（植物學(xué)專業(yè)論文）一品紅組織培養(yǎng)與植株再生初步研究.pdf

碩士學(xué)位論文 、l st e r st h ! s is 摘要 本文以一品紅( e u p h o r b i ap u i c h e r r i 冊(cè)w i l l d ) 為材料，以幼嫩莖、葉 片為外植體。以m s 為基本培養(yǎng)基附加不同濃度和比例的細(xì)胞生長素、細(xì)胞分 裂素，進(jìn)行了愈傷組織的誘導(dǎo)、芽的分化、根的分化、芽的增殖及芽苗生根及 以休眠芽為外植體快繁等的些基本規(guī)律進(jìn)行了研究；初步探討了固體培養(yǎng)條 件下不同光質(zhì)、不同糖及濃度對(duì)愈傷組織的形成、芽分化的影響，以期為一 品紅的快速繁殖提供一些基礎(chǔ)資料，為我國優(yōu)質(zhì)一品紅種苗的專業(yè)化生產(chǎn)提供 可能性。 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 不同種類、不同濃度的激素及其組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效果均不相同，愈 傷組織的質(zhì)量及再分化的能力也有較大的差別：不同的外植體在相同的生長 素、相同濃度下，愈傷組織的誘導(dǎo)率、質(zhì)量有明顯差異。本文根據(jù)實(shí)驗(yàn)得出： 以幼嫩莖段作為外植體，誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)，單因子以m s + n m 。l - i 組合因子 以m s + z t ?！? n a k 。為培養(yǎng)基效果最好；m s + 6 一ba 】。+ n a a 。一 。：。1 次之。誘導(dǎo)愈傷組織以葉片為外植體單因子以m s + n 地。1 組 合因子以m s + 6 一b a 。，。1 + n 地。“效果最好。在附加有n a a 、2 ，4 - d 、 i a a 的培養(yǎng)基中，愈傷組織疏松、濕潤、乳白色或白綠色、透明狀或半透明狀： 在附加有i b a 、k t 的培養(yǎng)基上，愈傷組織致密、干燥、白綠色、易褐化；在低 濃度( 小于1 0 m g l “) 的z t 培養(yǎng)基上愈傷組織疏松、濕潤、乳白色、容易 分化：在高濃度( 大于等于1 0m g l 1 ) 的z t 培養(yǎng)基上，愈傷組織致密、綠 色、瘤狀：在附加有6 一b a 的培養(yǎng)基上，最初切口處形成白色、致密、小晶體 狀的愈傷組織，隨后逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橹旅?、綠色、瘤狀的愈傷組織。 芽分化最佳培養(yǎng)基配方為m s + z t ，。1 + n a k 。1 和m s + z t 。 _ 1 效果最好；m s + 6 一b a 。d - 2 。_ 1 + n a k ，ms 。, l - i 效果次之。并且在m s + z t 、 m s + z t + n 從的培養(yǎng)基中培養(yǎng)過程中容易形成胚性細(xì)胞團(tuán)。開始時(shí)在愈傷組織表 面，長出許多淡黃色、小顆粒狀構(gòu)成的球形細(xì)胞團(tuán)、質(zhì)地較堅(jiān)硬，很容易從原 愈傷組織上脫離下來，生長迅速，容易分化成苗。 不同糖類及糖濃度對(duì)一品紅培養(yǎng)過程中愈傷組織的誘導(dǎo)率、愈傷組織的芽 分化率具有顯著影響；相比較而言，蔗糖效果比葡萄糖好，蔗糖的最適濃度范 碩士學(xué)位論文 、f s t e rst h e s is 圍為3 0 一4 0g l ，葡萄糖的最適范圍為3 0 一5 0g l - l ：同時(shí)還可知，高 濃度的蔗糖對(duì)愈傷組織的芽分化有明顯的抑制作用，高濃度的葡萄糖對(duì)愈傷組 織的芽分化的抑制作用不顯著。 根分化最佳培養(yǎng)基配方為m s + i b w o 。l - j + n a k s 。1 和幅+ n “。 。- - l 效果最佳；m s + i 從。1 效果次之。在m s + i b a + n 從培養(yǎng)上，形成 根數(shù)量多、白色、粗壯、多根毛、生長迅速，能產(chǎn)生次級(jí)根，但容易再愈傷組 織化；在m s + i 從培養(yǎng)基上分化出的根，乳黃色、直而細(xì)、根毛少、不愈傷組 織化。 芽的增殖培養(yǎng)基的最佳配方為m s + z t t 。1+ n a k 一。t 1 和m s + z t m 。t “+ 6 一b a 土。1 + n ?！靶Ч沃?。從芽的增殖培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)z t 與6 一b a 組 合在一起時(shí)，對(duì)于愈傷組織的形成、芽的分化均沒有顯著的促進(jìn)作用，這一點(diǎn) 與前人在仙客來、泡桐等組織培養(yǎng)中的應(yīng)用結(jié)果不太一致。在拈+ z t m 一“+ n a & 。1 培養(yǎng)基上芽的增殖培養(yǎng)過程中，形成的芽粗壯、葉片生長正常。 試管苗生根培養(yǎng)基為m s + i a a 。，惦+ n 從。；。l - 1 效果最好，m s + i b & 。1 + n 地；。1 效果次之。 以日光為對(duì)照，在紅、綠、藍(lán)、黃四種不同光質(zhì)條件下，愈傷組織的誘導(dǎo) 率均有所提高，紅光下愈傷組織誘導(dǎo)率最高。各種光質(zhì)對(duì)愈傷組織芽的分化均 沒有顯著的促進(jìn)作用，相比較而言，綠光比較有利。