運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)試驗(yàn)指導(dǎo).doc

實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)操作一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┝私鈱?shí)驗(yàn)室規(guī)則及注意事項(xiàng)。（二）學(xué)習(xí)運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器的使用及清洗方法。（三）學(xué)習(xí)721型分光光度計(jì)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)是研究人體運(yùn)動(dòng)時(shí)體內(nèi)的化學(xué)變化。運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法基本上是化學(xué)的方法，用定量及定性的分析方法來(lái)觀察機(jī)體內(nèi)物質(zhì)代謝的規(guī)律，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)必須做到定性的潔凈及定量的精確，因此實(shí)驗(yàn)取樣要準(zhǔn)確、樣品要無(wú)污染。對(duì)于相同物質(zhì)和相同波長(zhǎng)的單色光來(lái)說(shuō)，溶液的光密度和溶液的濃度呈正比。配制各種濃度的CuSO4溶液，然后在780nm波長(zhǎng)下比色，測(cè)定各種濃度的CuSO4溶液吸光度值，并制作曲線圖。三、實(shí)驗(yàn)器材試管、CuSO4溶液、蒸餾水、721分光光度計(jì)、移液管、吸耳球等。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）玻璃儀器的清洗。（二）使用移液管的移液操作及721分光光度計(jì)的使用。取4支大試管，編號(hào)，按表7-1進(jìn)行操作：表7-1 CuSO4溶液的測(cè)定空白管試管1試管2試管3CuSO4溶液(ml)01.02.03.0蒸餾水(ml)4.03.02.01.0充分混勻后，以空白管調(diào)零，780nm波長(zhǎng)比色以CuSO4溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，將3種不同濃度的CuSO4溶液的光密度值分別點(diǎn)在坐標(biāo)紙上，通過(guò)3點(diǎn)繪制成曲線圖，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。五、注意事項(xiàng)（一）玻璃儀器清洗后注意檢查，管壁不能留有水珠。（二）使用移液管吸取液體時(shí)一定要緩慢平穩(wěn)，不要太快、太猛。六、作業(yè)與思考（一）玻璃儀器的清洗有哪些基本要求？實(shí)驗(yàn)二 血紅蛋白的測(cè)定血紅蛋白（Hb）是紅細(xì)胞中的一種重要蛋白質(zhì)，1分子的Hb是由4分子的亞鐵血紅素和1分子的珠蛋白結(jié)合而成的。Hb的主要生理功能是運(yùn)輸氧氣（O2）、二氧化碳（CO2）和對(duì)酸性物質(zhì)（H+）起緩沖作用，參與體內(nèi)的酸堿平衡調(diào)節(jié)。運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體需氧增加，故血紅蛋白增加，有利于為組織提供氧氣，促進(jìn)物質(zhì)的有氧代謝和帶走CO2，而且也能起中和酸性的作用。如果血紅蛋白下降，氧供應(yīng)減少，影響運(yùn)動(dòng)能力。運(yùn)動(dòng)員安靜時(shí)血紅蛋白值與正常人沒(méi)有明顯差異。一般人Hb的正常值男性為120-160g/L；女性110-150g/L。臨床上常用判斷貧血的標(biāo)準(zhǔn)，即成年男性低于120 g/L；成年女性低于110 g/L；而14歲以下的少年、兒童，不論男女，均以低于120 g/L作為貧血。血紅蛋白的含量與運(yùn)動(dòng)員的身體機(jī)能狀態(tài)、訓(xùn)練水平、運(yùn)動(dòng)負(fù)荷等關(guān)系密切，因此血紅蛋白的含量高低直接影響運(yùn)動(dòng)員的身體機(jī)能和運(yùn)動(dòng)能力，尤其對(duì)耐力運(yùn)動(dòng)員的專項(xiàng)素質(zhì)能力。運(yùn)動(dòng)員在大運(yùn)動(dòng)量開(kāi)始時(shí)，血紅蛋白濃度出現(xiàn)明顯下降，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間訓(xùn)練后，運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能逐漸適應(yīng)大運(yùn)動(dòng)量訓(xùn)練，血紅蛋白逐漸回升。若訓(xùn)練一個(gè)階段后Hb水平仍未回升或還有繼續(xù)下降的趨勢(shì)，應(yīng)及時(shí)注意調(diào)整運(yùn)動(dòng)量，并加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充。因此，定期測(cè)定Hb的含量，有助于了解運(yùn)動(dòng)員的對(duì)負(fù)荷的適應(yīng)、身體機(jī)能水平及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等情況。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬W(xué)習(xí)取微量血的方法及血樣的處理。（二）掌握血紅蛋白的測(cè)定方法。（三）掌握運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中血紅蛋白指標(biāo)應(yīng)用的評(píng)價(jià)及價(jià)值。（四）鞏固721分光光度計(jì)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理（高鐵氰化鉀法）血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白與氰離子結(jié)合成棕紅色氰化高鐵血紅蛋白。氰化高鐵血紅蛋白在540nm處有一個(gè)吸收峰，通過(guò)比色可以測(cè)定其光密度值，從而計(jì)算出血紅蛋白濃度。氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法是國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)委員會(huì)確定的檢測(cè)血紅蛋白含量的標(biāo)準(zhǔn)方法。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）氰化高鐵血紅蛋白稀釋液：高鐵氰化鉀0.2g、氰化鉀0.05g、磷酸二氫鉀0.12g，用蒸餾水溶解并稀釋至1000ml，置于棕色瓶中，瓶口塞緊后保存于冷暗處或冰箱，注意不能冷凍，至少可穩(wěn)定1個(gè)月。（二）氰化高鐵血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：（試劑盒）。（三）95%酒精、75%酒精。（四）一次性采血針、吸血管、棉球、試管、移液管、吸耳球、721分光光度計(jì)等。四、實(shí)驗(yàn)步驟 取3支大試管編號(hào)，按表7-2進(jìn)行操作。表7-2 血紅蛋白的測(cè)定空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管氰化高鐵血紅蛋白稀釋液(ml)5.05.05.0新鮮手指血 (ml)0.02氰化高鐵血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(ml)0.02充分混勻后，放置3min，以空白管調(diào)零，在540nm波長(zhǎng)處比色，讀取測(cè)定管及標(biāo)準(zhǔn)管光密度OD值對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，并分析討論。 血紅蛋白（g%）OD測(cè)OD標(biāo)C標(biāo)五、注意事項(xiàng)（一）試劑含有氰化物，為劇毒藥品，配制和保存時(shí)必須嚴(yán)格注意安全。實(shí)驗(yàn)后一定要洗手，并注意藥品的處理，不能亂倒。（二）取血部位對(duì)血紅蛋白測(cè)定結(jié)果有很大影響，最好取手指血測(cè)定血紅蛋白。