腸桿菌科鑒定(全)PPT課件.ppt

腸桿菌科 1 一 分布9版伯杰鑒定細(xì)菌手冊(cè)分為24個(gè)屬 108個(gè)種現(xiàn)增加到31個(gè)屬 常見的15個(gè)屬1 占臨床分離菌總數(shù)50 2 占G 桿菌總數(shù)80 3 占敗血癥50 4 占尿路感染70 2 二 臨床意義 有些菌屬對(duì)人類有明顯的致病作用1 鼠疫耶耳森菌 引起烈性傳染病2 埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 耶耳森菌屬可導(dǎo)致腹瀉 食物中毒 傷寒有些菌屬與醫(yī)院感染有關(guān)1 肺炎2 腦膜炎3 菌血癥4 各種部位的感染多數(shù)菌屬是腸道正常菌群 也是條件致病菌 3 與人類感染有關(guān)的腸桿菌科細(xì)菌有31個(gè)菌屬 其中臨床標(biāo)本中常見的菌屬有15種克雷伯菌屬愛德華菌屬鄰單胞菌屬變形桿菌屬普羅威登斯菌屬沙門菌屬耶爾森菌屬志賀菌屬沙雷菌屬腸桿菌屬埃希菌屬哈夫尼亞菌屬枸櫞酸桿菌屬摩根菌屬多源菌屬 4 三 微生物特性 1 G 桿菌 多數(shù)有鞭毛 菌毛2 發(fā)酵葡萄糖 兼性厭氧3 氧化酶陰性4 還原硝酸鹽為亞硝酸鹽5 觸酶 6 營(yíng)養(yǎng)條件不高 5 拉絲試驗(yàn) 涂片 G b 氧化酶試驗(yàn) 非發(fā)酵菌 弧菌 腸桿菌科細(xì)菌 不動(dòng) 嗜麥芽菌 雙糖試驗(yàn) F O 不動(dòng) 嗜麥芽 腸桿菌科細(xì)菌 苯丙 葡鹽 枸 硝 賴 鳥 氨對(duì) 山 肌 側(cè) 吲哚 硝酸鹽還原 嗜麥芽 不動(dòng) 四 鑒定流程圖 6 種屬鑒定 科的特征 硝酸鹽還原 葡萄糖發(fā)酵 氧化酶 觸酶 屬間鑒定特征 屬內(nèi)種間鑒定特征 血清學(xué)分型 報(bào)告細(xì)菌種名 報(bào)告細(xì)菌血清型 概述 分子生物學(xué)鑒定 7 五 腸桿菌科的初步分群 可用苯丙氨酸和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)將腸桿菌科分為四大組 8 菌屬名苯丙氨酸葡萄糖酸鹽變形桿菌屬 普魯維登斯菌屬 摩根氏菌屬 塔特姆菌屬 克雷伯菌屬 腸桿菌屬 多源菌屬 沙雷菌屬 西地西菌屬 哈夫尼亞菌 埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 枸櫞酸桿菌屬 愛德華菌屬 耶爾森菌屬 克盧瓦菌屬 蘭恩氏菌屬 9 六 苯丙氨酸陽(yáng)性組的各屬鑒別 試驗(yàn)變形桿菌屬普魯維登菌屬摩根氏菌屬塔特姆屬H2S 枸櫞酸鹽 靛基質(zhì) 10 1 變形桿菌屬內(nèi)各種的鑒別 試驗(yàn)普通變形桿菌奇異變形桿菌潘氏變形桿菌產(chǎn)粘液變形桿菌靛基質(zhì) 鳥基酸 木糖 11 2 普魯維登菌屬各種的鑒別 試驗(yàn)產(chǎn)堿斯圖雷極普魯維登斯菌普魯維登斯菌普魯維登斯菌側(cè)金盞花醇 甘露醇 12 生化反應(yīng)雷氏斯氏產(chǎn)堿拉氏海氏吲哚產(chǎn)生 肌醇 V海藻糖 戊五醇 13 3 摩根菌屬種的鑒定 試驗(yàn)?zāi)ΩΩΩ?