「光合細(xì)菌的培養(yǎng)及應(yīng)用方法」.doc

光合細(xì)菌的培養(yǎng)及應(yīng)用方法光合細(xì)菌(簡(jiǎn)稱(chēng)PSB)是地球上最早出現(xiàn)具有原始光能合成體系的原核生物，是一大類(lèi)在厭氧條件下進(jìn)行不放氧光合作用的細(xì)菌的總稱(chēng)，廣泛存在于地球生物圈的各處。光合細(xì)菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用主要有以下五個(gè)方面：作為養(yǎng)殖水質(zhì)凈化劑；作為飼料添加劑；用于魚(yú) 、蝦、貝幼體的培育；作為動(dòng)物性生物餌料的餌料；防治魚(yú)病。一、培養(yǎng)工具的消毒方法1加熱消毒法：利用高溫殺死微生物的方法。（1）直接灼燒：此法可直接把微生物燒死，滅菌徹底，但只適用于小型金屬或玻璃工具的消毒。（2）煮沸消毒：一般煮沸510分鐘，適用于小型容器、工具的消毒。（3）烘干箱消毒：亦稱(chēng)為恒溫干燥箱消毒法。 2化學(xué)藥品消毒法：適用在批量培養(yǎng)中，大型容器、工具、玻璃鋼水槽和水泥池中。（1）酒精：濃度為70的酒精常用于中、小型容器的消毒。用紗布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分鐘后，用消毒水沖洗兩次即可。（2）高錳酸鉀：按300ppm配成高錳酸鉀溶液，把洗刷潔凈的容器、工具放在溶液中浸泡5分鐘，取出，再用消毒水沖洗2次3次即可。二、光合細(xì)菌的培養(yǎng)條件1、 營(yíng)養(yǎng)條件光合細(xì)菌細(xì)胞體構(gòu)成元素主要有：碳、氫、氧、氮、磷、鉀、鈉、鎂、鈣、硫和一些微量元素等，它們也是所有生物細(xì)胞構(gòu)成的主要物質(zhì)。一般情況下，比重：水占80-90、無(wú)機(jī)鹽1-1.5、蛋白質(zhì)7-10、脂肪1-2、糖類(lèi)和其它有機(jī)物1-1.5。其中干細(xì)胞含碳45-55、氫5-10、氧20-30、氮5-13、磷3-5、其它礦物元素3-5。光合細(xì)菌的細(xì)胞膜具有半透性，能選擇性地讓營(yíng)養(yǎng)成分按一定需要進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，在酶的作用下合成自己的細(xì)胞組分并促進(jìn)分裂新的個(gè)體。營(yíng)養(yǎng)元素的全面合理的搭配,是培養(yǎng)高產(chǎn)光合細(xì)菌的關(guān)鍵。根據(jù)這一要求,鄭州生物材料公司選用多種光合細(xì)菌生長(zhǎng)必需的原料，科學(xué)配方，經(jīng)特殊加工而成的光合細(xì)菌發(fā)生劑（培養(yǎng)基），基本符合光合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的營(yíng)養(yǎng)要求，無(wú)毒無(wú)副作用，使用安全，固狀結(jié)晶體便于包裝和運(yùn)輸，而且有2年的保質(zhì)期。光合細(xì)菌培養(yǎng)基是光合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需各種營(yíng)養(yǎng)元素的復(fù)合體。每種原料都能得以充分利用，最大限度地生產(chǎn)高濃度的菌液，因此，單位效價(jià)的光合細(xì)菌菌液生產(chǎn)成本低、質(zhì)量好，這無(wú)論是對(duì)于用戶(hù)、經(jīng)銷(xiāo)商還是廠家都有很大的益處，對(duì)在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的推廣和普及將產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。2.環(huán)境條件有了營(yíng)養(yǎng)全面的光合細(xì)菌培養(yǎng)基，只是滿(mǎn)足了其生長(zhǎng)的內(nèi)在條件，并不能培養(yǎng)出光合細(xì)菌菌液。還需有適宜光合細(xì)菌生長(zhǎng)的環(huán)境條件，才能培養(yǎng)出優(yōu)質(zhì)的菌液。環(huán)境條件具體有以下幾個(gè)方面：（1）.培養(yǎng)介質(zhì)：含菌量低的清潔淡水、海水或加粗食鹽的淡水。從經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的角度考慮，地下水含菌量低，為最佳水源；清潔的地表水也可使用；含氯量較高的自來(lái)水應(yīng)敞口放置兩三天或調(diào)pH值至偏堿后使用；蒸餾水及純凈水固然很好，但成本太高，可用于提純菌種。（2）.酸堿度（pH）值：7.5-8.5最佳（適應(yīng)范圍6-10）。（3）.水硬度：pH值中性時(shí)10度以下。即調(diào)節(jié)pH值至8.0左右時(shí)，培養(yǎng)介質(zhì)中的乳白色沉淀物不宜過(guò)多。（4）.