食品微生物它雖然小但是你可別輕看它.doc

食品微生物它雖然小但是你可別輕看它一般來說，食品企業(yè)或大或小的都有自己的微生物檢測實(shí)驗(yàn)室，但是微生物檢測實(shí)驗(yàn)室的地位則不盡相同。微生物檢測實(shí)驗(yàn)室作為消費(fèi)性部門，總不被領(lǐng)導(dǎo)們重視，特別是一些生產(chǎn)內(nèi)銷產(chǎn)品的公司，更是如此。這其實(shí)是他們還沒有真正認(rèn)識(shí)到微生物檢測的重要性。我們可以從下面3個(gè)方面來了解下微生物檢測所不可忽視的作用。 1微生物檢測是產(chǎn)品的最后監(jiān)控點(diǎn) 微生物檢測作為生產(chǎn)的產(chǎn)品的最后監(jiān)控點(diǎn)，有著至關(guān)重要的作用。產(chǎn)品合格與否，衛(wèi)生是關(guān)鍵，不僅關(guān)系到產(chǎn)品的質(zhì)量問題，更有可能關(guān)系到顧客的生命安全問題，微生物檢測作為產(chǎn)品的最后監(jiān)控點(diǎn)，也是最后的“把關(guān)員”，這一關(guān)掌控的好，企業(yè)贏得市場的認(rèn)可，贏得健康發(fā)展，贏得長遠(yuǎn)利益，若掌控的不好，則產(chǎn)品衛(wèi)生勢必得不到保障，也許企業(yè)一時(shí)得到生存，但肯定無法長遠(yuǎn)發(fā)展。 2、微生物檢測是產(chǎn)品衛(wèi)生的監(jiān)督員 要想生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，必須要有良好的衛(wèi)生。怎樣來監(jiān)控衛(wèi)生的好與壞呢？除了遵守SSOP等基礎(chǔ)生產(chǎn)操作規(guī)范以外，那就要靠微生物檢測來衡量衛(wèi)生是否合格，衛(wèi)生不合格，產(chǎn)品的微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)就會(huì)增高，產(chǎn)品不合格率就會(huì)提升。如果生產(chǎn)出來的都是不合格品，企業(yè)豈不是要提高生產(chǎn)成本來重新處理不合格品？所以，微生物檢測作為衛(wèi)生的監(jiān)督員，至關(guān)重要，它把良好的生產(chǎn)衛(wèi)生控制在生產(chǎn)過程中，降低了微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，提高了產(chǎn)品的合格率，降低了公司的成本。 3微生物檢測是食品原輔料進(jìn)入生產(chǎn)車間的第一道關(guān)卡 有好的基礎(chǔ)才能建起穩(wěn)固的大廈，同樣的有好的原輔料才能生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，而微生物檢測作為原輔料進(jìn)入生產(chǎn)車間的第一道關(guān)卡，起著非常重要的作用。原輔料衛(wèi)生不合格，那么這批原輔料肯定是不能用到生產(chǎn)上的，否則，小則產(chǎn)品不能進(jìn)入市場，企業(yè)承擔(dān)損失，大則產(chǎn)品進(jìn)入市場，引發(fā)食物中毒等事件，企業(yè)承擔(dān)更大損失。 由此可見，我們也不難發(fā)現(xiàn)微生物檢測在一個(gè)企業(yè)中所不可忽視的作用，無論是從企業(yè)本身來說還是從消費(fèi)人群來說，它理應(yīng)得到該得到的重視。檢測方法生長量測定法體積測量法：又稱測菌絲濃度法。通過測定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養(yǎng)液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設(shè)定一定的離心時(shí)間（如5分鐘）和轉(zhuǎn)速（如5000 rpm），離心后，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的一個(gè)重要監(jiān)測指標(biāo)。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設(shè)定一致的處理?xiàng)l件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營養(yǎng)物，結(jié)果會(huì)有一定偏差。稱干重法：可用離心或過濾法測定。一般干重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養(yǎng)液倒入離心管中，設(shè)定一定的離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速，進(jìn)行離心，并用清水離心洗滌1-5次，進(jìn)行干燥。干燥可用烘箱在1050C或1000C下烘干，或采用紅外線烘干，也可在800C或400C下真空干燥，干燥后稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細(xì)菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾后用少量水洗滌，在400C下進(jìn)行真空干燥。稱干重發(fā)法較為煩瑣，通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時(shí)，常采用這種方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。比濁法：微生物的生長引起培養(yǎng)物混濁度的增高。通過紫外分光光度計(jì)測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養(yǎng)物內(nèi)的菌體生長作定時(shí)跟蹤時(shí)，可采用一種特制的有側(cè)臂的三角燒瓶。將側(cè)臂插入光電比色計(jì)的比色座孔中，即可隨時(shí)測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長監(jiān)測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計(jì)，在波長600nm 處用比色管定時(shí)測定發(fā)酵液的吸光光度值OD600，以此監(jiān)控E.Coli的生長及誘導(dǎo)時(shí)間。