植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及.doc

植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及 常用設(shè)備的使用與維護(hù)1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.熟悉植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的組成及設(shè)備 2.掌握植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)要求 3.熟悉植物組織培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備2 實(shí)驗(yàn)原理植物組織培養(yǎng)是通過無菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。要達(dá)到無菌操作和無菌培養(yǎng)，就需要人為創(chuàng)造無菌的環(huán)境，使用無菌的器皿及器械，同時(shí)還需要人工控制的溫度,光照，濕度等培養(yǎng)條件。無菌環(huán)境和培養(yǎng)條件的創(chuàng)造需要一定的設(shè)施及設(shè)備。三實(shí)驗(yàn)步驟1.實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)要求 功能齊全、布局合理、環(huán)境清潔、易于滅菌2. 實(shí)驗(yàn)室的組成及功能實(shí)驗(yàn)室的組成： 洗滌室、藥品室、稱量室、培養(yǎng)基配制室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室、觀察記錄室、儲(chǔ)藏室、移苗室實(shí)驗(yàn)室的功能： 洗滌室用于玻璃器皿、實(shí)驗(yàn)用具的清洗、干燥、培養(yǎng)材料清洗、預(yù)處理也可在本室完成。室內(nèi)應(yīng)建造大型水槽和一個(gè)或幾個(gè)浸泡池，水槽最好上一內(nèi)襯白瓷片的水泥槽，為防止碰壞玻璃器皿，下面可鋪一活動(dòng)的橡膠板。備有晾瓶架，用于放置刷凈的培養(yǎng)器皿，配備有一定數(shù)量的周轉(zhuǎn)盤或小推車，用于運(yùn)輸培養(yǎng)器皿。地面要注意防滑，排水通暢，墻壁要有耐濕、防潮功能。 藥品室用于存放各種藥品試劑。室內(nèi)要求干燥、通風(fēng)，避免光照，配有藥品柜、冰箱等設(shè)備。化學(xué)試劑物品分類存放于柜中，有毒物質(zhì)如升汞需要專人密封保存。原藥可室溫下存放，配好的母液，宜置于4冰箱中保存。藥品室緊鄰稱量室較好，便于工作。 稱量室進(jìn)行化學(xué)藥品的稱量。要求干燥、密閉，無直射光照，避免腐蝕性藥品和水氣直接接觸。有固定的水磨石平臺(tái)，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有電源插座，最好設(shè)計(jì)在陰面的房間，這樣對(duì)怕光藥品的保存和稱量有利，稱量室緊鄰培養(yǎng)基配制室較好，以方便配制母液和培養(yǎng)基。房間較少時(shí)，可以與藥品室合二為一。 培養(yǎng)基配制室主要進(jìn)行母液的配制，培養(yǎng)基的配制、分裝、包扎和滅菌前的暫時(shí)存放。在條件允許下，面積宜大不宜小，室內(nèi)應(yīng)有大型實(shí)驗(yàn)臺(tái)。配有電爐、鍋?zhàn)?、量具、培養(yǎng)基分裝器具、吸管、培養(yǎng)容器、水浴鍋和酸度計(jì)等。