細胞生物學（翟中和）配套習題.doc

第一章:緒論1、 填空題:1、 細胞生物學是細胞整體、超微結構和分子水平上研究 及其 規(guī)律的科學。、2、名詞解釋:1、細胞學說（cell theory）3、選擇題:1、現(xiàn)今世界上最有影響的學術期刊是。a:Natuneb: Cellc: PNASd: Science2、自然界最小的細胞是（a） 病毒（b） 支原體（c） 血小板（d） 細菌4、是非題:1、現(xiàn)代細胞生物學的基本特征是把細胞的生命活動和亞細胞的分子結構變化聯(lián)系起來。（ ）5、問答題:1. 當前細胞生物學研究的熱點課題哪些？2. 細胞學說的基本要點是什么？細胞學說在細胞學發(fā)展中有什么重大意義？3. 細胞生物學的發(fā)展可劃分為哪幾個階段？各階段的主要特點是什么？第二章:細胞基本知識概要1、名詞解釋:1. 血影（Ghost）2. 通道形成蛋白（Porin）3. 纖維冠（fibrous corona）2、選擇題:1、立克次氏體是（a） 一類病毒（b） 一種細胞器（c） 原核生物（d） 真核生物2、 原核細胞的呼吸酶定位在（a） 細胞質(zhì)中（b） 質(zhì)膜上（c） 線粒體內(nèi)膜上（d） 類核區(qū)內(nèi)3、 最小的細胞是（a） 細菌（b） 類病毒（c） 支原體（d） 病毒4、 在英國引起瘋牛病的病原體是:（a） 朊病毒（prion）（b） 病毒（Virus）（c） 立克次體（rickettsia）（d） 支原體（mycoplast）5、 逆轉病毒（retro virus）是一種（a） 雙鏈DNA病毒（b） 單鏈DNA病毒（c） 雙鏈RNA病毒（d） 單鏈RNA病毒6、 英國瘋牛病病原體是（a） DNA病毒（b） RNA病毒（c） 類病毒（d） 朊病毒7、 線蟲基因組的全序列測定目前已接近尾聲，發(fā)現(xiàn)其一共約有（ ）種的編碼基因（a） 6000（b） 10000（c） 20000（d） 500008、 原核細胞與真核細胞雖有許多不同，但都是（a） 核仁（b） 核糖體 （c） 線粒體（d） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)9、 前病毒是（a） RNA病毒（b） 逆轉錄RNA病毒RNA病毒（c） 整合到宿主DNA中的逆轉錄DNA（d） 整合到宿主DNA中的DNA病毒3、是非題:1.類病毒僅由裸露的DNA所構成，不能制造衣殼蛋白。（ ）2. 原核細胞中只含一個DNA分子。.（ ）3.逆轉錄是一種僅為DNA病毒所特有的違反中心法則的例子。（ ）4. 真核細胞和原核細胞分別起源于各自的祖先。.（ ）5. 果蠅染色體的一條代表一個基因。（ ）6. 細胞學說是英國科學家胡克創(chuàng)立的。（ ）4、問答題:1. 根據(jù)你所掌握的知識，如何理解“細胞是生命活動的基本單位”這一概念？2. 病毒是非細胞形態(tài)的生命體，又是最簡單的生命體，請論證一下它與細胞不可分割的關系？3. 為什么說支原體可能是最小最簡單的細胞存在形式？4. 說明真核細胞與原核細胞在遺傳裝置，基因表達及調(diào)控方面的區(qū)別。5. 真核細胞在亞顯微結構水平可以劃分為哪三大基本結構體系？（據(jù)說在國內(nèi)，這是翟中和先提出來的）6. 細胞與病毒在起源上的關系有哪幾種假說？你比較同意哪一種？為什么？（必須同意:生物大分子細胞病毒這種，論據(jù)26）7. 請簡要說明病毒的增殖過程。（今年SARS流行，而且陳建國和鄧宏魁現(xiàn)在都在研究SARS，還要看一下SARS病毒基本的結構和增殖途徑）8. 在生命起源和進化過程中化學進化與生物進化的關系如何？9. Miller實驗的方案是怎樣設計的？有什么重要意義？10. 微球學說和團聚體學說的主要內(nèi)容是什么？11. 如何評價真核生物起源的內(nèi)共生假說和經(jīng)典假說？12. 葉綠體可能起源于原核綠藻和藍細菌（藍藻）的觀點的根據(jù)是什么？13. HIV的分子結構特征是什么？HIV的英文全稱是什么？14. 列出原核細胞與真核細胞的主要差異。15. 蛋白質(zhì)組是什么？1、 RE: 走近蛋白質(zhì)組研究轉發(fā)自:中華基因網(wǎng),非常謝謝!Proteome（蛋白質(zhì)組），這個在各種字典里都還查不到的詞組，近幾年來開始在生命科學領域逐漸浮出水面，曝光頻率越來越高，蛋白質(zhì)組是什么？它與我們有什么關系？讓我們來揭開其神秘的面紗，一睹其迷人的風采。 一、什么是蛋白質(zhì)組研究 基因，尤其是基因組研究形成了20世紀生命科學研究一道亮麗的風景線，取得了巨大的成就。那么，知道了人類的全部基因組序列，就可以解決各種醫(yī)學問題嗎？其實并不是這么簡單。僅憑基因組學這只單腳圓規(guī)，很難繪出完美的圓圈。隨著人類基因組計劃的逐步完成，科學家們又進一步提出了后基因組計劃，蛋白質(zhì)組研究是其中一個很重要的內(nèi)容。 在人體內(nèi)真正發(fā)揮作用的是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)扮演著構筑生命大廈的“磚塊”角色，是生命活動的真正執(zhí)行者和體現(xiàn)者?；蚝帽纫粡堉圃祜w機和坦克的圖紙，蛋白質(zhì)就是根據(jù)圖紙制造的真正進行戰(zhàn)斗的飛機和坦克。雖然目前已完成了對人類基因的全部序列測定，但是單憑制造飛機和坦克的圖紙，不可能演繹出一場戰(zhàn)爭，也不會知道一場戰(zhàn)爭是如何發(fā)生、如何進行的。