漫分布的纖維間隔，間隔一般較細(xì)小，其凹凸程度隨病變而加深。切片HE染色、光鏡下檢查，在注射氨基半乳糖5個月后，肝小葉結(jié)構(gòu)開始紊亂,形成大小不等的肝細(xì)胞團(tuán)，有的仍見好的中央靜脈，但其周圍門脈區(qū)膽管上皮高度增生，其間夾有殘留的個別肝細(xì)胞及少量單核多核白細(xì)胞及褐色素沉著。隨著病程的延長，增生的膽管及纖維母細(xì)胞向四周呈星芒狀伸展，有的與中央靜脈相連。一般肝細(xì)胞變性壞死少見，大多呈增生表現(xiàn)。Gordon與Sweet法染色顯示肝細(xì)胞團(tuán)中網(wǎng)狀纖維少見而周圍組織中存在著大量疏松的網(wǎng)狀纖維。膠原纖維及彈性纖維均未見增多。除肝外，其余實質(zhì)器官切片無異常發(fā)現(xiàn)。實驗動物在出現(xiàn)肝硬化時血清白蛋白含量稍有降低,濁度試驗略增高,血清GPT、LDH、MAO、5-NA、-GT與膽鹼脂酶均無明顯改變。六、急性出血性胰腺炎動物模型胰腺炎是指胰腺及其周圍組織被胰腺分泌的消化酶自身消化的化學(xué)性炎癥，其中出血壞死型胰腺炎死亡率高達(dá)30%。胰腺分泌過度旺盛、胰液排泄障礙、胰腺血循環(huán)紊亂與生理性胰蛋白酶抑制物質(zhì)減少都能促發(fā)胰腺炎。胰腺分泌的各種蛋白酶是一酶原形式存在的，各種酶原在進(jìn)入十二指腸后，在腸激酶的作用下被激活。因此，通過反灌腸液（含活性蛋白酶）可致急性出血性胰腺炎。選家兔（體重2kg左右）麻醉固定后，在無菌操作下由腹中線開腹（劍突下1cm至臍），進(jìn)入腹腔找到胰腺。找到十二指腸的升部胰導(dǎo)管開口，在靠近腸管處穿線，將胰管結(jié)扎。在近胰腺端再穿一線，已備注射后結(jié)扎用。接著用注射器自十二指腸內(nèi)抽取腸液25mL，用5號針頭快速注入胰管內(nèi)，使腸液能進(jìn)入細(xì)小的胰管中，甚至進(jìn)入胰組織內(nèi)。拔出針頭后，立即將胰管在針孔的遠(yuǎn)端結(jié)扎，以免注射物逸出。操作完畢后即可縫合腹腔。術(shù)后1d就發(fā)生明顯的出血性胰腺炎，表現(xiàn)為白細(xì)胞計數(shù)升高，血清淀粉酶激素急速升高。七、大鼠急性心肌缺血垂體后葉素（pituitrin，Pit）含縮宮素和抗利尿激素。其中的抗利尿激素能收縮血管，使血壓升高，又稱加壓素。過量注射Pit將引起冠狀動脈強(qiáng)烈痙攣性收縮。利用它的這一特點，復(fù)制急性心肌缺血乃至心肌損傷的動物模型 實驗對象：大白鼠 建模方法：1抓取大白鼠并稱重，25%烏拉坦4ml/kg腹腔注射麻醉，仰臥固定在大白鼠手術(shù)臺上，分別在大白鼠的右前肢、右后肢和左后肢插入銀針或注射用針頭，然后將下述顏色的鱷魚夾夾上針頭：右前肢：白色，右后肢：黑色，左后肢：紅色，引導(dǎo)出鼠導(dǎo)聯(lián)心電圖。 2沿頸正中切開皮膚，分離頸外靜脈，穿線做靜脈插管。打開計算機(jī)，啟動BL-420E生物機(jī)能實驗系統(tǒng)。經(jīng)第1通道，選擇試驗項目：心電。描記一段正常心電圖。 3.經(jīng)插管處注射Pit2U/kg，記錄給Pit后10、15、20、30、45、60s和1.5、2、3、5、10min的ECG（或連續(xù)記錄）。觀察心率、S-T段、T波的變化，一般以注射后30s出現(xiàn)S-T段升高或2min后T波低平作為心肌缺血的指標(biāo)。實驗注意事項： 1.描記心電圖要盡量排除干擾，一定要描記到一段正常心電圖，才進(jìn)行模型的復(fù)制。 2.Pit導(dǎo)致的急性心肌缺血波形的改變消失較快，可以反復(fù)、多次注射Pit。八、急性呼吸窘迫綜合征動物模型急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是一種以進(jìn)行性呼吸困難與頑固性低氧血癥為特征的急性呼吸衰竭。多發(fā)生于原心肺功能正常的患者，由于肺外或肺內(nèi)的嚴(yán)重疾病引起廣泛的肺泡毛細(xì)血管膜的損傷，通透性增加，繼發(fā)急性高通透性肺水腫和進(jìn)行性缺氧性型呼吸衰竭。雖病因各異，臨床表現(xiàn)均為急性呼吸窘迫，難治性低氧血癥。實驗對象：犬、家兔、大鼠建模方法：1骨髓提取液所致ARDS 用乙醚提取骨髓液(含甘油三酯、膽固醇，游離脂肪酸)。犬(1823kg)，以1.41.7mg提取液靜脈注射，可建立ARDS模型。