- 關(guān)鍵詞：一品紅；愈傷組織；植株再生 i i 碩士學(xué)位論文 ” s t e r st | e sjs a b s t r a c t t i l i sp a p e rr e p o r t e dt h er e s e a r c ho f e u p h o r b i ap u l c h e r r i m aw i l l du s e dy o u n g s t e r n aa n dy o u n gl e a v e sa se x p l a n t s t h em sm e d i aw a st h eb a s i cm e d i a , g i v e n d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o na n dr a t i oa u x i no r c y t o k i n i n s s t u d i e d c a l l u s i n d u c e ，e n d o s p e r md i f f e r e n t i a t i o na n dr e p r o d u c e ，r o o td i f f e r e n t i a t i o na n dy o u n gp l a n t r o o t a g e a i s os t u d i e dt h eb a s i cl a wo fr e p r o d u c t i o no fd o r m a n tb u d ：t h ee f r c c to f d i f f e r e n tl i g h tq u a l i t u ya n ds u c r o s ed i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n h o p et oo f f e rs o m et o 也ei n d u s t r i a l i z a t i o no f e u p h o r b i ap u l c h e r r i m aw d d i f f e r e n th o r m o n e d i f f c r e n tc o n c e n t r a t i o nc o u l di n d u c cd i f f e r e n tc a l l u s i f g i v e ns a m ef a c t o r s ，d i f f e r e n te x p l a n t sh a dd i f f e r e n tc a l l u sr a t i o i fy o u n ge n d o s p e r m w a su s e da se x p l a n t s ，t h em e d i am s + z t o 2 i 0 m gl q ( f o l l o wa si t ) + n a a 0 5 10w a s t h e b e s tm e d i a x h em e d i a m s + 6 - b a i o - 2 o + n a a o5 - 2 0s e c o n d e dt oi t i f y o u n gl e a v e sw a s u s e da se x p l a n t s ，t h em e d i a m s + 6 b a i 0 - 2o + n a 5 20w a st h eb e s tm e d i a 1 1 1 em e d i a m s + 6 一b a l0s e c o n d e dt oi t i ft h em e d i aw a sg i v e nn a a ，2 ，4 一d ，i a a ，c a l l u sw a s l o o s e ，m o i s t ，m i l kw h i t e o rw h i t e g r e e n ，t r a n s p a r e n to rs e m i - t r a n s p a r e n t i ft h em e d i a w a sg i v e ni b a ，k t , c a l l u sw a sd e n s i t y , d r y , w h i t e g r e e na n de a s yt ob r o w n c a l l u s c u l t u r e d i nl o w c o n c e n t r a t i o n ( 1 o m g l “1 t h em e d i am s + z t l 0 20 + n a i - 05w a st h eb e s tm e d i am e d i af o re n d o s p e r m d i f f e r e n t i a t i o n t h em e d i am s + 6 - b a t0 - 20 + n a a o1 - o5s e c o n d e dt oi t c a l l u sc u l t u r e d i nm e d i am s 十z t 村q aaw 觴e a s yt or e g e n e r a t ep a r t i c u l a t ee m b r y o n i cc a l l u s o nt h e s u f f i c eo f c a l l u s , t h e r ew a ss o m ec e l lg r o u p ，a n de a s yt or e g e n e r a t ep l a n t d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o ns u g a rh a dd i f f e r e n te f r e c tt oc a l i n s t h ee f f e c to fm e d i a 諏t hs u c r o s ew a sb e t t e rt h a nt h a tw i t hg l u c a n t h ec o n c e n t r a t i o no fs u c r o s ef r o m 3 0 - 4 0 9 l - 1w a ss u i t a b l et oc a l l u s ，t h ec o n c e n t r a t i o no fg l u c a nf r o m 3 0 5 0 9 l 1 w a s a l s os u i t a b l et oc a l l u s a tt h es a m et i m e , h i g hc o n c e n t r a t i o ns u g a ri n h i b i t e dc a l l u s i n d u c t i o n , b u th i g h c o n c e n t r a t i o ng t u c a nd i dn o ti n h i b i t e dc a l l u si n d u c t i o n t h ee f f e c to fm e d i am s + i b a o 2 i o + 1 q a