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GB 19489 2004 實驗室生物安全通用要求 培訓班 中國CDC傳染病所聯(lián)系電話 010 61739439Email xiwenlong ICDC com 什么是生物危險 生物危險是指由生物因子形成潛在的危險 當在實驗室中處理致病微生物時 或處理基因重組過程中產(chǎn)生的可能具有潛在生物危害的新未知基因時 或在處理致病因子的產(chǎn)物時 這些病原體有可能對實驗室的工作人員造成危害 當實驗室硬件條件缺失 管理制度不完善以及不規(guī)范的操作程序 導致實驗室致病因子泄漏和逃逸 則可能造成災難性的后果 什么是生物安全 生物安全是指避免危險生物因子造成實驗室人員暴露 向實驗室外擴散并導致危害的綜合措施 什么是生物安全實驗室 生物安全實驗室是指在研究傳染性疾病或微生物時能夠避免病原體意外傷害的實驗室 氣溶膠感染主要途徑 吸球 即吸管 操作 吸球是微生物學方面最基本的器具 用吸球操作時 能導致氣溶膠發(fā)生 例如由吸管中向外排液 用力過猛則會使液滴飛濺 彈離液體或固體培養(yǎng)基表面 釋放出大量微粒 或者 當吸管末端含有物快排盡時 可能產(chǎn)生氣泡 尤其是富于蛋白性懸液更易形成氣泡 而氣泡破裂就成為氣溶膠 離心沉淀時 沉淀管裝量太滿 管蓋未蓋或不嚴 以及離心操作過操作過程中離心管破裂 都可導致氣溶膠散播 氣溶膠感染主要途徑 注射器操作時 當抽吸后或者撥出時 注射器針頭由于顫動而散發(fā)出液體微粒 用接種針去粘沾液體時 液柱斷裂 鏡檢涂片時 液絲斷裂 傳染性材料傾注出來 打開培養(yǎng)皿蓋時 蓋內壁往往有傳染性的凝結水薄膜 因破裂而散播氣溶膠 氣溶膠感染主要途徑 開安瓿時 如瓿內為液體 則當銼刀銼斷瓿頸后 即可能發(fā)生氣溶膠 如瓿內為干燥的活菌或菌種 特別是用真空熔封的 更易產(chǎn)生溶膠 機械振蕩和超聲振蕩 或者研磨 浸解 撥出研磨柱時 都可形成氣溶膠 裝有液體容器的破損或液體益出 用超聲波清洗機清洗污染器具時 也可能發(fā)生大量氣溶膠 在粗糙的培養(yǎng)基表面涂布菌液時 高壓滅菌器在滅菌前的排氣 從玻璃或離心管上撥出棉塞時 處理關過受感染動物的籠子 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 可能產(chǎn)生危險的設備和操作方法 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 實驗室事故 傷害以及與工作有關的感染主要是由于人為失誤 不良實驗技術以及儀器使用不當造成的 實驗室樣品的收集以及內部傳遞和接收不當時 都能夠帶來使相關人員感染的危險 應建立完善的管理制度與操作細則 避免或盡量減少這類問題的發(fā)生 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 樣品容器樣品容器可以是玻璃的 但最好使用塑料制品 樣品容器應當堅固 正確地用蓋子或塞子蓋好后應無泄漏 在容器外部不能有殘留物 容器上應當正確地張貼標簽以便于識別 樣品的要求或說明書不能夠卷在容器外面 而是要分開放置 最好放置在防水的袋子里 樣品在設施內的傳遞為了避免意外泄漏或溢出 應當使用盒子等二級容器 并將其固定在架子上使裝有樣品的容器保持直立 二級容器可以是金屬或塑料制品 應該可以耐高壓滅菌或耐受化學消毒劑的作用 密封口最好有一個墊圈 要定期清除污染 樣品接收需要接收大量樣品的實驗室應當指定專門的房間或空間 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 包裝開啟接收和打開樣品的人員應當了解樣品對身體健康的潛在危害 并接受過如何采用常規(guī)預防措施的培訓 尤其是處理破碎或泄漏的容器時更應如此 樣品要在生物安全柜內打開 并準備好消毒劑 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 移液管和移液輔助器的使用1 應使用移液輔助器 嚴禁用口吸取 2 所有移液管應帶有棉塞以減少移液器具的污染 3 不能向含有感染性物質的溶液中吹人氣體 4 感染性物質不能夠用移液管反復吹吸混合 