菌絲長度測量法：對于絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養(yǎng)基上測定一定時(shí)間內(nèi)菌絲生長的長度，或是利用一只一端開口并帶有刻度的細(xì)玻璃管，到入合適的培養(yǎng)基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時(shí)間后記錄其菌絲生長長度，借此衡量絲狀微生物的生長。微生物計(jì)數(shù)法血球計(jì)數(shù)板法:血球計(jì)數(shù)板是一種有特別結(jié)構(gòu)刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個(gè)平臺(tái)，兩嵴的表比兩平臺(tái)的表面高0.1 mm，每個(gè)平臺(tái)上刻有不同規(guī)格的格網(wǎng)，中央0.1 mm2面積上刻有400個(gè)小方格。通過油鏡觀察，統(tǒng)計(jì)一定大格內(nèi)微生物的數(shù)量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數(shù)。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜于單細(xì)胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且所得結(jié)果是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)。染色計(jì)數(shù)法：為了彌補(bǔ)一些微生物在油鏡下不易觀察計(jì)數(shù)，而直接用血球計(jì)數(shù)板法又無法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的不足，人們發(fā)明了染色計(jì)數(shù)法。借助不同的染料對菌體進(jìn)行適當(dāng)?shù)娜旧?，可以更方便的在顯微鏡下進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。如酵母活細(xì)胞計(jì)數(shù)可用美藍(lán)染色液，染色后在顯微鏡下觀察，活細(xì)胞為無色，而死細(xì)胞為藍(lán)色。比例計(jì)數(shù)法：將已知顆粒（如霉菌孢子或紅細(xì)胞）濃度的液體與一待測細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細(xì)胞濃度。這種計(jì)數(shù)方法比較粗放。并且需要配制已知顆粒濃度的懸液做標(biāo)準(zhǔn)。液體稀釋法：對未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋，根據(jù)估計(jì)數(shù)，從最適宜的三個(gè)連續(xù)的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液的試管中，經(jīng)培養(yǎng)后記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長的試管數(shù)，然后查最大或然數(shù)表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數(shù)，根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。平板菌落計(jì)數(shù)法：這是一種最常用的活菌計(jì)數(shù)法。將待測菌液進(jìn)行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養(yǎng)基在凝固前均勻混合，或?qū)⒕和坎加谝涯痰墓腆w培養(yǎng)基平板上。保溫培養(yǎng)后，用平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數(shù)。一般以直徑9cm的平板上出現(xiàn)50-500個(gè)菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù)，而且同時(shí)將菌液中的細(xì)菌進(jìn)行了一次分離培養(yǎng)，獲得了單克隆。試劑紙法：在平板計(jì)數(shù)法的基礎(chǔ)上，發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計(jì)數(shù)用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yǎng)基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)一定密度的玫瑰色微小菌落與標(biāo)準(zhǔn)紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計(jì)數(shù)快捷準(zhǔn)確，相比而言避免了平板計(jì)數(shù)法的人為操作誤差。膜過濾法：用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經(jīng)丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細(xì)胞的熒光，活細(xì)胞會(huì)發(fā)橙色熒光，而死細(xì)胞則發(fā)綠色熒光。生理指標(biāo)法：微生物的生長伴隨著一系列生理指標(biāo)發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產(chǎn)氣量等，與生長量相平行的生理指標(biāo)很多，它們可作為生長測定的相對值。測定含氮量：大多數(shù)細(xì)菌的含氮量為干重的12.5%，酵母為7.5%，霉菌為6.0%。根據(jù)含氮量6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱后產(chǎn)生氮?dú)?，收集在呼吸?jì)中，用KOH吸去CO2后即可測出N2的量。