同時(shí)，取血時(shí)注意擦干、消毒采血部位，用自然流出的第二滴血。最好固定采血部位。（三）一次性采血針應(yīng)一人一針，嚴(yán)防交叉感染。六、作業(yè)與思考（一）運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)血紅蛋白含量有何影響？（二）在訓(xùn)練周期中如何運(yùn)用血紅蛋白指標(biāo)來(lái)評(píng)定？實(shí)驗(yàn)三 血尿素的測(cè)定尿素是體內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸分解代謝的終產(chǎn)物。體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸分解代謝產(chǎn)生氨，氨代謝的主要去路是在肝臟合成尿素后釋放進(jìn)入血液，然后經(jīng)血液循環(huán)至腎臟排出體外。正常生理活動(dòng)時(shí)，尿素的生成和排泄處于平衡狀態(tài)，使血尿素濃度保持相對(duì)穩(wěn)定。正常人血尿素安靜值為3.27.0 mmol/L。運(yùn)動(dòng)員的安靜值與普通人一致。一般在30min以內(nèi)運(yùn)動(dòng)時(shí)，血尿素變化不大，超過(guò)30min以上的運(yùn)動(dòng)蛋白質(zhì)和氨基酸分解代謝加強(qiáng)參與供能，尿素生成增多，血尿素含量也較明顯增加。身體對(duì)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的適應(yīng)性越差，運(yùn)動(dòng)時(shí)生成的尿素就越多。在訓(xùn)練期可每天或隔天、或大運(yùn)動(dòng)量訓(xùn)練后次日晨測(cè)定血尿素，來(lái)評(píng)定運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能狀況；也可測(cè)定每周一晨的血尿素以了解機(jī)體的恢復(fù)情況。所以，血尿素氮可作為評(píng)定運(yùn)動(dòng)負(fù)荷量、機(jī)能狀況及機(jī)體疲勞程度的重要指標(biāo)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬W(xué)習(xí)血尿素氮的測(cè)定方法，熟練微量血的采集技術(shù)。（二）掌握血尿素氮指標(biāo)在運(yùn)動(dòng)實(shí)踐中的應(yīng)用。（三）學(xué)習(xí)離心機(jī)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理在強(qiáng)酸性的條件下，去蛋白血濾液中的尿素與二乙酰一肟和硫氨脲共熱，生成粉紅色的二嗪化衍生物，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與尿素含量成正比，通過(guò)與同樣處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)溶液比色，可求出血尿素氮的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）1%氟化鈉溶液。（二）10%三氯乙酸溶液。（三）二乙酰一肟-硫氨脲溶液：稱取二乙酰一肟 600mg，硫氨脲30mg，加蒸餾水溶解并加至100mL，置棕色瓶中，冰箱保存。（四）尿素氮標(biāo)準(zhǔn)貯存液（1mg/mL）：精確稱取干燥分析純尿素0.2143g，用1%H2SO4溶解并稀釋100mL，冰箱保存。（五）尿素氮標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（0.01mg/mL）：準(zhǔn)確取標(biāo)準(zhǔn)貯存液1mL，加1%H2SO4稀釋至100mL。（六）混合酸液：濃磷酸（85%87%）3.5mL、濃硫酸8mL，慢慢滴加于80mL水中，冷卻加水至100mL。（七）空白液：取1份1%NaF液和3份10%的三氯乙酸混合而成。（八）一次性采血針、吸血管、消毒棉球、試管、移液管、吸耳球、水浴箱、離心管、離心機(jī)、721分光光度計(jì)等。 四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）制備無(wú)蛋白血濾液：取2支離心管，按表3-1操作。取指尖血0.02mL，立即置于含1%氟化鈉0.48mL的離心管中，加入10%三氯醋酸1.5mL，充分搖勻。立即以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心15min，分離血清。表7-3 無(wú)蛋白血濾液的制備離心管1%NaF溶液（ml）0.48新鮮手指血（ml）0.02立刻搖勻10%三氯乙酸(ml）1.5充分混勻，離心5min（3000r/min），將上清液倒入另一離心管中（二）取3支大試管，標(biāo)明“空白管”、“標(biāo)準(zhǔn)管”、“測(cè)定管”，按表3-2操作。表7-4 血尿素氮的測(cè)定空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管空白液(ml)0.5尿素氮標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(ml)0.5去蛋白血濾液(ml)0.5二乙酰一肟-硫氨脲溶液(ml)0.50.50.5混合酸液(ml)3.03.03.0充分搖勻后，沸水浴10min，置于流水中冷卻至室溫，以空白管調(diào)零，在500nm波長(zhǎng)處比色，讀取測(cè)定管及標(biāo)準(zhǔn)管光密度OD值對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，并分析討論。五、注意事項(xiàng)（一）沸水浴時(shí)間對(duì)顯色程度影響很大，應(yīng)該嚴(yán)格控制好水浴時(shí)間，以水浴10min為宜。（二）二乙酰一肟硫氨脲溶液不能久置，若有結(jié)晶析出應(yīng)該重新配制。（三）運(yùn)動(dòng)實(shí)踐中利用這一指標(biāo)評(píng)定機(jī)能恢復(fù)狀況時(shí)，應(yīng)分別在運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后即刻及次日晨取血。若評(píng)定一個(gè)訓(xùn)練周期情況時(shí)，應(yīng)在周期初始、中間及結(jié)束時(shí)分別取晨血跟蹤測(cè)試。（四）血尿素含量超過(guò)40mg%時(shí)，應(yīng)將樣品稀釋后重新測(cè)定。六、作業(yè)與思考（一）測(cè)定血尿素含量有什么實(shí)際意義？（二）血尿素含量變化與身體機(jī)能有什么關(guān)系？（三）如何通過(guò)測(cè)定血尿素氮濃度控制訓(xùn)練負(fù)荷？實(shí)驗(yàn)四 血乳酸的測(cè)定乳酸是體內(nèi)糖無(wú)氧酵解的終產(chǎn)物。儲(chǔ)存在肌肉中的糖原和葡萄糖，在無(wú)氧的條件下分解成乳酸。乳酸經(jīng)擴(kuò)散進(jìn)入血液，稱為血乳酸。在正常情況下，乳酸的生成與消除處于動(dòng)態(tài)平衡中，正常人安靜時(shí)血乳酸濃度保持在12mmol/L，運(yùn)動(dòng)員血乳酸安靜值與正常人無(wú)差異，但在比賽前情緒緊張時(shí)，運(yùn)動(dòng)員的血乳酸安靜值有可能出現(xiàn)升高至3mmol/L，這與體內(nèi)的腎上腺分泌增多有關(guān)。劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，肌肉內(nèi)糖的無(wú)氧分解加強(qiáng)，血乳酸濃度顯著升高。運(yùn)動(dòng)時(shí)血乳酸濃度的變化與所動(dòng)用的能量系統(tǒng)有關(guān)。以磷酸原系統(tǒng)供能為主的運(yùn)動(dòng)，血乳酸生成量較少，血乳酸一般不超過(guò)4mmol/L；以糖酵解系統(tǒng)供能為主的運(yùn)動(dòng)，血乳酸可達(dá)15mmol/L 以上；而以有氧氧化系統(tǒng)供能為主的運(yùn)動(dòng)，血乳酸在4mmol/L左右。速度耐力性運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目的高水平運(yùn)動(dòng)員，運(yùn)動(dòng)成績(jī)好者，運(yùn)動(dòng)后血乳酸最大濃度值也高；耐力性運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)員，在完成相同亞極量運(yùn)動(dòng)負(fù)荷時(shí)，優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后血乳酸相對(duì)較低。