如規(guī)模較小，可與洗滌室、滅菌室合并在一起。 滅菌室主要用于培養(yǎng)基和器皿的滅菌以及蒸餾水的制備。建筑上要求其墻壁耐濕、耐高溫、墻壁上最好有排除蒸汽的排風(fēng)扇。有用于滅菌鍋的二相或三相電源、供水、排水設(shè)施齊全。配有干燥箱、高壓蒸汽滅菌鍋、蒸餾水器或純水機(jī)以及擺放和存放器皿、培養(yǎng)基的架子和櫥柜。滅菌室應(yīng)鄰近接種室，避免滅菌后的培養(yǎng)基長距離搬運(yùn)，增加污染機(jī)會(huì)。 接種室主要進(jìn)行植物材料的表面消毒、分離切割、轉(zhuǎn)接，其無菌程度的高低對(duì)組織培養(yǎng)的成功與否起至關(guān)重要的作用。在工作方便的前提下，接種室面積宜小不宜大，一般小的無菌室57m2即可。平方易吸潮，容易引起污染，有條件的應(yīng)選擇樓房，最好在二層或二層以上，與其他區(qū)域隔離。接種室的天花板及四壁盡可能光滑平整，地面平坦無縫，便于清洗和消毒。一般安裝滑動(dòng)門，以減少開關(guān)門時(shí)空氣的流動(dòng)，在適當(dāng)位置安裝12支紫外線燈，用以輻射滅菌。室內(nèi)干爽安靜，清潔明亮，門窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流，不存放與接種無關(guān)的物品，以免形成 紫外線無法照射到的死角。室內(nèi)配有超凈工作臺(tái)、小推車、接種器械、酒精燈、酒精等。為減少接種人員進(jìn)出時(shí)帶入的雜菌，接種室外應(yīng)設(shè)有緩沖室，供操作人員更換工作服、帽、鞋之用。為便于觀察和參觀，中間最好用玻璃墻隔離，接種室的門和緩沖室的門要錯(cuò)開，滅菌以23m2為宜。緩沖室最好也安裝1支紫外線燈，用于環(huán)境的滅菌。 培養(yǎng)室是植物材料生長的場所。培養(yǎng)室應(yīng)保持清潔，有光照、控溫設(shè)備和定時(shí)設(shè)備，溫度一般保持在（252），光照強(qiáng)度10005000lx，光照時(shí)間826h/d，在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)不同的要求靈活掌握。培養(yǎng)室主要用電調(diào)節(jié)溫度和補(bǔ)充光照，用電量大。為節(jié)省能源，降低成本，其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。培養(yǎng)室可選兩面采光，加大窗戶，盡量考慮到利用自然光。采用雙層玻璃以利隔熱和防塵，培養(yǎng)室高度以比培養(yǎng)架略高為宜，墻壁要求有隔熱、防火的性能。室內(nèi)應(yīng)保持整潔，切忌堆放無關(guān)物品。室內(nèi)配有培養(yǎng)架、空調(diào)、藥床等設(shè)備。小的培養(yǎng)室容易控制溫度、光照等環(huán)境條件，特別是培養(yǎng)材料較少時(shí)節(jié)能效果更為明顯。培養(yǎng)室初次使用要用甲醛熏蒸消毒，培養(yǎng)期間要定期進(jìn)行室內(nèi)消毒工作。 觀察記錄室是對(duì)培養(yǎng)物的生長情況及實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行觀察、記錄的場所。室內(nèi)應(yīng)有固定的水磨石臺(tái)面，放置顯微鏡、解剖鏡、顯微照相等儀器，最好還應(yīng)有一套制片和細(xì)胞學(xué)染色設(shè)備，進(jìn)行制片或染色觀察。室內(nèi)應(yīng)安靜、清潔、明亮、保證儀器不振動(dòng)、不受潮。 儲(chǔ)藏室用于暫時(shí)不用的器皿、用具等的存放。