基因的主要功能是通過其表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)來實現(xiàn)的，而蛋白質(zhì)亦具有自身特有的活動規(guī)律，隨著生命活動的進程表現(xiàn)出極其動態(tài)的緊密協(xié)調(diào)的變化，蛋白質(zhì)在合成之后具有相對獨立的修飾、轉運和相互間作用能力，同時還具有對外界因素發(fā)生反應的能力。因此，只有從蛋白質(zhì)組學的角度對所有蛋白質(zhì)的總和進行研究，即開展蛋白質(zhì)組學研究，才能更加貼近對生命現(xiàn)象和本質(zhì)的掌握，生命活動的本質(zhì)和活動規(guī)律才能找到答案。正是因為這樣，國際科學界預言，在21世紀，生命科學的熱點將從基因組學轉向蛋白質(zhì)組學，使后者成為新的前沿。 蛋白質(zhì)組學研究不但對了解生命本質(zhì)有重要的意義，而且在疾病診斷治療、藥物篩選等有廣泛應用前景。其中蘊藏著開發(fā)疾病診斷方法和新藥的線索。 二、蛋白質(zhì)組能給我們帶來什么 人體內(nèi)的每一細胞是由一萬余個不同蛋白質(zhì)的有機組合，不同蛋白質(zhì)的組合就構成不同細胞的功能。要想把細胞內(nèi)部這些功能和信息全部展現(xiàn)出來，唯一的方法是利用蛋白質(zhì)組學技術，得到一張擁有各種蛋白質(zhì)點的繁星圖，利用現(xiàn)代科學分析技術，將此圖變成開發(fā)新藥的“探寶圖”，了解其藥物的細胞內(nèi)作用與運轉機制，成為藥物發(fā)現(xiàn)的“路標”。 蛋白質(zhì)組的研究不僅是探索生命奧秘的必須工作，也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑，為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益?，F(xiàn)在已經(jīng)知道，在疾病中只有一小部分是起因于基因突變，而各種疾病都有蛋白質(zhì)譜的動態(tài)變化，每種疾病在不同的發(fā)病階段，在任何癥狀出現(xiàn)之前，在蛋白質(zhì)水平方面已經(jīng)發(fā)生了變化，所以通過蛋白質(zhì)組學研究提供給我們大量的、完整的、動態(tài)的蛋白質(zhì)譜，通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析，我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”，它們可成為新藥物設計的分子靶點，通過這些靶點，在藥物發(fā)現(xiàn)階段，我們可能對大量新化合物進行自動篩選，縮短新藥發(fā)現(xiàn)周期；或者通過這些被確認的蛋白質(zhì)變化標志物，發(fā)展成為臨床早期診斷指標，為疾病的早期診斷提供分子標志，形成未來診斷學和治療學的理論和應用基礎。 一項科學統(tǒng)計表明，在20世紀90年代中期，全世界用于找尋新藥的藥靶共約483個，它們主要是蛋白質(zhì)；而當時全世界正在使用的共2000多種藥物中， 85都是針對上述483種藥靶。這483種藥靶分子構成了全世界藥廠的最重要的發(fā)展源泉。據(jù)研究，按人類主要的100多種疾病進行計算，還應該有300015000種的蛋白質(zhì)具有成為藥靶的可能，也就是說還可能有幾千到上萬種的新藥靶將被發(fā)現(xiàn)，這些潛在的發(fā)展源頭，將有可能給制藥界帶來的無窮的財富和發(fā)展空間。這也是為什么蛋白質(zhì)組學作為發(fā)現(xiàn)藥靶的主要技術平臺，越來越受國際制藥業(yè)界垂青的重要原因所在。 三、蛋白質(zhì)組基因組之后的下一個關鍵詞 上世紀末，人類基因組序列草圖的完成宣告了一個新的紀元“后基因組時代”的到來。在這個后基因組時代里，蛋白質(zhì)組學則是其中流砥柱之一，是研究的重心所在。正因如此，自然、科學在公布人類基因組序列草圖的同時，分別發(fā)表了述評與展望，將蛋白質(zhì)組學的地位提到前所未有的高度，認為蛋白質(zhì)組學將成為新世紀最大戰(zhàn)略資源爭奪戰(zhàn)的重要“戰(zhàn)場”，是新世紀生物醫(yī)學前沿研究的戰(zhàn)略制高點。 蛋白質(zhì)組學的第一篇原始論著發(fā)表于1995年國際上并不著名的電泳雜志。不過幾年時間，蛋白質(zhì)組研究所展現(xiàn)出的巨大的市場前景、戰(zhàn)略的重要性和技術的先進性，已成為西方各主要發(fā)達國家、跨國制藥集團競相投入的熱點與焦點，得到了突飛猛進的發(fā)展。 除了國家組織的研究，企業(yè)與制藥公司也紛紛斥巨資開展蛋白質(zhì)組研究?，F(xiàn)在國外幾乎每個大的制藥公司都有其蛋白質(zhì)組研究計劃，小公司也厲兵秣馬，準備從股市圈錢擴展研究。除了早已進入該領域的公司外，原先定位在基因組研究的公司也雄心勃勃地大舉進軍該市場。如獨立完成人類基因組測序的賽萊拉公司已宣布投資上億美元于此領域；羅氏公司決定在未來的幾年內(nèi)投資近10億瑞士法郎來進一步加強其在蛋白質(zhì)組領域的探索；又如日內(nèi)瓦蛋白質(zhì)組公司與布魯克質(zhì)譜儀制造公司聯(lián)合成立了國際上最大的蛋白質(zhì)組研究中心。 經(jīng)過短短幾年的發(fā)展，蛋白質(zhì)組學已經(jīng)開始從建立數(shù)據(jù)庫走向解決生命科學的重大問題，成為研究生命科學問題或機制的強有力手段。