溫度：25-34最佳（適應(yīng)范圍15-40）。（5）.光照強(qiáng)度:3000LX-4000LX最佳。即每25千克菌液需用60瓦左右的電燈泡進(jìn)行光照，當(dāng)然，太陽(yáng)光最好且無(wú)需成本。（6）.透氣性：密閉、敞口皆可培養(yǎng)，密閉效果更好。（7）.容器：透明或白色容器；大規(guī)模培養(yǎng)可用土池、水泥池等，菌液深度30厘米以下為佳。三、接種培養(yǎng)基配制好后，應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的接種量比較高， 一般為2050，即菌種母液量和新配培養(yǎng)量之比為1：4（20）1：1（50），且不 應(yīng)低于20，尤其微氣培養(yǎng)接種總量應(yīng)高些，否則，光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。四、光合細(xì)菌的生產(chǎn)工藝1、培養(yǎng)液的配制將光合細(xì)菌培養(yǎng)基取一小包（0.5公斤），放入一個(gè)干凈的容器中，加入100公斤水，攪拌均勻，直到培養(yǎng)基溶化為止。注意事項(xiàng)：水源一定要選擇好，含菌量較低的清潔淡水、海水或加粗食鹽的淡水。從經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的角度考慮，地下水（井水）含菌量低，為最佳水源，另外，若當(dāng)?shù)刈詠?lái)水含氯較低，也可用，效果很好；清潔的地表水也可使用；含氯量較高的自來(lái)水應(yīng)敞口放置兩三天或調(diào)pH值至偏堿后使用。容器：少量生產(chǎn)可用透明度較高的白色或透明塑料桶、玻璃容器。大量生產(chǎn)可用水泥池、水泥船，也可臨時(shí)開(kāi)挖土池，墊上雙層塑料膜防漏防渾濁，培養(yǎng)液的深度為30厘米最佳。 2、培養(yǎng)方式有以下二種： （1）做小規(guī)模培養(yǎng) 容器為：1.25升的飲料瓶，即小規(guī)模生產(chǎn)方法，由于飲料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培養(yǎng)環(huán)境好，需要的接種量也少， 比較簡(jiǎn)單。 設(shè)備為：光照箱，用一個(gè)大的紙箱，放1個(gè)40瓦的白熾燈懸掛在箱子的頂部？（注意防火），紙箱內(nèi)壁四周，擺裝好了培養(yǎng)液并接了種的飲料瓶，這樣，既達(dá)到了保溫到2540度的效果，又達(dá)到了光照的效果。較大的箱子要用60瓦的白熾燈，一般一個(gè)箱子，可 放這種飲料瓶8個(gè)以上，即一次可生產(chǎn)約10公斤/箱。 燈泡與瓶子的距離不超過(guò)20厘米。夏天，可撤去紙箱，以防溫度過(guò)高，并在紙箱四周鉆孔以散熱。 操作規(guī)程如下： 配料：培養(yǎng)液和液體菌種4：1 培養(yǎng)：在箱子內(nèi)，打開(kāi)白熾燈，照幾天即可，一般可達(dá)到溫度在35度，控制在30-40度之內(nèi)，第一次培養(yǎng)可能需要5天以上，每天早晚?yè)u晃兩次，一般只需要2天即可長(zhǎng)成深紅色。 成熟標(biāo)準(zhǔn)：以培養(yǎng)液長(zhǎng)成深紅色為準(zhǔn)，這時(shí)一般成品的光合細(xì)菌濃度可達(dá)到30-50億/毫升。（2）大規(guī)模培養(yǎng)：利用太陽(yáng)能大規(guī)模培養(yǎng)（以培養(yǎng)2噸菌液為例）：選擇陽(yáng)光充足的地方，開(kāi)挖一土池（長(zhǎng)5米、寬1.8米、深0.4米），墊上塑料薄膜，然后再鋪上桶狀塑料薄膜，并將其一端密封，從另一端加入1.8噸配制好的培養(yǎng)液，和0.2噸的菌種，一共2噸，排盡薄膜中空氣后，再將該端密封。保持適當(dāng)?shù)臏囟?，冬天如果溫度過(guò)低，搭建透明塑料薄膜棚增溫。5天后，菌液培養(yǎng)成熟。五、培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)日常管理包括測(cè)試、觀察和分析處理等三個(gè)方面。1.測(cè)試（1）攪拌：光合細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中必須攪拌或充氣，其作用 是幫助沉淀的光合細(xì)菌上浮獲得光照，保持菌細(xì)胞的良好生長(zhǎng)，每天至少搖動(dòng)3次，定時(shí)進(jìn)行。（2）調(diào)節(jié)光照度：培養(yǎng)光合細(xì)菌需要連續(xù)進(jìn)行照明，白天可利用太陽(yáng)光源培養(yǎng)，晚間則需人工光源照明，或完全利用人工光源培養(yǎng)。人工光源一般使用碘鎢燈或白熾燈泡。一般培養(yǎng)光照強(qiáng)度控制在2000lx5000lx之間。