5 不能將液體從移液管內用力吹出 6 刻度對應 Mark to mark 移液管不需要吹出最后一滴液體 因此最好使用這種移液管 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 移液管和移液輔助器的使用7 污染的移液管應該完全浸泡在盛有適當消毒液的防碎容器中 移液管應當在消毒劑中浸泡18 24小時后再進行處理 8 盛放廢棄移液管的容器應當放在生物安全柜內 而不能放在外面 9 固定有皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液 應當用鈍頭導管替代針頭 可以用工具打開瓶塞后再用移液管取樣 從而避免使用注射器和針頭 10 為了避免感染性物質從移液管中意外滴出而擴散 在工作臺面應當放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙 使用后將其高壓滅菌或按感染性廢物處理 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 避免感染性物質的擴散1 為了避免轉移物質灑落 微生物接種環(huán)的直徑應為2 3mm并完全封閉 手柄 shanks 的長度應小于6cm以減小振動 或者采用一次性滅菌棉簽 2 使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)能夠避免在本生燈的明火上加熱所引起的感染性物質爆濺 最好使用不需要再進行消毒的一次性接種環(huán) 3 為了避免產(chǎn)生氣泡和氣溶膠的擴散 不要在玻片上進行觸酶試驗 而應當采用試管 毛細管或蓋玻片法 4 準備高壓滅菌和 或處理的廢棄樣品和培養(yǎng)物應當放置在防漏的容器內 如實驗室廢物袋 5 在每一階段工作結束后 必須采用適當?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的污染 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 生物安全柜的使用1 應參考國家標準和相關文獻 介紹生物安全柜的使用方法和局限性 并發(fā)給工作人員書面的操作步驟 安全或操作手冊 應明確注明當出現(xiàn)溢出 破損或不良操作時 安全柜就不再能保護操作者 2 生物安全柜必須運行正常時才能使用 3 生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板 4 安全柜內應盡量少放置器材或樣品 不能阻礙后部的氣流循環(huán) 樣品在放人安全柜內的工作區(qū)前需要清除表面污染 5 安全柜內不能使用酒精燈 否則燃燒產(chǎn)生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器 允許使用微型電加熱器 但最好使用一次性無菌接種環(huán) 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 生物安全柜的使用6 所有工作必須在工作臺面的中后部進行 并能夠通過觀察擋板看到 7 盡量減少操作者身后的人員流動 8 操作者不應反復移出和伸進手臂以免干擾氣流 9 實驗記錄 移液管以及其他物品不能夠阻礙前面的空氣格柵 因為這將干擾氣體流動 引起物品的潛在污染和操作者的暴露 10 工作完成后以及每天下班前 應使用適當?shù)南緞ι锇踩竦谋砻孢M行擦拭 11 工作開始前和結束后 安全柜的風機應至少運行5分鐘 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 避免感染性物質的注入1 通過認真練習和仔細操作 可以避免破碎玻璃器皿的意外刺傷 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 2 皮下注射針頭 玻璃吸管以及破碎的玻璃均可能將感染性物質注入體內 3 以下兩點可以減少針刺事故 a 注射時特別小心 b 減少使用注射器和針頭 許多操作可用帶有鈍頭導管的注射器替代 可用一些簡單的裝置來打開瓶塞 然后使用吸管取樣 4 不要重新給用過的針頭戴護套 一次性注射器用完后 不必將針頭從注射器上取下 