a 0 - 1 05 w a sb e s tt o r o o t d i f f e r e n t i a t i o n ，a n dm e d i am s + l a 2 - 0 5s e c o n d e dt o i t m e d i aw a sg n e n i b a , n a a , t h er o o tw a sw h i t e ，m o r es t r o n g e ra n dg r e wm o r eq n i c k l y , h a dm o r er o o t r i p b u t i tw 砌dc o m eo u tc a l l u s a g a i n i f m e d i aw a s g i v e nl a a , r o o t w a s y e l l o w , s l i m ，l e s sr o o tr i pa n d c o u l d n o tc o m et oc a l l u sa g a i n t h eo p t i m u mm e d i af o r a m p l i f i c a t i o nw 蠲m s + z t l o 斗n a a 0i 1 1 1 em e d i a j i i 一一 碩士學(xué)位論丈 m s t e rst h e s 【s m s + z t lo + 6 - b a 2 o + n a a o1 s e c o n d e d t o i t , b u t t h em e d i am s + 6 b ac o u l d n o t p r o m o t ec a l l u si n d u c eo rd i f f e r e n t i o n e n d o s p e r mc u l t u r e di nm e d i am s + z t low a s s t r o n ga n d i t sl e a v e sw e r en o r m a l 1 1 1 e o p t i m u mm e d i af o rr o o tr e g e n e r m i o nw a sm s + i a a i o a n dt h em e d i a m s + i b a o 2 + n a a 05s e c o n d e dt oi t c o n t r a s t e dt os u n l i g h i , c a l l u s r a t i oi n r e d ，b l u e ，g r e e n a n dw h i t e l i g h t w a s h i g h e r , c a l l u sr a t i oi nr e dl i g h tw a 3t h eh i g h e s t l i g h tq u a l i t yh a dn oo b v i o u se f f e c t t oe n d o s p e r m d i f f e r e n t i a t i o n , b u tg r e c i ll i g h th a dal i t t l ee f f e c t k e yw o r d ：e u p h o r b i a p u l c h e r r i m a w i l l d ；c a l l u s ；p l a n tr e g e n e r a t i o n i 碩士學(xué)位論文 、i s t e rst h e s is 第一章前言 1 一品紅的分類地位及生活習(xí)性 一品紅( e u p h o r b i a p u l c h e r r i m a w i l l d ) 為大戟科大戟屬多年生灌木， 原產(chǎn)于墨西哥a z t e c s 地區(qū)。莖呈青綠色，光滑無毛，有分支，莖上部髓空， 革質(zhì)草本，下部黃褐色，有皺紋，已木質(zhì)化；上部枝葉，有乳白色的漿液；葉 單生，互生，卵圓形至披針形，葉脈明顯，葉柄紅紫色，葉全緣或淺波狀，有 淺裂，下部的葉較闊大，上部葉較窄：苞葉初為綠色，后轉(zhuǎn)紅似花瓣，這些變 態(tài)葉，十分顯眼，往往被誤以為花0 1 。因其葉片鮮紅之處，像猩紅血滴，所以 也叫“猩猩術(shù)”，因其鮮紅的葉片急尖似象牙，又叫“像牙紅”，又因紅色的時(shí) 間長久，故稱日：“萬年紅”還因紅色苞片里水平狀，著色期長，我國愛好者 又取名“水萍相逢”1 ，一品紅不但紅得鮮明，紅得象烈火，射出耀眼的紅顏 色，而且它傲視在萬花凋謝了的寒冬，顯示著它那大無畏的精神，所以倍受青 睞。 一品紅適于溫暖，陽光充足和肥沃濕潤的土壤中生活，不耐寒，在下霜之 前務(wù)必將花盆置于1 5 度以上溫度的溫室，否則葉片變黃，脫落：夏季忌強(qiáng)光 直射，不然葉片卷曲，發(fā)黃生長不良。在溫度適合時(shí)，營養(yǎng)生長季節(jié)需要光強(qiáng) 為4 0 0 0 至6 0 0 0 l u x ，光度降低對(duì)一品紅母株生長發(fā)育有極不良的影響，如葉片 較大，節(jié)間變長，其所繁殖的后代生育及開花都要受影響，會(huì)造成花朵發(fā)育不 整齊，延遲開花。光質(zhì)對(duì)一品紅開花和莖伸長也很重要；光周期決定植物是 維持營養(yǎng)狀態(tài)還是進(jìn)入生殖生長狀態(tài)。一品紅是典型的短日照植物，通常的自 然條件下日長1 2 小時(shí)2 0 分鐘是臨界點(diǎn)，日照長于該臨界點(diǎn)，一品紅就轉(zhuǎn)入生 殖生長，開始花芽分化“3 。 2 一品紅的栽培歷史 一品紅原產(chǎn)于墨西哥a z t e c s 地區(qū)，其花朵色澤鮮紅，被當(dāng)?shù)赜〉匕踩艘?為純潔的象征。十七世紀(jì)，法國圣芳濟(jì)教會(huì)的傳教士首先應(yīng)用一品紅作為慶祝 圣徒誕生游行的裝飾”1 ，而現(xiàn)在世界許多地區(qū)都把一品紅當(dāng)做圣誕節(jié)的應(yīng)節(jié) 花卉，所以又名圣誕花、圣誕紅。 一品紅在我國的栽培具有悠久的歷史，曾有許多文人墨客為她歌頌。清代， ：= 峨士哮i ? i 論文 、1 sre rsr he s is 梁?jiǎn)⒊谂_(tái)灣竹枝詞；吟“一品紅”中這樣寫到郎行贈(zèng)妾猩猩木，妾贈(zèng)郎 行蝴蝶蘭：猩紅血淚有時(shí)盡，蝶翅低垂那得干。1 ?