（3）調(diào)節(jié)溫度：在光合細(xì)菌的培養(yǎng)過(guò)程中，一般在2339均能正常生長(zhǎng)繁殖，但如果溫度過(guò)低，可以把培養(yǎng)容器放在箱子里，利用白熾燈炮散發(fā)的熱提高箱內(nèi)溫度，并根據(jù)需要調(diào)整箱子的密封程度達(dá)到調(diào)節(jié)溫度的目的。（4）酸堿度的測(cè)定和調(diào)整為了延長(zhǎng)光合細(xì)菌的指數(shù)生長(zhǎng)期，提高培養(yǎng)基的利用率和單位水體的產(chǎn)量，測(cè)定和調(diào)整pH值是一項(xiàng)重要措施。一般采用加酸的辦法降低菌液的酸堿度，醋酸、乳酸均可使用，而最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必須每天測(cè)定菌液的pH值，當(dāng)pH值上升超出最適范圍，即加酸調(diào)整。（5）測(cè)定光密度（O.D.）值光密度值和細(xì)胞干重之間是近似線性關(guān)系，這種相關(guān)關(guān)系常用來(lái)測(cè)定培養(yǎng)物的濃度。首先根據(jù)測(cè)定的數(shù)據(jù)畫(huà)出相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，然后測(cè)定菌液的光密度值，即可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線大致估算出菌細(xì)胞的濃度。光密度值常用分光光度計(jì)測(cè)定。在日常管理工作中，通過(guò)測(cè)定菌液的光密度，可以了解光合細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖情況。2.生長(zhǎng)情況的觀察和檢查在培養(yǎng)過(guò)程中，可以通過(guò)觀察菌液的顏色及其變化來(lái)了解光合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的大致情況。菌液的顏色是否正常，接種后顏色是否由淺迅速變深，均反映光合細(xì)菌生長(zhǎng)是否正常以及繁殖速度的快慢。此外，通過(guò)測(cè)定菌液的光密度值及其變化情況，能更準(zhǔn)確地了解菌體的生長(zhǎng)繁殖情況。接種后，光密度值迅速加大，表示生長(zhǎng)正常、繁殖迅速。如果光密度值不增加以及菌液顏色不正常、出現(xiàn)菌體附壁等現(xiàn)象，說(shuō)明培養(yǎng)效果不良。必要時(shí)還可以通過(guò)顯微鏡檢查，了解細(xì)菌生長(zhǎng)情況。3.問(wèn)題的分析和處理：通過(guò)日常管理、檢測(cè)、觀察和檢查，了解光合細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，就可以結(jié)合當(dāng)時(shí)環(huán)境條件的變化進(jìn)行分析，找出影響光合細(xì)菌正常生長(zhǎng)的原因，采取相應(yīng)的對(duì)策。影響光合細(xì)菌生長(zhǎng)的原因很多，從內(nèi)因看菌種本身是否優(yōu)良，即接種的母種的質(zhì)量是否優(yōu)良；從外因看，不外乎是光照、溫度、營(yíng)養(yǎng)、敵害、厭氣程度等方面。六、光合細(xì)菌的培養(yǎng)液顏色解析 平時(shí)，在我們培養(yǎng)光合細(xì)菌的生產(chǎn)實(shí)踐中，經(jīng)常會(huì)遇到培養(yǎng)液出現(xiàn)不同的顏色，自然界的光合細(xì)菌分別屬于紅螺菌科、著色菌科、綠桿菌科、和綠色絲狀菌科等四個(gè)科目，一共23屬，80余種菌侏。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖上用得最為廣泛的種類(lèi)是紅螺菌科，特別是紅色假單孢菌屬中的種類(lèi)。這類(lèi)光合細(xì)菌在凈化水質(zhì)、防治疾病和促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)方面有著較明顯的效果。1、光合細(xì)菌培養(yǎng)液的顏色。 光合細(xì)菌的光合色素包括細(xì)菌葉綠素和胡蘿卜素，菌體因各種色素含量的不同而呈現(xiàn)出不同的顏色。一般紅螺菌科和著色菌科的菌呈現(xiàn)出紅色、粉紅色、橙色、紫色或茶褐色；綠桿菌科和綠色絲狀菌科的菌呈現(xiàn)出綠色。但由于培養(yǎng)條件的不同，其顏色在此基礎(chǔ)上仍會(huì)有變化：如球形紅色假單孢菌和莢膜紅色假單孢菌的厭氧液體培養(yǎng)液呈茶褐色，而在半好氧（微厭氧）狀態(tài)下培養(yǎng)液呈紅色。這是因?yàn)橛捎谘醯拇嬖冢瑢?duì)光合細(xì)菌色素的合成有十分明顯的抑制作用。