應丟棄在防穿透的帶蓋容器中 5 應當用塑料吸管代替玻璃吸管 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 血清的分離1 只有經(jīng)過嚴格培訓的人員才能進行這項工作 2 操作時應戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置 3 規(guī)范的實驗操作技術可以避免或盡量減少噴濺和氣溶膠的產(chǎn)生 血液和血清應當小心吸取 而不能傾倒 嚴禁用口吸液 4 移液管使用后應完全浸入次氯酸鹽或其他適當?shù)南疽褐?移液管應在消毒液中浸泡至少18小時 然后再丟棄或滅菌清洗后重復使用 5 帶有血凝塊等的廢棄樣品管 在加蓋后應當放在適當?shù)姆缆┤萜鲀雀邏簻缇?或焚燒 6 為了清洗噴濺和溢出的血樣 應當備有每天新鮮配制的次氯酸鹽溶液 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 離心機的使用1 在使用實驗室離心機時 儀器良好的機械性能是保障微生物安全的前提條件 2 應按照操作手冊來操作離心機 3 離心機放置的高度應當使低于平均身高的工作人員也能夠看到離心機腔體內部 以正確放置十字軸和離心管套 4 離心管和盛放離心樣品的容器應當由厚壁玻璃制成 或最好為塑料制品 并且在使用前應檢查是否破損 5 用于離心的試管和樣品容器應當始終牢固蓋緊 最好使用螺旋蓋 6 離心管套的裝載 平衡 密封和打開必須在生物安全柜內進行 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 離心機的使用7 離心管套和十字軸應按重量配對 并在裝載離心管后正確平衡 8 操作指南中應給出液面距離心管邊緣需要留出的空間大小 9 空離心管套應當用蒸餾水或乙醇 異丙醇 70 平衡 鹽溶液或次氯酸鹽溶液對金屬具有腐蝕作用 因此不能使用 10 對于危險度3級和4級的微生物 必須使用可封口的離心離心管套 安全杯 11 當使用固定角離心轉子時 必須小心不能將離心管裝得過滿 否則會導致漏液 12 應當每天檢查離心機內轉子部位的腔壁是否被沾染或弄臟 如污染明顯 應重新評估離心操作規(guī)程 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 離心機的使用13 應當每天檢查離心轉子和離心管套是否有腐蝕或細微裂痕 14 每次使用后 要清除離心管套 轉子和離心機腔的污染 15 使用后離心管套應當?shù)怪么娣攀蛊胶庖毫鞲?16 當使用離心機時 可能噴射出可在空氣中傳播的感染性顆粒 如果將離心機放置在傳統(tǒng)的前開式的I級或 級生物安全柜內 這些粒子由于運動過快而不能被安全柜內的氣流截留 而在 級生物安全柜內封閉離心時 可以防止生成的氣溶膠廣泛擴散 但是 良好的離心操作技術和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護 以防止感染性氣溶膠和可擴散粒子的產(chǎn)生 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 勻漿器 搖床 攪拌器和超聲處理器的使用1 實驗室不能使用家用 廚房 勻漿器 因為它們可能泄漏或釋放氣溶膠 使用實驗室專用攪拌器和消化器 stomacher 更為安全 2 蓋子 杯子或瓶子應當保持正常狀態(tài) 沒有裂縫或變形 蓋子應能封蓋嚴密 襯墊也應處于正常狀態(tài) 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 3 在使用勻漿器 搖床和超聲處理器時 容器內會產(chǎn)生壓力 含有感染性物質的氣溶膠就可能從蓋子和容器間隙逸出 由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質并傷害操作者 建議使用塑料容器 尤其是聚四氟乙烯 po1ytetranuoroe thylene PTFE 容器 4 使用勻漿器 搖床和超聲處理器時 應該用一個結實透明的塑料箱覆蓋設備 并在用完后消毒 可能的話 這些儀器可在生物安全柜內覆蓋塑料罩進行操作 5 操作結束后 應在生物安全柜內打開容器 6 