達(dá)亞美操作程序 (1).doc

ABO正/反定型和RhD血型檢測(cè)卡操作規(guī)程樣本要求：血樣最好用枸櫞酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在用前離心，1500g10min，以免纖維蛋白物殘余干擾反應(yīng)結(jié)果。樣本準(zhǔn)備：5%樣本紅細(xì)胞制備：壓積紅細(xì)胞25 l或全血50 l懸浮于0.5 ml達(dá)亞美2號(hào)稀釋液中。配套試劑：ABO正/反定型和RhD血型檢測(cè)卡 2號(hào)稀釋液標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞A1和B操作步驟：1) 取50l A1,B 標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞（0.8%）分別加入A1,B管中。2) 取50l 血清或血漿加入A1,B管中。3) 取10l 5% 樣本紅細(xì)胞加入A, B, D, Ctl管中。4) 離心10 分鐘。判讀結(jié)果。記錄。結(jié)果解釋：1、陽(yáng)性（）：細(xì)胞在凝膠表面凝集成一條紅線或散布在凝膠中。陰性（）：細(xì)胞沉積在管底。雙相（d.p.）：既有陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)也有陰性結(jié)果。溶血（Hemo）：紅細(xì)胞溶解，作為陽(yáng)性結(jié)果對(duì)待。2、ABO血型判斷血型抗原與抗血清反應(yīng)與A1、B細(xì)胞反應(yīng)抗-A抗-BA1BAA+/+BB+/+ABA，B，AB+0H+/+/+3、 Rh D血型判斷+陰性Rh D陽(yáng)性Rh D弱陽(yáng)性Rh D陰性抗 體 篩 選 操 作 程 序 操 作 規(guī) 程（間 接 抗 人 球 法IAT）樣本要求：血樣最好用枸櫞酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在用前離心，1500g10min，以免纖維蛋白物殘余干擾反應(yīng)結(jié)果。配套試劑：低離子抗人球蛋白卡 2號(hào)稀釋液 抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞 抗原格局圖操作步驟：1) 取50 l試劑紅細(xì)胞懸液至低離子/抗人球卡各微管中。2) 取25 l待檢血漿/血清加入各管中。3) 37孵育15 min。4) 離心10 分鐘。判讀結(jié)果。記錄。結(jié)果解釋：1、陽(yáng)性（）：細(xì)胞在凝膠表面凝集成一條紅線或散布在凝膠中。陰性（）：細(xì)胞沉積在管底。雙相（d.p.）：既有陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)也有陰性結(jié)果。溶血（Hemo）：紅細(xì)胞溶解，作為陽(yáng)性結(jié)果對(duì)待。2、抗體篩選結(jié)果：陰性表示被檢血漿/血清未發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體；陽(yáng)性表示有不規(guī)則抗體。將結(jié)果與試劑紅細(xì)胞的抗原格局圖比對(duì)，初步確定抗體類型，并進(jìn)一步檢測(cè)以鑒定抗體。交 叉 配 血 操 作 程 序 操 作 規(guī) 程樣本要求：血樣最好用枸櫞酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在用前離心，1500g10min，以免纖維蛋白殘余干擾反應(yīng)結(jié)果。樣本準(zhǔn)備：0.8樣本紅細(xì)胞制備：取10l壓積紅細(xì)胞至1ml達(dá)亞美2號(hào)稀釋液中。配套試劑：低離子抗人球蛋白卡 2號(hào)稀釋液 操作步驟：1) 取0.8供體紅細(xì)胞懸液50 l至低離子/抗人球卡主側(cè)管中；取0.8病人紅細(xì)胞懸液50 l至低離子/抗人球卡次側(cè)管中。2) 取25 l病人血漿/血清加入主側(cè)管中；取25 l供體血漿/血清加入次側(cè)管中。3) 37孵育15 min。4) 離心10 分鐘。判讀結(jié)果。記錄。結(jié)果解釋：1、陽(yáng)性（）：細(xì)胞在凝膠表面凝集成一條紅線或散布在凝膠中。陰性（）：細(xì)胞沉積在管底。雙相（d.p.）：既有陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)也有陰性結(jié)果。