下表為水養(yǎng)殖中常用的紅色假單孢菌屬的幾個(gè)種在不同培養(yǎng)條件下的呈色反應(yīng)：表一、紅螺菌科紅假單孢菌屬中的幾個(gè)種在厭氧條件與半好氧條件下液體培養(yǎng)物的顏色比較菌種名稱(chēng)厭氧液體培養(yǎng)物的顏色半好氧液體培養(yǎng)物的顏色R. gelatinosa青桃色至深黃褐色無(wú)色至淺黃褐色R. capsulata淺黃褐色至深褐色深紅至紫紅色（若空中振蕩幾小時(shí)成紅色）R. sphaeroides初為淡綠褐色，后為暗褐色獨(dú)特的紅色（在空氣中振蕩幾小時(shí)，厭氧下的褐色也轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色）R. palustris初為淡粉紅色，后成紅至褐紅色，老的為暗紅褐色無(wú)色至粉紅色R. viridis最初為黃綠色，以后綠色至橄欖綠色無(wú)色至淡黃綠色。2、生產(chǎn)實(shí)踐中光合細(xì)菌培養(yǎng)液顏色變化的分析：很多客戶(hù)一般在培養(yǎng)的開(kāi)始期，如頭幾天會(huì)出現(xiàn)黃褐色，或淺黃色，如果堅(jiān)持培養(yǎng)下去，而不是就此倒掉，最終仍可以培養(yǎng)出外觀質(zhì)量較好的紅色菌液來(lái)。從上表也可以看出，往往是最后才變成紅色。很多客戶(hù)往往出現(xiàn)，同樣的操作，同一批產(chǎn)品，為什么有的培養(yǎng)容器中會(huì)產(chǎn)生綠色的溶液顏色。這時(shí)，您可能要檢查一下，是否容器密封得太死，最好是有一點(diǎn)氧氣進(jìn)入會(huì)更好。從上表也可以看出，在半好氧的條件下，往往可以得到比較鮮艷的紅色產(chǎn)品。所以培養(yǎng)時(shí)，最好能進(jìn)入一次空氣，或在容器中留一部分空氣，一來(lái)可以保持半好氧狀態(tài)，二來(lái)也便于搖晃均勻。如果最終培養(yǎng)成為了綠色的液體，這時(shí)，培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)也已消耗殆盡了，只是不能作為商品出售，可以自用（也是光合細(xì)菌）。另外，溫度高，光照強(qiáng)的條件下，容易得到綠色菌，這是因?yàn)榇藭r(shí)的條件容易造成水體缺氧，從而引起綠色菌的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)?？傊?，要得到顏色鮮艷的紅色菌，就必須注意以下幾個(gè)條件，1、注意要保持半好氧培養(yǎng)的條。2、溫度光照不要太強(qiáng)。3、出現(xiàn)一點(diǎn)綠色也不要灰心，要及時(shí)采取措施，如增加供氧，遮蔭降溫等，并堅(jiān)持培養(yǎng)下去。4、平時(shí)注意用燈泡和紙箱的培養(yǎng)方式，不間斷地培養(yǎng)一些菌種，因?yàn)楸鼐惯@種培養(yǎng)的方式得到的培養(yǎng)液的質(zhì)量好，菌體穩(wěn)定。七、光合細(xì)菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用技術(shù) 1、凈化水質(zhì) 由于高密度水產(chǎn)養(yǎng)殖的水體中含有大量的魚(yú)類(lèi)糞便和殘餌，以及魚(yú)藥的殘留物，它們腐敗后產(chǎn)生的氨態(tài)氮、硫化氫和一些有害物質(zhì)，直接污染水體和底泥。輕度污染可造成魚(yú)類(lèi)生活不適，餌料系數(shù)增高，生長(zhǎng)緩慢，積累到一定程度后，可使水體底部缺氧的情況下，PSB能有效地將氨態(tài)氮、硫化氫等有害物質(zhì)吸收，組成菌體本身，從而提高水體中溶氧含量，調(diào)節(jié)pH。水體的富營(yíng)養(yǎng)化亦可滋生大量的病原微生物，使魚(yú)類(lèi)感染發(fā)病。施用PSB后，還能抑制其它病原菌的生長(zhǎng)，從而達(dá)到凈化水質(zhì)，使魚(yú)類(lèi)健康生長(zhǎng)的目的。 2、維護(hù)水體微生態(tài)平衡 水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)的水體中存在著各種各樣的微生物，有些是有益的，有些是有害的；也有些是處于中間狀態(tài)的叫“條件致病微生物”，即正常情況下，這類(lèi)微生物不致病，遇水質(zhì)污染，魚(yú)類(lèi)免疫功能下降時(shí)，它們便大量繁殖危害魚(yú)類(lèi)。 通常人們采用消毒殺菌劑來(lái)控制，但隨著施用次數(shù)的增加，病原微生物的耐藥性也相應(yīng)地增強(qiáng)，為了達(dá)到預(yù)防和治療的效果，每次施用的劑量不得不逐漸加大，這不僅增加了用藥成本，而且還污染了水體，造成水產(chǎn)品質(zhì)量下降，甚至不能食用。 如何控制病原微生物的生長(zhǎng)繁殖，又不使其不產(chǎn)生抗藥性，不污染水體呢？答案是現(xiàn)成的，用光合細(xì)菌預(yù)防魚(yú)病，完全可克服消毒殺菌劑的缺點(diǎn)，它不僅可降解或清除水體中包括魚(yú)藥在內(nèi)的有害化學(xué)物質(zhì)，占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的光合細(xì)菌還可與病原微生物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)、空間，使其無(wú)法進(jìn)行大量生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)還不存在病原微生物耐藥性問(wèn)題，從而不易形成致病的環(huán)境條件，魚(yú)類(lèi)也就不易發(fā)病。 