鎘對(duì)小鼠腎臟急性損害作用的評(píng)價(jià)

鎘對(duì)小鼠肝臟急性損害作用的評(píng)價(jià)福建醫(yī)科大學(xué)12級(jí)預(yù)防醫(yī)學(xué) 梁好前言：日本神通川上游的神崗礦山在采礦過(guò)程中及堆積的礦渣中產(chǎn)生含有鎘等重金屬的廢水，在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)直接流入神通川上游的高原川，使得鎘等重金屬在水田土壤、河流底泥中產(chǎn)生沉積。土壤中的鎘質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高達(dá)4.8510-6，平均達(dá)到1.1210-6，糙米中的鎘質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均為0.9910-6。 鎘沉淀造成一種以婦女為主的奇怪的地方病，患者感到全身各部位劇烈疼痛，嚴(yán)重者自己稍一活動(dòng)身體，就會(huì)造成全身骨折。1972年，地方法院裁定該病的病因是鎘，其來(lái)源主要是神崗礦山排放的廢物和廢水，責(zé)成神崗礦山對(duì)患者進(jìn)行補(bǔ)償。至1991年3月底為止，共確認(rèn)患者129人（其中死亡116人）。同時(shí)也造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。一、實(shí)驗(yàn)的目的和意義：1、掌握急性中毒的定義及應(yīng)用，練習(xí)經(jīng)口染毒的方法及眼眶后取血。2、應(yīng)用7220型分光光度計(jì)探究鎘在小鼠肝臟蓄積情況及小鼠血液指標(biāo)變化情況。3、進(jìn)一步了解鎘在肝臟中的蓄積情況以及對(duì)肝臟的損害作用，學(xué)習(xí)自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理鎘是一種重金屬，鎘可經(jīng)過(guò)消化道攝入機(jī)體，影響肝臟功能，肝臟是體內(nèi)貯存鎘的主要器官之一我們現(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)通過(guò)選擇以小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究鎘在小鼠肝臟的蓄積作用及損害作用，通過(guò)研究鎘對(duì)小鼠損害作用、對(duì)肝臟組織的毒作用機(jī)理的探討、對(duì)肝生化指標(biāo)的改變情況檢測(cè)等，另外通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠大體解剖、病理組織學(xué)檢查、染毒后觀察中毒的發(fā)生發(fā)展過(guò)程的規(guī)律，中毒特點(diǎn)、體重變化等，從而對(duì)鎘肝臟的蓄積情況和對(duì)其他內(nèi)臟的毒性損害作用作出評(píng)價(jià)。肝臟是產(chǎn)生血清磷酸酶（AKP）的主要器官，和膽紅素一樣，血清磷酸酶經(jīng)肝臟從膽汁中排出。在膽管梗阻、肝細(xì)胞損害、膽管上皮再生和癌變等情況下，肝細(xì)胞過(guò)度產(chǎn)生AKP，經(jīng)淋巴道和肝竇返流入血液。當(dāng)肝臟受到損傷或者障礙時(shí)經(jīng)淋巴道和肝竇進(jìn)入血液，同時(shí)由于肝內(nèi)膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清堿性磷酸酶明顯升高。通過(guò)檢測(cè)血液AKP含量來(lái)評(píng)價(jià)鎘對(duì)小鼠肝臟毒性作用。三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器1、動(dòng)物：健康成年小鼠50只，體重1825g，雌雄各一半；2、試劑和儀器：毛細(xì)管、移液槍、7220型分光光度計(jì)、剪刀、鑷子、玻片、離心機(jī)、電子稱、灌胃針 0.15、025 、0.35、0.45gL CdCl2溶液，水溶液。四、實(shí)驗(yàn)方法1、選擇健康動(dòng)物和性別鑒定：生殖孔與肛門(mén)距離小者為雌性，大者為雄性。2、稱重編號(hào)及分組：選擇體重1825g的50只小鼠隨機(jī)分為5組（A、B、C、D、E），每組10只、雌雄各5只。3、受試化合物的配制（查閱資料后估計(jì)實(shí)驗(yàn)用鎘濃度，已配制好）：0.15、025 、0.35、0.45gL CdCl2。4、染毒劑量：給5個(gè)小組的其中A、B、C、D、E組小鼠分別進(jìn)行受試化合物灌胃劑量均為3ml。 