溶血（Hemo）：紅細(xì)胞溶解，作為陽(yáng)性結(jié)果對(duì)待。2、交叉配血結(jié)果：陰性表示配血成功；陽(yáng)性表示配血不成功，需進(jìn)一步檢測(cè)。 新生兒溶血癥的“三項(xiàng)試驗(yàn)”操作規(guī)程樣本要求：血樣最好用枸櫞酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在用前離心，1500g10min，以免纖維蛋白殘余干擾反應(yīng)結(jié)果。樣本準(zhǔn)備：0.8樣本紅細(xì)胞制備：取10l壓積紅細(xì)胞至1ml達(dá)亞美2號(hào)稀釋液中。配套試劑：低離子/抗人球卡，2號(hào)稀釋液，A1、B標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，DiaCidel洗滌液（用前以蒸餾水1：10稀釋），DiaCidel放散液，DiaCidel緩沖液操作步驟：紅細(xì)胞直接抗球蛋白試驗(yàn)(DAT)1 取新生兒臍帶血，用達(dá)亞美2號(hào)稀釋液（ID-Diluent2）配0.8%的紅細(xì)胞懸液。2 在低離子/抗人球卡中加入50l上述紅細(xì)胞懸液。3 離心10分鐘，判讀結(jié)果。記錄。游 離 試 驗(yàn)(IAT)1 取新生兒臍帶血，離心，取血漿。2 在低離子/抗人球卡中分別加入50l 0.8%的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞。3 各孔均加入25l新生兒臍帶血清。4 37孵育15分鐘，離心10分鐘。判讀結(jié)果。記錄。 釋 放 試 驗(yàn)(IAT)1 用等滲生理鹽水洗滌紅細(xì)胞一次，至少需要壓積紅細(xì)胞1ml。2 用DiaCidel洗滌液（工作濃度）洗紅細(xì)胞4次。3 最后一次洗滌后，小心傾除上清液?？闪碛迷嚬鼙Ａ舨糠稚锨逡?，以檢測(cè)是否存在不規(guī)則抗體。4 將1ml DiaCidel放散液加至紅細(xì)胞中，充分混勻。5 立即離心1分鐘，轉(zhuǎn)速900g（3000 rpm）。6 將放散液移入干凈試管。7 加5滴（250l）DiaCidel緩沖液于放散液中，混勻。若有蘭色出現(xiàn)，表明達(dá)到中性，即pH 6.57.5；如為出現(xiàn)蘭色，則需再加入更多DiaCidel緩沖液（每次一滴，邊加邊搖勻）。8 將放散液再次離心1分鐘，轉(zhuǎn)速900g（3000 rpm）。以完全清除殘存細(xì)胞。9 現(xiàn)在放散液可用于檢測(cè)了（可以根據(jù)臨床實(shí)際情況用A1、B標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和/或抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）。10 在低離子/抗人球卡中分別加入50l 0.8%的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞。11 各孔均加入25l放散液。12 37孵育15分鐘，離心10分鐘。判讀結(jié)果。記錄。結(jié)果解釋：1、 紅細(xì)胞直接抗球蛋白試驗(yàn)(DAT)陽(yáng)性：紅細(xì)胞被致敏。 陰性：紅細(xì)胞未被致敏。2、游離試驗(yàn)(IAT)陽(yáng)性：血漿中有游離抗體。 陰性：血漿中無游離抗體。3、釋放試驗(yàn)(IAT)陽(yáng)性：紅細(xì)胞表面有抗體包被。 陰性：紅細(xì)胞表面無抗體包被。孕婦血清IgG抗體水平檢測(cè)操作規(guī)程樣本要求：血樣最好用枸櫞酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在用前離心，1500g10min，以免纖維蛋白殘余干擾反應(yīng)結(jié)果。配套試劑：低離子/抗人球卡，2號(hào)稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（A1、B和/或抗體篩選），0.2 M二巰基乙醇液（17 l 2-Me原液加入1ml 2號(hào)稀釋液中，混勻）操作步驟：1 配制中和血漿：取母親血漿與0.2 M二巰基乙醇液（2-Me）各100 l，充分混勻。置37水浴30分鐘，以充分破壞血清中的IgM類抗體。2把孕婦的中和血漿用生理鹽水倍比稀釋效 價(jià)1：321：641：1281：256中和血漿（l）10200200200生理鹽水（l）3102002002002 取50 l的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（用何種細(xì)胞取決于父方血型）加入低離子/抗人球卡。