儲(chǔ)藏室最好設(shè)在樓房低層背陰處，便于物品搬運(yùn)和存放，房間有良好的通風(fēng)條件。 移苗室用于試管苗煉苗和移栽。移苗室應(yīng)具有一定的控溫、保濕、遮蔭條件，一般要求溫度在1525，相對(duì)空氣濕度在70%以上，避免強(qiáng)光。普通溫室或塑料大棚經(jīng)過適當(dāng)?shù)母脑炀墒褂?，室?nèi)配有彌霧裝置、遮陽網(wǎng)、防蟲網(wǎng)、移植床、營養(yǎng)缽及移栽基質(zhì)等。3. 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室基本儀器設(shè)備一常規(guī)設(shè)備1 天平使用方法及注意事項(xiàng)：1.要放置在水平的地方。游碼要?dú)w零。 2.調(diào)節(jié)平衡螺母(天平兩端的螺母)調(diào)節(jié)零點(diǎn)直至指針對(duì)準(zhǔn)中央刻度線。 3.左托盤放稱量物，右托盤放砝碼。根據(jù)稱量物的性狀應(yīng)放在玻璃器皿或潔凈的紙上，事先應(yīng)在同一天平上稱得玻璃器皿或紙片的質(zhì)量，然后稱量待稱物質(zhì)。 4.添加砝碼從估計(jì)稱量物的最大值加起，逐步減小。托盤天平只能稱準(zhǔn)到0.1克。加減砝碼并移動(dòng)標(biāo)尺上的游碼，直至指針再次對(duì)準(zhǔn)中央刻度線。 5.過冷過熱的物體不可放在天平上稱量。應(yīng)先在干燥器內(nèi)放置至室溫后再稱。 6.物體的質(zhì)量 =砝碼+游碼 7.取用砝碼必須用鑷子，取下的砝碼應(yīng)放在砝碼盒中，稱量完畢，應(yīng)把游碼移回零點(diǎn)。 8.稱量干燥的固體藥品時(shí)，應(yīng)在兩個(gè)托盤上各放一張相同質(zhì)量的紙，然后把藥品放在紙上稱量。 9.易潮解的藥品，必須放在玻璃器皿上（如：小燒杯、表面皿）里稱量。 10.砝碼若生銹，測量結(jié)果偏小；砝碼若磨損，測量結(jié)果偏大。11.稱量完畢后，應(yīng)當(dāng)把游碼撥回零刻度，把砝碼放回砝碼盒中。12.當(dāng)天平不用時(shí)天平罩內(nèi)應(yīng)放硅膠或其他中性干燥機(jī)以保持干燥。2.冰箱3.酸度計(jì)使用方法：首先、安裝 電源的電壓與頻率必須符合儀器銘牌上所指明的數(shù)據(jù)，同時(shí)必須接地良好，否則在測量時(shí)可能指針不穩(wěn)。 儀器配有玻璃電極和甘汞電極。將玻璃電極的膠木帽夾在電極夾的小夾子上。將甘汞電極的金屬帽夾在電極夾的大夾子上?？衫秒姌O夾上的支頭螺絲調(diào)節(jié)兩個(gè)電極的高度。 玻璃電極在初次使用前，必須在蒸餾水中浸泡24小時(shí)以上。平常不用時(shí)也應(yīng)浸泡在蒸餾水中。 甘汞電極在初次使用前，應(yīng)浸泡在飽和氯化鉀溶液內(nèi)，不要與玻璃電極同泡在蒸餾水中。不使用時(shí)也浸泡在飽和氯化鉀溶液中或用橡膠帽套住甘汞電極的下端毛細(xì)孔。 其次、校整 將“pHmv”開關(guān)撥到pH位置。 打開電源開頭指示燈亮，預(yù)熱30分鐘。 取下放蒸餾水的小燒杯，并用濾紙輕輕吸去玻璃電極上的多余水珠。在小燒杯內(nèi)入選擇好的，已知pH的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液。將電極浸入。注意使玻璃電極端部小球和甘汞電極的毛細(xì)孔浸在溶液中。輕輕搖動(dòng)小燒杯使電極所接觸的溶液均勻。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的pH，將量程開關(guān)擰到07或714處。 調(diào)節(jié)控溫鈕，使旋鈕指示的溫度與室溫同。 