應對使用超聲處理器的人員提供聽力保護 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 組織研磨器的使用1 使用玻璃研磨器時應戴手套 并用一塊具有吸收性的軟物包住研磨器 塑料 聚四氟乙烯 研磨器更加安全 2 操作和打開組織研磨器時應當在生物安全柜內進行 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 冰箱與冷柜的維護和使用1 冰箱 低溫冷柜和干冰柜應當定期除霜和清潔 應清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品 清理時應戴厚橡膠手套并進行面部防護 清理后要對內表面進行消毒 2 儲存在冰箱內的所有容器應當清楚地標明內裝物品的學名 儲存日期和儲存者的姓名 未標明的或廢舊物品應當高壓滅菌并丟棄 3 應當保存一份凍存物品的清單 4 除非采用有效防爆措施 否則冰箱內不能放置易燃溶液并冰箱門上應明確標示 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 裝有凍干感染性物質安瓿的開啟當打開裝有凍干物的安瓿時必須小心 因為其內部可能處于負壓 瞬間進入的空氣可能使一些物質擴散進入空氣 安瓿應該在生物安全柜內打開 建議按下列步驟打開安瓿 1 首先清除安瓿外表面的污染 2 如果管內有棉花或纖維塞 可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡 3 用一團酒精浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手 然后手持安瓿從標記的銼痕處打開 4 將頂部小心移去并按污染物處理 5 如果塞子仍然在安瓿上 用消毒鑷子除去 6 緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物 避免出現(xiàn)泡沫 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 裝有感染性物質安瓿的儲存裝有感染性物質的安瓿不能浸入液氮中 因為這樣會造成有裂痕或密封不嚴的安瓿在取出時破碎或爆炸 如果需要低溫保存 安瓿應當儲存在液氮上面的氣相中 此外 感染性物質應儲存在低溫冰柜或干冰中 當從冷凍儲存器中取出安瓿時 實驗室工作人員應當進行眼睛和手的防護 以這種方式儲存的安瓿在取出時應對外表面進行消毒 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 樣品的收集 標記和運輸1 始終遵循常規(guī)預防措施 所有操作均要戴手套2 應當由受過培訓的人員來采集病人或動物的血樣 3 在靜脈抽血時 應當使用一次性的安全的抽真空設備取代傳統(tǒng)的針頭和注射器 因為這樣可以使血液直接采集到帶塞的運輸管和 或培養(yǎng)管中 用完后自動廢棄針頭 4 裝有樣品的試管應置于適當容器中運至實驗室 在實驗室內部轉運也應這樣說明書應當分開放置在防水袋或信封內 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 玻璃器皿和 銳器 1 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 只能用實驗室級別 硼硅酸鹽 的玻璃 任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應丟棄 2 不能將皮下注射針作為移液管使用 可以使用鈍頭導管 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 用于顯微觀察的薄膜和涂片用于顯微觀察的血液 唾液和糞便樣品在固定和染色時 并不必殺死涂片上的所有微生物和病毒 應當用鑷子拿取這些東西 恰當儲存 并經(jīng)清除污染和 或高壓滅菌后再丟棄 自動化儀器 超聲處理器 渦旋混合器 1 為了避免液滴和氣溶膠的擴散 這些儀器應采用封閉型的 2 排出物應當收集在封閉的容器內進一步高壓滅菌和 或廢棄 3 在每一步完成后應根據(jù)操作指南對儀器進行消毒 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 