第十七章腫瘤標志物檢驗-天然藥物化學課程.doc

第十七章腫瘤標志物檢驗為了提高對腫瘤的早期檢測、鑒別診斷、療效觀察以及預后判斷，人們從腫瘤細胞的化學特性、細胞病理、免疫反應和基因表達產(chǎn)物等諸多方面尋找各種特異性強、靈敏度高的腫瘤標志物。腫瘤標志物的研究對腫瘤的診斷有極其重要的意義。第一節(jié)概 述一、腫瘤標志物的概念所謂腫瘤標志物，指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞合成、釋放，存在于組織、細胞或體液中，反映腫瘤存在和生長的一類物質。通過對這類物質的分析，能幫助人們從正常組織中區(qū)別腫瘤或測定腫瘤細胞核、細胞質以及對細胞膜上的特性進行分析，以此作為辨認腫瘤細胞的標志。理想的腫瘤標志物應該具有下列條件：標志物的含量變化應與腫瘤的生長、消退、轉移有直接的定性或定量的比例關系；標志物應具有較高的特異性，能比較明顯地區(qū)別于正常人群和良性腫瘤；檢測這類標志物的方法簡便，易推廣，而且成本較低。根據(jù)腫瘤標志物的來源以及它的特異性，大致可分為兩大類。1.腫瘤特異性標志物 是一種腫瘤所產(chǎn)生的特異性物質。例如前列腺特異性抗原（PSA）就是前列腺腫瘤所產(chǎn)生的特異性標志物質，只有患前列腺癌時，PSA才會顯著性升高。2.腫瘤輔助標志物 由一類組織類型相似而性質不同的腫瘤產(chǎn)生，其含量有較大的變化。這類標志物往往易同良性腫瘤或正常組織發(fā)生混淆。二、腫瘤標志物的分類腫瘤標志物分類大致有兩種：其一按腫瘤標志物的來源，第二是按腫瘤標志物本身的化學特性。主要包括：腫瘤胚胎性抗原標志物；糖類標志物；酶類標志物；激素類標志物；蛋白質類標志物；基因類標志物。三、腫瘤標志物的臨床應用近年來，腫瘤標志物在臨床上已得到較廣泛的應用， 目前主要應用于：腫瘤的普查；腫瘤高危人群的篩選；腫瘤的診斷和鑒別診斷；腫瘤監(jiān)測；腫瘤分類、分期、定位；腫瘤治療。第二節(jié)常見的腫瘤標志物的測定一、胚胎性抗原標志物的測定在人類發(fā)育過程中，許多原本只在胎盤期才具有蛋白類物質，應隨胎兒的出生而逐漸停止合成和分泌，但因某種因素的影響，特別是腫瘤狀態(tài)時，會使得機體一些“關閉”的基因激活，出現(xiàn)了返祖現(xiàn)象，而重新開啟并重新生成和分泌這些胚胎、胎兒期的蛋白。胚胎類腫瘤標志物名 稱性 質相 關 腫 瘤甲胎蛋白糖蛋白70ku肝細胞、胚細胞（非精原細胞瘤）-癌胚抗原80ku結腸癌胚鐵蛋白糖蛋白600ku肝癌胚抗原糖蛋白22ku結腸、直腸、胰腺、肺、乳腺胰癌胚抗原糖蛋白40ku胰腺鱗狀細胞抗原糖蛋白44-48ku肺、皮膚、頭和頸部組織多肽抗原細胞角蛋白8.18.19乳腺、結腸這類蛋白雖然與腫瘤組織不一定都具有特定的相關性，但與腫瘤的發(fā)生存在著內在的聯(lián)系，故被作為一種較為常見的腫瘤標志物。（一）甲胎蛋白（AFP）AFP主要是由胎肝細胞和卵黃囊合成的單一多聚體肽鏈的糖蛋白。其分子量平均為70ku，含糖4。AFP在電場中泳動于-球蛋白區(qū)，是胎兒血清中的主要蛋白質。1964年Tatarinov發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清中檢測到AFP?！菊⒖挤秶砍扇搜獫{AFP濃度低于25g/L。【臨床意義】AFP是原發(fā)性肝癌的最靈敏、最特異的腫瘤標志物，80%以上的原發(fā)性肝癌患者血清AFP明顯增高，AFP檢測診斷肝癌的標準為：血清AFP測定結果大于500g/L持續(xù)4周；AFP含量有不斷增高者；血清AFP測定結果大于200g/L持續(xù)8周。肝癌患者血清AFP含量變化的速率和程度與腫瘤組織分化程度高低有一定相關性，分化程度較高的腫瘤AFP含量常大于200g/L。