魚(yú)類(lèi)的病害防治原則是：防重于治。只有在日常的漁業(yè)生產(chǎn)中，維持水體中微生態(tài)系統(tǒng)平衡，使有益微生物始終占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，盡量不給病原微生物有大量生長(zhǎng)繁殖的機(jī)會(huì)，才是健康養(yǎng)殖的出路之一，如果平時(shí)不能有效地預(yù)防，到了出現(xiàn)癥狀再去治療，包括魚(yú)藥成本在內(nèi)的重大生產(chǎn)損失將是不可避免的。 3、培養(yǎng)蜉蝣動(dòng)物作餌料 PSB的菌體細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)很豐富，這正好是蜉蝣動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)餌料，實(shí)踐證明，水體中的PSB越多，蜉蝣動(dòng)物生長(zhǎng)也就越旺盛，以蜉蝣動(dòng)物為食的魚(yú)類(lèi)增產(chǎn)效果也就越明顯 4、作為飼料添加劑 PSB的菌體細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)豐富，并含有大量的生理活性物質(zhì)，可直接拌入飼料中投喂，除增加營(yíng)養(yǎng)，降低飼料系數(shù)外，還可起到刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)消化和抗病能力，促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。 5、間接增氧作用 PSB生長(zhǎng)繁殖時(shí)，不需要氧氣，也不釋放氧氣，它是通過(guò)吸收水體中的耗氧因子，而產(chǎn)生了間接地增加氧氣的作用。八、光合細(xì)菌在養(yǎng)殖和種植上的用法用量 （一）PSB在水產(chǎn)及畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用劑量及注意事項(xiàng)。 PSB對(duì)各種水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物都有益，尤其是育苗階段的效果特別地明顯，具有成活率高于對(duì)照2060%，用于成魚(yú)育肥，增產(chǎn)20%左右，餌料系數(shù)下降20%左右，個(gè)體增重15%，且無(wú)任何副作用。 育苗用量：每平方米用100克。間隔10天用一次。 魚(yú)育肥：首次用7公斤一畝，以后用45公斤/畝，間隔15天用一次。 魚(yú)苗或病魚(yú)藥浴：用光合細(xì)菌稀釋10倍，把魚(yú)苗或病魚(yú)放入游15分鐘即可。 藥浴后，可使藥浴魚(yú)蝦成活率提高90%，如患粘細(xì)菌病、爛鰓病、打印病后成活60-100%，患水霉病、赤鰭病、擦傷病后成活近100%且無(wú)任何藥浴副作用。 飼料中用量：魚(yú)苗5%，成魚(yú)3%，禽畜3%-5%，現(xiàn)拌現(xiàn)喂，喂水添加3%?，F(xiàn)拌現(xiàn)喂。 施用方法：適當(dāng)用水稀釋后全池灑勻，若先用生石灰后2小時(shí)，再用PSB則效果更好。 注意事項(xiàng)：不可與消毒殺菌劑同時(shí)使用，水體消毒須1周后方可使用。晴天水溫在20度以上時(shí)使用效果較好。液體PSB拌入料中后應(yīng)于當(dāng)天用完。酸性水體易使魚(yú)生病，且不利于PSB生長(zhǎng)，應(yīng)常用生石灰調(diào)節(jié)水體pH值。 （二）在種植業(yè)上的應(yīng)用：水稻、小麥：每次畝用5千克葉面噴施。水稻秧苗期、孕穗期各用一次；小麥冬肥、拔節(jié)期各用一次。油菜：基肥畝用15千克澆根。竄苔前畝用15千克葉面噴施。瓜果類(lèi)蔬菜：每次畝用10千克，幼苗期稀釋澆根一次，現(xiàn)蕾期噴一次。葉菜類(lèi)蔬菜：每次畝用20千克，生長(zhǎng)期澆根或葉面噴施，7天用一次。花卉：移載后每畝40千克澆根，生長(zhǎng)期每畝20千克噴施，15天一次。茶樹(shù)：播種基肥畝用80千克。冬肥畝用40千克澆根。萌發(fā)期前畝用20千克澆根，葉片生長(zhǎng)期畝用15千克噴施，每15天一次。果樹(shù)：冬肥畝用40千克澆根。新葉長(zhǎng)成后畝用20千克葉面噴施。（三）使用方法（1）將光合細(xì)菌菌液稀釋20-30倍全池均勻潑灑。（2）將菌液用沸石粉吸附或拌和細(xì)土后撒入池中。（3）將菌液拌和飼料后投喂。（4）將菌液稀釋10倍后，浸泡魚(yú)種。（5）拌種、澆根、葉面噴施。（四）.