生物1群 賴氨酸 動(dòng)力 14 4 塔特姆菌屬的鑒定 苯丙氨酸H2S枸櫞酸鹽鳥氨酸靛基質(zhì) 15 苯丙氨酸陽(yáng)性組菌屬鑒別索引圖 5 16 七 葡萄糖酸鹽陽(yáng)性組各屬鑒別 17 原克雷伯菌屬 klebsiella 有5個(gè)種 2個(gè)亞種肺炎克雷伯菌 K pneumoniae 產(chǎn)酸克雷伯菌 K oxytoca 解鳥氨酸克雷伯菌 K ornithinolytica 植生克雷伯菌 K planticola 土生克雷伯菌 K terrigena 分類 克雷伯菌屬 臭鼻亞種鼻硬結(jié)亞種 解鳥氨酸柔特勒菌 R ornithinolytica 植生柔特勒菌 R planticola 土生柔特勒菌 R terrigena 柔特勒菌屬 Raoultella Thisproposalisbaseon16SrDNAandrpoBgenesequencingandcarbonassimilationstudies 18 培養(yǎng)特征 血瓊脂上菌落較大 呈黏液狀 以接種環(huán)挑取時(shí)易拉成絲在腸道培養(yǎng)基上呈發(fā)酵乳糖小菌落在液體培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)混濁 濃厚 可見菌膜 管底有粘性沉淀物 K pneumoniae菌落 血平板 克雷伯菌屬 19 1 克雷伯菌屬各種的鑒別 20 克雷伯菌和柔特勒菌種間鑒定表 克雷伯菌屬 21 S marcescens菌落特征 普通營(yíng)養(yǎng)平板 沙雷菌屬 22 S marcescens菌落特征 普通營(yíng)養(yǎng)平板 沙雷菌屬 23 2 沙雷菌屬各種的鑒別 24 分類 現(xiàn)有13個(gè)種2個(gè)生物型 原有7個(gè)種2個(gè)生物型產(chǎn)氣腸桿菌 E aerogenes 陰溝腸桿菌 E cloacae 杰高維腸桿菌坂崎腸桿菌泰洛腸桿菌中間腸桿菌聚團(tuán)腸桿菌河生腸桿菌生物群1 河生腸桿菌生物群2后增加7個(gè)菌阿氏腸桿菌何氏腸桿菌溶解腸桿菌超壓腸桿菌克沃尼腸桿菌考伯腸桿菌帕瑞勒腸桿菌 腸桿菌屬 25 3 腸桿菌屬各種的鑒別 本菌屬的細(xì)菌生化反應(yīng)不典型 常用的商品化鑒定系統(tǒng)很難達(dá)到90 以上的鑒定正確率 26 腸桿菌屬種間鑒定表 腸桿菌屬 27 4 哈夫尼亞菌屬鑒定 葡萄糖酸鹽枸櫞酸鹽棉子糖 5 多源菌屬種的鑒定試驗(yàn)聚團(tuán)多源菌彌散多源菌賴氨酸 鳥氨酸 水揚(yáng)苷 28 5 葡萄糖酸鹽陽(yáng)性菌屬鑒別雙岐索引圖 29 八 苯丙氨酸葡萄糖酸鹽陰性組的各屬鑒別 30 枸櫞酸桿菌屬 分類 枸櫞酸桿菌屬 Citrobacter 包括11個(gè)種 弗勞地枸櫞酸桿菌 C freundii 差異枸櫞酸桿菌 C diversus 庫(kù)斯枸櫞酸桿菌無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌 C amalonaticus C koseri 布拉吉枸櫞酸桿菌 C braakii 雷登枸櫞酸桿菌 C rodentium 塞拉克枸櫞酸桿菌 C sedlakii 魏克曼枸櫞酸桿菌 C werkmanii 揚(yáng)哥枸櫞酸桿菌 C youngae 吉樂枸櫞酸桿菌 C gillenii 穆利枸櫞酸桿菌 C murliniae 法瑪麗枸櫞酸桿菌 C farmeri 31 1 枸櫞酸桿菌屬各種的鑒別 注意 很多鑒定系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫(kù)中不包括枸櫞酸桿菌屬新種名稱和分類資料 32 枸櫞酸桿菌種間鑒定表 枸櫞酸桿菌屬 33 2 愛德華菌屬各種的鑒別 34 