組織1 組織樣品應當采用福爾馬林固定 小塊樣品 如針頭活檢樣品 能夠在幾個小時內固定和消毒 但是較大樣品則可能需要幾天時間 2 應當避免冰凍切片 如果必須進行冰凍切片 應當罩住冰凍機 操作者要戴安全防護罩 面具 清除污染時 儀器的溫度要升至20 C 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 生物安全實驗室消毒與滅活消毒和滅菌的基本常識對于實驗室生物安全是至關重要的 生物安全中關于清除污染的特殊要求要根據(jù)實驗工作的類型和所操作感染性物質的特性來決定 因此 有必要利用已知的普通信息來確立更具體的和標準化的程序 以滿足某些特殊實驗室中各種不同生物危害水平的需求 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 清除局部環(huán)境的污染需要聯(lián)合應用液體和氣體消毒劑來清除實驗室空間 用具和設備的污染 清除表面污染時可以使用次氯酸鈉 Na0C1 溶液 含有1 有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設備 但是當處理高危環(huán)境時 建議使用高濃度 5g L 溶液 用于清除環(huán)境污染時 含有3 過氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品 可以通過加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chǎn)生的甲醛蒸氣熏蒸來清除房間和儀器的污染 產(chǎn)生甲醛蒸氣 前 房間的所有開口 如門窗等 都應用密封帶或類似物加以密封 熏蒸應當在室溫不低于21 且相對濕度70 的條件下進行清除污染時氣體需要與物體表面至少接觸8小時 熏蒸后 該區(qū)域必須徹底通風后才能允許人員進入 在通風之前需要進入房間時 必須戴適當?shù)姆蓝久婢?可以采用氣態(tài)的碳酸氫銨來中和甲醛 已有報道 可采用過氧化氫溶液的氣霧熏蒸污染的空間 但對此還需要進一步的研究 注 甲醛是一種危險和有刺激性的氣體 并懷疑有致癌性 應使用具有供氣系統(tǒng)的全面罩式防毒面具 操作時應當采用 雙人 制 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 生物安全柜污染的清除清除I級和 級生物安全柜的污染時 應當將適量的多聚甲醛 空氣中的終濃度達到0 8 放在電熱板或電熱盤上 在生物安全柜外進行控制 然后在生物安全柜內放置第二個放有比多聚甲醛多10 的碳酸氫銨的加熱板或盤 第二個盤上覆蓋一個能夠從遠處將其移走的蓋子 如連接一個能夠從生物安全柜外拉動的繩子 從而盡量減少對甲醛氣體的提前中和 如果相對濕度低于70 在使用強力膠帶 如 管道密封膠帶 ducttape 密封前部封閉板前 還要在安全柜內部放置一個開口的盛有熱水的容器 如果前部沒有封閉板 則可以用重型塑料布 heavygaugeplastic heeting 粘貼覆蓋在前部以保證氣體不會泄漏進入房間 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 打開多聚甲醛盤的加熱開關 1小時后或多聚甲醛完全蒸發(fā)后關閉 讓生物安全柜靜置過夜 移去第二個盤子的蓋后打開加熱開關 讓碳酸氫銨揮發(fā) 然后 關閉開關并啟動安全柜讓碳酸氫銨氣體循環(huán)1小時 移去前封閉板 或塑料布 后就可以使用生物安全柜了 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 洗手 清除手部污染接觸生物危害性材料時 必須戴合適的手套 但是這并不能代替實驗室人員需要經(jīng)常地 徹底地洗手 接觸過生物危害性材料和動物后 使用過衛(wèi)生間后 離開實驗室前以及吃東西前都必須洗手 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 大多數(shù)情況下 用普通的肥皂和水徹底沖洗對于清除手部污染就足夠了 但在高度危險的情況下 建議使用殺菌肥皂 手要完全抹上肥皂 搓洗至少10秒鐘 