蛋白質(zhì)組市場，在2000年產(chǎn)生了9.63億美元的收入，估計到2006年可產(chǎn)生56億美元的收入。蛋白質(zhì)組市場的收入將會繼續(xù)高漲，因為該技術所蘊藏的潛能，足以促進一系列“重磅炸彈”式新藥的誕生。 我國于1997年設立了重大項目“蛋白質(zhì)組學技術體系的建立”；99年由中國科學院上海生化研究所等多家單位聯(lián)合組成課題組；2001年在北京由9家著名高校、科研單位聯(lián)合組建成立了蛋白質(zhì)組學研究院；內(nèi)蒙古億利集團公司是我國最先涉足這一領域的企業(yè)，他們投資5000萬用于研制和開發(fā)有應用價值的蛋白質(zhì)芯片和建立高通量的蛋白質(zhì)識別技術。 目前，蛋白質(zhì)組研究在國內(nèi)外正如火如荼地展開，大有星火燎原之勢。但我們也應當看到，蛋白質(zhì)組研究，遠比研究基因復雜得多，困難得多，在技術和儀器上都會遇到瓶頸?，F(xiàn)在蛋白質(zhì)組研究都仍處于基礎研究階段，對蛋白質(zhì)組研究的應用有一個認識過程以及升級配套過程，蛋白質(zhì)組研究的產(chǎn)業(yè)化還有很長一段路要走。因此，如何既抓住蛋白質(zhì)組學研究剛剛啟動的時機，迅速地進入到蛋白質(zhì)組學的前沿，搶占制高點，又要審時度勢，結合自身實際情況，確定自身發(fā)展的方向，是擺在我們生命科學研究發(fā)展方向決策中的一個重要問題。 21世紀將是生物技術的時代，蛋白質(zhì)組的時代。蛋白質(zhì)組學的發(fā)展給醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)提供了一個新的發(fā)展機遇。隨著人們對蛋白質(zhì)組研究的深入，必將出現(xiàn)更令人振奮的成果，這些成果將很快應用于生物制藥，從而使一批高科技含量、高附加值、對疾病的認識和治療將上升到一個新的高度，為生物制藥業(yè)插上騰飛的翅膀，為全人類健康帶來無可限量的福音。 蛋白質(zhì)組學正是近年來新發(fā)展起來的強有力的發(fā)現(xiàn)藥靶的技術平臺，作為一個新的學科發(fā)展領域，它對所有及時進入者都將提供巨大的機會。 不過，蛋白質(zhì)組學為一種新生領域，目前還處于初期發(fā)展階段，仍有許多困難有待克服。如現(xiàn)有分析儀器的靈敏度還很難將體內(nèi)微量的調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)精確分析。而這種微量調(diào)控蛋白的精確表達在生命過程中起到關鍵性作用。另外，成千上萬種蛋白質(zhì)間及蛋白質(zhì)與其它生物大分子間的相互作用和作用方式的復雜性同樣也是蛋白質(zhì)組研究所面臨的問題。 蛋白質(zhì)組學研究和基因組研究一樣，依賴于強有力的、高通量、大規(guī)模的技術。在目前的蛋白質(zhì)研究中，仍以雙相電泳和質(zhì)譜技術為支柱技術，并在分辨率和檢出率方面有很大改進。但是與基因組學研究相比，由于蛋白質(zhì)的復雜性和識別原則的多樣性，缺乏一種高通量的識別工具仍然是蛋白質(zhì)組學深入研究的瓶頸。因此，一些新的技術也由此孕育而生。 新藥設計開發(fā)和個性化治療的關鍵是找到有關的蛋白質(zhì)。人類基因組序列草圖雖然已經(jīng)完成，完整的序列圖譜也接近完成，但是僅有基因，甚至基因的信使rna（指導細胞產(chǎn)生特定蛋白質(zhì)的物質(zhì)，是dna轉錄的產(chǎn)物）還遠遠不能實現(xiàn)基因組研究的預期目標。因為，第一，藥物作用的靶子往往是蛋白質(zhì)，基因組不能告訴一個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)數(shù)量或其動態(tài)的信息；第二，信使rna表達水平和蛋白質(zhì)表達水平之間的對應關系尚不明確，信使rna高表達不等于相應的蛋白質(zhì)也高表達；第三，蛋白質(zhì)會經(jīng)歷對其活性可能有重大影響的化學修飾，基因組本身不足以提供有關的信息?；蚪M只是提供了理論預期的可能性，信使rna也只提供了更接近現(xiàn)實的可能性，只有蛋白質(zhì)組才能準確告訴細胞內(nèi)正在發(fā)生的事件。 蛋白質(zhì)組（在特定時間和空間一個細胞內(nèi)全部的蛋白質(zhì)種類、數(shù)量及其變化情況）的研究比基因組復雜。第一，蛋白質(zhì)組的變數(shù)多，隨不同個體、不同組織和年齡而變化，基因可能只有幾萬，而相應的蛋白質(zhì)可能多達12億，即使是關鍵蛋白質(zhì)（如與疾病和發(fā)育有關的蛋白質(zhì)）也不少；第二，解析蛋白質(zhì)的結構和功能比基因組序列測定要復雜得多，需要特定的儀器和技術；第三，研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間的相互作用的任務更加艱巨。 蛋白質(zhì)組學研究開發(fā)方興未艾，競爭日趨白熱化。這是因為該領域的研究具有重大意義；研究開發(fā)難度遠非基因組序列測定所能比擬；競爭對手的水平相差不大，幾乎都或多或少依賴同一笨方法2d電泳。目前沒有一個公司能夠像當年基因組測序時的celera一樣占據(jù)壟斷地位，每個新入者都可能有很大的發(fā)展空間，競爭也十分激烈。國外幾乎每個大的制藥公司包括羅氏等都有其蛋白質(zhì)組研究計劃，小公司也厲兵秣馬，準備從股市圈錢擴展研究。