血清AFP含量的檢測對其它腫瘤的監(jiān)測亦有重要臨床價值。如睪丸癌、畸胎瘤、胃癌、胰腺癌等患者血清AFP含量可以升高。（二）癌胚抗原（CEA）癌胚抗原是1965年Gold和Freedman首先從胎兒及結腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的，CEA是一種分子量為22ku的多糖蛋白復合物，45為蛋白質。CEA的編碼基因位于19號染色體。一般情況下，CEA是由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細胞所合成，通常在妊娠前6個月內CEA含量增高，出生后血清中含量很低?！菊⒖挤秶砍扇搜逯蠧EA濃度小于2.5g/L?！九R床意義】當CEA大于60g/L時，可見于結腸癌、直腸癌、胃癌和肺癌。CEA值升高，表明有病變殘存或進展。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量會明顯升高，大多顯示為腫瘤浸潤，其中約70為轉移性癌。一般來說，手術切除后6周，CEA水平恢復正常，否則提示有殘存腫瘤，若CEA濃度持續(xù)不斷升高，或其數(shù)值超過正常5-6倍者均提示預后不良。二、糖類抗原標志物的測定腫瘤標志物相關物質是指由腫瘤細胞表面的抗原物質或者是腫瘤細胞所分泌的物質，這類物質又是單克隆抗體，故又稱為糖類抗原（carbohydrate antigen，CA）。這類標志物出現(xiàn)為臨床腫瘤的診斷帶來方便，糖類抗原標志物產(chǎn)生又可分為兩大類，為高分子粘蛋白類和血型類抗原。糖類高分子粘蛋白抗原腫瘤標志物名 稱性 質癌 腫常用單克隆抗體CA125糖蛋白200ku卵巢、子宮內膜OC125CA15-3糖蛋白400ku乳腺、卵巢DF3和115D3CA549高分子量糖蛋白乳腺、卵巢BC4E549BC4n154CA27.29高分子量糖蛋白乳腺B27.29DU-PAN-2粘蛋白100-500ku胰腺、卵巢、胃DU-PAN-2血型類抗原腫瘤標志物名 稱性 質癌 腫常用單克隆抗體CA19-9唾液酸化Lexa胰腺、胃腸、肝116NS19-9CA19-5唾液酸化Lea和Leag胃腸、卵巢116NS19-5CA50唾液酸化Lea胰腺、胃腸、結腸Colo-50CA72-4唾液酸化Tn卵巢、乳腺、胃腸、結腸B27.3.cc49CA242唾液酸化CHO結腸、直腸、胰腺C242這類抗原標志物的命名是沒有規(guī)律的，有些是腫瘤細胞株的編號，有些是抗體的物質編號，常用檢測方法是單克隆抗體法。（一）CA19-9CA19-9是1979年Koprowski等用結腸癌細胞免疫小鼠，并與骨髓瘤雜交所得116NS19-9單克隆抗體，它是一種分子量為5000ku的低聚糖類腫瘤相關糖類抗原，其結構為Lea血型抗原物質與唾液酸Lexa的結合物?！菊⒖挤秶垦錍A19-9含量為216U/ml（RIA法）?！九R床意義】CA19-9是胰腺癌和結、直腸癌的標志物。血清CA19-9陽性臨界值為37U/ml。胰腺癌患者85以上為陽性。腫瘤切除后CA19-9濃度會下降，如再上升，則可表示復發(fā)。結直腸癌、膽囊癌、膽管癌、肝癌和胃癌的陽性率也會很高，若同時檢測CEA和AFP可進一步提高陽性檢測率。良性疾患時如胰腺炎和黃疸，CA19-9濃度也可增高，但往往呈“一過性”，而且其濃度多低于120U/ml，必須加以鑒別。（二）CA125CA125是一種大分子多聚糖蛋白，是重要的卵巢癌相關抗原。分子量為200ku，加熱至100時CA125的活性破壞?！菊⒖挤秶垦錍A12535.0U/ml（RIA法）。CA125是上皮性卵巢癌和子宮內膜癌的標志物，漿液性子宮內膜樣癌、透明細胞癌、輸卵管癌及未分化卵巢癌患者的CA125含量可明顯升高。