調(diào)節(jié)零點(diǎn)，使指針指在pH7處。 輕輕按下或稍許轉(zhuǎn)動(dòng)讀數(shù)開關(guān)使開關(guān)卡住。調(diào)節(jié)定位旋鈕，使指針恰好指在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的pH數(shù)值處。放開讀數(shù)開關(guān)，重復(fù)操作，直至數(shù)值穩(wěn)定為止。 校整后，切勿再旋動(dòng)定位旋鈕，否則需重新校整。取下標(biāo)準(zhǔn)液小燒杯，用蒸餾水沖洗電極。 最后、測量將電極上多余的水珠吸干或用被測溶液沖洗二次，然后將電極浸入被測溶液中，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)或搖動(dòng)小燒杯，使溶液均勻接觸電極。 被測溶液的溫度應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液的溫度相同。 校整零位，按下讀數(shù)開關(guān)，指針?biāo)傅臄?shù)值即是待測液的pH。若在量程pH07范圍內(nèi)測量時(shí)指針讀數(shù)超過刻度，則應(yīng)將量程開關(guān)置于pH714處再測量。 測量完畢，放開讀數(shù)開關(guān)后，指針必須指在pH7處，否則重新調(diào)整。 關(guān)閉電源，沖洗電極，并按照前述方法浸泡。4.離心機(jī)使用方法：1)離心前用天平保證離心管的絕對(duì)平衡。(2)打開電源殲關(guān)，離心機(jī)自檢后，開啟蓋門(3)選擇所需轉(zhuǎn)頭，用扳手安裝轉(zhuǎn)頭，松緊適當(dāng)。(4)裝載離心管后，擰好轉(zhuǎn)頭蓋，按下離心機(jī)門蓋。(5)設(shè)定好轉(zhuǎn)速、時(shí)間和溫度后，按下啟動(dòng)按鈕開始離心。(6)離心結(jié)束后，開啟門蓋，擰開轉(zhuǎn)頭蓋。(7)取出離心管后，卸下轉(zhuǎn)頭，關(guān)閉電源開關(guān)。(8)在離心機(jī)內(nèi)倉恢復(fù)室溫后，擦干內(nèi)壁。二，滅菌設(shè)備高壓蒸汽滅菌器使用方法：（1） 在外層鍋內(nèi)加適量的水，將需要滅菌的物品放入內(nèi)層鍋，蓋好鍋蓋并對(duì)稱地扭緊螺旋。 （2） 加熱使鍋內(nèi)產(chǎn)生蒸氣，當(dāng)壓力表指針達(dá)到 33.78kPa時(shí)，打開排氣閥，將冷空氣排出，此時(shí)壓力表指針下降，當(dāng)指針下降至零時(shí)，即將排氣閥關(guān)好。 （3） 繼續(xù)加熱，鍋內(nèi)蒸氣增加，壓力表指針又上升，當(dāng)鍋內(nèi)壓力增加到所需壓力時(shí)，將火力減小，按所滅菌物品的特點(diǎn)，使蒸氣壓力維持所需壓力一定時(shí)間，然后將滅菌器斷電或斷火，讓其自然冷后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物。 注意事項(xiàng)：（1） 待滅菌的物品放置不宜過緊。 （2） 必須將冷空氣充分排除，否則鍋內(nèi)溫度達(dá)不到規(guī)定溫度，影響滅菌效果。 （3） 滅菌完畢后，不可放氣減壓，否則瓶內(nèi)液體會(huì)劇烈沸騰，沖掉瓶塞而外溢甚至導(dǎo)致容器爆裂。須待滅菌器內(nèi)壓力降至與大氣壓相等后才可開蓋。 （4） 裝培養(yǎng)基的試管或瓶子的棉塞上，應(yīng)包油紙或牛皮紙，以防冷凝水入內(nèi)。 （5） 為了確保滅菌效果，應(yīng)定期檢查滅菌效果，常用的方法是將硫磺粉末（熔點(diǎn)為115）或安息香酸（熔點(diǎn)為120）置于試管內(nèi)，然后進(jìn)行滅菌試驗(yàn)。