，F(xiàn)代作家袁鷹說：“遠(yuǎn)看它猶 如萬綠叢中一點(diǎn)紅”，“近看時(shí)，紅樸樸的連成一片”，“使人感到分外新鮮、艷 麗。” 一品紅在我國南北都有栽培。在我國南方暖地及云南、西雙版納、閩、廣 地區(qū)，露地種植，地栽可達(dá)3 6 米，長得比屋檐還高，成為亭亭聳立的小喬 木。在長江兩岸卻長成一米左右的灌木，它的葉片在1 2 月上旬已開始轉(zhuǎn)紅。 北方不能在室外越冬。一品紅它不僅在南方可以供花壇、庭園、路邊、叢植、 帶植，在其它地區(qū)也可作盆栽觀賞，為冬季花卉缺少時(shí)的重要花卉。如以多數(shù) 盆花聚成花壇，則紅云映日，霞光凌空，成為壯麗景色。 3 一品紅的應(yīng)用價(jià)值 鮮花文明社會(huì)進(jìn)步與人民生活幸福、美好的象征。花卉業(yè)的興起是我 國經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展的重要標(biāo)志?，F(xiàn)在我國無論南北，城鎮(zhèn)花店的開設(shè)如雨后春 筍，人們探親訪友、看望病人，商店開張和有關(guān)重大活動(dòng)，以及平時(shí)裝點(diǎn)居室、 寫字樓、大廳等，花束、花籃、盆花、盆景和盆栽觀葉植物，己日益成為不可 缺少的種類。全球的花卉資源非常豐富，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全球植物約有3 5 萬 4 0 萬種例其中近t 6 具有觀賞價(jià)值。在這千姿百態(tài)的花卉資源中，一品紅 就是極具觀賞價(jià)值的一枝名珠。 自從十七世紀(jì)，一品紅被傳教士第一次作為庚祝圣徒誕生游行時(shí)的裝飾以 來，現(xiàn)在世界許多地區(qū)都把圣誕紅當(dāng)做圣誕節(jié)的應(yīng)節(jié)花卉。在歐洲每年約有 8 0 0 0 萬盆供應(yīng)市場(chǎng)，美國每年約上市5 0 0 0 萬盆，在日本每年也有5 0 0 萬盆的 銷售量”“。在我國，一品紅銷售季節(jié)可包括圣誕節(jié)、元旦、春節(jié)三大節(jié)日。在 廣州、北京、上海等大城市越來越多的商家在圣誕前一個(gè)月甚至更早就開始用 一品紅來裝點(diǎn)賓館、寫字樓等公共場(chǎng)所。一品紅可以從1 1 月開始一直銷售到 翌年2 月份，銷售季節(jié)長達(dá)兩三個(gè)月，并且北方由于冬季缺花，加上一品紅具 有擺放周期長，擺放面積大等特點(diǎn)，具有節(jié)日氣氛的一品紅就特別受到青睞， 以冠幅6 0 厘米的一品紅和3 0 厘米冠幅的其他花相比，每平方米擺放兩個(gè)月的 所需費(fèi)用一覽。 碩士學(xué)位論文 h s t e rst h e s is 一品紅與其它花草的比較 一品紅在日常生活中它紅色的苞片也被當(dāng)作紅紫色的染劑，植體流出的乳 汁，還可做解熱劑。“。 4 一品紅的生產(chǎn)現(xiàn)狀及市場(chǎng)分析 在2 0 世紀(jì)初已開始有商品化一品紅的切花生產(chǎn)“，到6 0 年代初由于品種 改良開始成為規(guī)?；a(chǎn)的盆花品種。因其花期長，苞片大，顏色鮮艷而深受 人們的喜愛，8 0 年代以后一直成為歐、美占市場(chǎng)份額最大的盆花品種，經(jīng)久不 衰。 中國現(xiàn)代化的一品紅生產(chǎn)則始于9 0 年代初，當(dāng)時(shí)生產(chǎn)者開始引進(jìn)新品種， 但由于栽培技術(shù)落后，產(chǎn)量一直不高。到了9 0 年代后期，臺(tái)灣地區(qū)的一些 品紅生產(chǎn)者來太陸設(shè)場(chǎng)生產(chǎn)，把一品紅的栽培水平提高了一個(gè)檔次，市場(chǎng)也隨 之?dāng)U大，產(chǎn)量劇增。隨后又有新的栽培者開始采用現(xiàn)代化的栽培技術(shù)，完全按 照國際的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行一品紅生產(chǎn)，產(chǎn)品達(dá)到國際標(biāo)準(zhǔn)。雖然產(chǎn)量不大，但對(duì) 一品紅的市場(chǎng)產(chǎn)生了一定的影響。2 0 0 0 年，世界上三大一品紅生產(chǎn)公司已有兩 家正式進(jìn)入中國市場(chǎng)，并通過尋找代理或?qū)で笠院腺Y的方式在中國大陸生產(chǎn)優(yōu) 質(zhì)一品紅“。他們的進(jìn)入將對(duì)今后一品紅的市場(chǎng)產(chǎn)生重大影響。生產(chǎn)技術(shù)的發(fā) 展將帶來產(chǎn)量的急劇增加，19 9 8 年全國的生產(chǎn)總量約在5 0 萬盆，較高品質(zhì)的 一品紅約占2 0 萬盆。1 9 9 9 年的生產(chǎn)總量達(dá)到1 2 0 萬盆，較高品質(zhì)的約占3 5 萬盆。一品紅，自1 8 2 5 年傳人美國，繼而推廣到歐洲，亞洲和非洲。其中美 國和德國對(duì)一品紅的馴化和開發(fā)比較早，成立了以經(jīng)營一品紅為主的專業(yè)花卉 公司，銳意從事一品紅的盆栽生意。先后選育了許多新品種。有單瓣的，又有 重瓣的。有以紅色為主調(diào)，顏色鮮紅的一品紅，還有白色的“一品白”，宮粉 的“一品粉”，金黃的“一品黃”，紫色的“一品紫”，變色的“一品雜”，“雙 色一品紅”等。今年在以“名花匯羊城，經(jīng)貿(mào)通五洲”為主題的廣州花卉節(jié)蹙 花卉商品交易會(huì)。怡華園藝公司送展的一品紅系列榮獲金獎(jiǎng)?；ǘ紖^(qū)先鋒園藝 3 碩士學(xué)注論丈 、l 、sr 卟! rhe s is 公司所報(bào)獎(jiǎng)的單株盆栽一品紅，被評(píng)為2 0 0 1 年廣州迎春花卉的花王。這兩項(xiàng) 突出的殊榮，使當(dāng)今一代名花一品紅的名聲更加顯赫，并在市場(chǎng)的營銷中會(huì)更 加繁榮興旺。 一品紅在臺(tái)灣地區(qū)8 0 年代初開始種植“，形成產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)則是在9 0 年代 初。當(dāng)時(shí)，由于新品種，技術(shù)的引進(jìn)大大提高了一品紅的觀賞性并延長了一品 紅的擺放壽命使銷售量迅速增加。