注意事項(xiàng)（1）不可與消毒殺菌劑混合使用，水體消毒須1周后方可使用。（2）使用前，將菌液光照10小時(shí)以上，使用效果更好。（3）晴天水溫20以上時(shí)使用效果較好。（4）拌入的飼料應(yīng)于當(dāng)天投喂完畢。（5）應(yīng)靈活掌握用量和使用的連續(xù)性，因?yàn)楣夂霞?xì)菌在水體中只有形成優(yōu)勢(shì)群落后，才能發(fā)揮最大的作用。宜春專(zhuān)利中心提供光合細(xì)菌發(fā)生劑。 （6）水體呈堿性時(shí)施用效果最好。酸性水體易使魚(yú)類(lèi)生病，應(yīng)常用生石灰或燒堿調(diào)節(jié)pH值至中性或偏堿程度。（7）光合細(xì)菌菌液不能用金屬器皿貯存。（8）培育魚(yú)苗時(shí)，在苗種入池前7天全池潑灑，以利于浮游生物生長(zhǎng)。（9）植物萌發(fā)期，施用效果最好。九、光合細(xì)菌液體成品的保存方法 成品應(yīng)放在低溫環(huán)境下，15度以下最好，夏季應(yīng)放在涼爽的地方，并要保持一定的光照度，每天不低于2小時(shí)，這是因?yàn)镻SB在剛剛結(jié)束培養(yǎng)時(shí)，正處于生長(zhǎng)旺盛期，形成了很強(qiáng)的“生長(zhǎng)慣性”，如果此時(shí)突然沒(méi)有了光照或光照很弱，經(jīng)510天后會(huì)出現(xiàn)光合作用失衡而導(dǎo)致大量死亡，使菌液發(fā)黑，并有惡臭，剛開(kāi)始發(fā)黑時(shí)若施以適當(dāng)光照，即可緩和。所以剛培養(yǎng)好的成品應(yīng)盡量降溫，逐步降光照，以減少生長(zhǎng)慣性，到了生長(zhǎng)慣性很弱或沒(méi)有慣性時(shí)，PSB就進(jìn)入了穩(wěn)定期，此時(shí)在陰涼避光處可保存6個(gè)月。 總之，保存期的長(zhǎng)短主要取決于溫度、光度。通常您在正常的連續(xù)的生產(chǎn)及使用過(guò)程中，對(duì)PSB的的保存及留種無(wú)須做特別的處理，如：夏天在太陽(yáng)下培養(yǎng)的產(chǎn)品就放于陽(yáng)光下，可保2個(gè)月，可不斷地再培養(yǎng)，擴(kuò)大，反復(fù)等。秋天，培養(yǎng)的最后一批產(chǎn)品可保1年之久。十、光合細(xì)菌的活菌計(jì)數(shù)和純種分離技術(shù)采用瓊脂固體培養(yǎng)基涂抹培養(yǎng)計(jì)數(shù)分離法。條件：無(wú)菌室、過(guò)濾空氣鼓風(fēng)工作臺(tái)、平皿、接種針、固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、密封玻璃試管、高壓滅菌鍋、加熱器、培養(yǎng)箱等。步驟：（在無(wú)菌室內(nèi)操作）1.將適量瓊脂固體培養(yǎng)基高壓蒸煮(120)20分鐘后，倒入若干個(gè)平皿冷卻到45以下，制成固體培養(yǎng)基待用。2.取待測(cè)光合細(xì)菌菌液，分別用蒸餾水以10萬(wàn)倍、50萬(wàn)倍、100萬(wàn)倍、500萬(wàn)倍、5000萬(wàn)倍、10000萬(wàn)倍 稀釋。3.分別從每個(gè)稀釋倍液中取1毫升的樣本各10個(gè)，均勻涂布于貼好相應(yīng)標(biāo)簽的平皿內(nèi)固體瓊脂培養(yǎng)基平面上。4.將平皿放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)12-50個(gè)小時(shí)，如菌落未長(zhǎng)成，再繼續(xù)培養(yǎng)，直到有明顯的菌落長(zhǎng)成為止。5.各種菌的菌落顏色、形狀各不相同，根據(jù)光合細(xì)菌菌落特征，找出光合細(xì)菌菌落，并計(jì)數(shù)。取同稀釋倍液10個(gè)樣本菌落的平均數(shù)，乘以它的稀釋倍數(shù)，即可大約得出待測(cè)菌液每毫升含光合細(xì)菌的活菌數(shù)。取各稀釋倍液算出的每毫升含光合細(xì)菌活菌的平均數(shù)，即可較為準(zhǔn)確地檢測(cè)出該待測(cè)菌液的濃度。實(shí)際操作并不如此簡(jiǎn)單，因?yàn)榫溆须s菌和光合菌交錯(cuò)在一起的，也有兩個(gè)以上光合細(xì)菌菌落合在一起的，很難分辨計(jì)數(shù)。6.用接種針將光合細(xì)菌菌落挑出，用適量蒸餾水稀釋后，再涂布于固體培養(yǎng)基平面上，進(jìn)行培養(yǎng)，待光合細(xì)菌在培養(yǎng)基上再次長(zhǎng)成菌落后，在鼓風(fēng)工作臺(tái)內(nèi)用接種針挑出，接入盛有經(jīng)高壓蒸煮滅活過(guò)液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)，進(jìn)行密封厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)好的光合細(xì)菌就是純菌種。