如上述物質(zhì)熔化，則說明高壓蒸氣滅菌器內(nèi)的溫度已達(dá)要求，滅菌的效果是可靠的。也可將檢測滅菌器效果的膠紙（其上有溫度敏感指示劑）貼于待滅菌的物品外包裝上，如膠紙上指示劑變色，亦說明滅菌效果是可靠的。 （6） 現(xiàn)在已有微電腦自動(dòng)控制的高壓蒸氣滅菌器，只需放去冷氣后，儀器即可自動(dòng)恒壓定時(shí)，時(shí)間一到則自動(dòng)切斷電源并鳴笛，使用起來很方便。 三.無菌操作設(shè)備1.超凈工作臺(tái)規(guī)格價(jià)格及產(chǎn)地：產(chǎn) 品 名 稱、型號(hào)規(guī) 格單 價(jià)產(chǎn)地經(jīng)濟(jì)型PLT-ZDS650mm寬，單人單面，桌上型垂直、水平送風(fēng)3400普朗特850mm寬，單人單面，桌上型垂直、水平送風(fēng)3800普朗特水平標(biāo)準(zhǔn)型PLT-DDS9007501430mm，單人單面，水平送風(fēng) 潔凈度：100級(jí)送風(fēng)風(fēng)速：0.30.6m/s，高檔不銹鋼臺(tái)面，帶紫外線燈。無隔板，進(jìn)口風(fēng)機(jī)，冷軋板三道酸化工序精制烤漆。5600普朗特PLT-SDm，雙人單面，水平送風(fēng)，潔凈度：100級(jí)送風(fēng)風(fēng)速：0.3-0.6m/s，高檔不銹鋼臺(tái)面，帶紫外線燈。無隔板，進(jìn)口風(fēng)機(jī)，冷軋板三道酸化工序精制烤漆。8700普朗特垂直標(biāo)準(zhǔn)型PLT-DDC9807201620mm，單人單面，垂直送風(fēng) 潔凈度：100級(jí)送風(fēng)風(fēng)速：0.3-0.6m/s，高檔不銹鋼臺(tái)面，帶紫外線燈。無隔板，進(jìn)口風(fēng)機(jī)，冷軋板三道酸化工序精制烤漆。6100普朗特PLT-SD單人單面，垂直送風(fēng) 潔凈度：100級(jí)送風(fēng)風(fēng)速：0.3-0.6m/s，高檔不銹鋼臺(tái)面，帶紫外線燈。無隔板，進(jìn)口風(fēng)機(jī)，冷軋板三道酸化工序精制烤漆。9200普朗特標(biāo)準(zhǔn)加長雙人單面，水平送風(fēng)，潔凈度：100級(jí)送風(fēng)風(fēng)速：0.3-0.6m/s，高檔不銹鋼臺(tái)面，帶紫外線燈。無隔板，進(jìn)口風(fēng)機(jī)，冷軋板三道酸化工序精制烤漆。12000普朗特2，接種設(shè)備規(guī)格價(jià)格及產(chǎn)地：產(chǎn) 品 名 稱規(guī) 格單 價(jià)產(chǎn)地手術(shù)剪125mm彎尖 、直尖不銹鋼30上海140mm彎尖 、直尖不銹鋼30上海180mm彎尖 、直尖不銹鋼30上海直鑷160mm、200mm、250mm300mm不銹鋼13、18、24、40上海槍型鑷170mm、200mm不銹鋼22、30上海250mm、270mm、300mm鎳鈦合金58、68、88上海接種棒含接種絲15上海手術(shù)刀柄3#、7#12上海手術(shù)刀片10#、11#、12#、15#，10片/包5上海接種專用盤14cm，全不銹鋼7上海接種器械滅菌器JZ-1，進(jìn)口加熱棒，0-300度可調(diào)，質(zhì)保兩年650普朗特JZ-II，數(shù)字顯示，0-300度可調(diào)，進(jìn)口加熱棒，880普朗特本生燈用于接種器具和培養(yǎng)瓶瓶口的灼燒滅菌，溫度高達(dá)1300，可代替酒精燈860臺(tái)灣石英珠接種器械滅菌器專用滅菌材料10普朗特?zé)o菌操作步驟及注意事項(xiàng)：(1)在接種4h前用甲醛熏蒸接