除了早已進入該領域的公司外，原先定位在基因組研究的公司也雄心勃勃地大舉進軍該市場。celera公司及其母公司pe也再度合作，希望以其特有的設備優(yōu)勢在蛋白質(zhì)組領域大展身手。celera準備用2000年9月從股市籌集的約10億美元添置100臺機器，包括正在開發(fā)的整合了激光分子掃描儀（laserbased molecular scanner）、高速質(zhì)譜、同位素標記蛋白質(zhì)準確定量方法的質(zhì)譜儀和蛋白質(zhì)分離裝置，使解析蛋白質(zhì)結構的速率從現(xiàn)在的每小時3萬個提高到100萬個，這些價值10億美元的超級電腦，至少能夠加快10倍速度處理滾滾而來的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)。incyte pharmaceiuticals公司也籌集了6億多美元，同oxford glycosciences合作，將后者提供的正常和疾病狀態(tài)的蛋白質(zhì)譜整合進其數(shù)據(jù)庫，充當信息掮客，賣給藥業(yè)公司。獲得有關數(shù)據(jù)庫的公司可以在信息方面明顯領先于競爭對手。其他公司也在利用抗原抗體免疫學方法制造所有蛋白質(zhì)的抗體，然后利用抗體從樣品中釣取靶蛋白和與它相互作用的蛋白質(zhì)，構建細胞內(nèi)特定生物化學途徑中相互作用的蛋白質(zhì)之間的數(shù)據(jù)庫。該數(shù)據(jù)庫對于希望開發(fā)阻斷特定代謝途徑的關節(jié)點的公司具有很大的吸引力。 1980年以后，新藥開發(fā)從以化學合成為主向生物學時代轉變，特別是在人類基因組計劃即將完成之時，利用大規(guī)模基因組研究方法和成果，為臨床用藥的高效性、針對性和安全性及新藥開發(fā)、評價提供了新的模式，這就是最近幾年提出的“藥物基因組學”。在大部分基因已測得其表達之后，為新藥研究提供了更多的靶標，利用遺傳標記及高通量篩選方法，使成本大幅度降低，加速新藥上市。 但“藥物基因組學”存在幾點致命的缺陷。由于核酸結構多數(shù)是同源的，聯(lián)系著許多正常功能，因而作用于DNA的藥物，大多數(shù)選擇性差，毒性大，有嚴重的細胞毒性；其次是疾病的表征是在蛋白質(zhì)上，許多疾病如癌癥、心血管疾病等是多種基因共同作用的結果，因而很難找到關鍵的基因。由于上述原因而約束了新藥開發(fā)的速度，僅憑“藥物基因組學”這只單腳圓規(guī)，很難繪出完美的圓圈。因此必須回到蛋白質(zhì)的研究上，才能真正在功能結構上闡明生命活動的實質(zhì)和進行新藥開發(fā)，故提出“蛋白質(zhì)組學”的新概念。 人體內(nèi)的每一細胞是由一萬余個不同濃度、不同類型蛋白質(zhì)的有機組合，不同蛋白質(zhì)的組合就構成不同細胞的功能，如肝細胞、肺細胞等。要想把細胞內(nèi)部這些功能和信息全部展現(xiàn)出來，惟一的方法是利用蛋白質(zhì)組學技術，通過二維聚丙烯酰胺凝膠電泳，結果得到一張擁有千余個蛋白質(zhì)點的“繁星圖”，利用計算機分析、質(zhì)譜和氨基酸分析鑒定，將此圖變成開發(fā)新藥的“探寶圖”。 20世紀的新藥研究集中在作用于細胞膜上的酶靶和受體靶，以信息傳遞或阻斷為目標，發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)目前臨床上常用的藥物，如-受體阻斷劑、ACE抑制劑等。借助于蛋白質(zhì)組學的相關技術，可了解其內(nèi)部的作用與運轉機制，成為藥物發(fā)現(xiàn)的“路標”。在藥物發(fā)現(xiàn)階段，大量合成有機化合物和分離獲得的天然有效成分，利用自動篩選，發(fā)現(xiàn)具有進一步開發(fā)價值的化合物，從而縮短新藥發(fā)現(xiàn)周期。還可以通過疾病發(fā)生不同時期蛋白質(zhì)的變化進行分析。發(fā)現(xiàn)疾病不同時期蛋白質(zhì)標志物，不僅對發(fā)現(xiàn)新藥有指導意義，而且可形成未來診斷學和治療學的理論基礎。 目前抗癌藥均具有較嚴重的毒副反應和耐藥性，如果研究中有毒副反應和耐藥的蛋白質(zhì)表達，就可以以此蛋白質(zhì)作為靶點，設計避免毒副反應和耐藥的新藥?？股氐哪退幤毡榇嬖冢壳靶滤庨_發(fā)的速度往往落后于微生物產(chǎn)生耐藥的速度，而利用蛋白質(zhì)組學可了解微生物哪些蛋白質(zhì)對抗生素產(chǎn)生耐藥，根據(jù)其改變情況而設計靶標的新藥。 蛋白質(zhì)組學最令人注目的是研究和開發(fā)抗體藥物?？贵w是抵抗病原體的主要防御體系，他們是由免疫系統(tǒng)自主產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，每一個抗體都具有特異性地識別作為抗原靶分子的特征。近百年來，傳染病的防治方法主要是利用疫苗注入或口服，使體內(nèi)產(chǎn)生抗體而發(fā)揮作用，應用此種方法已使部分傳染病如天花等疾病被消滅。利用蛋白質(zhì)組學技術和藥物基因組學技術的配合，可直接生產(chǎn)各種抗體藥物，經(jīng)注射或口服進入人體內(nèi)直接發(fā)揮防治疾病的作用，不僅對傳染病有效，對某些非傳染病也有效。 “蛋白質(zhì)組學”和“藥物基因組學”，兩者相互結合，相互補充，相互融合，將在21世紀新藥開發(fā)中占據(jù)主導地位。 載自:生物醫(yī)藥世界第三章:細胞生物學研究方法1、填空題:1、 顯微鏡的分辨率約等于光波的，通常把這一數(shù)值看作是光學顯微鏡分辨力的 。