實(shí)驗(yàn)二 沉淀試驗(yàn)PPT課件.ppt

實(shí)驗(yàn)二沉淀試驗(yàn) 1 目的要求1 掌握炭疽桿菌環(huán)狀沉淀試驗(yàn)的操作技術(shù)和結(jié)果觀察 2 掌握炭疽桿菌瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的基本操作技術(shù)和結(jié)果觀察 2 沉淀試驗(yàn) 可溶性抗原 如細(xì)菌的外毒素 內(nèi)毒素 菌體裂解液 病毒 組織浸出液等 與相應(yīng)的抗體結(jié)合后 在適量電解質(zhì)存在下 形成肉眼可見的白色沉淀 稱為沉淀試驗(yàn)抗原 沉淀原抗體 沉淀素 3 沉淀試驗(yàn)的類型 液相沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)固相沉淀試驗(yàn)瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)免疫電泳技術(shù) 4 實(shí)驗(yàn)材料1 炭疽沉淀血清由獸醫(yī)生物藥品廠生產(chǎn)供應(yīng) 該血清是由免疫的馬血清分離 首免用炭疽芽孢苗 再以炭疽強(qiáng)毒的死菌按3 4d的間隔 進(jìn)行3 4次加強(qiáng)免疫 抗體效價達(dá)到要求時 采血分離血清 2 炭疽沉淀抗原由獸醫(yī)生物藥品廠生產(chǎn)供應(yīng) 5 3 待檢抗原冷浸法用于待檢皮張 檢樣置37C溫箱烘干 高壓滅菌后 剪成小塊稱重 然后加入5 10倍的石炭酸生理鹽水 放室溫浸泡18 24h 用濾紙過濾2 3次 使之呈清朗的液體 即為待檢抗原 熱浸法用于待檢的組織臟器 取懷疑死于炭疽病畜的臟器 脾 肝 腎 血液或肌肉等 放入乳缽內(nèi)研磨碎 加5 10倍生理鹽水 裝入試管或小三角瓶中 煮沸30 40min 冷卻后用濾紙過濾數(shù)次 直到濾液透明 即為待檢抗原 4 生理鹽水 6 一 炭疽環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 7 方法與步驟 取3支口徑0 4cm的小試管 在其底部各加約0 1ml的炭疽沉淀血清 取其1支 用毛細(xì)管將待檢抗原沿著管壁重疊在炭疽沉淀血清之上 上下兩液間有整齊的界面 注意勿產(chǎn)生氣泡 另2支小試管 一支加炭疽陽性抗原 另一支加生理鹽水 作為對照 如圖 8 2020 1 9 9 炭疽環(huán)狀沉淀試驗(yàn)加樣式意圖 10 結(jié)果判定5 10min內(nèi)判定結(jié)果 上下重疊兩液界面上出現(xiàn)乳白色環(huán)者 為炭疽陽性 對照組中 加炭疽陽性抗原者應(yīng)出現(xiàn)白環(huán) 而加生理鹽水者應(yīng)不出現(xiàn)白環(huán) 11 二 炭疽瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 12 方法與步驟 瓊脂板制備稱取1g瓊脂粉 加至100ml0 5 石炭酸生理鹽水中 煮沸使之溶解 待溫度降至55 左右時澆玻板 厚約2 3mm左右 打孔在瓊脂凝膠上打梅花孔 孔徑為2mm 中間孔和周圍孔間的距離大約為3mm 加樣中間孔加炭疽沉淀血清 周圍孔中分別加炭疽沉淀抗原 待檢抗原及鹽水 如圖 13 炭疽瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)加樣式意圖 14 作用將瓊脂凝膠板放置濕盒中 于37 擴(kuò)散24 72h 每天觀察結(jié)果 觀察三天 結(jié)果觀察抗原抗體擴(kuò)散時 在兩孔間比例最合適的位置出現(xiàn)白色沉淀線 出現(xiàn)