用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干 如果有條件 也推薦使用暖風干手器 推薦使用腳控或肘控的水龍頭 如果沒有安裝 應使用紙巾或毛巾關上水龍頭以防止再度污染洗凈的手 如上所述 如果沒有條件徹底洗手或洗手不方便 應該用酒精擦手來清除雙手的輕度污染 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 加熱滅菌和消毒加熱是最常用的清除病原體污染的物理手段 干 熱沒有腐蝕性 可用來處理實驗器材中許多可耐受160 C或更高溫度2 4小時的物品 燃燒或焚化也是一種干熱方式 高壓滅菌的濕熱法則最為有效 煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體 但如果其他方法 化學殺菌 清除污染 高壓滅菌 不可行或沒有條件時 也可以作為一種最起碼的消毒措施 滅菌后的物品必須小心操作并保存 以保證在使用之前不再被污染 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 高壓滅菌壓力飽和蒸汽滅菌 高壓滅菌 是對實驗材料進行滅菌時最有效和最可靠的方法 對于大多數(shù)目的 下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果 134 2 3分鐘 126 10分鐘 121 15分鐘 115 25分鐘 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 高壓滅菌器的裝載為了利于蒸汽的滲透和空氣排出 高壓滅菌物品應松散包裝放置在滅菌器內 要使蒸汽能夠作用到其內容物 通過高壓滅菌器內的蒸汽 由下而上置換空氣并經(jīng)排氣孔排出 當所有的空氣排出后 關閉排氣孔的閥門 緩慢加熱使壓力和溫度上升到安全閥預置的水平 此時記為滅菌開始時間 滅菌結束后停止加熱 讓溫度下降到80 以下再打開蓋子 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 高壓滅菌器使用注意事項下列規(guī)定能夠減小操作壓力容器時會發(fā)生的危害 1 高壓滅菌器的操作和日常維護應由受過良好培訓的人員負責 預防性的維護程序應包括 由有資質人員定期檢查滅菌器內部 門的密封性以及所有的儀表和控制器 2 應使用飽和蒸汽 并且其中不含腐蝕性抑制劑或其他化學試劑 這些物質可能污染正在滅菌的物品 3 所有要高壓的物品都應放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中 滅菌器內不能塞得過緊 否則蒸汽不能均勻作用于裝載物 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 4 當滅菌器內部加壓時 互鎖安全裝置可以防止門被打開 而沒有互鎖裝置的高壓滅菌器 應當關閉主蒸汽閥并待溫度下降到80 以下時再打開門 5 即使溫度下降到80 以下 操作者打開門時也應當戴適當?shù)氖痔缀兔嬲謥磉M行防護 6 在進行高壓滅菌效果的常規(guī)監(jiān)測中 生物指示劑或熱電偶計應置于每件高壓滅菌物品的中心 最好在 最大 裝載時用熱偶計和記錄儀進行定時監(jiān)測 以確定滅菌程序是否恰當 7 滅菌器的過濾器 如果有 應當每天拆下清洗 8 應當注意保證高壓滅菌器的安全閥沒有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 焚燒在處理那些經(jīng)過或事先未經(jīng)清除污染的動物尸體以及解剖組織或其他實驗室廢物時 焚燒是一種有效的方法 只有在實驗室可以控制焚燒爐 并且能夠有效地控制溫度和配備了二級焚燒室時 才能用焚燒代替高壓滅菌來處理感染性物質 焚燒也是一種處理被朊蛋白污染物品的有效方法 生物安全實驗室微生物操作技術規(guī)范 需要焚燒的材料 即使事先已清除污染 應當用袋子運送到焚燒室 最好使用塑料袋 負責焚燒的工作人員應當接受關于如何裝載和控制溫度等的正確指導 還需要注明的是 焚燒爐的操作是否有效主要取決于對需要處理的廢物中物品的正確混合 危險度評估 危險評價首先集中在實驗室相關感染的防御上 