2、 HeLa細胞具有兩種中間絲，它們是 和 。3、用以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的技術有 、 。（酵母雙雜交、噬菌體展示技術）4、單克隆抗體是細胞和細胞在聚乙二醇或滅活的病毒介導下發(fā)生融合的。2、名詞解釋:1. 掃描隧道顯微鏡（scanning tunneling microscpe）2. 胞質(zhì)雜種（cybrid）3. 原位雜交（hybridization in situ）4. 激光掃描共焦顯微鏡（Laser scanning confocal microscope）5. 縮時顯微電影技術（time lapse microcinematography）6. 細胞培養(yǎng)（cell culture）7. 嵌合體（chimera）8.（1）knock out,（2）knock in（3）cell line（4）cell strain（5）cell engineering（6）cell fusicn （7）定點突變（8）流式細胞術（9）原位雜交（in situ hybridization）（10）免疫熒光技術（11）SEM(P58)（12）PCR9.細胞、細胞質(zhì)、原生質(zhì)、原生質(zhì)體、細胞器、細胞質(zhì)基質(zhì)、病毒、類病毒和朊病毒。3、選擇題:1、目前制造的單克隆抗體多為（a） 鼠人型（b） 鼠兔型（c） 人鼠型（d） 鼠鼠型2、 cDNA是指（a） 細菌環(huán)狀的DNA分子（b） 質(zhì)粒環(huán)狀的DNA分子（c） tRNA的DNA拷貝（d） mRNA的DNA拷貝3、 在雜交瘤技術中，篩選融合細胞時常選用的方法是:（a） 密度梯度離心法（b） 熒光標記的抗體和流式細胞術（c） 采用在選擇培養(yǎng)劑中不能存活的缺陷型瘤系細胞來制作融合細胞（d） 讓未融合的細胞在培養(yǎng)過程中自然死亡4、 動物的正常細胞在體外培養(yǎng)條件下的生長行為是（a） 能無限增殖（b） 在有充分營養(yǎng)條件下，能無限增殖（c） 不能無限增殖，其增殖代數(shù)與物種和供體年齡有關5、 正常細胞培養(yǎng)中除培養(yǎng)基外常需加入血清，主要是因為血清中含有（a） 大量氨基酸（b） 核酸（c） 生長因子（d） 維生素6、 不必用超薄切片、不經(jīng)染色而能觀察較厚標本的電鏡是（a） 一般透射電鏡（b） 掃描透射電鏡（c） 掃描電鏡（d） 超高壓電鏡7、 Wilson根據(jù)光學顯微鏡下所見，繪制的細胞模式圖上能見到（a） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（b） 核糖體 （c） 吞飲泡（d） 核仁8、 要探知細胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)的表達水平，可以通過（ ）實現(xiàn)（a） Southern blot（b） Nothern blot（c） Western blot（d） 原位分子雜交4、是非題:1. 原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代后即成細胞株。（ ）2. 帶有標記的特定核酸分子作探針，測定與之互補的染色體DNA區(qū)段的位置，稱為原位雜交。.（ ）3.嵌合體是指將囊胚細胞的核植入到去核受精卵內(nèi)后發(fā)育的完整個體。（ ）4. 用免疫熒光技術顯示與酶解過程有關的酶是結合在微管上的。（ ）5. 超薄切片的電子染色，可以正染也可以負染。（ ）6.在光學顯微鏡下用目鏡10，物鏡40下所攝得到的照片，其放大倍數(shù)就是1040=400。（ ）7. 亞顯微結構就是超微結構。（ ）8. 光學顯微鏡和電子顯微鏡的差別在于后者的放大倍數(shù)遠遠大于前者，所以能看到更小的細胞結構。（ ）5、問答題:1.電鏡三維重建技術的主要步驟是什么？2.闡明光學顯微鏡的成象原理。顯微鏡的分辨力有何意義？3.電子顯微鏡與光學顯微鏡的結構原理有何主要異同點？4.放射自顯影技術的基本原理及其用途。5.染色體組型制做技術包括哪幾個基本步驟？6.免疫熒光技術的原理和操作步驟如何？試與放射自顯影技術相比較。7.何為制備離心？何為分析離心？二者各有何用途？8.設計一套分離細胞核、葉綠體、線粒體的技術路線。9.細胞融合有哪幾種方法？思考引起膜融合的原理。10.DNA分子雙螺旋結構模型的基本要點是哪些？11.什么叫分子雜交技術？有何用途？12.酶在細胞代謝中的重要作用是什么？它為什么具有化學和遺傳雙重調(diào)節(jié)作用？13.多酶體系分哪幾類？各有何作用特點？理解多酶體系同細胞代謝活動高效性的關系。14.什么叫基因擴增？15.研究一個基因的功能的方法有哪些？16.請舉出研究基因表達的五種實驗方法。（中科院微生物所1999年分子生物學考研試題）17.如何制備涂片（Smears）、壓片（Squashes）、介離標本（Mecerations）、和懸滴標本（Hanging drop preparations），并例舉其在細胞生物學中的應用。18.蘭花發(fā)表于:2003年1月28日12:31:已知一個疾病基因的部分序列,如何克隆到該全長基因?RE: 1.RACE:3-RACE或5-RACE,看你缺哪部分了,原理我在置頂貼里已轉發(fā)過了;2.到核DNA文庫中找:用你的部分序列與文庫中的GENES進行分子雜交,當然是用SSDNA或RNA/DNA,還涉及到PROBE,挑出陽性片段,參見:靜國忠 基因工程及其分子生物學基礎 北大3.