純菌種的分離是專(zhuān)業(yè)性很強(qiáng)的一門(mén)技術(shù)，只有專(zhuān)業(yè)人員，且經(jīng)驗(yàn)豐富的，才能識(shí)別各種菌落，從中分離出有用的菌株。十一、光合細(xì)菌品質(zhì)的鑒別 目前，市面上光合細(xì)菌產(chǎn)品良莠不齊，有些不法廠家為達(dá)到贏利目的，采用色素加水調(diào)配成所謂的光合細(xì)菌，或用培養(yǎng)得不好的劣質(zhì)光合細(xì)菌加色素調(diào)配。這些假、劣產(chǎn)品從外貌看幾乎可以亂真，但是由于質(zhì)量低劣，完全達(dá)不到有關(guān)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)，使用后甚至?xí)埡︷B(yǎng)殖對(duì)象，嚴(yán)重地侵犯了用戶(hù)的利益。如何分辨光合細(xì)菌產(chǎn)品的真與假、劣，成為許多用戶(hù)頭疼的事情?？茖W(xué)培養(yǎng)出來(lái)的光合細(xì)菌產(chǎn)品的紅色是光合細(xì)菌菌體的顏色，為非水溶性的，而用色素調(diào)配出來(lái)的假劣產(chǎn)品的紅色為水溶性色素的顏色。根據(jù)這兩者的不同，我們?cè)O(shè)計(jì)了一套鑒別真與假、劣產(chǎn)品的方法，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)證明該方法科學(xué)、準(zhǔn)確、易操作、易觀察?，F(xiàn)將此方法介紹給廣大用戶(hù)，希望能對(duì)用戶(hù)辨別真與假、劣光合菌產(chǎn)品有所幫助。具體方法如下：1、鑒別綠色色素溶液的配制：稱(chēng)取食用果綠色素0.1克，溶于100毫升自來(lái)水中，配成深綠色的鑒別色素溶液?；蛉∩倭渴秤霉G色素，溶于適量自來(lái)水中，配成深綠色的溶液。2、取樣品：取待測(cè)的樣品10-20毫升裝于干凈、透明的玻璃管中。3、滴2滴鑒別綠色素溶液于裝有待測(cè)樣品的玻璃管中。4、觀察顏色的反應(yīng)。若樣品為真正培養(yǎng)的光合細(xì)菌產(chǎn)品，綠色素溶液則會(huì)與紅色光合細(xì)菌分層，上層綠色為綠色素溶液，下層紅色為光合細(xì)菌液，搖動(dòng)之后稍微放置，分層仍是存在，滴加的鑒別綠色素溶液越多，綠色層所占的比例越多，最后，整玻璃管都為綠色。若是用色素調(diào)配出來(lái)的假光合細(xì)菌產(chǎn)品，可見(jiàn)滴加的鑒別綠色素溶液會(huì)溶于紅色產(chǎn)品中，綠色溶液與紅色溶液不會(huì)分層，輕輕搖動(dòng)后，兩者顏色會(huì)混勻，樣品的紅色加深，紅中帶有點(diǎn)紫，滴加的綠色色素溶液越多，顏色就會(huì)逐漸加深為紫黑色。有些廠家在培養(yǎng)得不好的劣質(zhì)光合細(xì)菌產(chǎn)品中加色素調(diào)色。如果鑒別這一類(lèi)加有色素的劣質(zhì)光合細(xì)菌產(chǎn)品，同樣也可用上述的方法。產(chǎn)品中因色素加量不同，加入鑒別綠色色素溶液后，會(huì)有不同的顏色反應(yīng)。若其產(chǎn)品中紅色素添加量較少，滴加鑒別綠色色素溶液后，會(huì)有分層，上層為淺綠，綠中帶有些紫。隨著產(chǎn)品內(nèi)紅色素加量的增加，滴加綠色素溶液后還會(huì)有分層，但上層較下層深紫紅，產(chǎn)品內(nèi)調(diào)配的紅色素量進(jìn)一步加大，上層顏色為深紫，輕搖后，整管顏色為紫黑色。十二、沼澤紅假單胞菌（光合細(xì)菌）水劑產(chǎn)品質(zhì)量暫行標(biāo)準(zhǔn) 1998-8-4農(nóng)牧函199830號(hào) 沼澤紅假單胞菌（光合細(xì)菌）水劑產(chǎn)品質(zhì)量暫行標(biāo)準(zhǔn) 1主題內(nèi)容與適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了沼澤紅假單胞菌（光合細(xì)菌）水劑產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存的要求。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于沼澤紅假單胞菌類(lèi)（光合細(xì)菌）水劑的生產(chǎn)。2引用標(biāo)準(zhǔn) 下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。在標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均為有效，所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂，使用標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討、使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。 