測定含碳量：將少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無機(jī)緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標(biāo)準(zhǔn)樣品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。還原糖測定法：還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用于大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的常規(guī)監(jiān)測。方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鐘，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點(diǎn)時(shí)加入淀粉溶液，繼續(xù)加Na2S2O3至終點(diǎn)，查表讀出還原糖的含量。氨基氮的測定：方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調(diào)色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應(yīng)數(shù)刻，加入0.02N的使之變色，根據(jù)NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據(jù)培養(yǎng)液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。其他生理物質(zhì)的測定：P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及產(chǎn)酸，產(chǎn)氣，產(chǎn)CO2（用標(biāo)記葡萄糖做基質(zhì)），耗氧，黏度，產(chǎn)熱等指標(biāo)， 都可用于生長量的測定。也可以根據(jù)反應(yīng)前后的基質(zhì)濃度變化，最終產(chǎn)氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發(fā)酵生產(chǎn)上，隨時(shí)監(jiān)測溶氧量的變化和酸堿度的變化，判斷細(xì)菌的長勢。商業(yè)化快速微生物檢測法：微生物的檢測，其發(fā)展方向是快速，準(zhǔn)確，簡便，自動(dòng)化，當(dāng)前很多生物制品公司利用傳統(tǒng)微生物檢測原理，結(jié)合不同的檢測方法，設(shè)計(jì)了形式各異的微生物檢測儀器設(shè)備，正逐步廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)微生物檢測和科學(xué)研究領(lǐng)域。例如：1、抗干擾培養(yǎng)基和微生物數(shù)量快速檢測技術(shù)結(jié)合解決了傳統(tǒng)微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統(tǒng)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。中科院廣州分院合作產(chǎn)業(yè)處提供的抗干擾微生物培養(yǎng)基，新型生化鑒定管，微生物計(jì)數(shù)卡，環(huán)境質(zhì)量檢測試劑盒等，可方便的用于多項(xiàng)檢測。2、BACTOMETER 全自動(dòng)各類總菌數(shù)及快速細(xì)菌檢測系統(tǒng)可以數(shù)小時(shí)內(nèi)獲得監(jiān)測結(jié)果，樣本顏色及光學(xué)特征都不影響讀數(shù)，對酵母和霉菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法（IMPEDANCE TECHNOLOGY）將待測樣本與培養(yǎng)基置于反應(yīng)試劑盒內(nèi)，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產(chǎn)生阻抗改變。如微生物生長時(shí)可將培養(yǎng)基中的大分子營養(yǎng)物經(jīng)代謝轉(zhuǎn)變?yōu)榛钴S小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統(tǒng)平板法更快速監(jiān)測微生物的存在及數(shù)量。測定項(xiàng)目包括總生菌數(shù)，酵母菌，大腸桿菌群，霉菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。隨著人們生活水平不斷提高，各種安全問題越來越受到人們的重視，微生物的污染問題也相應(yīng)地備受關(guān)注。在食品和環(huán)境等各個(gè)方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物將大量繁殖而導(dǎo)致食源性疾病或環(huán)境污染甚至醫(yī)院內(nèi)感染。特別是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，導(dǎo)致感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物對人類的威脅越來越大。傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，主要包括形態(tài)檢查和生化方法，其準(zhǔn)確性、靈敏性均較高，但涉及的實(shí)驗(yàn)較多、操作煩瑣、需要時(shí)間較長、準(zhǔn)備和收尾工作繁重，而且要有大量人員參與1，2。所以，迫切需要準(zhǔn)確、省時(shí)、省力和省成本的快速檢驗(yàn)方法。本文對微生物快速檢測方法的進(jìn)展情況及實(shí)際應(yīng)用進(jìn)行綜述，以利于預(yù)防食源性疾病及公共衛(wèi)生突發(fā)事件的發(fā)生。1 即用型紙片法3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物測試片，可分別檢測菌落總數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、霉菌和酵母計(jì)數(shù)3。