反向PCR:見吳乃虎 基因工程原理(上) 科學出版社 1998,107-109.肯定還有更好的方法.具體操作可到分子CLONE3等實驗書上去找吧.對于你的第一種方法,有同學答他只答了SMART技術,不知道可不可以?對于你第2種方法,我請問了,到cDNA文庫中篩選出來的基因就一定是全長的基因嗎?我不熟悉SMART技術,RACE就是為了克隆兩端的SEQUENCE.我說的核DNA文庫包括INTRON.應是全長的GENE.因為cDNA或核DNA文庫是從新鮮的表達目的GENES的TISSUE和CELL中分離出的總RNA或mRNA反轉錄而成.一般并不切開CDNA而是采用接頭連接的辦法CLONE入載體,cDNA文庫也可.還可用電子克隆.流式細胞術是什么方法？RE: 流式細胞術(Flow Cytometry,簡稱FCM)是20世紀70年代發(fā)展起來的一種對細胞的物理和化學性質(zhì),如大小,內(nèi)部結構,DNA,RNA,PROTEIN,抗原等進行快速測量并可分類收集的高技術.其原理是懸浮在液體中的分散細胞,一個一個地依次通過測量區(qū),當每個細胞通過測量區(qū)時產(chǎn)生電信號,這些電信號可代表熒光,光散射,光吸收或細胞的阻抗等,這些信號可以被測量,存儲,顯視,于是細胞的一系列重要的物理特性和化學特征就被快速地,大量地測定.參見:宋平根 李素文 主編 流式細胞術的原理和應用 北師大出版社 199220. ChaoYue主題:/faint,請教一個答案。(分子雜交)有一個問題，我不知道如何回答了。DNA/RNA、DNA/DNA雜交的分子基礎是_和_.RE: A/U,G/C堿基配對 A/T,G/C堿基配對 . 21. zhutou什么是RT-PCRxianghaimei:RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. 便便:反轉錄PCR技術先得到RNA，反轉錄成DNA，再PCR22. feisays主題:敲除基因？ 請問，什么是敲除基因？是用來做什么的？RE:先用基因重組技術在目的基因FRAGMENTS中插入一外源GENE作為篩選標志基因,并使目的GENE失活.再將此滅活GENE轉入小鼠胚胎干細胞中,通過細胞內(nèi)的基因同源重組使滅活的GENE取代染色體上原有的目的GENE.這就是基因敲除,常用于研究基因表達和基因功能.什么是自殺性抑制和什么是順式作用和反式作用？有什么意義？這兩個問題任何一本生化書上很易找到,自己看.23.liulang1979主題:兩個關于病毒的問題1.已知一植物病毒,如何確定其為RNA或DNA 病毒?（Rnase/Dnase,看誰失去活性）2.如何使病毒中某一特定基因從基因組中缺失?（Gene knock ont）3.如何區(qū)分侵染性核酸和非侵染性核酸?24.花剌主題:福爾根染色什么機理保證對DNA特異性？ 不對RNA幾個細胞化學問題 （染色的問題）福爾根染色什么機理保證對DNA特異性？ 不對RNA.細胞壁用什么特異染色， 染色體用什么，脂類用什么？ biosphinx翟的書上有啊，把RNA先酸水解了，再染色 蘇丹紅-；蘇丹黑-磷脂，膽固醇；四氧化鋨-不飽和脂肪酸。細胞壁不是有格蘭氏嗎？染色體-姬母薩染色。yhqsdu附耳根的反應是因為水解產(chǎn)生的醛基團，和無色品紅反應，產(chǎn)生有發(fā)光集團的物質(zhì)。估計是把?；ㄘ菟嵝詴粫估w維素的細胞壁部分水解暴露拳擊從而顯色.25.blueki主題:體細胞突變的正負選擇法一道考試題,大家?guī)兔匆幌?什么是體細胞突變體篩選的正負選擇法,并舉例說明.第四章:細胞與細胞表面1、名詞解釋:1、糖萼（glycocalyx）2、磷脂轉換蛋白（phospholipid exchange proteins）2、選擇題:1、 ABO血型抗原的決定簇是（a） 糖脂類（b） 糖類（c） 脂類（d） 血型糖蛋白2、 膜蛋白高度糖基化的是（a） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜（b） 質(zhì)膜（c） 高爾基體膜（d） 溶酶體膜3、 參與纖毛運動的纖維蛋白是（a） 驅動蛋白（kinesin）（b） 動力蛋白（dyneir）（c） tau蛋白（d） 微管結合蛋白2（MAP2）3、問答題:1、物膜的基本結構特征是什么？這些特征與它的生理功能有什么聯(lián)系？2、何謂膜內(nèi)在蛋白？膜內(nèi)在蛋白以什么方式與膜脂相結合？3、流體鑲嵌模型的內(nèi)容是什么？4、細胞表面有哪幾種常見的特化結構？（填空）5、細胞連接有哪幾種類型（填空）6、外基質(zhì)的組成、分子結構及生物學功能是什么？7、物細胞鞭毛與細菌鞭毛的區(qū)別是什么？8、植物細胞壁與細菌細胞壁有什么區(qū)別。（盡量簡要）9、細胞的流動性如何用實驗證明？請舉兩例。提示1、成帽與成斑現(xiàn)象，P82；（2）光脫色恢復技術。10、簡述脂筏模型P74-P7511、什么是生物膜的不對稱性？12、生物膜的膜脂主要包括哪些成分？（P76）13、生物膜中的脂質(zhì)的生物學功能是什么？（中科院上海生化所1999年生物化學（A）考研試題）答:（1）生物膜中的磷脂構成生物膜的主要成分；（2）脂質(zhì)維持生物膜的流動性，以使其行使復雜的生物功能；（3）生物膜的膽固醇（類固醇）對膜的流動性有很明顯的影響；（4）生物膜中的某些脂質(zhì)在信號傳遞過程中有重要意義，比如糖脂在免疫應答中，DG/IP3作為第二信使也產(chǎn)生了膜脂質(zhì)。