到9 0 年代中期，從晟初的幾萬盆發(fā)展到 年產(chǎn)1 5 0 萬盆左右的規(guī)模。依臺(tái)灣地區(qū)發(fā)展速率推算大陸2 0 0 1 年的市場(chǎng)容 量至少可達(dá)3 0 0 萬一3 5 0 萬盆。中國有比其他任何國家大得多的市場(chǎng)，國際大 公司對(duì)中國的興趣要大得多，因此在中國的一品紅競(jìng)爭(zhēng)將是國際水平的競(jìng)爭(zhēng)， 最終將會(huì)導(dǎo)致中國大陸一品紅的質(zhì)量迅速提高。2 0 0 0 年以來，全球最大的幾家 圣誕紅種苗公司，如：美國保羅艾克( p a u l e c k er a n c h ) 等頻頻打出“多 種品系歡迎訂購，助您打開成功之門! ”的廣告，極力搶占中國一品紅的發(fā)展 市場(chǎng)。 在中國，一品紅銷售季節(jié)可包括圣誕、元旦、春節(jié)三太節(jié)日。廣州、上海、 北京等大城市越來越多的商家開始用一品紅裝點(diǎn)賓館、寫字樓等公共場(chǎng)所。一 品紅可以從1 1 月開始一直銷售到翌年2 月份，高品質(zhì)的一品紅已開始銷售到 香港、澳門、日本等周邊市場(chǎng)。目前，低品質(zhì)一品紅占有的市場(chǎng)份額很大，約 占2 3 左右，低品質(zhì)一品紅的市場(chǎng)價(jià)格這幾年穩(wěn)定在1 5 元左右，中等質(zhì)量的 一品紅在2 0 3 0 元左右，高品質(zhì)的一品紅售價(jià)在4 0 元以上。從目前的國內(nèi)、 國際生產(chǎn)與銷售的市場(chǎng)分析，一品紅產(chǎn)業(yè)的發(fā)展空間及市場(chǎng)前景是非常廣闊 的，尤其是高品質(zhì)一品紅供不應(yīng)求。因此，可以肯定整個(gè)一品紅產(chǎn)業(yè)的發(fā)展存 在著巨大的市場(chǎng)潛力。 近幾年來，一品紅增長勢(shì)頭迅猛，受到業(yè)內(nèi)人士的關(guān)注，預(yù)計(jì)未來幾年內(nèi) 一品紅的產(chǎn)量將連翻幾番，在盆花市場(chǎng)的所占份額必將越來越大。而商品質(zhì)的 產(chǎn)品是種植者生存、發(fā)展的基石，因?yàn)?，一品紅成品質(zhì)量的好壞對(duì)其價(jià)格的影 響極大，而一品紅種苗質(zhì)量好壞直接影響成品質(zhì)量。所以，業(yè)內(nèi)對(duì)優(yōu)質(zhì)一品紅 種苗的需求越來越大。以往種苗的生產(chǎn)主要采用扦插繁殖方法“”，在扦插過程 中如果基質(zhì)、時(shí)間、溫度掌握不當(dāng)，常會(huì)導(dǎo)致爛根、成活率低，再者，目前大 多數(shù)中、高檔一品紅種植者都采用進(jìn)口優(yōu)質(zhì)種苗，價(jià)格昂貴，插條的來源受到 限制，因此，高品質(zhì)的一品紅的發(fā)展受到限制。目前，在國內(nèi)所見到的有關(guān)一 4 碩士學(xué)位論文 m a s t e r 。st h e s i s 品紅的報(bào)導(dǎo)中，多是關(guān)于一品紅栽培、管理、扦插、肥、水、光、溫等生產(chǎn)管 理技術(shù)方面的研究，有關(guān)一品紅組織培養(yǎng)方面的報(bào)導(dǎo)很少。本文作者，經(jīng)過二 年多的努力，在一品紅組織培養(yǎng)過程中不同光質(zhì)、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、不同培養(yǎng)基 等因子對(duì)愈傷組織的形成、器官分化等方面的作用進(jìn)行了初探，以期在我國優(yōu) 質(zhì)一品紅的專業(yè)化生產(chǎn)上為后人進(jìn)一步研究積累些資料。 5 _ 一 碩士學(xué)位論文 、l s t e r st h e s is 第二章一品紅愈傷組織的誘導(dǎo) 1 材料與方法 1 1 實(shí)驗(yàn)材料 供試材料為一品紅( e u p h o r b i ap u c h e r r i m aw i l l d ) 的幼嫩莖及葉片 品種為彼得之星全球熱銷的圣誕紅品種。材料購自美國保羅艾克( p a u l e c k e r a n c h ) 公司：中國總代理大漢園景公司，大益農(nóng)資公司。栽培管 理狀況良好，幼莖采用當(dāng)年生的枝、葉片采用當(dāng)年生枝條上從頂芽往下數(shù)第3 片葉“。材料取下當(dāng)即處理。 1 2 培養(yǎng)基 采用m s 培養(yǎng)基，附加3 蔗糖及不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)及其組合， p h 5 8 ，附加瓊脂8 - i 0 9 6 ，高壓滅菌1 2 0 ，1 5 分鐘。 1 3 不同光源主要技術(shù)參數(shù) 1 4 實(shí)驗(yàn)方法 取一品紅幼嫩莖和葉片，經(jīng)表面消毒“”，把嫩莖切成3 5 帆左右小段： 葉片則主脈附近切取邊長為3 5 眥的小方塊，接種于附加有各種激素的惦培 養(yǎng)基上“，每日光照l 卜1 2 小時(shí)，光強(qiáng)為1 0 0 0 r u x 左右，溫度為2 4 攝氏度左 右。2 0 天后，統(tǒng)計(jì)各培養(yǎng)基中愈傷組織的誘導(dǎo)率 愈傷組織的誘導(dǎo)率( ) = 愈 傷組織的塊數(shù)接種外植體塊數(shù)1 0 0 ，并觀察愈傷組織的生長情況。 2 結(jié)果與討論 2 1 植物生長調(diào)節(jié)物對(duì)一品紅愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng) 2 1 1 單因子的誘導(dǎo)作用 6 碩士學(xué)位論文 m s t e r 。st h e s is 本實(shí)驗(yàn)選取了z t 、6 _ _ b “k t 、n a a 、i b a 、i a a 、2 4 一d 等七種生長調(diào)節(jié) 物質(zhì)附加m s 培養(yǎng)基中，用幼嫩莖段和葉片作為外植體接種。觀察不同植物生 長調(diào)節(jié)物質(zhì)分別在不同濃度下對(duì)一品紅愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)，結(jié)果如下( 二周 后觀察) ： z t 的效應(yīng) z t 的誘導(dǎo)效應(yīng)見表1 從表1 可以看出，不同濃度的z t 對(duì)莖，對(duì)葉的愈傷組織及其生長的作用， 以0 5 m g 1 - 】最佳。