A1、 3ml 生理鹽水 B1、 3ml 0.15gL CdCl2溶液 C1、 3ml 0.25gL CdCl2溶液 D1、 3ml 0.35gL CdCl2溶液 E1、 3ml 0.45gL CdCl2溶液 5、進(jìn)行灌胃操作：將已經(jīng)隔夜禁食，不限制飲水，的小鼠進(jìn)行灌胃，然后對(duì)各組動(dòng)物用經(jīng)口灌胃法進(jìn)行3次染毒，分早（8-9點(diǎn)），中（13-14點(diǎn)），晚（18-19點(diǎn)）時(shí)間染毒。染毒后繼續(xù)禁食34h，2-3小時(shí)才能喂食，直至24小時(shí)后。灌胃方法：左手拇指和食指捏住小鼠頭部?jī)啥笃つw，無(wú)名指或小指將尾部緊壓在手上，使小鼠腹部向上，盡量使其體位垂直，注意使動(dòng)物的上消化道固定成一直線。右手持連著灌胃針的注射器，將灌胃針由動(dòng)物口腔側(cè)插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑入食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動(dòng)探索，一旦感覺(jué)阻力消失，即深入至胃部，隨后將受試物溶液注入。如遇動(dòng)物掙扎，應(yīng)停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?，千萬(wàn)不能強(qiáng)行插入，以免穿破食管，甚至誤入氣管，導(dǎo)致動(dòng)物立即死亡。一般進(jìn)針深度小鼠2.54cm，大鼠或豚鼠46cm。五、結(jié)果與計(jì)算1、染毒后觀察中毒的發(fā)生發(fā)展過(guò)程的規(guī)律，中毒特點(diǎn)等。做好實(shí)驗(yàn)記錄，對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行大體病理學(xué)觀察，存活動(dòng)物進(jìn)行大體解刨學(xué)觀察，肉眼觀察到病變是做病理學(xué)觀察；小鼠的皮膚、毛發(fā)、眼、黏膜、神經(jīng)系統(tǒng)（特別觀察有無(wú)震顫、驚厥、流衍、腹瀉、呆滯、嗜睡等）有何異常。2、對(duì)小鼠進(jìn)行眼眶后取血，利用分光光度法在520nm波長(zhǎng)測(cè)定小鼠血液AKP含量。3、再次稱量小鼠的體重，并與染毒之前的小鼠體重比較。4、計(jì)算死亡小鼠數(shù)量，對(duì)死亡小鼠進(jìn)行大體解刨，有必要時(shí)進(jìn)行病理學(xué)檢查。5、頸椎脫臼法處死未死亡的小鼠，并進(jìn)行大體解剖，有必要時(shí)進(jìn)行病理學(xué)檢查。6、預(yù)期實(shí)驗(yàn)效果：小鼠體重減輕，隨給毒劑量增多體重減輕越多，血液AKP含量隨給毒劑量增多而增多，解剖觀察到肝淤血程度隨劑量增多而增多，可能伴隨其他臟器損害等。7、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：結(jié)果采用方差分析的方法比較各不同染毒劑量小鼠APK含量，并與對(duì)照組AKP含量進(jìn)行比較。 Dunnett-t檢驗(yàn)適用于多個(gè)實(shí)驗(yàn)組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)的比較，步驟如下(檢驗(yàn)時(shí)對(duì)照組為給生理鹽水組)：（1）建立檢驗(yàn)假設(shè)，確定檢驗(yàn)水準(zhǔn)H0：T=C,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組總體均數(shù)相等H1：TC,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組總體均數(shù)不等=0.05(2)計(jì)算檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量 q1 。(3)確定P值，作出推斷 按照預(yù)計(jì)，結(jié)果為給予不同含量鎘的實(shí)驗(yàn)組血液AKP含量與對(duì)照組不同，且大于對(duì)照組，隨給毒劑量增多AKP含量增多。注方積乾衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)第5版北京：人民衛(wèi)生出版社，2003，136137六、評(píng)價(jià)與討論 依據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀、死亡時(shí)間、每組死亡