動物靜脈注射骨髓提取液后，立即出現(xiàn)呼吸增快、窘迫、紫紺，雙肺滿布哮鳴音，約2h出現(xiàn)羅音。光鏡檢查見肺泡及間質(zhì)水腫、出血、透明膜形成、急性肺炎、肺不張、肺氣腫、嗜酸細(xì)胞浸潤、血管內(nèi)及肺間質(zhì)脂肪栓塞。 2佛波醇十四酸乙酸所致ARDS 取體重24kg健康家兔，常規(guī)麻醉，仰臥固定，經(jīng)耳緣靜脈注射PMA(40mgkg)。急性呼吸窘迫持續(xù)46h，伴有肺出血，以后進(jìn)入彌漫性肺間質(zhì)炎，進(jìn)而發(fā)生肺纖維化。整個病理過程與臨床ARDS甚相似，是觀察肺纖維化較理想的模型。模型成功復(fù)制后，動物出現(xiàn)呼吸增快、窘迫、紫紺，雙肺滿布哮鳴音。光鏡檢查見肺泡及間質(zhì)水腫、出血、透明膜形成。九、應(yīng)激性胃潰瘍動物模型應(yīng)激是指機(jī)體在受到內(nèi)外環(huán)境因素刺激時所出現(xiàn)的非特異性全身反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體處于溫度過高、過低、手術(shù)、中毒、感染等的強(qiáng)烈刺激時，除引發(fā)直接效應(yīng)外，還出現(xiàn)交感-腎上腺髓質(zhì)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸興奮為主的神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)。其發(fā)生機(jī)制主要是由于兒茶酚胺增多導(dǎo)致內(nèi)臟血流減少，胃腸粘膜缺血，致使胃粘膜屏障遭到破壞，H+反向彌散有關(guān)。實驗對象：大鼠建模方法：取大鼠，禁食24h，將其固定于特制的木板上，垂直浸于（230.5）水中，水深至劍突；24h后取出，即可復(fù)制此模型。脫椎處死，打開腹腔，結(jié)扎幽門和賁門，胃內(nèi)注入8mL的1%甲醛溶液；將胃取出浸入甲醛溶液中，30min后沿胃大彎切開，測量每個潰瘍長度。計算全胃潰瘍長度之和為潰瘍指數(shù)。此模型可用于應(yīng)激性潰瘍的發(fā)病機(jī)制和胃粘膜保護(hù)藥物的研究。十、學(xué)習(xí)記憶障礙動物模型現(xiàn)代神經(jīng)生理學(xué)認(rèn)為，學(xué)習(xí)是指人或動物通過神經(jīng)系統(tǒng)接受外界環(huán)境信息而影響自身行為的過程。記憶是指獲得的信息或經(jīng)驗在腦內(nèi)貯存和提取(再現(xiàn))的神經(jīng)活動過程，二者密切相關(guān)。按照信息論的觀點，學(xué)習(xí)記憶的基本過程大致可分為三個階段：獲得（acquisition），是通過感覺系統(tǒng)向腦內(nèi)輸入訊號的階段，也就是學(xué)習(xí)階段；鞏固(consolidation)，是獲得的信息在腦內(nèi)編碼貯存和保持的階段；再現(xiàn)(retention)，是將貯存于腦內(nèi)的信息提取出來使之再現(xiàn)于意識中的過程；后二者屬于記憶階段。實驗對象：小鼠建模方法： 1記憶獲得障礙實驗：腹腔注射東莨菪堿2mg/kg后30分鐘進(jìn)行跳臺實驗。 2記憶鞏固障礙實驗：小鼠進(jìn)行跳臺實驗，測試學(xué)習(xí)能力。學(xué)習(xí)完后立即腹腔注射NaNO2 120mg/kg，以復(fù)制記憶鞏固障礙模型。24小時后進(jìn)行記憶能力測試。 3記憶再現(xiàn)障礙實驗：小鼠進(jìn)行跳臺實驗，測試學(xué)習(xí)能力。于訓(xùn)練后24h，記憶測試前20min，灌胃30乙醇10ml/kg復(fù)制記憶再現(xiàn)障礙動物模型，然后測試記憶成績。 實驗時保持周圍環(huán)境安靜，盡量減少對小鼠的干擾。十一、血管性癡呆動物模型 實驗對象：選用健康級SD雄性大鼠，體重280-320g，動物于安靜環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，室溫控制在(22士1)的范圍內(nèi)，相對濕度60%，光線自動控制，明(07: 00- 19: 00)暗（19: 00-07）交替，給予充足清潔飲水、攝食。建模方法：大鼠10%水合氯醛腹腔注射(1g/ kg)麻醉后，將其仰臥固定。