3 再分別加入25 l不同效價(jià)的稀釋血漿（一般為1：64、1：128、1：256三種）。4 37孵育15分鐘。5 離心10分鐘，判讀結(jié)果。記錄。結(jié)果解釋：1ABO新生兒溶血病：美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)（AABB）認(rèn)為1:128滴度為有臨床意義；根據(jù)P.L.Mollison所著教材臨床醫(yī)學(xué)中的輸血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）,將1:512或更高滴度作為有臨床意義抗體。2Rh新生兒溶血?。焊鶕?jù)現(xiàn)代血庫(kù)和輸血實(shí)踐第20章427頁(yè),各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的滴度決定水平。18-20周檢測(cè)RhD滴度，如：（1）如RhD滴度為1:32或更高，應(yīng)重復(fù)檢測(cè)，在20-24周行羊膜穿刺或抽臍帶血進(jìn)行檢測(cè)。（2）如RhD滴度為1:16或更低，應(yīng)在妊娠第4-6個(gè)月，每月檢測(cè)一次，第7個(gè)月至預(yù)產(chǎn)期前，每2周檢測(cè)一次RhD滴度。新生兒ABO血型和Rh血型鑒定操作規(guī)程樣本要求：血樣最好用枸櫞酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血漿進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)在用前離心，1500g10min，以免纖維蛋白殘余干擾反應(yīng)結(jié)果。樣本準(zhǔn)備：0.8樣本紅細(xì)胞制備：取10l壓積紅細(xì)胞至1ml達(dá)亞美2號(hào)稀釋液中。配套試劑：達(dá)亞美新生兒血型卡 2號(hào)稀釋液操作步驟：1 取新生兒臍帶血或靜脈血，用達(dá)亞美2號(hào)稀釋液（ID-Diluent2）配0.8%的紅細(xì)胞懸液。2 在達(dá)亞美新生兒血型卡所有6根微管中，均分別加入50l上述紅細(xì)胞懸液。3 離心10分鐘。判讀并記錄結(jié)果。結(jié)果解釋：1、陽(yáng)性（）：細(xì)胞在凝膠表面凝集成一條紅線或散布在凝膠中。陰性（）：細(xì)胞沉積在管底。雙相（d.p.）：既有陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)也有陰性結(jié)果。溶血（Hemo）：紅細(xì)胞溶解，作為陽(yáng)性結(jié)果對(duì)待。2、 新生兒由于免疫系統(tǒng)的發(fā)育不完全，體內(nèi)尚不能自主形成相應(yīng)的抗體。此時(shí)體內(nèi)抗體多來自母親，反定型沒有臨床意義。因此，在達(dá)亞美新生兒血型卡中去掉了反定型檢測(cè)，增加了抗-AB孔和AHG孔?？笰B可作為對(duì)抗-A和抗-B的對(duì)照監(jiān)測(cè)；AHG則可進(jìn)行直接抗人球檢測(cè)，初步進(jìn)行新生兒溶血癥的篩查。達(dá)亞美離心機(jī)(ID-Centrifuge 12S II)操作規(guī)程1. 打開機(jī)器電源開關(guān)(開關(guān)在機(jī)箱后部、電源插頭上方)。2. 屏幕出現(xiàn)如下字幕，表示機(jī)器進(jìn)入可使用狀態(tài)： Ready3. 按面板上的 STOP/OPEN 鍵，打開機(jī)器蓋子。4. 將達(dá)亞美卡對(duì)稱放入離心機(jī)轉(zhuǎn)頭內(nèi)，關(guān)上機(jī)器蓋子。5. 按面板左側(cè)的 START 鍵，機(jī)器開始運(yùn)轉(zhuǎn)。6. 當(dāng)屏幕出現(xiàn)如下字幕，機(jī)器自動(dòng)進(jìn)入10分鐘倒計(jì)時(shí)：1030rpm 10:007. 機(jī)器發(fā)出警報(bào)聲，并同時(shí)自動(dòng)開啟蓋子。8. 取出達(dá)亞美卡。達(dá)亞美孵育器(ID-Incubator 37S I)操作規(guī)程1. 打開機(jī)器電源開關(guān)(開關(guān)在機(jī)箱后部、電源插頭上方)。2. 待機(jī)：預(yù)熱15-30分鐘，溫度自動(dòng)上升到372(注意在此過程中溫度會(huì)有回降)。3. 當(dāng)屏幕出現(xiàn)如下字幕，表示機(jī)器進(jìn)入可使用狀態(tài)：（