GB 1307991飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB 1309191飼料中沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)方法 GB 838187 飼料中黃曲霉素B1的測(cè)定方法 GB 1307991飼料中總砷的測(cè)定方法 GB 1308091 飼料中鉛的測(cè)定方法 GB 1064893飼料標(biāo)簽3技術(shù)要求31微生物指標(biāo)311菌落形態(tài) 本品稀釋后在瓊脂培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，菌落形態(tài)為草帽形或園形，表面光滑，少隆起，邊緣整齊，棕紅色。312菌體形態(tài) 顯微鏡下觀察，本產(chǎn)品菌體形態(tài)為短桿狀或卵園形，寬0.5-0.9微米，長(zhǎng)1.2-2.0微米，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，單極鞭毛，可運(yùn)動(dòng)。313革蘭氏染色陰性32感觀指標(biāo) 本品為紅色懸浮液體，帶培養(yǎng)基發(fā)酵味，長(zhǎng)時(shí)間靜置紅色懸浮菌體會(huì)逐漸下沉，振蕩后可恢復(fù)懸浮液狀，無(wú)臭味。33光合細(xì)菌含量 總菌數(shù) 不低于30億個(gè)ml 活菌數(shù) 不低于20億個(gè)ml34理化指標(biāo) 酸度pH6.5-7.0 電導(dǎo)率68ms/cm35光譜指標(biāo) 光吸收植A6601.5 A4902.5 A8051.7 A8601.936衛(wèi)生指標(biāo) 沙門(mén)氏菌 無(wú) 黃曲霉素B1 Mg/Kg 0.02 總砷（AS） Mg/Kg 0.5 鉛 Mg/Kg 2.04試驗(yàn)方法41試劑和溶液 除特別注明外，試驗(yàn)中所用試劑為分析純?cè)噭疄檎麴s水或相應(yīng)程度的水，溶液為水溶液。41光合細(xì)菌培養(yǎng)液5.5g磷酸二氫鈉，1.5gDL蘋(píng)果酸，2g乙酸鈉，2g氫氧化鈉，1g氯化銨，0.25g氯化鎂，0.05g氯化鈣溶于1升蒸餾水，再加入本產(chǎn)品生產(chǎn)中用的生長(zhǎng)因子溶液和微量元素溶液各1ml，攪拌均勻，pH應(yīng)于6.5至7.0之間。42常規(guī)實(shí)驗(yàn)和儀器和設(shè)備421分光光度計(jì)：有10mm比色池，可在340900nm處測(cè)量吸光度。422 1600倍光學(xué)顯微鏡423電動(dòng)離心機(jī)（4000轉(zhuǎn)分）424酸度計(jì)：精度0.01pH425電導(dǎo)儀：DDS11型（或同等精度其它型號(hào)）43取樣 需備20ml具塞磨口無(wú)色透明的三角瓶為樣品瓶，洗凈后置烘箱120干燥滅菌，用清潔并滅菌后的25ml移液管（或吸管）隨機(jī)在5桶產(chǎn)品中各取25ml左右置于樣品瓶中混和，將靡口塞蓋嚴(yán)，用膠布封住，貼上標(biāo)簽注明廠名、產(chǎn)品名，批號(hào)。取樣日期、生產(chǎn)日期。按和以上相同方法取樣200ml置于一干燥滅菌潔凈的200ml白塑料瓶中，注明標(biāo)簽（內(nèi)容同上）密封后留存。44檢驗(yàn)方法441微生物檢驗(yàn)4411菌落形態(tài)檢驗(yàn)：用含1.2瓊脂的光合菌用培養(yǎng)液，除菌處理后，在無(wú)菌環(huán)境中，充平皿板，厚約35mm。凝固后取光合菌液做平板劃線，將平皿厭氧培養(yǎng)光照35天，室溫30，35天后長(zhǎng)出紅色菌落，觀察菌落形態(tài)。4412原菌液用培養(yǎng)液稀釋100倍，取一滴置載片上（蓋蓋片）在高倍鏡下（1640）觀察菌形態(tài)大小及運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。4413培養(yǎng)中的菌液一滴做涂片，自然干燥，酒精燈火焰固定，經(jīng)初染（結(jié)晶紫），媒染（路氏碘液），脫色（95乙醇），復(fù)染（番紅染液）后，油鏡（16100）觀察，菌體呈紅色。442感觀檢驗(yàn) 量取樣品500ml，置三角瓶中，用肉眼觀察顏色，用嗅覺(jué)檢察嗅味。長(zhǎng)期靜置已有沉淀的產(chǎn)品應(yīng)先振蕩或攪拌1020秒后再取樣。443含量測(cè)定4431總菌數(shù)測(cè)定：樣品充分振蕩后取0.5ml用水稀釋到200ml滅菌水中，攪勻后從中取數(shù)微升充板入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中（每大格0.1mm3，置600倍顯微鏡下觀察，同時(shí)用紅血球計(jì)數(shù)法記菌數(shù)，將25個(gè)小格的每格菌數(shù)平均值乘1億為每毫升總菌數(shù)。4432活菌數(shù)測(cè)定：將4431節(jié)中稀釋的菌液再稀釋100000倍，取1ml加到10ml培養(yǎng)液中，混合均勻后加入20g/1000