當卵巢癌復發(fā)時，在臨床確診前幾個月便可呈現(xiàn)CA125增高，尤其卵巢癌轉移患者的血清CA125更明顯高于正常參考值。動態(tài)觀察血清CA125濃度有助于卵巢癌的預后評價和治療控制，經(jīng)治療后，CA125含量可明顯下降，若不能恢復至正常范圍，應考慮有殘存腫瘤的可能。（三）CA15-3CA15-3是一種乳腺癌相關抗原，于1984年由Kufu和Hilkens等人發(fā)現(xiàn)，CA15-3分子量為400ku，分子結構尚未清楚。【正常參考范圍】血清CA15-328U/ml（RIA法）?！九R床意義】30%50%的乳腺癌患者CA15-3明顯升高，它也是監(jiān)測乳腺癌患者術后復發(fā)的最佳指標，當CA15-3大于100U/ml時，可認為有轉移性病變，其含量的變化與治療結果密切相關。肺癌、胃腸癌、卵巢癌及宮頸癌患者的血清CA15-3也可升高，應予以鑒別，特別要排除部分妊娠引起的含量升高。（四）CA50CA50是1983年Lindholm等從抗人結、直腸癌Colo-205細胞株的一系列單克隆抗體中篩選出的一株對結、直腸癌有強烈反應，但不與骨髓瘤細胞及血淋巴細胞反應的單克隆抗體，所能識別的抗原稱CA50。CA50存在于細胞膜內，其抗原決定簇為唾液酸Lea血型物質與唾液酸-N-四氧神經(jīng)酰胺?！菊⒖挤秶垦錍A5020U/ml（RIA法）?！九R床意義】CA50是胰腺和結、直腸癌的標志物，因CA50廣泛存在胰腺、膽囊、肝、胃、結直腸、膀胱、子宮，當細胞惡變時，由于糖基轉化酶的失活或胚胎期才能活躍的某些轉化酶被激活，造成細胞表面糖類結構性質改變而形成CA50，因此，它又是一種普遍的腫瘤標志相關抗原，而不是特指某個器官的腫瘤標志物。所以在多種惡性腫瘤中可檢出不同的陽性率。三、酶類抗原標志物的測定酶及同工酶是最早出現(xiàn)和使用的腫瘤標志物之一。在腫瘤標志酶中根據(jù)來源可將其分為兩類：組織特異性酶，因組織損傷或變化而使儲存在細胞中的酶釋放，如前列腺特異性抗原等；非組織特異性酶，主要是腫瘤細胞代謝加強，酶類腫瘤標志物名 稱分子量及同工酶相 關 腫 瘤醛縮酶160ku3個肝堿性磷酸酶95ku7個骨、肝、白血病、肉瘤、卵巢等淀粉酶45ku胰腺等谷胱甘肽轉移酶80ku多種肝、胃、結腸肌酸激酶83ku4個前列腺、肺、結腸、卵巢等-谷氨酰轉移酶90ku12個肝乳酸脫氫酶135ku5個肝、淋巴瘤、白血病神經(jīng)原特異性烯醇化酶73ku2個肺（小細胞）、神經(jīng)母細胞瘤、類癌、黑色素瘤、嗜鉻細胞瘤5-核苷酸酶6區(qū)帶肝-L巖藻糖苷酶230ku8個肝核糖核酸酶2個卵巢、肺、大腸等前列腺特異性抗原34ku前列腺在酶標志物分析中，腫瘤標志同工酶可分為三大類型：異位型同工酶：指某種瘤組織改變了自己的分泌特性，而去分泌表達了其它成年組織的同工酶的類型；胚胎型同工酶：某些組織在腫瘤狀態(tài)時，使酶的同工酶譜退化到胚胎時未分化狀態(tài)，而分泌出大量的胚胎期的同工酶，這種變化往往與腫瘤的惡性程度成正比；胎盤型同工酶：有些腫瘤組織會分泌出某些原屬胎盤階段的同工酶譜。（一）前列腺特異性抗原（PSA）PSA是1979由Wang等從前列腺肥大癥患者的前列腺組織中分離出來的絲氨酸蛋白酶，分子量34ku，編碼基因定位于19q13，PSA僅存在于前列腺上皮細胞的胞質、導管上皮和粘液內，具有糜蛋白酶樣和胰蛋白酶的活性，PSA具有高度的組織特異性?！菊⒖挤秶磕行院啃∮?.5g/L（RIA法、ElA法）?！九R床意義】PSA是前列腺癌的特異性標志物，也是目前少數(shù)器官特異性腫瘤標志物之一。前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)的主要囊性腫瘤，前列腺癌患者血清PSA明顯增高，放療后療效顯著者，50%以上2個月內血清PSA降至正常。