當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染因子時 對某一個特定的操作程序或實驗進行危險度評估 危險評價幫助正確選擇生物安全水平 設施 設備和操作 評估職業(yè)性疾病風險 采取相應安全防護措施 減少危險性事件發(fā)生 危險度評估 在進行危險性的評估和選擇安全防護措施時 應充分考慮有關實驗以及實驗動物的特點 可能直接或間接參與風險的傳染性病原 工作人員的專業(yè)素養(yǎng)及經(jīng)驗 實施項目的具體活動和程序等因素 做出決策 根據(jù)傳染過程的基本因素 減少工作人員暴露的危險和使環(huán)境污染降到最低限度 危險度評估 危險度評估應當由那些對微生物特性 設備和操作程序 動物模型 屏障設備和設施最為熟悉的人員來進行 授權的專業(yè)人員進行 危險度評估一旦進行 在必要時就應當對它進行常規(guī)性的評估和修訂 同時要考慮收集與危險程度相關的新資料以及來自科學文獻的其他相關的新信息 微生物的危險評價涉及范疇 1 已知的傳染微生物經(jīng)過鑒定的病原體 有實驗室研究 疾病監(jiān)測和流行病學研究危險評價資料 2 未知傳染微生物對未知傳染微生物危險評價的需要考慮以下方面 傳染性 傳播途經(jīng) 發(fā)病率和死亡率等流行病學和病原血清型等生物學特性資料 微生物的危險評價涉及范疇 3 基因修飾微生物通過基因修飾技術獲得的具有新特性的微生物 通常通過受體和供體的生物特性和用量 進行危險性評價 修飾后是否改變其毒性 繁殖能力 宿主范圍 與宿主染色體整合性和對細胞生長周期的影響等 4 未知傳染性的生物材料在缺少資料證明有或沒有未知傳染性微生物材料時應該擴展防護范圍和提高防護級別 危險度評估內容 進行微生物危險度評估最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級 然而對于一個特定的微生物來講 在進行危險度評估時僅僅參考危險度等級的分類是遠遠不夠的 適當時還應考慮其他一些因素 包括 1 微生物的致病性和感染劑量越是發(fā)病率高 后果嚴重的病原越是危險 病原體的來源在危險評價時必須考慮在內 來源 涉及到微生物來源的地域 宿主和特點 危險度評估內容 2 暴露的后果發(fā)生暴露后對人員或環(huán)境可能的危害后果3 自然感染途徑傳染性病原能通過四種主要的感染途徑而致病 即攝人 吸人 黏膜接觸以及腸道外直接接種 感染途徑 可能與自然患病的感染途徑相類似 也可能截然不同 危險度評估內容 4 實驗室操作所造成的其他感染途徑 非消化道途徑 空氣傳播 食入 傳染性病原可通過天然的或人為的方式從實驗動物體內逸散 經(jīng)尿液 唾液和糞便排出或從皮膚損害部位釋出是天然逸散方式的例子 促使傳染性病原從實驗動物體內逸散的人為方式有很多 用針頭和注射器從病毒血癥動物身上抽取血樣 活組織檢查或尸體剖檢操作者時被帶有污染物的針頭 刀刃刺傷 割破或擦傷 以及被動物咬傷而直接接種 照料動物 實驗操作時吸人帶污染物的氣溶膠被濺出的污染物 污染的手和污染的表面接觸操作人員的眼睛 鼻腔或口腔黏膜 氣溶膠傳播的可能性越大 危險性越高 通過氣溶膠傳播的疾病最容易發(fā)生實驗室感染 危險度評估內容 進行微生物危險度評估最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級 然而對于一個特定的微生物來講 在進行危險度評估時僅僅參考危險度等級的分類是遠遠不夠的 適當時還應考慮其他一些因素 包括 1 微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性不僅考慮微生物的傳染性 細菌芽胞 而且要考慮其在環(huán)境中的存活力 抗性越強越危險 危險度評估內容 2 所操作微生物的濃度和濃縮樣品的體積根據(jù)研究內容 病原體濃度決定危險的程度 濃度越高越危險 3 適宜宿主 人或動物 的存在常見的人畜共患疾病文獻記載的職業(yè)性疾病來源人體患病的嚴重程度 對疾病的抵抗力 危險度評估內容 4 從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息在人體數(shù)據(jù)缺乏時 