種室，并打開其內(nèi)紫外燈進(jìn)行滅菌； (2)在接種前20min，打開超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外燈； (3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等； (4)上工作臺(tái)后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后擦拭工作臺(tái)面； (5)先用酒精棉球擦拭接種工具，再將鑷子和剪子從頭至尾過火一遍，然后反復(fù)過火尖端處，對(duì)培養(yǎng)皿要過火烤干； (6)接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說話、走動(dòng)和咳嗽等； (7)接種完畢后要清理干凈工作臺(tái)，可用紫外燈滅菌30min。若連續(xù)接種，每5天要大強(qiáng)度滅菌一次。四.培養(yǎng)設(shè)備：1.培養(yǎng)架2.光照培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)箱SPX-250B-G250升B-G型采用不銹鋼內(nèi)膽，兩面光照。I-G型采用全真空玻璃，三面光照?？販胤秶?-50。9800上海SPX-250I-G250升10800上海SPX-300B-G300升11800上海SPX-300I-G300升3. 搖床使用方法：首先將需振蕩培養(yǎng)的樣品夾在托盤夾具上。接通電源(將隨機(jī)所配的電源插頭分別插頭分別插在本機(jī)電源插座上)，合上電源開關(guān)，打開溫控開關(guān)，此時(shí)恒溫控加熱部分也已進(jìn)入工作狀態(tài)。數(shù)字所顯示的度即為工室內(nèi)的實(shí)際溫度，-50-100數(shù)字為預(yù)置溫度值。如你需將溫度控制在某一區(qū)域，只需將數(shù)字選至需控制的某一溫度上，即可進(jìn)行恒溫。打開振蕩開關(guān)，振蕩部分即可工作，你可根據(jù)實(shí)際需要，將振蕩速度選至0一220轉(zhuǎn)/分范圍之內(nèi)。定時(shí)器控制振蕩及溫控部分。注意事項(xiàng)1,儀器應(yīng)置于堅(jiān)固、干燥、通風(fēng)性好的地面上或工作臺(tái)上使用。2,供電電源應(yīng)有接地裝置，以免發(fā)生意外。3,振蕩培養(yǎng)箱帶壓縮機(jī)制冷的儀器，搬動(dòng)時(shí)，應(yīng)平行移動(dòng)，任何一方傾斜角應(yīng)小于45度。4,箱內(nèi)載物擺放應(yīng)不影響空氣流通，以后證箱內(nèi)溫度均勻5,做準(zhǔn)備工作或存取試驗(yàn)品時(shí)，應(yīng)關(guān)閉電源。6,在轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，中速使用可延長儀器的使用壽命。7,裝培養(yǎng)試瓶，為了使儀器工作時(shí)平衡性能好，避免產(chǎn)生較大的振動(dòng)，裝瓶時(shí)應(yīng)將所有的試瓶位布滿，各瓶的培養(yǎng)液應(yīng)大致相等，若培養(yǎng)瓶不足數(shù)，可將試瓶對(duì)稱放置。8,本儀器不能在有可燃性氣體的環(huán)境中使用，如發(fā)現(xiàn)可燃性氣體泄露，千萬不可拔去電源插頭，關(guān)閉溫控器或燈開關(guān)，否則會(huì)產(chǎn)生電花，引起火災(zāi)。9,每次使用結(jié)束后，必須清潔儀器內(nèi)外表面，保持整潔，清理時(shí)禁止使用酸化學(xué)稀釋劑、汽油、笨之類物品清洗。儀器長期使用