莖段為外植體愈傷組織誘導(dǎo)率比葉片高，同時(shí)觀察到在z t 濃度大于0 5 m g 1 。1 時(shí)培養(yǎng)基中的愈傷組織呈現(xiàn)綠色瘤狀物，芽分化率較高； 小于0 5 m g 1 。1 愈傷組織呈現(xiàn)乳白色，疏松顆粒狀，芽分化率低。 表1 ：z t 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)( ) t a b l e l ：e f f e c to fz to nc a l l u si n d u c t i o n z t 濃度 0o 10 20 51 02 05 0 ( m g 1 。) 莖段誘導(dǎo)率 01 73 68 5 46 2 75 6 71 2 6 生長勢(shì) 一+ + + + + + 葉片誘導(dǎo)率 o51 21 51 074 5 生長勢(shì) 一+ 注：一無：+ 差；+ + 一般；+ + + 較好；+ + + + 旺盛( 本文中各表均同) 6 _ b a 的效應(yīng) 6 一b a 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)見表2 表26 - b a 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)頻率c ) 及其生長勢(shì)的影響 t a b l e 2 ：e f f e c to f6 一b ao nc a l l u si n d u c t i o i l 6 一b a濃度 00 10 20 51 02 05 0 ( m g 1 1 ) 莖段誘導(dǎo)率 01 06 7 26 9 16 8 45 1 31 6 1 生長勢(shì) 一+ + + + + + + 葉片誘導(dǎo)率 01 54 7 86 6 56 8 65 4 2 0 5 生長勢(shì) 一+ + + + + + 7 碩士學(xué)位論丈 m s 1 e rs1 h e s is 從表2 可知，不同濃度的6 一b a 對(duì)莖、葉愈傷組織及其生長的影響，以莖 為外植體時(shí)0 2 一1 o m g 1 。1 效果較好，以0 5 m g 1 1 效果最佳；以葉為外植體時(shí) 6 一b a 濃度在0 5 2 o m g 1 1 效果較好，尤以1 o m g 1 1 為最佳：在附加6 - b a 的 培養(yǎng)基上，愈傷組織呈瘤狀綠色致密。 k t 的效應(yīng) k t 對(duì)愈傷組織的效應(yīng)見表3 表3k t 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率( ) 及生長勢(shì)的影響 t a b l e 3 ：e f f e c to fk to nc a l l u si n d u c t i o n k t 濃度 ( m g 1 _ 1 ) 00 10 20 51 02 05 0 莖誘導(dǎo)率 ol1 54 04 03 22 0 葉誘導(dǎo)率 00 91 33 53 24 01 5 生長勢(shì) 一+十 從表3 可見k t 各濃度對(duì)莖、葉愈傷組織的誘導(dǎo)率均不高，長勢(shì)也較差 且易褐化，愈傷組織黃褐色，干燥。 n a a 的效應(yīng) n a a 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率及其生長勢(shì)的影響見表4 表4n a a 愈傷組織誘導(dǎo)率( ) 及生長勢(shì)的影響 t a b l e 4 ：e f f e c to fn a ao nc a l l u si n d u c t i o n n a a 濃度 00 10 20 51 0 2 05 0 ( m g 1 1 ) 莖段誘導(dǎo)率 o3 5 47 5 39 6 47 8 16 5 35 0 生長勢(shì) 葉片誘導(dǎo)率 o1 58 51 0 08 67 8 23 2 1 生長勢(shì) 一+ + + + + + + + + + 從表4 可知，n a a 對(duì)莖、葉愈傷組織的誘導(dǎo)作用較好，尤以0 5 m g 1 1 效果 最佳，對(duì)葉片愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)1 0 0 ，愈傷組織疏松、濕潤、白色透明；同 時(shí)。在實(shí)驗(yàn)中觀察到以葉片為外植體時(shí)在0 5 m g 1 1 濃度下，根的誘導(dǎo)率較高。 8 碩士學(xué)位論文 、f s t f r st h e s 【s 2 4 _ d 的效應(yīng) 2 4 - d 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)見表5 表52 4 一d 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率( ) 及其生長勢(shì)的影響 t a b l e 5 ：e f f e c to f2 4 - do nc a l l u si n d u c t i o n 2 4 - d 濃度 o0 10 20 51 o2 o6 0l o o ( m g 1 1 ) 莖段誘導(dǎo)率 0282 04 55 88 54 7 生長勢(shì) 一+ + + + + + + + + 葉片誘導(dǎo)率 o223 61 0 24 56 59 5 生長勢(shì) 一+ + + + + + + 從表5 可見，不同濃度的2 4 d 對(duì)莖、葉愈傷組織的形成及生長的作用 5 o m g 1 。對(duì)莖段，葉片效果較好，尤其對(duì)莖段愈傷組織誘導(dǎo)率較高，葉片在 i 0 o m g 1 。達(dá)到最高誘導(dǎo)率，低濃度下的愈傷組織黃綠色，易褐化，高濃度下 5 o m g i - 一1 0 o m g i 1 愈傷組織墨綠色、粘稠狀、不褐化。 