動物研究數(shù)據(jù)可對危險評價提供有用的資料 動物體致病性 傳染性和傳播途徑的信息可提供有價值的提示 但推論從一種動物到另一種動物傳染性時 必須小心驗證 危險度評估內容 5 計劃進行的實驗室操作 如濃縮 超聲處理 氣溶膠化 離心等 實驗室操作內容與其設備相關操作細則是否可保證其不泄露 實驗程序和操作方法 操作的性質和作用避免操作者攝人吸人 直接接種 割破或擦傷 針刺 咬傷直接接觸可能性 危險度評估內容 6 可能會擴大微生物的宿主范圍或改變微生物對于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術對開展遺傳修飾微生物方面的工作進行危險度評估時 必須要包括對其潛在的危害程度 后果的嚴重性以及發(fā)生這種危害的可能性或頻率大小 宿主的易感性 宿主菌的致病性 包括毒力 傳染性 毒素生成 宿主范圍的變化 受體的免疫程度以及免疫系統(tǒng)的狀態(tài) 暴露后果的嚴重性 直接由插入的外源性基因片段所產(chǎn)生的危害當插人外源性基因后的產(chǎn)物具有有害生物學活性危害性等方面的評估 危險度評估內容 當?shù)厥欠窨梢赃M行有效的預防或治療干預預防和治療的有效性是應該考慮的重要因素 有效性越低 危險性越大 反之亦然 試驗室工作人員 有無免疫預防措施 文獻記載的職業(yè)性疾病 工作人員的素養(yǎng)及經(jīng)驗 危險度評估內容 危險度評估時 只有在明確了上述信息的基礎上 才能明確所計劃開展的研究工作的生物安全水平級別 并選擇合適的個體防護裝備 對于那些所知甚少的樣品當了解了足夠的信息時 才能很好地進行上述危險度評估 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 為保證菌 毒 種管理體系能規(guī)范化制度化正常運作 制定符合本單位實際情況的菌 毒 種管理及監(jiān)督標準操作細則 SOP 是非常必要的 該 SOP 主要內容包括 菌 毒 種管理與監(jiān)督標準操作細總則 其內容包括菌 毒 種接收 分離 標準操作細則 SOP 種子批制備與質控準操作細則 SOP 菌 毒 種使用 保藏 分發(fā)標準操作細則 SOP 菌 毒 種銷毀標準操作細則 SOP 菌 毒 種事故應急處理標準操作細則 SOP 菌 毒 種管理監(jiān)督標準操作細則 SOP 在各細則中根據(jù)其實際內容或實驗 制定更詳細的各實驗獨立的操作細則 并制作對應的規(guī)范化表格化的原始記錄 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 1 菌 毒 種管理與監(jiān)督標準操作細總則總則的內容主要為菌 毒 種管理與監(jiān)督的制定SOP指導思想 各SOP形成與批準程序 主要內容提要 以及各SOP目錄 實施與監(jiān)督部門 2 菌 毒 種接收 分離 標準操作細則 SOP 菌 毒 種接收標準操作細則 SOP 要求內容 接收 外購 贈送 審批與接收程序 對菌種來源 背景資料的要求 接收樣品的檢驗 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 要求配套原始記錄 1 菌 毒 種外購 接受贈送 申請表 2 菌種來源 背景資料登記記錄 3 菌 毒 種入庫登記表 4 外來菌種傳代與檢驗記錄 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 菌 毒 種分離標準操作細則 SOP 取樣程序 對菌種來源 背景資料的要求 樣品的分離操作 如分離過程較復雜可分寫各自獨立SOP 1 樣品來源 背景資料登記記錄 2 菌 毒 種分離記錄 3 外來菌種傳代與檢驗記錄 4 菌 毒 種入庫或處理登記表 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 3 菌 毒 種種子批制備與質控標準操作細則 SOP 菌 毒 種種子批制備標準操作細則 SOP 內容包括原代主代及工作種子批制品過程各工藝要求細則 批準種子批發(fā)行使用程序 各過程應制定相對應實驗原始記錄 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 菌 毒