14、 構的流動鑲嵌模型的要點是什么？ 15、細胞的吞排作用和細胞內(nèi)的膜泡運輸?shù)幕具^程如何？16、說明籠形蛋白（clathrin）在膜泡運輸?shù)幕具^程如何？17、物質(zhì)穿膜運輸有哪些方式？比較其異同點。18、解釋運輸?shù)鞍?、隧道蛋白、載體蛋白、透性酶、受體、配體、穿胞運輸?shù)暮狻?9、以Na+-K+泵為例，說明“泵”在物質(zhì)穿膜運輸中的作用原理及其在細胞代謝中的意義。20、細胞表面包括哪幾種結構？動物細胞外被有哪些功能？21、細胞連接有哪些類型？各有何功能？22、比較動物、植物和細菌的細胞質(zhì)膜外結構的異同點。23、liuguangming主題:跨膜區(qū)域發(fā)表于:2002年11月10日10:45某跨膜蛋白的氨基酸序列已被測定,發(fā)現(xiàn)它除具有N-端信號肽之外,還存在14個疏水性肽段,其中7段各含25個氨基酸殘基,3段各含16個氨基酸殘基,4段各含10個氨基酸殘基.經(jīng)過上述分析可知,此肽鏈將來能形成_跨膜區(qū)域. 我認為是四段因為（跨膜區(qū)域a螺旋20個氨基酸，B折疊10-12個氨基酸），這地方符合的只有10個氨基酸的肽段，但其余一些肽段又形成什么結構呢RE: 14個疏水性肽段中:跨膜區(qū)域a螺旋20-30個氨基酸，B折疊10-14個氨基酸,數(shù)拒來自:趙南明,周海夢 主編 生物物理學 高教出版社 2000,因此可能形成7段a-Helix,四段B-sheet strand.3段各含16個氨基酸殘基可能形成3段B-sheet strand剩下的2個AA REDUES可留在膜外,這樣也可保持E-MIN,不過是諸害取其輕.實際情況可能更為復雜一些比如暴露在親水環(huán)境下的AA REDUES可能接上了其他的側鏈,也可能成為外周PROTEIN的錨定位點-疏水相互作用.我順便回答另外三個問題(我找不到原貼了):1.用PCR是否可對DNA測序?當然可以,原理與SANGER加減法一樣,不過是酶SYSTEM有區(qū)別.2.分子病是不是包括構象病?分子病從其原始定義來看,是指由于GENES 突變引起的可遺傳的病征,但是由于構象病的發(fā)現(xiàn)使這一概念發(fā)生動搖,比如克-雅氏綜合征瘋牛病以及羊騷癢征等,皆是由于PROTEINS發(fā)生翻譯后加工而后形成了新的構象,并導致淀粉樣沉淀,引發(fā)病理后果.我請教了北大生科院的三位教授,其中兩位是博導,兩位博導皆認為分子病包括構象病并不限于遺傳病,另一位教授認為分子病可能還是特指遺傳病,而構象病應單歸為一類.我個人同意兩位博導的意見.3.Eastern Blotting是什么技術?學術界有人把Dot blot稱為Eastern blot,這樣東南西北四種雜交類型就成了一個完整的體系，也可能是因為有了南西北而不能沒有東的緣故吧，如此說來，將Dot blot稱為Eastern blot就有牽強之嫌。鑒定DNA的另一種雜交Dot blot。這是與Southern blot完全不同的一種雜交方法，雜交的受體是完整的Genome DNA，Probe可以是用DNA或RNA。DNA不經(jīng)消化和電泳直接點樣在硝酸纖維膜上與探針進行雜交。24、liulang1979主題:請教陳斑竹. 生物膜在特殊的生理條件下，可能出現(xiàn)什么結構？RE: 六角相和立方相結構.參見:趙南明 周海夢 主編 生物物理學 高教出版社 2000.25、ebblood主題:請教斑竹幾個問題1. 鞘磷脂和酸性磷酸酶的合成部位是細胞質(zhì)基質(zhì)中還在在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中？2. abo血型到底由什么決定。，同一本書上一會寫糖脂一會寫糖蛋白3. 真核細胞中3大活性物質(zhì)是什么4、greenmoon主題:想問一下關于橋粒的問題橋粒是不是就是“跨膜連接蛋白”?和中間纖維連接的粘著斑（是這么叫的吧）是不是就是:附著蛋白“？第四章:細胞與細胞表面1、名詞解釋:1、糖萼（glycocalyx）2、磷脂轉換蛋白（phospholipid exchange proteins）2、選擇題:1、 ABO血型抗原的決定簇是（a） 糖脂類（b） 糖類（c） 脂類（d） 血型糖蛋白2、 膜蛋白高度糖基化的是（a） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜（b） 質(zhì)膜（c） 高爾基體膜（d） 溶酶體膜3、 參與纖毛運動的纖維蛋白是（a） 驅動蛋白（kinesin）（b） 動力蛋白（dyneir）（c） tau蛋白（d） 微管結合蛋白2（MAP2）3、問答題:1、物膜的基本結構特征是什么？這些特征與它的生理功能有什么聯(lián)系？2、何謂膜內(nèi)在蛋白？膜內(nèi)在蛋白以什么方式與膜脂相結合？3、流體鑲嵌模型的內(nèi)容是什么？4、細胞表面有哪幾種常見的特化結構？（填空）5、細胞連接有哪幾種類型（填空）6、外基質(zhì)的組成、分子結構及生物學功能是什么？7、物細胞鞭毛與細菌鞭毛的區(qū)別是什么？8、植物細胞壁與細菌細胞壁有什么區(qū)別。（盡量簡要）9、細胞的流動性如何用實驗證明？請舉兩例。提示1、成帽與成斑現(xiàn)象，P82；（2）光脫色恢復技術。10、簡述脂筏模型P74-P7511、什么是生物膜的不對稱性？12、生物膜的膜脂主要包括哪些成分？（P76）13、生物膜中的脂質(zhì)的生物學功能是什么？