菌落總數(shù)大腸菌群檢驗(yàn)范例.doc

餅干中菌落總數(shù)與大腸菌群的測(cè)定GB/T4789.24 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 糖果，糕點(diǎn)，蜜餞檢驗(yàn)項(xiàng)目 指標(biāo)非夾心餅干 夾心餅干菌落總數(shù)/(cfu/g) 750 2000大腸菌群(MPN/100g) 30霉菌計(jì)數(shù)/(cfu/g) 50致病菌(沙門氏菌，志賀氏菌，金黃色葡萄球菌)不得檢出 一、檢測(cè)對(duì)象 散裝餅干，小包裝餅干二.儀器用具1儀器高壓蒸汽滅菌鍋、電熱干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱（361）、冰箱（2-5 ）、電子天平、電爐等。2用具無(wú)菌吸量管（1mL）、放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器、pH計(jì)或精密pH試紙、滅菌試管平皿(直徑9cm)、刻度吸管、采樣瓶、小倒管等。三食品的采樣方法采樣應(yīng)遵循無(wú)菌操作程序，采樣工具和容器應(yīng)無(wú)菌、干燥、防漏，形狀及大小適宜。1.即食類預(yù)包裝食品取相同批次的最小零售原包裝，檢驗(yàn)前要保持包裝的完整，避免污染。2. 散裝食品或現(xiàn)場(chǎng)制作食品根據(jù)不同食品的種類和狀態(tài)及相應(yīng)檢驗(yàn)方法中規(guī)定的檢驗(yàn)單位，用無(wú)菌采樣器現(xiàn)場(chǎng)采集5倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品，放入無(wú)菌采樣容器內(nèi), 采樣總量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求。3. 采集樣品的標(biāo)記應(yīng)對(duì)采集的樣品進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的記錄和標(biāo)記，采樣人應(yīng)清晰填寫采樣單（包括采樣人、采樣地點(diǎn)、時(shí)間、樣品名稱、來(lái)源、批號(hào)、數(shù)量、保存條件等信息）。4.5 采集樣品的貯存和運(yùn)輸采樣后，應(yīng)將樣品在接近原有貯存溫度條件下盡快送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。運(yùn)輸時(shí)應(yīng)保持樣品完整。如不能及時(shí)運(yùn)送，應(yīng)在接近原有貯存溫度條件下貯存。四菌落總數(shù)的測(cè)定1.菌落總數(shù)aerobic plate count：食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。2. GB 4789.22010 菌落總數(shù)測(cè)定流程檢樣25 g(mL)樣品+225 mL稀釋液，均質(zhì) 10 倍系列稀釋 選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取1 mL 分別加入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿中加入15 mL20 mL平板計(jì)數(shù)瓊脂，混勻36 1 ，48 h 2 h培養(yǎng)，計(jì)數(shù)各平板菌落數(shù) 報(bào)告2.菌落計(jì)算公式有兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)在合適范圍，按照如下公式計(jì)算：N = C / n1 + (0.1n2) (d)N = 樣品中菌落數(shù)C =平板菌落數(shù)之和n1 = 含合適范圍菌落數(shù)的第一稀釋度（低）平板數(shù)n2 =含合適范圍菌落數(shù)的第二稀釋度（高）平板數(shù)d = 第一稀釋度（低）3. 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基成分A胰蛋白胨 5.0gB 酵母浸膏 2.5 gC 葡萄糖 1.0 gD 瓊脂 15.0 gE 蒸餾水 1000 mLpH 7.0 +/- 0.2制法 將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH.分裝試管或錐形瓶，經(jīng)121高壓滅菌15min. 五大腸菌群的測(cè)定1.GB 4789.32010大腸菌群計(jì)數(shù)a.檢樣25 g+225 mL稀釋液b.適當(dāng)十倍稀釋樣品c.選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯（每管9 mL LST肉湯并加有導(dǎo)管），每管接種1 mLd.36 ，24 2 h 48 2 he.沒(méi)有產(chǎn)氣管有產(chǎn)氣管,報(bào)告陰性有產(chǎn)氣管,接種BGLB肉湯管,36 ，48 2h,查MPN表報(bào)告結(jié)果（大腸菌群）. 有產(chǎn)氣管,接種EC肉湯,44.50.5 （水浴培養(yǎng)）,24 2 h 48 2 h.產(chǎn)氣管接種EMB平板（36、1824 h）.從EMB平板上挑取5個(gè)可疑菌轉(zhuǎn)接到PCA斜面，進(jìn)行革蘭氏染色、IMVC生化鑒定、接種LST復(fù)檢產(chǎn)氣,查MPN表報(bào)告結(jié)果（大腸桿菌）2培養(yǎng)基 .LST成份 胰蛋白胨或 胰酪胨 20.0 g 乳糖 5.0 g 氯化鈉 5 .0g磷酸氫二鉀 2.75g磷酸二氫鉀 2.75g月桂基硫酸鈉 0.1g 蒸餾水 1000 mLpH 6.8 +/- 0.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH.分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10mL。121高壓滅菌15min. 、BGLB成份蛋白胨 10.0 g 乳糖 10.0 g牛膽粉溶液 200ml0.1%煌綠水溶液 13.3 ml蒸餾水 800 mLpH 7.2 +/- 0.1制法將蛋白胨 , 乳糖 溶解于500ml蒸餾水中，加入牛膽粉溶液200ml，用蒸餾水稀釋到975ml,調(diào)節(jié)pH,再加入0.1%煌綠水溶液13.3 ml，用蒸餾水補(bǔ)足到1000ml,用棉花過(guò)濾后，分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10mL。121高壓滅菌15min. .EC肉湯成份胰蛋白胨 20.0 g3號(hào)膽鹽（或混合膽鹽） 1.5g 乳糖 5 g磷酸氫二鉀 4g磷酸二氫鉀 1.5g氯化鈉 5 .0g蒸餾水 1000 mLpH 6.9 +/- 0.2制法將上述成分混合，溶解于蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH.分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10mL。121高壓滅菌15min. 六霉菌和酵母計(jì)數(shù)1.設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱：2 5 ，恒溫培養(yǎng)箱：281 ， 均質(zhì)器(不能旋轉(zhuǎn)刀)， 恒溫振蕩器， 顯微鏡：10100， 電子天平：感量0.1 g，無(wú)菌錐形瓶:容量500mL、250 mL， 無(wú)菌廣口瓶：500 mL， 無(wú)菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10mL(具0.1 mL 刻度)， 無(wú)菌平皿：直徑90mm， 無(wú)菌試管: 10 mm75 mm， 無(wú)菌牛皮紙袋、塑料袋。2. 培養(yǎng)基和試劑馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A 中A.1。孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄A 中A.2。 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，附加抗菌素。孟加拉紅培養(yǎng)基。滅菌蒸餾水。3 操作步驟3.1 樣品的稀釋3.2 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL 樣品勻液于2 個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取1mL樣品稀釋液加入2 個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。3.3培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，28 1培養(yǎng)5 d，觀察并記錄。3.4 菌落計(jì)數(shù)肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colony form