i b a 的效應(yīng) i b a 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)見表6 表6i b e 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率( ) 及其生長勢(shì)的影響 t a b le 6 ：e f f e c to fi b ao nc a ll u si n d u c ti o n i b a 濃度 00 10 20 51 02 05 0 ( m g 1 1 ) 莖段誘導(dǎo)率 01 5 34 7 67 l6 3 15 41 0 1 生長勢(shì) 一+ + + + + 葉片誘導(dǎo)率 05 32 84 52 57 34 5 生長勢(shì) 一+ + + + + 佳，葉片與莖段相比較，i b a 對(duì)莖段愈傷組織的誘導(dǎo)頻率較高。愈傷組織自綠 色，致密平滑，呈現(xiàn)晶體小顆粒狀。愈傷組織生長到第4 周開始褐化、干燥死 亡。在此培養(yǎng)基上存活期，比附加有n a a 、2 4 - d 等生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基上 存活期短。 9 碩士學(xué)位論文 l f s t e r st j ! s f s i a a 的效應(yīng) i a a 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)見表7 表7i m t 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率( ) 及生長勢(shì)的影響 t a b l e 7 ：e f f e c to fi 從o nc a l l u si n d u c t i o n i 從濃度 ( m g 1 。) 00 10 20 5l _ o2 o5 0 莖段誘導(dǎo)率 04 0 55 0 65 8 76 0 35 6 63 0 6 葉片誘導(dǎo)率 03 8 64 9 15 7 65 9 55 4 52 8 4 生長勢(shì) 一+ + + + + + + + 從表7 可知i a a 對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用以1 o m g 1 1 效果最佳，對(duì)莖段、 葉片的愈傷組織誘導(dǎo)作用較為一致，愈傷組織呈疏松、白綠色、透明狀與n a a 誘導(dǎo)形的愈傷組織相似。對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用比i b a 效果好。 2 1 2 組合因子的誘導(dǎo)作用 z t 和n 從組合的效應(yīng) z t 和n a a 的組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)見表8 表8z t 和n a a 組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率及生長勢(shì)的影響 t a b l e 8 ：e f f e c to fz ta n dn 從o l qc a l l u si n d u c t i o n 從表8 可知，z t 與n a a 的各濃度的組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用顯著增加。 當(dāng)z t 固定時(shí)在n 從。，1 的范圍內(nèi)作用最明顯，且隨n a a 濃度的升高，誘導(dǎo) 率增加，在z t o 。- + n a a t - i 的組合中愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)1 0 0 ；當(dāng)n 從的 1 0 _ _ _ - - - - _ - 一 一 碩士學(xué)位論文 m s t e rs1 h e 5 i s 濃度固定時(shí)，在z t oz 。- ?！皌 1 的效果顯著。尤其在z t 。1 十n 地?！坝鷤?組織的誘導(dǎo)率達(dá)1 0 0 。從實(shí)驗(yàn)中還觀察到z t 與n a a 各濃度的組合中愈傷組織 的品質(zhì)與單因子z t 或n a a 的作用有所差別，愈傷組織疏松，乳白色或乳黃色， 愈傷組織生長旺盛。 6 - b a 和n 從組合的效應(yīng) 6 一b a 和n a a 組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)見表9 表96 - b a 和n a a 組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響 t a b l e 9 ：e f f e c to f 6 - b aa n dn a ao nc a l l u sl n d u c t i o i l 從表9 可知卜b a 與n a a 各濃度的組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用，6 - b a 與 n a a 各濃度的組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用與單因子6 - b a 、n a a 單獨(dú)作用沒有太 明顯的提高。n a a 對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)顯著大于6 - b a 的誘導(dǎo)效應(yīng)，n a a 在這 個(gè)組臺(tái)中處于主導(dǎo)地位，但與6 一b a 的不同配合誘導(dǎo)效應(yīng)差異也很大。當(dāng)6 一b a 為0 時(shí)，n a a 的最適濃度為o 5m g 1 ，誘導(dǎo)率為9 6 4 ，n a a 。；。1 與6 一b a 各濃度的組合，愈傷組織的誘導(dǎo)率有所增加，但無顯著變化。當(dāng)n a a 的濃度偏 離最適濃度0 5m g 1 1 時(shí)，n a a 與6 - b a 各濃度的組合，愈傷組織的誘導(dǎo)率在 6 b k 。1 范圍內(nèi)隨6 一b a 濃度的升高而增加，在6 - b a ，。1 + n 從。，1 效果 最好，誘導(dǎo)率達(dá)到1 0 0 ，比單因子6 一b a 。1 的作用有顯著提高：從表中還可 知6 - b a 與n a a 的組合，使6 一b a 的最適濃度后移，對(duì)n a a 的最適濃度影響不大。 