教師版土壤中分解尿素的細菌的分離與計數_學案(定稿)1.doc

高二生物學案（選修1） 專題二 微生物的培養(yǎng)與應用 主備人： 審核人：高二生物組 使用時間：2013年 月 日課題2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數 班級_ 姓名_教學目標利用選擇培養(yǎng)基分離細菌，運用相關技術解決生產生活中有關微生物的計數。重點與難點 對土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制、對分解尿素的細菌的計數自主預習1、 課題背景1、 尿素是一種重要的氮肥，農作物 _（能，不能）直接吸收利用，而是首先通過土壤中的細菌將尿素分解為 ，這是因為細菌能合成 。2、科學家能從熱泉中把耐熱細菌篩選出來是因為 這樣也適用于實驗室中微生物的篩選，原理是 。點評：生物適應一定環(huán)境，環(huán)境對生物具有選擇作用。所以通過配制選擇培養(yǎng)基、控制培養(yǎng)條件等選擇目的微生物。思考1在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是 ，提供氮源的的是 ，瓊脂的作用是 。思考2該培養(yǎng)基對微生物 （具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機制是 。3、在統計菌落數目時，常用來統計樣品中活菌數目的方法是 。除此之外， 也是測定微生物數量的常用方法?！狙a充】顯微鏡直接計數是測定微生物的方法。公式：觀察到的紅細胞平均數觀察到的細菌平均數紅細胞含量細菌含量4、 采用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于 。通過統計 ，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數在 的平板進行計數。思考3從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數的計算方法是 。思考4利用稀釋涂布平板法成功統計菌落數目的關鍵是 。思考5第 位同學的結果接近真實值。你認為這兩位同學的實驗需要改進的操作是 。5、統計的菌落數比活菌的實際數目 。這是因為當兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察到的只是 菌落。因此，統計結果一般用 來表示。6、設置對照的主要目的是 。7、對照實驗是指除了 的條件外，其他條件都 的實驗。滿足該條件的稱為 ，未滿足該條件的稱為 組。思考6請設計本實驗的對照實驗組： 。二、實驗設計1、實驗設計的內容包括 、 、 和 等。2、根據圖示27填寫以下實驗流程：3 、土壤微生物主要分布在距地表 cm的近 性土壤中，約 為細菌。4、分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是 ，其目的是保證獲得 的平板。細菌稀釋度為 ，放線菌稀釋度為 ，真菌稀釋度為 。5、 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌一般在 培養(yǎng)12d，放線菌一般在 培養(yǎng)57d，霉菌一般在 的溫度下培養(yǎng)34d。6、在菌落計數時，每隔 h統計一次菌落數目。選取 時的記錄作為結果，以防止因 而導致遺漏菌落的數目。點評：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養(yǎng)時間要充足，使得每個菌體都能形成肉眼可觀察到的菌落。7、菌落的特征包括 等方面。思考7土壤微生物種類最多、數量最大的原因是什么？土壤中營養(yǎng)物質含量豐富，環(huán)境條件適宜等。8、 實驗過程1）取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要 。2）應在 旁稱取土壤 g。將稱好的土樣倒入盛有 mL無菌水的 中，塞好棉塞。3）在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在 旁進行。4）實驗時要對 作好標記。注明 等。5）為了提高效率，在操作時更加有條不紊，應當 。思考8在研究未知微生物時務必規(guī)范操作，以防被 感染，實驗后一定要洗手。3結果分析與評價1、對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助 的方法。2、在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的 將尿素分解成了 。氨會使培養(yǎng)基的堿性 ，PH 。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基 變化來判斷該化學反應是否發(fā)生。3、在以 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變 ，說明該細菌能夠 。思考9測定飲水中大腸桿菌數量的方法是將一定體積的水用細菌過濾器過濾后，將濾膜放到 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現 ，通過記述得出水樣中大腸桿菌的數量。你認為在該實驗中至少應取 個水樣。（三）課堂總結、點評實驗方案土壤中尿素分解菌的分離與計數分離篩選微生物的原理有利于目的菌株生長抑制或阻止其他微生物生長人為條件微生物計數方法與原理稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數對照設置與重復設置實驗設計實驗操作結果與分析預習自測1、下列能選擇出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是 ( ) AKH2PO4、Na2HP04、MgS047H20、葡萄糖、尿素、瓊脂、水 BKH2PO4、Na2HP04、MgS047H20、葡萄糖、瓊脂、水 CKH2PO4、Na2HP04、MgS047H20、尿素、瓊脂、水 DKH2PO4、Na2HP04、MgS047H20、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水； 2、某同學在稀釋倍數為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數的平均值為234，那么每克樣品中的菌落數是(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL) ( ) A2.34108 B2.34109 C234 D23.43、在做分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從對應106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。