根據(jù)這一特點(diǎn)可用以評(píng)定運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練水平或選材?？筛鶕?jù)運(yùn)動(dòng)后血乳酸的消除速率來(lái)評(píng)定運(yùn)動(dòng)員有氧代謝能力，若恢復(fù)速度快，表示有氧代謝能力強(qiáng)。因此，血乳酸含量的測(cè)定，對(duì)于從事體育工作的人來(lái)說(shuō)是很重要的。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┱莆昭樗岬臏y(cè)定方法。（二）初步掌握血乳酸的運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)評(píng)定方法及意義。（三）學(xué)習(xí)用掌式血乳酸分析儀測(cè)定血乳酸。二、實(shí)驗(yàn)原理去蛋白血濾液，加濃硫酸共熱，可使乳酸氧化成乙醛，在酮離子存在時(shí)，乙醛與對(duì)羥基聯(lián)苯作用生成紫紅色復(fù)合物，其顯色程度與乳酸濃度成正比，故通過(guò)比色可以測(cè)定其光密度值，從而計(jì)算出血液中乳酸的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）1%氟化鈉溶液：1g氟化鈉溶液溶于100ml蒸餾水中。（二）10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于100ml蒸餾水中。（三）濃H2SO4（分析純、比重：1.838）（四）4%CuS04溶液：4gCuS04溶于100ml蒸餾水中。（五）對(duì)羥基聯(lián)苯試劑：將1. 5 g對(duì)羥基聯(lián)苯溶于10ml的5%NaOH溶液中，待溶解后加水稀釋至100ml，冷卻后貯存于棕色瓶中。（六）乳酸標(biāo)準(zhǔn)貯存液(1ml含1mg)：稱取乳酸鋰106.6 mg，溶于約10ml水中，加H2SO4（濃）2滴，移至100ml容量瓶，用水稀釋至刻度，混勻。置于冰箱保存。（七）乳酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1ml含10 g)：取1ml乳酸標(biāo)準(zhǔn)貯存液，用100 ml容量瓶加蒸餾水稀釋至刻度即成。此液臨用時(shí)配制。（八）乳酸空白液：取1%氟化鈉溶液和10%三氯乙酸溶液按13體積比混合而成。（九）臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴箱、水浴鍋、離心管、721分光光度計(jì)、試管、移液管、滴管、吸血管、一次性采血針、消毒棉球、血乳酸分析儀。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）制備無(wú)蛋白血濾液：取2支離心管，按實(shí)驗(yàn)三表7-5操作。表7-5 無(wú)蛋白血濾液的制備離心管1%NaF溶液（ml）0.48新鮮手指血（ml）0.02立刻搖勻10%三氯乙酸(ml）1.5充分混勻，離心5min（3000r/min），將上清液倒入另一離心管中（二）取3支大試管，標(biāo)明“空白管”、“標(biāo)準(zhǔn)管”、“測(cè)定管”，按表7-6操作。表7-6 血乳酸的測(cè)定空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管乳酸空白液（ml）0.50乳酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）0.50無(wú)蛋白血濾液（ml）0.504%CuS04溶液（滴）111濃硫酸（ml）試管放于冷水中，各加3 ml，邊加邊搖勻置沸水浴5min，冷水浴冷卻至15C以下對(duì)羥基聯(lián)苯溶液（滴）222充分搖勻，置37C水浴保溫15 min，每隔5 min振搖一次試管。然后沸水浴90s，用冷水冷卻至室溫。以空白管調(diào)零，在560nm波長(zhǎng)處比色，讀取測(cè)定管及標(biāo)準(zhǔn)管光密度OD值。（三）用掌式血乳酸分析儀測(cè)定血乳酸。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，并分析討論。血乳酸（mg%）=OD測(cè)/OD標(biāo)100血乳酸（mmol/L）=血乳酸（mg%）/9五、注意事項(xiàng)（一）濃硫酸對(duì)顯色影響很大，必須選用純凈濃硫酸。加濃硫酸時(shí)，應(yīng)把試管放入冷水中，慢慢滴加，要邊加邊搖勻。濃硫酸有強(qiáng)的氧化性和腐蝕性，使用時(shí)要小心。（二）嚴(yán)格控制水浴時(shí)保溫溫度和保溫時(shí)間，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。（三）滴加對(duì)羥基聯(lián)苯時(shí)，試管應(yīng)充分冷卻，滴加時(shí)應(yīng)滴加在液面上，并立即搖勻，防止附著于管壁上。（四）血乳酸測(cè)定時(shí)取樣時(shí)間非常重要，安靜值應(yīng)在早晨起床前安靜時(shí)采樣；運(yùn)動(dòng)后血乳酸的測(cè)定應(yīng)根據(jù)不同運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目而定，一般運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度較低的運(yùn)動(dòng)在運(yùn)動(dòng)后20s左右取樣，中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)在運(yùn)動(dòng)后16min取樣，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)在運(yùn)動(dòng)后312min取樣。在實(shí)際測(cè)試時(shí)，可多選幾次采血時(shí)間（如1、3、5分鐘）間隔采樣。六、作業(yè)與思考（一）測(cè)定血乳酸時(shí)應(yīng)如何控制采血樣的時(shí)間？（二）如何運(yùn)用血乳酸指標(biāo)監(jiān)控運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度？（三）如何運(yùn)用血乳酸指標(biāo)評(píng)定運(yùn)動(dòng)員有氧代謝能力和無(wú)氧代謝能力？實(shí)驗(yàn)五 尿肌酐的測(cè)定人體90%肌酸存在于肌肉，而且大部分以磷酸肌酸的形式存在于肌肉中。磷酸肌酸脫去磷酸后生成肌酐，肌酐隨尿液排出即為尿肌酐。正常人尿肌酐日排出量相當(dāng)穩(wěn)定，成年男子日排出量約1.01.8g，女性為0.71.0g，不受食物蛋白質(zhì)含量和尿量的影響。24h每千克體重排出的尿肌酐毫克數(shù)稱為尿肌酐系數(shù)。正常人尿肌酐系數(shù)為：男子1832 mg/kg 體重，1025mg/kg體重。運(yùn)動(dòng)員尿肌酐系數(shù)高于常人，一般為2540mg/kg 體重。不同項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)員尿肌酐系數(shù)也不同，力量和速度項(xiàng)目運(yùn)動(dòng)員，肌肉發(fā)達(dá)，其尿肌酐系數(shù)也高，且尿肌酐的日排出量與運(yùn)動(dòng)成績(jī)高度相關(guān)。尿肌酐日排出與肌肉中磷酸肌酸和肌酸的含量有關(guān)。因此，測(cè)定尿肌酐含量可以間接了解骨骼肌中磷酸肌酸的含量。運(yùn)動(dòng)員經(jīng)過(guò)一個(gè)階段訓(xùn)練后，尿肌酐系數(shù)可能增加，這反映肌肉的磷酸肌酸濃度或肌肉發(fā)達(dá)程度提高。尿肌酐系數(shù)可作為運(yùn)動(dòng)員力量素質(zhì)與速度素質(zhì)的評(píng)定、運(yùn)動(dòng)選材、訓(xùn)練效果的指標(biāo)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬W(xué)習(xí)尿肌酐的測(cè)定方法。（二）掌握尿肌酐系數(shù)指標(biāo)的計(jì)算及在運(yùn)動(dòng)實(shí)踐中的作用。