此時(shí)的愈傷組織初期白綠色，致密，呈小晶體顆粒狀，生長到2 0 天左右，逐 漸變成綠色瘤狀的愈傷組織。 1 i 一一一一 碩士學(xué)位論交 sr e rst h e s i s 6 一b a 和i b a 組合的效應(yīng) 6 一b a 和i b a 組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)見表l o 表1 06 - b a 和i b a 的組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響 t a b l e l 0 ：e f f e c to f6 - b aa n d1 8 ao nc a l l u si n d u c t i o n 從表1 0 可見6 一b a 和i b a 的組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用。當(dāng)6 一b a 固定時(shí)在工b 缸。范圍內(nèi)愈傷組織誘導(dǎo)率較高，并以i 脯* 。時(shí)為最佳濃 度，與單因子作用相比向低濃度推移。當(dāng)i b a 濃度固定時(shí)，在6 一b 。- 1 的 范圍內(nèi)誘導(dǎo)效果較好，以6 - b a i 。“時(shí)為最佳濃度，與其單因子( 6 一b a ) 作用 相比最佳濃度向高濃度推移。愈傷組織在6 - b a 小于1 o m g 1 - 】的培養(yǎng)基上呈白 綠色、疏松，在6 - b a 大于1 o m g 、l “的培養(yǎng)基中愈傷組織呈綠色瘤狀。 n 從和i b a 組臺(tái)的效應(yīng) n a a 和i b a 組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)見表l i 見表i i n a a 和i b a 組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響 t a b l el le f f e c to fn 從a n di b ao nc a l l u si n d u c t i o n 碩士學(xué)位論文 m s t e rst he s is 從表1 1 可知i b a 與n a a 的組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用比單因子i b a 顯著 提高，同時(shí)與單因子n a a 作用相比，作用不明顯。由此可知n a a 在該組合中起 主導(dǎo)作用。最適濃度范圍在i b 凡。1 + n 詆。l - t 尤其在i b a 。i - i 這個(gè)濃 度下，愈傷組織誘導(dǎo)率很高，可達(dá)1 0 0 。愈傷組織的質(zhì)量受i b a 與n a a 比率的 影響，當(dāng)i b a 濃度小于5 0m g 1 _ i 時(shí)，愈傷組織無色或白色、疏松、濕潤、易 分化。當(dāng)t b a 濃度大于5 0m g 1 - 】時(shí)，愈傷組織墨綠色，濕潤，不易分化。 3 2 不同碳源對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用 本實(shí)驗(yàn)以幼嫩莖段作為外植體，接種到附加6 一b 幾。，1 + n 從。- 1 的m s 培 養(yǎng)基上，把m s 培養(yǎng)基中的碳源用不同濃度的蔗糖或葡萄糖來替代，以觀察不 同糖及不同濃度的糖對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)。其結(jié)果見表1 2 。 表1 2 不同濃度的碳源對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng) t a b l e l 2 ：e f f e c to fs i i l r o s ea n d g l u c o s e o nc a l l u si n d u c t i o n 碳源濃度( g 1 - )愈傷組織誘導(dǎo)率生長勢(shì) 顏色質(zhì)量 oo i 07 5 + 黃綠色致密干燥 蔗 2 08 0 + + 黃綠色致密干燥 3 01 0 0 + + + 黃綠色疏松濕潤 糖 4 09 0 + + + 十 黃綠色疏松濕潤 5 07 5 + + 白綠致密干燥 o0 1 06 0 + 白綠致密濕潤 葡 2 07 5 + 白綠致密濕潤 萄 3 08 5 + + + 粉白疏松濕潤 糖 4 08 0 + + + 粉白疏松濕潤 5 08 0 + + + 粉白疏松濕潤 從表1 2 可知不同的碳源物質(zhì)對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)作用不同，蔗糖的效果比 葡萄糖好。葡萄糖的最適濃度是3 0 9 1 ，但愈傷組織誘導(dǎo)率僅為8 5 ：蔗糖的 最適濃度范圍在3 0 一4 0g 1 ，在3 0 9 1 “時(shí)愈傷組織的誘導(dǎo)率最高可達(dá)1 0 0 ， 但是在4 0 9 1 _ l 的培養(yǎng)上愈傷組織生長旺盛。同時(shí)還可以看出，葡萄糖濃度在 2 0 _ _ 5 0g 1 1 的范圍內(nèi)，隨濃度的升高，誘導(dǎo)率增高的幅度不大，這一點(diǎn)與蔗 1 3 一 _ l 一一 碩士學(xué)位論丈 、1 a s t e rst h e s is 糖不同。 2 3 不同光質(zhì)對(duì)愈傷組織的影響 有關(guān)光質(zhì)對(duì)組織培養(yǎng)中愈傷組織的形成及其分化的影響，眾說紛紜，不同 的人以不同的材料進(jìn)行試驗(yàn)，得出的結(jié)論差異較大”。我在一品紅的組織 培養(yǎng)過程中試著做了些這方面的工作，以m s + 6 一b a ：。l _ 1 + n a a 。，。為培養(yǎng)基， 以莖為外植體和6 - b a 王。l - i + n a a 。，m 。l - i 形成的愈傷組織分別作為外植體。 結(jié)果見表1 3 。 表1 3 ：不同光質(zhì)對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng) t a b l e l 3 ：e f f e c to f l i g h tq u a l i t y o i lc a l l u si