由RCP Scientific Inc 公司開發(fā)上市的Regdigel系列，除上述項(xiàng)目外還有檢測乳桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌的產(chǎn)品4，這兩個(gè)系列的產(chǎn)品與傳統(tǒng)檢測方法之間的相關(guān)性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測餐具的表面，操作簡便、快速、省料，特異性和敏感性與發(fā)酵法符合率高，已經(jīng)被列為國標(biāo)方法。使用時(shí)應(yīng)正確掌握操作技術(shù)和判斷標(biāo)準(zhǔn)，從而達(dá)到理想的檢測效果5。美國3M公司生產(chǎn)的PF(Petrifilm)試紙還加入了染色劑、顯色劑，增強(qiáng)了菌落的目視效果，而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細(xì)菌恢復(fù)的缺陷。霉菌快速檢驗(yàn)紙片，應(yīng)用于食品檢驗(yàn)中的霉菌具有操作簡便，僅需36培養(yǎng)，不需要低溫設(shè)備；快速，僅需2 d就可觀察結(jié)果，比現(xiàn)在的國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法縮短35 d，大大提高了工作效率。紙片法與國標(biāo)法在霉菌檢出率上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且菌落典型，易判定。紙片熒光法利用細(xì)菌產(chǎn)生某些代謝酶或代謝產(chǎn)物的特點(diǎn)而建立的一種酶底物反應(yīng)法。只需檢測食品中大腸菌群、大腸桿菌的有關(guān)酶的活性，將熒光產(chǎn)物在365 nm紫外光下觀察即可。同時(shí)紙片可高壓滅菌處理，4保存，簡化了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、操作和判斷6。但由于它們價(jià)格昂貴，限制了在基層單位的實(shí)際應(yīng)用。2 生物化學(xué)技術(shù)2.1 PCR技術(shù) PCR技術(shù)采用體外酶促反應(yīng)合成特異性DNA片段，再通過擴(kuò)增產(chǎn)物來識(shí)別細(xì)菌。由于PCR靈敏度高，理論上可以檢出一個(gè)細(xì)菌的拷貝基因，因此在細(xì)菌的檢測中只需短時(shí)間增菌甚至不增菌，即可通過PCR進(jìn)行篩選，節(jié)約了大量時(shí)間，但PCR技術(shù)也存在一些缺點(diǎn)：食物成分、增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有抑制作用，可能導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果假陰性；操作過程要求嚴(yán)格，微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無限放大產(chǎn)生假陽性結(jié)果，擴(kuò)增過程中有一定的裝配誤差，會(huì)對結(jié)果產(chǎn)生影響。由于以上原因，PCR技術(shù)對操作者的自身素質(zhì)要求很高，對于基層單位而言難以做到。短時(shí)間內(nèi)也不會(huì)有經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，因此影響了這項(xiàng)技術(shù)在基層的應(yīng)用。2.2 基因探針技術(shù) 基因探針技術(shù)利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補(bǔ)形成穩(wěn)定的DNARNA或DNADNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來識(shí)別細(xì)菌?；蛱结樀膬?yōu)點(diǎn)是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國生物一梅里埃公司的GENPROBE基因探針檢測系統(tǒng)，對于分離到的單個(gè)菌落，30 min完成微生物的確證試驗(yàn)7，基因探針的缺點(diǎn)是不能鑒定目標(biāo)菌以外的其他菌。3 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等，可使目標(biāo)培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24 h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌8。Merk公司的chromocult Coliform Agar培養(yǎng)基上，大腸桿菌為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍(lán)綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落9。這個(gè)方法對操作者要求不高，短期培訓(xùn)合格后即可上崗，從而取得一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，應(yīng)用前景十分廣泛。4 免疫學(xué)技術(shù)免疫學(xué)技術(shù)通過抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，再輔以免疫放大技術(shù)來鑒別細(xì)菌。免疫方法的優(yōu)點(diǎn)是樣品在進(jìn)行選擇性增菌后，不需分離，即可采用免疫技術(shù)進(jìn)行篩選。由于免疫法有較高靈敏度，樣品經(jīng)增菌后可在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到檢出度，抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)可在很短時(shí)間內(nèi)完成10。此技術(shù)對操作者要求也不高，是目前為止基層單位應(yīng)用時(shí)間最長最為廣泛的一項(xiàng)快速檢測技術(shù)。