A同學的結果產生原因可能有( ) 由于土樣不同 由于培養(yǎng)基污染 由于操作失誤 沒有設置對照 A B C D4、關于土壤取樣的敘述錯誤的是( ) A土壤取樣，應選取肥沃、濕潤的土壤 B先鏟去表層土3cm左右，再取樣 C取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌 D應在火焰旁稱取土壤5、下列關于從土壤中分離細菌的操作步驟中，正確的是( ) 土壤取樣 稱取10g土壤取出加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中 吸取0.1mL進行平板涂布 依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A B C D6、下列關于測定土壤中細菌數量的敘述，正確的是( ) A一般選用103107倍的稀液分別涂布 B測定放線菌的數量，一般選用103、lO 4和105倍稀釋 C測定真菌的數量，一般選用103、104和105倍稀釋 D當第一次測量某種細菌的數量，可以將101107倍的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)7、下列關于微生物的培養(yǎng)敘述錯誤的是( ) A細菌一般在3037的溫度下培養(yǎng)12 d B放線菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)57 d C霉菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)34 d D不同種類的微生物，一般需要相同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間8、下列操作需要在火焰旁進行的一組是( ) 土壤取樣 稱取土壤 稀釋土壤溶液 涂布平板 微生物的培養(yǎng)A B C D9、下列可以鑒定出分解尿素的細菌的方法是 ( ) A以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加人酚紅指示劑 B以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑 C以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹試劑 D以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑10、土壤取樣時最好選擇哪種環(huán)境中的土壤做分離細菌的實驗( )A街道旁 B花盆中 C農田中 D菜園里11、分離土壤中分解尿素的細菌，對培養(yǎng)基的要求是()加尿素不加尿素加瓊脂糖不加瓊脂糖加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽A BC D12、（2010全國1高考）下列是與微生物培養(yǎng)有關的問題，請回答：某細菌固體培養(yǎng)基的組成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是，碳源是，氮源是。已知只有能合成脲酶的細菌才能在該培養(yǎng)基上生長，故該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。按照化學成分分類，該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。從同化作用類型上看，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的細菌屬于。答案：1基礎知識 11 不能 氨和CO2 ， 脲酶 。12 熱泉的高溫條件淘汰了絕大多數微生物 ，原理是 人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、PH等），同時抑制或阻止其他微生物生長 。思考1 葡萄糖 ，提供氮源的的是 尿素 ，瓊脂的作用是 凝固劑 。思考2 具有 （具有，不具有）選擇作用。選擇機制是 只有能夠以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長 。13 是 稀釋涂布平板法 。除此之外， 顯微鏡直接計數 也是測定微生物數量的常用方法。14 來源于 樣品稀釋液中一個活菌 。通過統計 平板上的菌落數 ，選擇菌落數在 30300 的。思考3計算方法是 （平均菌落數涂布的稀釋液體積）稀釋倍數 。思考4利用稀釋涂布平板法成功統計菌落數目的關鍵是 恰當的稀釋度 。思考5第 二 位同學的結果接近真實值。你認為這兩位同學的實驗需要改進的操作是第一位同學需設置重復實驗組；第二位同學統計的三個菌落數相差太大，說明操作有誤，需重新實驗。15比活菌的實際數目 低 。只是 一個 菌落。因此，統計結果一般用 菌落數 來表示。16設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。17對照實驗是指除了 被測試 的條件外，其他條件都 相同 的實驗。滿足該條件的稱為 對照組，未滿足該條件的稱為 實驗 組。思考6請設計本實驗的對照實驗組：方案1：其他同學用A同學的土樣進行實驗。 方案2：A同學以不接種的培養(yǎng)基作為空白對照。2實驗設計21 實驗設計的內容包括實驗方案、材料用具、實施步驟和時間安排等。22 根據圖示27填寫以下實驗流程：菌落計數配制土壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)23 土壤微生物主要分布在距地表38cm的近中性土壤中，約7080為細菌。24 分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保證獲得菌落數在30300之間、適于計數的平板。細菌稀釋度為104、105、106，放線菌稀釋度為103、104、105，真菌稀釋度為102、103、104。25 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌一般在3037培養(yǎng)12d，放線菌一般在2528培養(yǎng)57d，霉菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)34d。26 在菌落計數時，每隔24h統計一次菌落數目。選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數目。27菌落的特征包括 形狀、大小、隆起程度、顏色 等方面。思考8土壤微生物種類最多、數量最大的原因是什么？土壤中營養(yǎng)物質含量豐富，環(huán)境條件適宜等。29 實驗過程1）取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2）應在火焰旁稱取土壤 10 g。將稱好的土樣倒入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。3）在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行。4）實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。5）為了提高效率，在操作時更加有條不紊，應當事先規(guī)劃時間。思考9在研究未知微生物時務必規(guī)范操作，以防被致病微生物感染，實驗后一定要洗手。3結果分析與評價31對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助 生物化學 的方法。32在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的 脲酶 將尿素分解成了 氨 。氨會使培養(yǎng)基的堿性 增強 ，PH 升高 。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基 pH 變化來判斷該化學