分離右頸總動脈（CCA） ,頸內(nèi)動脈(ICA)及頸外動脈(ECA）并掛線備用，結(jié)扎ECA與CCA,用動脈夾夾閉ICA遠(yuǎn)心端后，迅速于ECA與ICA分義處作一切切口，從切口處插入一端加熱成光滑球形尼龍線(直徑為0.25 mm,距球端2cm處作標(biāo)記)。線插入ICA后，于入日處稍稍結(jié)扎尼龍線與入口處ICA段，然后松開夾閉ICA的動脈夾，繼續(xù)插入尼龍線至稍有阻力后略回撤，至線插入深度為(18.5士0. 5)mm左右，實現(xiàn)大腦中動脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。再次結(jié)扎入口處?？p合皮膚。2h后輕輕提拉所留線頭至有阻力，實現(xiàn)大腦中動脈再灌，則造模完成。納入標(biāo)準(zhǔn)：動物入選的標(biāo)準(zhǔn)按照Zea Longa 5級評分法取評分為2,3,4分的動物,動物于缺血2h后出現(xiàn)對側(cè)前肢倦曲或行走轉(zhuǎn)圈或行走向?qū)?cè)倒體征則納入，動物無此體征或于缺血2h后仍不清醒者棄去。十二、酒精性肝病動物模型實驗對象： 體重125- 155g雄性SD大鼠，環(huán)境溫度18一20 0C,濕度70%左右，自由采食全價營養(yǎng)顆粒飼料，墊料為紫外線消毒后的衛(wèi)生紙。將酒精體積分?jǐn)?shù)為0. 52的紅星二鍋頭自酒(北京釀酒總廠生產(chǎn))，按體積比分別稀釋成400Io .450Io .500Io ( v/ v)備用。建模方法：按每周所測得的體重給子每日早晚白酒灌胃各1次。第1周將稀釋成40%的白酒按劑量4g/(kg.d)、每次0. 5m1/ 100g灌胃，第2周按劑量8g/(kg.d)、每次1. 0ml/ 100g,灌胃，第5周開始將稀釋成45%的自酒按9g/(kg.d),每次1.0m1/ 100g灌胃，第9周將稀釋成50%的白酒按10g/（kg.d）、每次1.0m1/ 100g灌胃，第11周起改用自由飲酒至第12周，以濃度50%白酒作為主要飲料，日供給量40ml，同時限制飲水。納入標(biāo)準(zhǔn)：棄去死亡的大鼠，即為模型大鼠。十三、肝郁脾虛證動物模型實驗對象：健康雄性SD大鼠，體重(230士10) g，SPF級，所有動物提前購入，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d, 5只/籠。光照節(jié)律12L: 12D(6 ：0018：00),室溫( 22士2) ，保持動物室安靜。相對濕度保持3%一40%，喂常規(guī)顆粒飼料及飲用水。建模方法：大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后進(jìn)行初步篩選，將過于活躍和過于安靜的大鼠排除,以慢性束縛方法制作慢性應(yīng)激大鼠模型，束縛架自制(T型束縛臺:底座寬10 cm,長20 cm,厚2 8 cm)上端束縛臺長22 cm,最寬處66 cm,兩側(cè)分別有適合四肢放置的四槽及一條可調(diào)節(jié)的粘貼軟帶)，將大鼠束縛于束縛架上，兩條粘貼軟帶分別固定大鼠的胸部和腹部，放入飼養(yǎng)箱中，每日3h,早8點到11點,連續(xù)21d,.納入棄去死亡大鼠，即為模型大鼠。十四、糖尿病動物模型實驗對象：健康SD大鼠60只，SPF級，雄性，體重190 230g.大鼠預(yù)先飼養(yǎng)3d.建模方法：造模前動物禁食16 h,按50 mg/ kg的劑量一次性快速腹腔注射0. 5%的鏈脲佐菌素。注射完后給食給水，2h后灌胃給予25%的葡萄糖水，防止大鼠低血糖的發(fā)生。于造模后第3天、第10天分別測定尿糖和空腹6h的血糖。尿糖陽性且空腹6h血糖16.7 mmol/ L者為糖尿病大鼠。十五、腎虛證動物模型實驗對象：選用6周齡無特殊病原體級SD大鼠，雌雄各半。正常飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。建模方法：去勢法:按常規(guī)方法做去勢手術(shù)，即摘除雙側(cè)卵巢與睪丸，術(shù)后28 d，取適量牛ll型膠原溶液(濃度為2 g/ L)逐滴加入至等容積的不完全弗氏佐劑中，牛1型膠原終濃度為1 g/ L;冰浴中用勻漿器充分乳化以滴入水中不打擴(kuò)散為度;取乳化后的混合物，按0. 2 mL/只，即200ug牛ll型膠原/只，于尾根部皮下注射;7d后按0.1 mL/只，