二、實(shí)驗(yàn)原理（堿性苦味酸法）尿中的肌酐在堿性溶液中與苦味酸作用，生成橙紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物，其生成量與肌酐含量成正比，通過(guò)比色可以測(cè)定尿中肌酐含量。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）飽和苦味酸溶液：取苦味酸15g，置于大燒杯中，加蒸餾水1000ml，溫?zé)嶂埽浜笕缬薪Y(jié)晶析出，表示已達(dá)飽和，取上清液備用。（二）10%的氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉100g，加蒸餾水溶解，冷卻用蒸餾水稀釋至1000ml。（三）堿性苦味酸溶液：取飽和苦味酸溶液5份，加10%氫氧化鈉1份，臨用前20 min新鮮配制?。ㄋ模┘◆麡?biāo)準(zhǔn)貯存液(1 mg/1mL)：精確稱取純肌酐 0.1g，置于100 ml容量瓶?jī)?nèi)，以10%鹽酸溶解稀釋至刻度。保存于冰箱中。（五）肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（0.1 mg/ml）：精確吸取肌酐標(biāo)準(zhǔn)貯存液10ml，置于100 ml容量瓶中，加10%鹽酸10ml，再加蒸餾水稀釋至刻度。加甲苯或氯仿數(shù)滴防腐。此液可存一周以上。（六）試管、移液管、721分光光度計(jì)等。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）制備稀釋尿液（1100）：收集受試者24h尿液，混勻后取0.1ml尿液置于大試管中，加9.9ml蒸餾水，搖勻。（二）取3支大試管，標(biāo)明“空白管”、“標(biāo)準(zhǔn)管”、“測(cè)定管”，按表7-7操作。表7-7 尿肌酐的測(cè)定空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(ml)0.5稀釋尿液（1100）(ml)510% NaOH溶液(ml)0.20.20.2蒸餾水(ml)5.04.5堿性苦味酸試劑(ml)111充分搖勻后，放置10 min，以空白管調(diào)零，在520nm波長(zhǎng)處比色，讀取測(cè)定管及標(biāo)準(zhǔn)管光密度OD值對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，并分析討論。五、注意事項(xiàng)（一）顯色反應(yīng)在1015min內(nèi)完成，若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，尿液中其他物質(zhì)也能與堿性苦味酸起反應(yīng)而影響結(jié)果。（二）若尿液樣品濃度過(guò)高，應(yīng)重新稀釋尿液，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即可。（三）肌酐與堿性苦味酸反應(yīng)所顯顏色要漸漸褪色，故宜在半小時(shí)內(nèi)進(jìn)行比色，讀取結(jié)果。六、作業(yè)與思考（一）如何利用尿肌酐測(cè)定來(lái)評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)員有機(jī)能？（二）日肌酐排泄量增高，是否能表明尿肌酐系數(shù)增高？為什么？ 實(shí)驗(yàn)六 尿蛋白的測(cè)定尿蛋白是指尿中蛋白質(zhì)而言，尿蛋白的主要成分是白蛋白。正常人尿內(nèi)含有微量蛋白質(zhì)，在2mg%以內(nèi)，成年人每晝夜排出的總量約10-100mg，偶爾可達(dá)150mg。安靜狀態(tài)下，運(yùn)動(dòng)員的尿蛋白含量與正常人含量無(wú)差別。由于運(yùn)動(dòng)而出現(xiàn)尿中蛋白質(zhì)增加的現(xiàn)象稱為運(yùn)動(dòng)性蛋白尿。在體育運(yùn)動(dòng)或訓(xùn)練后，尿中蛋白質(zhì)的排出量可能達(dá)到250mg以上。測(cè)定運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后尿中蛋白質(zhì)的數(shù)量，可以用來(lái)評(píng)定運(yùn)動(dòng)員體機(jī)能狀態(tài)、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度和運(yùn)動(dòng)量及恢復(fù)情況等。評(píng)定一次訓(xùn)練課的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷量時(shí)，一般采集晨起安靜時(shí)尿液與運(yùn)動(dòng)后15min的尿液進(jìn)行比較。若運(yùn)動(dòng)量大，尤其是運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度越大，尿蛋白生成量也越多。而觀察身體機(jī)能狀況及身體恢復(fù)情況，要采集運(yùn)動(dòng)后4h或次日晨尿液進(jìn)行評(píng)定。若運(yùn)動(dòng)后4h或次日晨尿蛋白下降至正常值，說(shuō)明機(jī)能已經(jīng)恢復(fù)；若仍處于較高水平，則說(shuō)明機(jī)能尚未恢復(fù)。運(yùn)動(dòng)性蛋白尿的數(shù)量受多種因素的影響，如運(yùn)動(dòng)身體機(jī)能狀態(tài)、訓(xùn)練手段、情緒、環(huán)境、年齡等，且存在個(gè)體差異，因此，在一個(gè)訓(xùn)練周期中可進(jìn)行跟蹤測(cè)試，根據(jù)個(gè)體尿蛋白變化規(guī)律評(píng)定訓(xùn)練負(fù)荷、系統(tǒng)監(jiān)測(cè)機(jī)體對(duì)訓(xùn)練負(fù)荷的適應(yīng)情況。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬W(xué)習(xí)尿蛋白的測(cè)定方法。（二）掌握尿蛋白指標(biāo)在運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中的應(yīng)用。（三）學(xué)會(huì)用尿液分析儀測(cè)定尿液中各種指標(biāo)。二、實(shí)驗(yàn)原理（磺基水楊酸比濁法）磺基水楊酸為蛋白沉淀劑。在酸性條件下，含蛋白質(zhì)的尿液和磺基水楊酸生成不溶性蛋白質(zhì)鹽而呈白色渾濁。在一定范圍內(nèi)，其渾濁度與蛋白質(zhì)含量成正比，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)蛋白液比較，可粗略求出尿中蛋白質(zhì)的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）3%磺基水楊酸溶液：稱取磺基水楊酸3g，加蒸餾水溶解并稀釋至100ml，溶解后貯棕色瓶備用。（二）不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列混濁液：自制或購(gòu)置。（三）移液管、試管、自動(dòng)尿八項(xiàng)分析儀。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）用塑料杯留取尿液。（二）取與標(biāo)準(zhǔn)比濁管口徑相同的小試管，加入尿液0.5ml（約10滴），加入3%磺基水楊酸溶液1.5ml，搖勻，放置3min后與系列標(biāo)準(zhǔn)管比濁，即可得出尿蛋白含量。（三）用自動(dòng)尿液分析儀測(cè)定尿蛋白值。五、注意事項(xiàng)（一）正常人安靜時(shí)本試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)。但尿中鹽類結(jié)晶較多時(shí)也出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，可先加熱原尿，使其渾濁消失，再加入磺基水楊酸溶液。（二）標(biāo)準(zhǔn)比濁管在使用前應(yīng)充分搖勻。六、作業(yè)與思考（一）測(cè)定運(yùn)動(dòng)員尿蛋白排泄量有什么實(shí)際意義？（二）在一次大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練或比賽后，何時(shí)取尿比較理想？（三）尿蛋白一次測(cè)定值增高，能否肯定其身體機(jī)能下降，為什么？實(shí)驗(yàn)七 溫度和pH對(duì)酶活性影響實(shí)驗(yàn)酶的催化作用受溫度的影響很大。