故PSA測定可作為監(jiān)測前列腺癌病情變化和療效的重要指標。（二）前列腺酸性磷酸酶（PAP）PAP是前列腺分泌的一種含有兩條肽鏈的糖蛋白酶，分子量102ku，含糖量13%。在pH5.0的酸性環(huán)境中活性最強，能水解各種有機磷酸酯。【正常參考范圍】4U/L（RIA、ELISA法）【臨床意義】測定PAP診斷前列腺癌的特異性比PSA高，可達96%。但靈敏度較PSA低，PAP和PSA聯(lián)合使用可提高診斷的陽性率。（三）神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NSE）烯醇化酶是催化糖原酵解途徑的酶。由3個不同的亞基、，組成5種形式的同工酶、。亞基同工酶存在于神經(jīng)原和神經(jīng)內分泌組織，稱為NSE。亞基同工酶定位于膠質細胞，稱為非神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NNE）。NSE和NNE的分子量分別為78ku和87ku。【正常參考范圍】0.6-5.4g/L。【臨床意義】NSE是神經(jīng)母細胞瘤和小細胞肺癌的標記物。神經(jīng)母細胞瘤是常見的兒童腫瘤，占114歲兒童腫瘤的8%-10%。NSE作為神經(jīng)母細胞瘤的標志物，對該病的早期診斷具有較高的臨床應用價值。小細胞肺癌（SCLC）是一種惡性程度高的神經(jīng)內分泌系統(tǒng)腫瘤，約占肺癌的25%30%，它可表現(xiàn)神經(jīng)內分泌細胞的特性，有過量的NSE表達，比其它肺癌和正常對照高5-10倍以上。SCLC患者血清NSE檢出的陽性率可高達65%-100%，目前已公認為NSE可作為SCLC高特異性、高靈敏性的腫瘤標志物。（四）-L巖藻糖苷酶（AFU）AFU是存在于血清中的一種溶酶體酸性水解酶，分子量230ku，單個亞基分子量50ku?！菊⒖挤秶?2490mol/L（化學法）?！九R床意義】AFU是原發(fā)性肝癌的一種新的診斷標志物，廣泛分布于人體組織細胞、血液和體液中，原發(fā)性肝癌患者血清AFU活力顯著高于其它各類疾患。雖然AFU升高的機制不甚明了，但可能有以下幾種：肝細胞和腫瘤細胞的壞死使溶酶體大量釋放入血；正常肝細胞的變性壞死可使攝取和清除糖苷酶的功能下降；腫瘤細胞合成糖苷酶的功能亢進；腫瘤細胞可能分泌某種抑制因子，抑制肝細胞對糖苷酶的清除能力或釋放某些刺激因子，促進肝細胞或腫瘤細胞本身合成糖苷酶。四、激素類抗原標志物的測定當具有分泌激素功能的細胞癌變時，就會使所分泌的激素量發(fā)生異常。常稱這類激素為正位激素異常。而異位激素則是指在正常情況下不能生成激素的那些細胞，轉化為腫瘤細胞后所產(chǎn)生的激素，或者是那些能產(chǎn)出激素的細胞癌變后，分泌出的是其它激素細胞所產(chǎn)生的激素。激素類腫瘤標志物激 素性 質相 關 腫 瘤兒茶酚胺類嗜鉻細胞促腎上腺皮質激素4.5ku庫欣綜合征、肺（小細胞）抗利尿激素肺（小細胞）、原發(fā)性類癌等降鈣素3.5ku甲狀腺髓質生長激素21ku垂體腺瘤、腎、肺hGG45ku胚胎絨毛膜、睪丸（非精原細胞癌）人胎盤催乳素22ku滋養(yǎng)層、性腺、肺、乳腺甲狀旁腺素肝、腎、乳腺、肺等催乳素22ku垂體腺瘤、腎、肺胰高糖素3ku胰高糖素瘤、嗜鉻細胞瘤（一）人絨毛膜促性腺激素（hCG）hCG是由胎盤滋養(yǎng)層細胞所分泌的一類糖蛋白類激素，在正常妊娠婦女血中可以測出hCG。hCG有、兩個亞基，-亞基的分子量約為13000，-亞基的生物特性與卵泡刺激素（FSH）和黃體生成激素（LH）的-亞基相同。-亞基的分子量約15000，-亞基為特異性鏈，可被單克隆抗體檢測，也是一個較好的標志物?！菊⒖挤秶磕蛞海篽CG的總量（ELISA法）小于30g/L，血清：hCG小于10g/L，-hCG小于3.0g/L。