北師大版選修3 4.2 基因工程的操作程序（Ⅱ） 課件（21張）.ppt

第2節(jié)基因工程的操作程序 ii 1 目的基因的獲取 2 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 3 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 4 目的基因的檢測與鑒定 一 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 一 轉(zhuǎn)化 目的基因進(jìn)入 內(nèi) 并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持 和 的過程 受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá) 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理 借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑 自學(xué)課本 回答 1 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常采用的方法是什么 2 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過程是怎樣的 3 將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞常用的方法 受體細(xì)胞分別是什么 4 早期基因工程都用原核細(xì)胞作為受體細(xì)胞 這是為什么 5 目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用的方法是什么 4 二 方法 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射法 氯化鈣法 感受態(tài)細(xì)胞 農(nóng)桿菌 植物的受傷組織會產(chǎn)生一些糖類和酚類物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中 使植物形成腫瘤 此類物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成 通常不存在于單子葉植物中 農(nóng)桿菌易感染雙子葉植物和裸子植物 對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力 1 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ti質(zhì)粒上的t dna可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞 并整合到受體細(xì)胞染色體的dna上 原理 轉(zhuǎn)化過程 ti質(zhì)粒目的基因 構(gòu)建 表達(dá)載體 植物細(xì)胞 植物細(xì)胞染色dna 新性狀 農(nóng)桿菌 2 基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法 是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力 將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體dna打入受體細(xì)胞中 使目的基因與其整合并表達(dá)的方法 3 花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后 花粉管要穿過花柱直通胚囊 花粉管通道法就是在植物受粉后 花粉形成的花粉管還未愈合前 剪去柱頭 然后 滴加dna 含目的基因 使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞 2 將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞 1 方法 顯微注射法 將基因表達(dá)載體提純 用顯微儀注射到受精卵中 思考 為什么要用受精卵而不用體細(xì)胞 2 操作程序 提純含目的基因表達(dá)載體 受精卵 顯微注射 移植到子宮 新性狀動物 早期胚胎培養(yǎng) 常用法 cacl法 ca2 增加細(xì)菌細(xì)胞的通透性 常用菌 大腸桿菌 微生物作受體細(xì)胞原因 繁殖快 多為單細(xì)胞 遺傳物質(zhì)相對少 過程 ca2 處理大腸桿菌 感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 感受態(tài)細(xì)胞吸收dna 3 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 細(xì)菌能夠吸收dna的狀態(tài) 受精卵體細(xì)胞 受精卵 細(xì)胞 個體 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射技術(shù) 用ca2 處理成感受態(tài)細(xì)胞 小結(jié) 二 目的基因的檢測與鑒定 1 分子檢測 檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的dna上是否插入了目的基因 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mrna 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法 方法 方法 dna分子雜交 分子雜交 抗原 抗體雜交 如果顯示出雜交帶 就表明待測樣品含有目的基因 dna分子雜交 提取 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法 抗原 抗體雜交 bt毒素蛋白 將bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi) 從小鼠血管抽出血液分離出抗bt毒素的抗體 抗體 蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶 脫分化 組織培養(yǎng) 2 個體鑒定 抗蟲鑒定 抗病鑒定 活性鑒定等 若不能表達(dá) 要對抗蟲基因再進(jìn)行修飾 怎樣檢驗抗蟲基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢 沒有抗蟲基因的棉植株 有抗蟲基因的棉植株 棉鈴蟲 蟲都沒有死 對照組蟲正常 實驗中蟲被殺死 抗蟲基因沒有表達(dá) 抗蟲基因表達(dá) 1 目的基因的獲取 2 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 3 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 4 目的基因的檢測與鑒定 基因工程基本操作的四個步驟 有了目的基因 我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 并可進(jìn)行遺傳 表達(dá)和發(fā)揮作用 載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá) 才能實現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化 才能確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá) 胰島素是治療糖尿病的特效藥 長期以來只能依靠從豬 牛