酶促反應(yīng)同一般化學(xué)反應(yīng)一樣都需要在一定的溫度下進(jìn)行。在其他條件恒定下，酶活性達(dá)最大時(shí)的溫度稱此酶的最適溫度。低于最適溫度，隨著溫度升高，催化反應(yīng)速度也會(huì)加快；但高于最適溫度，隨著溫度升高，反應(yīng)速度反而逐漸下降，直至酶蛋白變性失活。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37度左右。環(huán)境pH對(duì)酶的催化活性影響顯著。在一定條件下，酶活性達(dá)最高時(shí)的pH值稱為該酶的最適pH，每一種酶都有一個(gè)最適的pH，此時(shí)它的催化反應(yīng)速度最快。在低于最適pH值時(shí)，隨著pH值的升高，酶的催化能力也相應(yīng)升高；高于最適pH值時(shí)，隨著pH值的升高，酶的活性逐漸下降。不同酶的最適pH不同，如唾液淀粉酶的最適pH為6.66.8。酶活性的發(fā)揮受許多因素的影響。從安靜狀態(tài)到運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，體內(nèi)物質(zhì)與能量代謝的速率會(huì)隨著酶活性的改變而增強(qiáng)，以滿足體能需求。激烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，乳酸等大量酸性物質(zhì)的生成可引起內(nèi)環(huán)境酸化，使酶活性受抑，從而導(dǎo)致肌肉等組織做功能力下降。體內(nèi)某些酶的活性可隨著長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練而發(fā)生適應(yīng)性變化，表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)能力提高，對(duì)運(yùn)動(dòng)員提供的某些營(yíng)養(yǎng)措施（如補(bǔ)充微量元素，服用堿性運(yùn)動(dòng)飲料等）都是基于發(fā)揮酶活力的原理。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬W(xué)會(huì)測(cè)定酶最適pH的方法。（二）學(xué)會(huì)測(cè)定溫度對(duì)酶活性影響的方法及原理。（三）了解溫度及pH對(duì)酶活性的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解成分子大小不同的糊精和麥芽糖，它們遇碘呈現(xiàn)不同顏色。直鏈淀粉遇碘呈藍(lán)色；糊精按分子大小的順序遇碘呈藍(lán)色、紫色、暗紅色；最小分子量的糊精和麥芽糖遇碘不變色。由于在不同溫度和不同pH下，唾液淀粉酶的活性高低不同，則淀粉水解的程度不同，可以從酶反應(yīng)混合物所遇碘所呈現(xiàn)的顏色來(lái)判斷酶的活性。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）0.5%淀粉液（以0.3%NaCl的作溶劑）。（二）碘化鉀碘溶液：碘4g，碘化鉀16g，加蒸餾水至100ml。棕色瓶保存。（三）pH5.0的檸檬酸磷酸氫二鈉緩沖液。（四）pH6.8的檸檬酸磷酸氫二鈉緩沖液。（五）pH8.0的檸檬酸磷酸氫二鈉緩沖液。（六）試管、燒杯、水浴鍋、恒溫水浴、移液管、試管架、濾紙、酒精燈等。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）制備稀釋唾液：用一次性杯取少許唾液。取唾液0.4ml放入燒杯，加水39.6ml，混勻，過(guò)濾備用。（二）制備煮沸唾液：取燒杯中的稀釋唾液10ml于試管中，沸水浴5min。（三）取六支試管并編號(hào)，分別按表7-8、表7-9操作。表7-8 溫度對(duì)酶活性的影響1號(hào)管2號(hào)管3號(hào)管0.5%淀粉液（ml）2.02.02.0水浴2min37370煮沸唾液（ml）1.0稀釋唾液（ml）1.01.0充分搖勻，水浴20min37370碘液（滴）111觀察并記錄各管顏色，判斷淀粉水解程度表7-9 pH對(duì)酶活性的影響4號(hào)管5號(hào)管6號(hào)管pH5.0的緩沖液（ml）3.0pH6.8的緩沖液（ml）3.0pH8.0的緩沖液3.00.5%淀粉液（ml）2.02.02.0稀釋唾液（ml）2.02.02.0充分搖勻，同時(shí)水浴37，水浴15min碘液（滴）111觀察并記錄各管顏色，判斷不同pH對(duì)淀粉水解和淀粉酶活性的影響，并確定淀粉的最適pH值。五、注意事項(xiàng)嚴(yán)格控制溫度及保溫時(shí)間。六、作業(yè)與思考（一）什么是酶的最適溫度？有何實(shí)踐意義？（二）PH對(duì)酶活性有何影響？什么是酶反應(yīng)的最適pH？實(shí)驗(yàn)八 血糖的測(cè)定正常人血液中的葡萄糖(血糖)含量為4.46.6 mmol/L（80120mg/dL），當(dāng)血糖低于3.8mmol/L時(shí)，臨床上稱為低血糖；血糖高于7.2mmol/L時(shí)，臨床上稱為高血糖；血糖濃度8.8mmol/L為稱腎糖尿閾，高于此值時(shí)，腎小球?yàn)V過(guò)的葡萄糖在腎小管不能被全部吸收，糖由尿中排出。飽食或大量食糖后，大量葡萄糖進(jìn)入血液，使血糖濃度增高，糖原的合成速度也隨之增大，但血糖濃度不久即恢復(fù)正常值。運(yùn)動(dòng)員安靜時(shí)與普通人血糖正常值無(wú)差異，運(yùn)動(dòng)時(shí)會(huì)隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間出現(xiàn)變化。短時(shí)間激烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，主要依靠肌糖原分解供能，血糖供能很少，血糖值變化不大；長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)時(shí)骨骼肌吸收利用血糖的過(guò)程加強(qiáng)、速度加快，血糖有下降現(xiàn)象，但下降程度因人而異。血糖是評(píng)定運(yùn)動(dòng)耐力素質(zhì)，監(jiān)控耐力訓(xùn)練的生化指標(biāo)之一。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┝私庹Ｈ搜褐械难呛考捌渥兓＃ǘW(xué)習(xí)血糖定量測(cè)定的方法。（三）了解運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練時(shí)血糖的變化。二、實(shí)驗(yàn)原理（葡萄糖氧化酶法）葡萄糖能被葡萄糖氧化酶（GOD）氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，后者與苯酚及4-氨基安替比林在過(guò)氧化酶（POD）作用下產(chǎn)生紅色醌類化合物，其顏色深淺與葡萄糖濃度成正比。通過(guò)比色可以計(jì)算出葡萄糖的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）一次性采血針、吸血管、消毒棉球、移液管，離心管和試管、水浴鍋、離心機(jī)和721分光光度計(jì)。 （二）酶制劑。 （三）1%氟化鈉溶液。（四）10%三氯乙酸溶液。（五）0.25%苯甲酸溶液：稱取苯甲酸2.5g，加入煮沸的蒸餾水1000ml中，使其成為飽和溶液，冷卻后取上清液備用。 （六）0.1%苯酚溶液：用蒸餾水把1%苯酚溶液稀釋至0.1%苯酚溶液。（七）酶酚混合液的制備：將0.1%苯酚溶液與等量的酶試劑混合。 （八）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液（10mg=1ml）：稱取純無(wú)水葡萄糖（預(yù)先置80烤箱干燥至恒重，移置干燥器內(nèi)保存）1g，溶解于0.25%苯甲酸溶液80mL中，移置100mL容量瓶中，再加苯甲酸溶液至刻度。（九）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（1.0ml=1.0mg）：取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10mL，置于100mL容量瓶中，加0.25%苯甲酸溶液稀釋至刻度。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）制備無(wú)蛋白血濾液：取3支離心管，標(biāo)明“運(yùn)動(dòng)前”、“運(yùn)動(dòng)中”、“運(yùn)動(dòng)后”，按表7-10操作。