凍干甲型肝炎減毒活疫苗.doc

凍干甲型肝炎減毒活疫苗Donggan Jianxing Ganyan Jiandu HuoyimiaoHepatitis A Vaccine（Live），F(xiàn)reeze-dried本品系用甲型肝炎 (簡(jiǎn)稱甲肝) 病毒減毒株接種人二倍體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、收獲、提純病毒、加入適宜穩(wěn)定劑后凍干制成，用于預(yù)防甲型肝炎。1基本要求生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動(dòng)物、等應(yīng)符合“凡例”有關(guān)要求。2制造2. 1 生產(chǎn)用細(xì)胞生產(chǎn)用細(xì)胞為人二倍體細(xì)胞（2BS 株、 KMB17株或其他批準(zhǔn)的細(xì)胞株）。2. 1. 1 細(xì)胞庫(kù)管理及檢定應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)和檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”規(guī)定。取自同批工作細(xì)胞庫(kù)的1支或多支細(xì)胞管, 經(jīng)復(fù)蘇擴(kuò)增后的細(xì)胞僅用于一批疫苗的生產(chǎn)。2BS株原始細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞代次應(yīng)不超過(guò)第14代，主細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞代次應(yīng)不超過(guò)第31代， 工作細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞代次應(yīng)不超過(guò)第44代。KMB17株原始細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞代次應(yīng)不超過(guò)第 6代，主細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞代次應(yīng)不超過(guò)第15代，工作細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞代次應(yīng)不超過(guò)第45代； 2. 1. 2 細(xì)胞制備取工作細(xì)胞庫(kù)中的1支或多支細(xì)胞管，復(fù)蘇后混合培養(yǎng)，成單層后，用適宜濃度的胰蛋白酶消化，置370.5靜置或旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。2. 2 毒種2. 2. 1 名稱及來(lái)源生產(chǎn)用毒種為甲型肝炎病毒H2或LA1減毒株。2. 2. 2 種子批的建立應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)和檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。H2減毒株原始種子批傳代應(yīng)不超過(guò)第7代，主種子批應(yīng)不超過(guò)第8代，工作種子批應(yīng)不超過(guò)第14代，生產(chǎn)的疫苗病毒代次應(yīng)不超過(guò)第15代；LA1株原始種子批傳代應(yīng)不超過(guò)第17代，主種子批應(yīng)不超過(guò)第18代，工作種子批應(yīng)不超過(guò)第26代，生產(chǎn)的疫苗病毒代次應(yīng)不超過(guò)第27代。2. 2. 3 種子批檢定主種子批應(yīng)進(jìn)行以下全面檢定，工作種子批應(yīng)至少進(jìn)行2.2.3.1-2.2.3.4項(xiàng)檢定。2. 2. 3. 1 鑒別試驗(yàn)用甲型肝炎病毒特異高效價(jià)免疫血清與5001000CCID50ml甲型肝炎病毒等量混合，置37水浴60分鐘，接種人二倍體細(xì)胞，置35培養(yǎng)至病毒增殖高峰期，提取甲型肝炎病毒后用酶聯(lián)免疫法測(cè)定，經(jīng)中和的培養(yǎng)物檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性（證明甲型肝炎病毒應(yīng)完全中和）， 未經(jīng)中和的病毒液檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性（應(yīng)證明為甲型肝炎病毒）。2. 2. 3. 2 病毒滴定將毒種作10倍系列稀釋，取至少3個(gè)稀釋度， 分別接種人二倍體細(xì)胞，置35培養(yǎng)至病毒增殖高峰期，收獲后提取甲型肝炎病毒，用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行病毒滴定，病毒滴度應(yīng)不低于6.50 LgCCID50/ml。2. 2. 3.3 無(wú)菌檢查依法檢查（附錄X A）， 應(yīng)符合規(guī)定。2.4 支原體檢查依法檢查（附錄X B）， 應(yīng)符合規(guī)定。2. 2. 3. 5 病毒外源因子檢查依法檢查（附錄X C）， 應(yīng)符合規(guī)定。供試品可不經(jīng)甲型肝炎病毒抗特異性免疫血清中和，直接接種小鼠觀察。2. 2. 3. 6 免疫原性檢查用主種子批制備原疫苗，按常規(guī)接種甲型肝炎易感者至少40名，分別于免疫前及免疫后68周采血，血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率應(yīng)不低于90%。2. 2. 3. 7 猴體安全及免疫原性試驗(yàn)用主種子批制備的疫苗做猴體試驗(yàn)。取甲型肝炎病毒抗體陰性、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶指標(biāo)正常、體重為1.5-4.5 kg的健康恒河猴或紅面猴5只，于下肢靜脈注射疫苗1.0ml，滴度應(yīng)不低于6.50 LgCCID50ml。試驗(yàn)猴于第0、4、8周肝穿刺做組織病理檢查。于第0周、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周采血測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及甲型肝炎病毒抗體。