【臨床意義】當發(fā)生絨毛膜上皮癌，胎盤絨毛膜細胞惡變?yōu)閻盒云咸烟ズ?，hCG會明顯增高。乳腺癌、睪丸癌、卵巢癌hCG也會增高。（二）降鈣素（CT）CT是由甲狀腺濾泡C細胞分泌的一種多肽激素，分子量3.5ku?！菊⒖挤秶?00ng/L【臨床意義】CT是甲狀腺髓樣癌的腫瘤標志物。肺癌、乳腺癌、胃腸道癌及嗜鉻細胞瘤病人可因高血鈣或異位分泌使血清CT增高。（三）兒茶酚胺類及其衍生物兒茶酚胺類激素是由腎上腺髓質中的一些交感神經(jīng)節(jié)纖維末梢終止髓質細胞（又稱嗜鉻細胞）產(chǎn)生和分泌，包括腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）和多巴胺（DA）等，它們既是激素又是神經(jīng)遞質。1.變腎上腺素 變腎上腺素是兒茶酚胺的甲基化代謝產(chǎn)物，甲基化是在肝細胞微粒體中進行，而兒茶酚胺的形成是在腎上腺髓質的嗜鉻細胞及交感神經(jīng)末梢處形成?！菊⒖挤秶?.30-1.50mol/24h尿。變腎上腺素濃度增高是分泌型嗜鉻細胞瘤的主要標志物。2.香草扁桃酸（3-甲氧-4羥苦杏仁酸，VMA） 是腎上腺素和去甲腎上腺素經(jīng)單胺氧化酶（MAO）和兒茶酚胺-O-甲基轉移酶（COMT）的作用下，甲基化和脫氨基的降解產(chǎn)物。VMA主要是從尿中排出?！菊⒖挤秶砍扇?.0-35.0mol/24h尿。【臨床意義】常被認為是神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤和嗜鉻細胞瘤的標志物。約有70神經(jīng)母細胞瘤患者均有VMA增高，在IV期神經(jīng)瘤患者VMA/HVA的比值可作為預后評價指標，在兒童的神經(jīng)母細胞瘤患者中，VMA也是一項重要指標。VMA又可作為嗜鉻細胞瘤的診斷首選標志物，但有時增高程度不穩(wěn)定，宜同時測定尿中兒茶酚胺和變腎上腺素。五、基因類標志物的測定隨著分子生物學的理論和技術的發(fā)展，癌基因和抑癌基因的檢測已成為腫瘤臨床診斷新一代的標志物。（一）癌基因類腫瘤標志物癌基因或腫瘤基因是指在自然或實驗條件下，具有潛在的誘導細胞惡性轉化的基因。從目前的資料分析，引起細胞惡變功能的基因已達30余種。常見癌基因類腫瘤標志物癌基因細胞株或原發(fā)腫瘤相 關 腫 瘤N-myc細胞株神經(jīng)母細胞瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、肺癌（小細胞）原發(fā)腫瘤神經(jīng)母細胞瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤C-erb-2原發(fā)腫瘤胃腺癌、腎腺癌、乳腺癌N-ras細胞株胃腺癌C-myc細胞株乳腺癌、胃腺癌、肺癌（巨細胞）原發(fā)腫瘤急性粒細胞白血病、結腸腺癌H-ras細胞株黑色瘤原發(fā)腫瘤膀胱癌、皮膚鱗癌K-ras細胞株結腸癌、骨肉瘤原發(fā)腫瘤膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌1.ras基因家族及其表達產(chǎn)物 ras基因表達產(chǎn)物是由188個或189個氨基酸組成的21ku蛋白質，故Ras基因編碼產(chǎn)物為p21ras蛋白。其本質為G蛋白，具有GTP酶活性，可水解GTP生成GDP。當機體發(fā)生腫瘤時，編碼p21ras蛋白的第12、13及61位氨基酸的核苷酸可以發(fā)生點突變，突變型的p21ras蛋白不具有GTP酶活化，無法使GTP水解為GDP。另外尚可在腫瘤中發(fā)現(xiàn)p21ras蛋白表達過度。