1運(yùn)動(dòng)前取血：取指尖或耳垂血0.02mL，立即置于含1%氟化鈉0.48mL的離心管中，加入10%三氯醋酸1.5mL，充分搖勻，注明“運(yùn)動(dòng)前”。立即以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心15min，分離血清。2運(yùn)動(dòng)中取血：蹬臺(tái)階運(yùn)動(dòng)，以30次/分的速度連續(xù)運(yùn)動(dòng)3min后立即取血，方法同上。3運(yùn)動(dòng)后取血：運(yùn)動(dòng)后休息15分鐘，再次取血，處理方法同上。表7-10 無(wú)蛋白血濾液的制備運(yùn)動(dòng)前運(yùn)動(dòng)中運(yùn)動(dòng)后1%NaF溶液（ml）0.480.480.48新鮮手指血（ml）0.020.020.02立刻搖勻10%三氯乙酸(ml）1.51.51.5充分混勻，離心5min（3000r/min），分別將上清液倒入另外的離心管中（二）取3支大試管按下表7-11進(jìn)行操作。表7-11 血糖的測(cè)定空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管（前）測(cè)定管（中）測(cè)定管（后）血清（ml）0.020.020.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）0.02酶酚混合液（ml）3.03.03.03.03.0各管搖勻，置于37水浴中保溫20min，冷卻至室溫，以空白管調(diào)零，在505nm波長(zhǎng)處比色，讀取測(cè)定管及標(biāo)準(zhǔn)管光密度OD值。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，并分析討論。葡萄糖（mg%）=OD測(cè)OD標(biāo)100葡萄糖（mmol/L）=葡萄糖（mg%）0.0555五、注意事項(xiàng)（一）本法不需去除蛋白質(zhì)，對(duì)葡萄糖有特異性，并不受其他糖存在的影響，亦可用于尿糖測(cè)定。（二）本法標(biāo)本用量小，取樣時(shí)力求準(zhǔn)確。（三）應(yīng)在取血樣后30min內(nèi)分離血清，以避免血糖進(jìn)行糖酵解等，降低血糖濃度，從而影響血糖的測(cè)定。六、作業(yè)與思考（一）人體血糖濃度的變化對(duì)什么運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目影響最為明顯？ （二）不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對(duì)血糖值有何影響？實(shí)驗(yàn)九 尿膽原的測(cè)定尿膽原是體內(nèi)血紅蛋白分解的產(chǎn)物。在一般情況下，每天由紅細(xì)胞破壞而釋放出來(lái)的血紅蛋白約8g，經(jīng)過(guò)代謝約產(chǎn)生280mg膽色素，其中有部分代謝產(chǎn)物以尿膽原形式排出體外。一般早晨安靜時(shí)尿中尿膽原2mg%為正常。尿膽原排泄量與腎小管管腔的酸堿度、膽紅素形成量和肝功能下降有關(guān)。由于尿膽原的排泄量與血紅素形成量有關(guān)，運(yùn)動(dòng)員在大運(yùn)動(dòng)負(fù)荷時(shí)，體內(nèi)溶血的增多，尿膽原排出隨之增加，因此，在尿膽原增多的同時(shí)，應(yīng)加測(cè)血紅蛋白指標(biāo)，觀察血紅蛋白是否下降。在評(píng)定運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能時(shí)，應(yīng)將血紅蛋白和尿膽原兩項(xiàng)指標(biāo)結(jié)合運(yùn)用，以使評(píng)定結(jié)果更客觀、可靠。應(yīng)用尿膽原進(jìn)行評(píng)定時(shí)，可在星期一晨起取耳血測(cè)血紅蛋白，取尿液測(cè)尿膽原，測(cè)定值是安靜值，可以作為運(yùn)動(dòng)值和恢復(fù)值的對(duì)照。晨安靜時(shí)尿中尿膽原2mg%為正常，說(shuō)明機(jī)體適應(yīng)訓(xùn)練，疲勞可恢復(fù)大運(yùn)動(dòng)負(fù)荷、機(jī)體疲勞或機(jī)能下降時(shí)，晨尿中尿膽原排泄量會(huì)明顯增加。當(dāng)尿膽原在安靜狀態(tài)下高于2mg%，且連續(xù)了23d，就應(yīng)注意運(yùn)動(dòng)負(fù)荷量的調(diào)整。大運(yùn)動(dòng)量訓(xùn)練后次日晨取血、尿，測(cè)定血紅蛋白和尿膽原值，并記錄主觀疲勞感。若血紅蛋白穩(wěn)定、尿膽原變化不大、主訴無(wú)疲勞感時(shí)，表示身體對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練負(fù)荷適應(yīng)；若血紅蛋白值下降、尿膽原排出量增多、晨起主訴有疲勞感時(shí)，則應(yīng)減輕訓(xùn)練負(fù)荷的強(qiáng)度或負(fù)荷量。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬W(xué)習(xí)尿膽素原的測(cè)定方法。（二）了解尿膽素原指標(biāo)在運(yùn)動(dòng)中的意義。二、實(shí)驗(yàn)原理尿液內(nèi)的尿膽素原在酸性條件下，與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成紅色化合物,與其顏色深淺與尿膽素原含量成正比，與人工配制的標(biāo)準(zhǔn)液比色，可求得尿膽原的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）對(duì)二甲氨基苯甲醛。（二）歐氏醛試劑：稱取對(duì)二甲氨基苯甲醛1.0g，溶解于150ml 50%鹽酸液中。（三）4%氯化金溶液。（四）10%溴化鈉溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）人工標(biāo)準(zhǔn)液配制法如下表。取3只100ml試劑瓶，標(biāo)號(hào)，按表7-12進(jìn)行操作。表7-12 人工標(biāo)準(zhǔn)液配制標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液4%氯化金溶液（ml）11110%溴化鈉溶液（ml）111蒸餾水（ml）132858相當(dāng)于尿膽原量（mg%）0.92.48.2（二）尿液預(yù)處理：取1只大試管加入新鮮尿液10ml，加無(wú)水氯化鈣0.4g，混合后過(guò)濾，除去可能存在的膽色素。（三）取1只大試管，加尿?yàn)V液5ml，歐氏醛試劑1ml，混合后放置5min，使其完全顯色，與最接近色度的人工標(biāo)準(zhǔn)比色，以蒸餾水為空白管調(diào)零，在520nm波長(zhǎng)處比色，讀取測(cè)定管的光密度OD值。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，并分析討論。尿膽素原mg% =OD測(cè)OD標(biāo)C標(biāo)五、注意事項(xiàng)（一）正常人尿膽原排出量每天波動(dòng)很大，夜間和上午量少，午后則迅速增加，在午后 24 點(diǎn)達(dá)最高峰。留取標(biāo)本的時(shí)間最好在下午24時(shí)，并記錄尿量。（二）尿液標(biāo)本必須新鮮，以免尿膽原氧化成尿膽素。若測(cè)定24h尿膽原，可用有色容器留尿，每100ml加無(wú)水碳酸鈉5g，并加入純石油醚或甲苯10ml防腐。（三）測(cè)定尿膽原前不能服用抗生素，以免改變腸道菌群，使尿膽原的產(chǎn)生抑制。六、作業(yè)與思考 （一）如何用尿膽原來(lái)評(píng)定運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能？實(shí)驗(yàn)十 運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的綜合評(píng)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)會(huì)用血乳酸、尿蛋白等多項(xiàng)生物化學(xué)指標(biāo)對(duì)無(wú)氧運(yùn)動(dòng)或有氧運(yùn)動(dòng)的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、運(yùn)動(dòng)負(fù)荷等進(jìn)行綜合評(píng)定。