3 埃希菌屬種的鑒別 35 致瀉性E coli分為5類 腸毒素型大腸埃希菌 ETEC 腸致病性大腸埃希菌 EPEC 腸侵襲型大腸埃希菌 EIEC 腸出血型大腸埃希菌 EHEC 腸凝聚型大腸埃希菌 EAggEC 埃希菌屬 臨床意義 ClinicalSignificance E coli以腸道外感染多見 主要有泌尿系統(tǒng)感染 E coli中的致病菌株能引起各種類型的腹瀉 根據(jù)其不同的血清型別 毒力和臨床癥狀 36 鑒定要點(diǎn) 不活躍大腸埃希菌與志賀菌易混淆 需相互鑒別 埃希菌屬 大腸埃希菌在中國(guó)蘭平板上為藍(lán)色菌落大腸埃希菌在伊紅美藍(lán)平板上為紫黑色菌落大腸埃希菌在麥康凱和SS平板上為紅色菌落 37 38 39 培養(yǎng)特征 兼性厭氧菌營(yíng)養(yǎng)要求不高菌落呈中等大小 無色 半透明 光滑在SS平板上 因產(chǎn)生H2S可形成黑色中心的菌落 傷寒沙門菌菌落形態(tài) SS平板 四沙門菌屬 40 常用血清 O多價(jià)血清 含A F群 O H Vi抗原因子血清方法 從臨床標(biāo)本中分離到菌株經(jīng)純培養(yǎng)后 符合沙門菌屬生物學(xué)特性 則采用A F多價(jià)血清初步確定是否為Salmonella1 如陽(yáng)性 即用O因子血清分群 再用第一相H因子血清定型 也可用第二相輔助定型2 如陰性 應(yīng)考慮是否有Vi抗原 血清學(xué)分型 加熱或傳代 去除Vi抗原 凝集 做O多價(jià)和單價(jià)凝集 不凝集 可能為A F以外 沙門菌屬 41 42 如是雙相菌 進(jìn)一步用復(fù)合血清1 2 5檢查第2相抗原 43 兼性厭氧菌營(yíng)養(yǎng)要求不高普通平板 中等大小 半透明 光滑鑒別培養(yǎng)基 乳糖不發(fā)酵的菌落 培養(yǎng)特性 菌落形態(tài) 麥康凱平板 志賀菌屬 44 種屬鑒定 菌屬特征發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣賴氨酸 H2S 尿素 動(dòng)力 志賀菌屬 45 5 志賀菌屬的鑒定 先用志賀多價(jià)血清與菌種凝集 如多價(jià)血清凝集為志賀菌 多價(jià)里不包含鮑氏C16 20再進(jìn)一步用因子血清凝集而定群 46 6 耶爾森菌屬各種的鑒別 47 48 7 苯丙氨酸 葡萄糖酸鹽陰性組菌屬鑒別雙歧索引圖 49 50 腸桿菌鑒定選用多少生化反應(yīng)管為好 苯丙氨酸 葡萄糖酸鹽 賴氨酸 鳥氨酸 氨基酸對(duì)照 枸櫞酸鹽 硝酸鹽 側(cè)金盞花醇 山梨醇 甘露醇 ONPG 靛基質(zhì) 雙糖 H2S 51 九 蘭恩氏菌屬的鑒定 52 十 西地西菌屬各種的鑒別 53 十一 克盧瓦菌屬各種的鑒別 54 十二 API鑒定系統(tǒng) 20E 菌液制成0 5麥?zhǔn)蠞岫?加入20E板條 55 56 火一樣的熱情浪一樣的沖勁 57 十三腸桿菌科某些菌株的特殊性質(zhì) 58 1 變形桿菌菌落呈遷延性生長(zhǎng) 59 2 克雷伯菌自身菌落可拉出絲來 60 3 多源聚團(tuán)菌在M H平板上產(chǎn)生黃色 61 4 沙雷菌M H平板上產(chǎn)生鐵銹紅色 62 63 6 菌落溶血的大腸桿菌 64 7 能產(chǎn)生H2S的菌株 變形桿菌愛德華菌傷寒沙門菌費(fèi)勞地枸櫞酸桿菌大腸桿菌 65 8 如是大腸桿菌 