應(yīng)設(shè)2只猴為陰性對(duì)照。試驗(yàn)組符合下列情況者判定合格：（1）至少4只猴抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)；（2）血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶有一過(guò)性（1周次）升高者不超過(guò)2只猴；（3）肝組織無(wú)與接種供試品有關(guān)的病理改變。有下列情況之一者可重試：（1）接種猴抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率低于45；（2）抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)前后兩周內(nèi)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶異常升高超過(guò)2次；（3）試驗(yàn)猴不能排除其他原因所致的肝組織病理改變。重試后仍出現(xiàn)上述情況之一者，判為不合格。2. 2. 4 毒種保存毒種應(yīng)置-60以下保存。2. 3 原液2. 3. 1 細(xì)胞制備同2.1.2項(xiàng)。2. 3. 2 培養(yǎng)液培養(yǎng)液為含適量滅能新生小牛血清的MEM或其他適宜培養(yǎng)液。新生牛血清的質(zhì)量應(yīng)符合規(guī)定（附錄XIII D）， 且甲肝抗體檢測(cè)應(yīng)為陰性。2. 3. 3 對(duì)照細(xì)胞外源因子檢查依法檢查（附錄X C ）， 應(yīng)符合規(guī)定。2. 3. 4 病毒接種和培養(yǎng)取工作種子批毒種按適宜MOI接種于人二倍體細(xì)胞（同一工作種子批應(yīng)按同一MOI接種），于350.5培養(yǎng)， 培養(yǎng)期間， 根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況， 可用不少于原倍培養(yǎng)液量的洗液充分洗滌細(xì)胞表面以去除牛血清，并換加維持液或其他適宜的液體繼續(xù)培養(yǎng)。2.3.5 病毒收獲物于病毒增殖高峰期，采用適宜濃度的胰蛋白酶或其他適宜方法消化含甲肝病毒的細(xì)胞，并經(jīng)離心或其他適宜的方法收集含甲肝病毒的細(xì)胞為病毒收獲物。2.3.6 病毒收獲物檢定按3.1項(xiàng)進(jìn)行。2.3.7 病毒收獲物保存于-20以下保存，保存時(shí)間按批準(zhǔn)的執(zhí)行。 2.3.7 病毒提取檢定合格的病毒收獲物經(jīng)凍融和（或）超聲波處理， 并采用適宜濃度的三氯甲烷抽提以提純病毒。2. 3. 8 合并同一細(xì)胞批生產(chǎn)的病毒收獲物經(jīng)提取病毒后合并為一批原液。2. 39原液檢定按3.2項(xiàng)進(jìn)行。2.3.10 原液保存于28保存，保存時(shí)間按批準(zhǔn)的執(zhí)行。2. 4 半成品241 配制用疫苗稀釋液將原液按同一病毒滴度進(jìn)行配制，并加入適量穩(wěn)定劑，即為半成品。2. 42 半成品檢定按3.3項(xiàng)進(jìn)行。2. 5 成品2. 5. 1 分批應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2. 5.2 分裝及凍干應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。2.5. 3 規(guī)格復(fù)溶后每瓶0.5ml或1.0ml。 每1次人用劑量為0.5ml或1.0ml，含甲型肝炎活病毒應(yīng)不低于6.50 LgCCID50。2. 5. 4 包裝應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。3 檢定3. 1 病毒收獲物檢定3. 1. 1 病毒滴定按2.2.3.2項(xiàng)進(jìn)行，病毒滴度應(yīng)不低于7.00 LgCCID50ml。3. 1. 2 無(wú)菌檢查依法檢查（附錄XA），應(yīng)符合規(guī)定。3.1.3 支原體檢查依法檢查（附錄X B），應(yīng)符合規(guī)定。3.2 原液檢定3. 2. 1 病毒滴定按2.2.3.2項(xiàng)進(jìn)行，病毒滴度應(yīng)不低于7.00 LgCCID50ml。3. 2. 2 無(wú)菌檢查依法檢查（附錄XA），應(yīng)符合規(guī)定。3.2.3 支原體檢查依法檢查（附錄X B），應(yīng)符合規(guī)定。3. 3 半成品檢定無(wú)菌檢查依法檢查（附錄X A）， 應(yīng)符合規(guī)定。3.4 成品檢定除水分測(cè)定外，應(yīng)按標(biāo)示量加入滅菌注射用水，復(fù)溶后進(jìn)行以下各項(xiàng)檢定。3.4.1 鑒別試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)證明含有甲型肝炎病毒抗原。3. 4. 2 外觀應(yīng)為乳酪色疏松體，復(fù)溶后為澄明液體，無(wú)異物。3. 4.3 水分應(yīng)不高于3.0 %（附錄VD）。3.4.4 三氯甲烷殘留量應(yīng)不高于0.006 %，（附錄 VI V ）345 抗生素殘留量檢查生產(chǎn)過(guò)程中加入抗生素的應(yīng)進(jìn)行該項(xiàng)檢查。 采用ELISA酶聯(lián)免疫法檢測(cè)， 應(yīng)不超過(guò)10ng/ml。3. 4. 6 病毒滴定取疫苗3-5瓶供試品混合滴定，按2.2.3.2項(xiàng)進(jìn)行，病毒滴度應(yīng)不低于6.50LgCCID50ml。3.4.7 熱穩(wěn)定性試驗(yàn)疫苗出廠前應(yīng)進(jìn)行熱穩(wěn)定性試驗(yàn)， 應(yīng)與病毒滴定同時(shí)進(jìn)行。 于37放置72小時(shí)后，按2.2.3.2項(xiàng)進(jìn)行，病毒滴度應(yīng)不滴于6.50 LgCCID50ml， 病毒滴度下降應(yīng)不高于0.50 Lg。3. 4. 8 無(wú)菌檢查依法檢查（附錄X A），應(yīng)符合規(guī)定。3. 4. 9 異常毒性檢查依法檢查（附錄X F），應(yīng)符合規(guī)定。3. 4. 10 牛血清白蛋白殘留量應(yīng)不高于