二、實(shí)驗(yàn)原理在運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的評(píng)定中，單一生物化學(xué)指標(biāo)難以說(shuō)明問(wèn)題，只有多指標(biāo)的綜合評(píng)定，才能起到互相補(bǔ)充，揚(yáng)長(zhǎng)避短的作用。一般地說(shuō)，目前常采用血乳酸、尿蛋白等評(píng)定運(yùn)動(dòng)負(fù)荷強(qiáng)度；采用血紅蛋白、血尿素、尿膽原等評(píng)定負(fù)荷量。評(píng)定運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的生物化學(xué)指標(biāo)除了要多項(xiàng)測(cè)試，還要進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，所以不僅要測(cè)定運(yùn)動(dòng)后的生化指標(biāo)變化，還要測(cè)定運(yùn)動(dòng)前的生化指標(biāo)的量，對(duì)運(yùn)動(dòng)前后的生化指標(biāo)相差絕對(duì)值進(jìn)行綜合評(píng)定。采用不同運(yùn)動(dòng)方式運(yùn)動(dòng)，機(jī)體的主要供能系統(tǒng)有所側(cè)重，運(yùn)動(dòng)后各指標(biāo)的變化也不同。短時(shí)間大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)（10s以內(nèi)）基本上依靠磷酸原供能系統(tǒng)供能，運(yùn)動(dòng)后血乳酸濃度的變化不太大；運(yùn)動(dòng)時(shí)間在10s到幾十秒鐘的大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)則主要依靠糖酵解系統(tǒng)供能為主，運(yùn)動(dòng)后血乳酸濃度會(huì)出現(xiàn)大幅度的升高；而長(zhǎng)時(shí)間的低、中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)以糖和脂肪的有氧氧化為主，運(yùn)動(dòng)后血乳酸濃度上升較少。三、實(shí)驗(yàn)器材體院實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的簡(jiǎn)便儀器，如尿液分析儀、血乳酸分析儀等。四、實(shí)驗(yàn)步驟將教學(xué)班分為若干組，每組5-6人，每組隨機(jī)抽取23人為受試者，其余擔(dān)任測(cè)試工作。例如受試者進(jìn)行準(zhǔn)備活動(dòng)后，可分別進(jìn)行3種運(yùn)動(dòng)：（1）10s原地快跑；（2）原地高抬腿慢跑3min；（3）3000m以上距離的長(zhǎng)跑運(yùn)動(dòng)。（一）分別于運(yùn)動(dòng)前安靜時(shí)、運(yùn)動(dòng)后35min取血，測(cè)定血乳酸。（二）運(yùn)動(dòng)前安靜時(shí)和運(yùn)動(dòng)后1520min取尿，測(cè)定尿蛋白。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表7-13中。表7-13 運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的綜合評(píng)定姓名血乳酸(mmol/L)尿蛋白(mg%)安靜運(yùn)動(dòng)后35min安靜運(yùn)動(dòng)后1520min方案一方案二方案三對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析討論。分析3種運(yùn)動(dòng)方式運(yùn)動(dòng)后各指標(biāo)的變化及其原因，進(jìn)而了解3種不同運(yùn)動(dòng)方式的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。五、注意事項(xiàng)注意控制好血乳酸、尿蛋白取樣的時(shí)間。 實(shí)驗(yàn)十一 運(yùn)動(dòng)生化指標(biāo)的綜合應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┠軌蚓C合應(yīng)用所學(xué)的運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)知識(shí)和技能，去解決一些實(shí)際問(wèn)題。（二）初步了解科研實(shí)驗(yàn)的基本要求和程序，提高學(xué)生分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力，提高創(chuàng)新的能力。二、實(shí)驗(yàn)原理運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量代謝發(fā)生變化，導(dǎo)致血、尿、汗和唾液中某些成分發(fā)生改變。測(cè)定某些生化指標(biāo)可了解機(jī)體的變化規(guī)律，從而對(duì)運(yùn)動(dòng)人體機(jī)能做出定性或定量的分析。為了科學(xué)地、準(zhǔn)確地評(píng)定運(yùn)動(dòng)人體機(jī)能，應(yīng)采用多個(gè)生化指標(biāo)的綜合評(píng)定。常用的生化指標(biāo)有血乳酸、血尿素、血紅蛋白、尿蛋白、尿肌酐、血睪酮等。三、實(shí)驗(yàn)器材試管、移液管、取血針、721分光光度計(jì)、血乳酸分析儀、尿八項(xiàng)分析儀等常用生化儀器。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）選題。把學(xué)生分成若干個(gè)小組，46人為一小組，要求每小組自行選一個(gè)題目或自擬題目。運(yùn)用兩個(gè)或兩個(gè)以上的生化指標(biāo)，設(shè)計(jì)并解決下列運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中的實(shí)際問(wèn)題。1評(píng)定運(yùn)動(dòng)后的身體機(jī)能狀況。常采用尿蛋白、血尿素、血紅蛋白等評(píng)定機(jī)能狀況。2評(píng)定訓(xùn)練課的負(fù)荷安排。采用血紅蛋白、血尿素、尿膽原評(píng)定負(fù)荷量。3監(jiān)測(cè)比賽的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。常采用血乳酸、尿蛋白、CK等評(píng)定運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。4評(píng)定訓(xùn)練后的恢復(fù)狀況。常采用血乳酸、血尿素、尿蛋白等評(píng)定。（二）查閱文獻(xiàn)資料。了解所選運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目的供能過(guò)程及生化特點(diǎn)；選擇兩種或兩種以上的生化指標(biāo)，能反映該運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目訓(xùn)練情況。（三）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。根據(jù)已學(xué)的運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)知識(shí)和相關(guān)文獻(xiàn)資料，每一個(gè)學(xué)生各自進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括：題目、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)對(duì)象、運(yùn)動(dòng)方式、實(shí)驗(yàn)器材、實(shí)驗(yàn)觀察的生化指標(biāo)及其測(cè)試方法等。（四）實(shí)施實(shí)驗(yàn)過(guò)程及生物化學(xué)指標(biāo)的測(cè)定，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論分析。（根據(jù)人力、物力和課時(shí)的實(shí)際情況，可只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)而不進(jìn)行具體的實(shí)驗(yàn)實(shí)施的方式。）