就應(yīng)該是賴氨酸陽(yáng)性枸櫞酸陰性靛基質(zhì)陽(yáng)性側(cè)金花醇陰性 66 9 如是二類菌 95 枸櫞酸試驗(yàn)陽(yáng)性靛基質(zhì)陰性 67 10 超廣譜 內(nèi)酰胺酶 ESBLS 1983年世界首例報(bào)道 最初在肺炎克雷伯菌中檢出 長(zhǎng)期大量使用第三代頭孢菌素后產(chǎn)生此酶 由 內(nèi)酰胺酶突變 CTM SHV 而來 可通過質(zhì)粒傳導(dǎo) 主要由大腸桿菌和克雷伯菌屬產(chǎn)生 68 ESBL的篩選與確證試驗(yàn) 69 70 鄰單胞菌屬 Plesiomonas 只有一個(gè)菌種 即類志賀鄰單胞菌 P shigelloides 該菌屬以前歸屬于弧菌科 后根據(jù)基因特征認(rèn)為與腸桿菌科細(xì)菌有更密切的關(guān)系 而歸屬于腸桿菌科 鄰單胞菌屬 分類 71 與氣單胞菌屬 弧菌屬鑒別 鄰單胞菌屬 72 73 十四 大腸桿菌的特點(diǎn) 1 侵襲力K抗原菌毛2 腸毒素LT引起腹瀉ST 74 大腸桿菌的特點(diǎn) 引起腹瀉的五類菌 腸毒素型大腸埃希菌 ETEC 旅行者腹瀉 水樣便腸致病性大腸埃希菌 EPEC 嬰兒腹瀉 水瀉粘液便腸侵襲性型大腸埃希菌 EIEC 類似菌痢 膿血粘液便腸出血型大腸埃希菌 EHEC 水源食源性污染 血便 典型的是O157 H7 引起溶血性尿毒綜合癥腸凝聚型大腸埃希菌 EaggEC 慢性腹瀉 水樣便 無LT和ST 75 大腸桿菌的特點(diǎn) 對(duì)多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣 吲哚 甲基紅 VP 枸櫞酸鹽 IMVC 五種致病性大腸桿菌要用特異性血清凝集加以鑒別 76 十五 沙門菌屬的特點(diǎn) 所有動(dòng)物可分離到沙門菌 有2000多血清可引起人類胃腸炎 敗血癥 傷寒 77 沙門菌屬的特點(diǎn) 傷寒菌口小腸淋巴結(jié)血液 肝脾骨髓 膽囊腸腔Ag Ab 排出體外 78 S R變異 菌落光滑 粗糙H O變異 失去鞭毛位相變異 H抗原雙相 一相V W變異 失去Vi抗原 沙門菌屬的特點(diǎn) 79 沙門菌屬的特點(diǎn) 伊紅美蘭 EMB 平板 菌落無色不透明麥康凱 MAC 平板 菌落無色透明SS平板 菌落無色不透明孔雀綠平板 強(qiáng)選擇培養(yǎng)基 80 沙門菌屬的特點(diǎn) 肥達(dá)反應(yīng) 81 十六 志賀菌屬的特點(diǎn) 急性菌痢 發(fā)燒 腹痛 膿血便 痢疾志賀菌引起的菌痢死亡率高達(dá)20 慢性菌痢 反復(fù)發(fā)作二個(gè)月 82 志賀菌屬與大腸埃希菌區(qū)別 動(dòng)力陰性 賴氨酸陰性 分解葡萄糖不分解乳糖志賀菌屬與傷寒沙門菌區(qū)別 動(dòng)力陰性H2S陰性 能于志賀菌因子血清凝集 志賀菌屬的特點(diǎn) 83 本章重點(diǎn) 1 超廣譜 內(nèi)酰胺酶 ESBLs 2 能產(chǎn)生硫化氫的菌有哪些3 常引起人類腹瀉的菌有哪些4 疑為沙門菌 但其與OAF多價(jià)血清不凝如何處理5 腸桿菌科致病力最強(qiáng)的是哪株菌6 在致腹瀉性腸道桿菌中 死亡率最高的是哪種菌7 傷寒為什么在初愈時(shí)會(huì)出現(xiàn)腸穿孔大出血8 G B OX 苯丙 葡鹽 側(cè)盞金花醇 賴氨酸 鳥氨酸 山梨醇 靛基質(zhì) 藥敏試驗(yàn)結(jié)果為 亞胺培南敏感 慶大霉素敏感 頭孢唑啉耐藥 氨曲南耐藥 頭