如采用免疫磁珠法可有效地收集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌，可顯著提高環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率11。膠體金免疫層析法能快速、靈敏檢測金黃色葡萄球菌12，應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原，可大大提高工作效率13。ATP生物發(fā)光法是近年發(fā)展較快的一種用于食品生產(chǎn)加工設(shè)備潔凈度檢測的快速檢測方法。利用ATP生物發(fā)光分析技術(shù)和體細(xì)胞清除技術(shù)，測量細(xì)菌ATP和體細(xì)胞ATP， 細(xì)菌ATP的量與細(xì)菌數(shù)成正比，用ATP生物發(fā)光分析技術(shù)檢測肉類食品細(xì)菌污染狀況或食品器具的現(xiàn)場衛(wèi)生學(xué)檢測，都能夠達(dá)到快速適時(shí)的目標(biāo)14，15。微型自動(dòng)熒光酶標(biāo)分析法(mini VIDAS)是利用酶聯(lián)熒光免疫分析技術(shù)，通過抗原-抗體特異反應(yīng)，分離出目標(biāo)菌，由特殊儀器根據(jù)熒光的強(qiáng)弱自動(dòng)判斷樣品的陽性或陰性。VIDAS法檢測凍肉中沙門菌具有很高的靈敏度和特異性，用于進(jìn)出口凍肉的檢測，可大大縮短檢驗(yàn)時(shí)間，加快通關(guān)速度16，檢測凍肉中李斯特氏菌亦如此17。5 細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法主要包括流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)和固相細(xì)胞計(jì)數(shù)(solid phase cytometry，SPC)法。FCM通常以激光作為發(fā)光源，經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大小；熒光信號(hào)的強(qiáng)度則代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，由此可通過儀器檢測散射光信號(hào)和熒光信號(hào)來估計(jì)微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)具有高度的敏感性，可同時(shí)對目的菌進(jìn)行定性和定量鑒定18。目前已經(jīng)建立了細(xì)菌總數(shù)19、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌20等的FCM檢驗(yàn)方法。固相細(xì)胞計(jì)數(shù)可以在單個(gè)細(xì)胞水平對細(xì)菌進(jìn)行快速檢測21。濾過樣品后，存留的微生物在濾膜上進(jìn)行熒光標(biāo)記，采用激光掃描設(shè)備自動(dòng)計(jì)數(shù)。每個(gè)熒光點(diǎn)可直觀地由通過計(jì)算機(jī)驅(qū)動(dòng)的流動(dòng)臺(tái)連接到ChemScan上的落射熒光顯微鏡來檢測，尤其對于生長緩慢的微生物檢測用時(shí)短，使該方法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)法22。此方法要求配備特殊的儀器，財(cái)政投入較大，因此基層單位目前暫時(shí)無法應(yīng)用。6 全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)(AMS)AMS是一種由傳統(tǒng)生化反應(yīng)及微生物檢測技術(shù)與現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合，運(yùn)用概率最大近似值模型法進(jìn)行自動(dòng)微生物檢測的技術(shù)，可鑒定由環(huán)境、原料及產(chǎn)品中分離的微生物。AMS僅需418 h即可報(bào)告結(jié)果，以常規(guī)法鑒定細(xì)菌，只能得到是或不是某種菌，要想知到是哪種菌還要做大量、煩瑣的生化試驗(yàn)，而AMS則可以直接報(bào)告是什么菌23。法國生物梅里埃集團(tuán)公司出品的VitekAMS自動(dòng)微生物檢測系統(tǒng)屬當(dāng)今世界上最為先進(jìn)、自動(dòng)化程度最高的細(xì)菌鑒定儀器之一。Vitek對細(xì)菌的鑒定是以每種細(xì)菌的微量生化反應(yīng)為基礎(chǔ)，不同種類的Vitek試卡(檢測卡)含有多種的生化反應(yīng)孔，可達(dá)30種，可鑒定405種細(xì)菌24。用AMS明顯縮短腸道菌生化鑒定的時(shí)間，如鑒定沙門菌屬只需4 h，鑒定志賀氏菌屬只需6 h，鑒定霍亂弧菌等致病性弧菌亦只需413 h22183-186。這套系統(tǒng)對基層單位而言具有極強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值，但他昂貴的價(jià)格讓人望而生畏。總之，隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，可以預(yù)料在不遠(yuǎn)的將來，傳統(tǒng)的微生物檢測技術(shù)將逐漸被各種新型簡便的微生物快速診斷技術(shù)所取代。近年來興起的基因探針技術(shù)及全自動(dòng)微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法，具有非常廣闊的應(yīng)用前景?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 唐靈，郭奕芳，吳翊，等.Petrifilm紙片法和國際法檢測奶制品細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)的結(jié)果比較J. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2000,10(3):325-327.2 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