（五）以小論文的形式完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。五、注意事項(xiàng)（一）學(xué)生要復(fù)習(xí)所學(xué)的能量供應(yīng)、運(yùn)動(dòng)員機(jī)能評(píng)定等相關(guān)理論知識(shí)，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)（實(shí)驗(yàn)課前一周）完成實(shí)驗(yàn)過(guò)程的設(shè)計(jì)，經(jīng)任課教師審核合格后，才能實(shí)施實(shí)驗(yàn)。（二）注意各生物化學(xué)指標(biāo)的適宜測(cè)試時(shí)間。六、作業(yè)與思考（一）根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，以小論文的形式寫(xiě)一篇實(shí)驗(yàn)報(bào)告或按設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)格式完成實(shí)驗(yàn)作業(yè)。參考文獻(xiàn)張?zhí)N琨,丁樹(shù)哲等.運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn).北京：高等教育出版社，2006.張?zhí)N琨,丁樹(shù)哲等.運(yùn)動(dòng)生物化學(xué).北京：高等教育出版社，2006.馮連世,李開(kāi)剛等.運(yùn)動(dòng)員機(jī)能評(píng)定常用生理生化指標(biāo)方法及應(yīng)用.北京:人民體育出版社,2002.馮美云等.運(yùn)動(dòng)生物化學(xué).北京:人民體育出版社,1999.林文弢等.運(yùn)動(dòng)生物化學(xué).北京:人民體育出版社,1999.張愛(ài)芳等.生物化學(xué)與運(yùn)動(dòng)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)及習(xí)題集.北京:北京體育大學(xué)出版社,2006.附 一、實(shí)驗(yàn)室規(guī)則及注意事項(xiàng)（一）實(shí)驗(yàn)課前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，弄清實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、操作步驟及注意事項(xiàng)等，有問(wèn)題及時(shí)提出，準(zhǔn)備充分后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。 （二）嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并隨時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所觀察到的每一現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行整理、分析，并寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。 （三）杜絕在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嬉戲打鬧，大聲喧嘩。 （四）藥品架及實(shí)驗(yàn)室要保持整潔，保證試劑藥品的純凈。試劑用后立即蓋好放回原處。移液管不能混用，試劑瓶蓋不能蓋錯(cuò)。 （五）愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，注意安全操作，若有損壞儀器或意外事故發(fā)生應(yīng)該立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師。 （六）實(shí)驗(yàn)完畢后，清洗整理所用器皿，搞好室內(nèi)衛(wèi)生。將廢紙、棉球、碎玻璃等雜物倒入污物桶，統(tǒng)一處理。必須切斷儀器的電源。二、常用玻璃儀器的使用及清洗方法（一）常用玻璃儀器的使用1移液管（吸管）移液管或吸管是用來(lái)準(zhǔn)確地移取一定體積的液體的玻璃儀器。移液管一般有無(wú)分度移液管和分度移液管（刻度吸管）兩種。其中無(wú)分度移液管有1ml、5ml、10ml、20ml、50ml等不同規(guī)格，只能量取全容量的溶液。分度移液管有0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml等不同規(guī)格，供準(zhǔn)確量取液體之用。分度吸管有完全流出式、吹出式和不完全流出式3種。完全流出式分度吸管的使用方法同無(wú)分度吸管一樣，當(dāng)吸管內(nèi)的溶液不能再自動(dòng)流出時(shí)，把容器傾斜約15，使吸管的尖嘴與器內(nèi)壁相接觸片刻，流出溶液的體積即等于吸管的標(biāo)準(zhǔn)容量；吹出式吸管，管上標(biāo)有“吹”字樣，殘留在尖嘴內(nèi)的溶液，最后應(yīng)當(dāng)吹出；不完全流出式吸管，其刻度自上而下排列。使用時(shí)溶液流到最下標(biāo)線即應(yīng)該停止，流出溶液的體積即為吸管的標(biāo)準(zhǔn)。（1）首先選擇與所要量取溶液容量相近的移液管(注：移液管規(guī)格要稍大于或等于所要量取的容量)。另外，在加同種試劑于不同試管中、且所取量不同時(shí)，應(yīng)選擇一支與最大取液量接近的刻度吸管。注意觀察移液管刻度數(shù)字的排布。使用時(shí)，洗凈的移液管要用被吸取的溶液洗滌3次，以除去管內(nèi)殘留的水分?？傻股僭S溶液于一干凈而干燥的小燒杯中，用移液管吸取少量溶液，將移液管橫臥轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液流過(guò)管內(nèi)標(biāo)線下所有的內(nèi)壁，然后使管直立將溶液由尖嘴口放出。（2）使用移液管時(shí)，一般左手拿洗耳球，右手拇指及中指拿住移液管或吸管的上端標(biāo)線以上部位，使管下端伸入液面約lcm。不應(yīng)伸入太深，以免外壁沾有過(guò)多液體；也不應(yīng)伸入太淺，以免液面下降時(shí)吸入空氣。這時(shí)，左手用洗耳球輕輕吸上液體，眼睛注意移液管中液面上升情況，移液管或吸管則隨容器中液體的液面下降而下降，以便保持尖嘴在液面下約lcm。當(dāng)液體上升到刻度標(biāo)線以上時(shí)，迅速用右手食指壓緊管口。（3）放下吸耳球，將移液管從液體內(nèi)取出，靠在盛溶液的容器壁上，然后稍微放松食指，同時(shí)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)移液管(或吸管)，使標(biāo)線以上的液體流回去。當(dāng)液面的彎月形最低點(diǎn)與標(biāo)線相切時(shí)，就按緊管口，使液體不再流出。（4）取出移液管移入準(zhǔn)備接受液體的容器中，使其出口尖端接觸器內(nèi)壁，讓接受容器傾斜而移液管保持直立。松開(kāi)食指，使液體自然地順壁流下。（5）待液體全部流盡后約等15 秒，取出移液管。移液管尖部位仍留有少量溶液，除特別注明“吹”字的以外，其他移液管尖部位留存的溶液不能吹入接受容器中。2容量瓶容量瓶又稱為量瓶，屬于精密量器，帶有玻璃磨口塞或塑料塞。頸上有環(huán)形標(biāo)線，表示在所指溫度（一般為20）下，當(dāng)液體充滿到標(biāo)線時(shí)凹面液體體積與瓶上所注明的體積相等。容量瓶主要用來(lái)配制一定體積和一定濃度的溶液，常用的為5ml、10ml、50ml、100ml、500ml、1000ml等不同規(guī)格。容量瓶在洗滌前應(yīng)先檢查其密合性。瓶中加入自來(lái)水，蓋好瓶塞，左手按住塞子，右手把持住瓶底邊緣，把瓶子倒立片刻，觀察瓶塞有無(wú)漏水現(xiàn)象。如果不漏，將瓶直立，瓶塞轉(zhuǎn)動(dòng)約180后，再倒過(guò)來(lái)試一次。容量瓶應(yīng)用根細(xì)繩把塞子系在瓶頸上，以避免打破塞子。在配制溶液前，應(yīng)先把稱好的固體溶質(zhì)在燒杯中溶解，然后再把溶液沿著玻璃棒從燒杯中轉(zhuǎn)移到容量瓶中。用蒸餾水洗滌燒杯23次，把洗滌液也轉(zhuǎn)移入容量瓶中，以保證溶質(zhì)全部轉(zhuǎn)移。緩慢地加入蒸餾水，加到接近標(biāo)線1cm處。等1-2 min，使附在瓶上的水流下。然后用滴管加水，直至溶液的彎月面與標(biāo)線相切為止。加水時(shí)，視線平視標(biāo)線。水充滿到標(biāo)線