ras基因檢測的方法（1）PCR-SSCP（單鏈構象多態(tài)性）、DGGE（變性梯度凝膠電泳，）、PCR-ASO（等位基因特異性寡核苷酸雜交，）和測序技術：探測點突變。（2）免疫組織化學：用RAP-5單抗。（3）Southern印跡法及Northern印跡法。（4）ELISA法及Western印跡法。ras基因家族與腫瘤的關系ras基因家族與腫瘤的關系腫瘤類型臨 床 意 義乳腺癌c-Ha-ras基因mRNA水平升高與惡性腫瘤進展期中p21ras水平相關結直腸癌50的腫瘤出現(xiàn)c-Ki-ras 基因點突變肺癌20-30腫瘤出現(xiàn)ras基因家族成員點突變，其中c-Ki-rad基因點突變與預后不良相關胰腺癌90左右的腫瘤出現(xiàn)c-Ki-ras基因點突變胃癌在惡性腫瘤中p21表達水平明顯升高，c-Ha-ras基因編碼第12位氨基酸突變與腫瘤轉移及預后不良相關髓性白血病10-50的腫瘤中出現(xiàn)c-N-ras基因突變膀胱癌部分病例可出現(xiàn)c-Ha-ras基因點突變及p21ras表達過度2.myc基因家族及其表達產(chǎn)物 1997年Duesbery等發(fā)現(xiàn)myc癌基因與禽類MC29病毒具有相似性。Myc基因家族共有6成員：C-myc、N-myc、L-myc、P-myc、R-myc及B-myc。其中C-myc、N-myc及L-myc與一些人類腫瘤相關。當機體發(fā)生腫瘤時，myc基因家族成員可以發(fā)生染色體基因易位、基因擴增以及表達過度。myc基因檢測的方法（1）標準細胞核型分析：基因易位。（2）原位雜交：ELISA法。（3）Southern印跡法及Northern印跡法。（4）RT-PCR方法。myc基因家族成員與腫瘤的關系myc基因家族成員與腫瘤的關系腫瘤種類臨 床 意 義神經(jīng)母細胞瘤在20的腫瘤中有N-myc基因擴增乳腺癌6-57的腫瘤中可見c-myc基因擴增。c-myc基因mRNA水平升高與預后不良相關結直腸癌10-20的腫瘤中可見c-myc基因擴增小細胞肺癌30腫瘤可見L-myc基因過度表達宮頸癌c-myc過度表達與預后不良相關（二）抑癌基因機體中有一類對正常細胞增殖起負調節(jié)作用的基因稱為抑癌基因。當這類基因丟失、失活或變異時，往往會促使細胞失控而呈惡性生長。常見抑癌基因類腫瘤標志物抑癌基因染 色 體相 關 腫 瘤RB13q14視網(wǎng)膜母細胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、肺癌WT111p13Wilms腫瘤NF-117q11.1q神經(jīng)纖維瘤DCC13q21.3結腸癌P5317q21-1q肺癌、結腸癌、胃癌Erb-B-27p乳腺癌1.RB基因及其表達產(chǎn)物 1986年Friend等成功地克隆了RB基因。RB基因定位于第13號染色體的13q14區(qū)，共有27個外顯子，26個內含子，DNA長度約200kb。其編碼的蛋白質產(chǎn)物為p110。當機體發(fā)生腫瘤時，RB基因的主要變化形式有：缺失、突變、甲基化、表達失活及與病毒和細胞癌蛋白結合引起功能性失活。RB基因檢測的方法（1）PCR-SSCP、DGGE、PCR-ASO及測序技術：檢測點突變。（2）PR-PCR、PCR。（3）PCR-RFLP限制片段長度多態(tài)性。RB基因與腫瘤的關系（1）RB基因突變約見于40的視網(wǎng)膜母細胞瘤。（2）RB基因還與成骨細胞肉瘤、軟組織肉瘤、小細胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、卵巢癌及膀胱癌有關。2.p53基因及其產(chǎn)物 1981年Crawford等發(fā)現(xiàn)了p53基因，并認為其為癌基因。以后Hinds、Finlay等通過研究發(fā)現(xiàn)傳染了