（中科院上海生化所1999年生物化學（A）考研試題）答:（1）生物膜中的磷脂構成生物膜的主要成分；（2）脂質(zhì)維持生物膜的流動性，以使其行使復雜的生物功能；（3）生物膜的膽固醇（類固醇）對膜的流動性有很明顯的影響；（4）生物膜中的某些脂質(zhì)在信號傳遞過程中有重要意義，比如糖脂在免疫應答中，DG/IP3作為第二信使也產(chǎn)生了膜脂質(zhì)。14、 構的流動鑲嵌模型的要點是什么？ 15、細胞的吞排作用和細胞內(nèi)的膜泡運輸?shù)幕具^程如何？16、說明籠形蛋白（clathrin）在膜泡運輸?shù)幕具^程如何？17、物質(zhì)穿膜運輸有哪些方式？比較其異同點。18、解釋運輸?shù)鞍?、隧道蛋白、載體蛋白、透性酶、受體、配體、穿胞運輸?shù)暮狻?9、以Na+-K+泵為例，說明“泵”在物質(zhì)穿膜運輸中的作用原理及其在細胞代謝中的意義。20、細胞表面包括哪幾種結構？動物細胞外被有哪些功能？21、細胞連接有哪些類型？各有何功能？22、比較動物、植物和細菌的細胞質(zhì)膜外結構的異同點。23、liuguangming主題:跨膜區(qū)域發(fā)表于:2002年11月10日10:45某跨膜蛋白的氨基酸序列已被測定,發(fā)現(xiàn)它除具有N-端信號肽之外,還存在14個疏水性肽段,其中7段各含25個氨基酸殘基,3段各含16個氨基酸殘基,4段各含10個氨基酸殘基.經(jīng)過上述分析可知,此肽鏈將來能形成_跨膜區(qū)域. 我認為是四段因為（跨膜區(qū)域a螺旋20個氨基酸，B折疊10-12個氨基酸），這地方符合的只有10個氨基酸的肽段，但其余一些肽段又形成什么結構呢RE: 14個疏水性肽段中:跨膜區(qū)域a螺旋20-30個氨基酸，B折疊10-14個氨基酸,數(shù)拒來自:趙南明,周海夢 主編 生物物理學 高教出版社 2000,因此可能形成7段a-Helix,四段B-sheet strand.3段各含16個氨基酸殘基可能形成3段B-sheet strand剩下的2個AA REDUES可留在膜外,這樣也可保持E-MIN,不過是諸害取其輕.實際情況可能更為復雜一些比如暴露在親水環(huán)境下的AA REDUES可能接上了其他的側鏈,也可能成為外周PROTEIN的錨定位點-疏水相互作用.我順便回答另外三個問題(我找不到原貼了):1.用PCR是否可對DNA測序?當然可以,原理與SANGER加減法一樣,不過是酶SYSTEM有區(qū)別.2.分子病是不是包括構象病?分子病從其原始定義來看,是指由于GENES 突變引起的可遺傳的病征,但是由于構象病的發(fā)現(xiàn)使這一概念發(fā)生動搖,比如克-雅氏綜合征瘋牛病以及羊騷癢征等,皆是由于PROTEINS發(fā)生翻譯后加工而后形成了新的構象,并導致淀粉樣沉淀,引發(fā)病理后果.我請教了北大生科院的三位教授,其中兩位是博導,兩位博導皆認為分子病包括構象病并不限于遺傳病,另一位教授認為分子病可能還是特指遺傳病,而構象病應單歸為一類.我個人同意兩位博導的意見.3.Eastern Blotting是什么技術?學術界有人把Dot blot稱為Eastern blot,這樣東南西北四種雜交類型就成了一個完整的體系，也可能是因為有了南西北而不能沒有東的緣故吧，如此說來，將Dot blot稱為Eastern blot就有牽強之嫌。鑒定DNA的另一種雜交Dot blot。這是與Southern blot完全不同的一種雜交方法，雜交的受體是完整的Genome DNA，Probe可以是用DNA或RNA。DNA不經(jīng)消化和電泳直接點樣在硝酸纖維膜上與探針進行雜交。24、liulang1979主題:請教陳斑竹. 生物膜在特殊的生理條件下，可能出現(xiàn)什么結構？RE: 六角相和立方相結構.參見:趙南明 周海夢 主編 生物物理學 高教出版社 2000.25、ebblood主題:請教斑竹幾個問題1. 鞘磷脂和酸性磷酸酶的合成部位是細胞質(zhì)基質(zhì)中還在在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中？2. abo血型到底由什么決定。，同一本書上一會寫糖脂一會寫糖蛋白3. 真核細胞中3大活性物質(zhì)是什么4、greenmoon主題:想問一下關于橋粒的問題橋粒是不是就是“跨膜連接蛋白”?和中間纖維連接的粘著斑（是這么叫的吧）是不是就是:附著蛋白“？第五章:物質(zhì)的跨膜運輸與信號傳遞1、填空題:1、 大分子的內(nèi)吞往往是首先同質(zhì)膜上的受體相結合，然后質(zhì)膜內(nèi)陷成，繼之形成 ，這種內(nèi)吞方式稱為受體介導內(nèi)吞。2、 細胞通訊信號有四種，內(nèi)分泌信號、旁分泌信號、 和 。2、名詞解釋:1、受體介導內(nèi)吞（receptr-mediated endocytosis）2、信號對答（crosstalking）3、受體（receptor）4、信號傳導（signal transduction）3、選擇題:1、 植物細胞間有獨特的連接結構，稱為胞間連絲，其結構（a） 類似動物細胞的橋粒（b） 類似間隙連接（c） 類似緊密連接（d） 不是膜結構2、 所謂被動運輸是通過（a） 內(nèi)吞或外排（b） 受介導體的內(nèi)吞作用（c） 自由擴散或異化擴散（d） 泵，例如鈣泵3、 cAMP在細胞信號通路中是（a） 信號分子（b） 第一信使（c） 第二信使（d） 第三信使4、 與視覺有關的第二信使分子是（a） 花生四烯酸（b） cAMP（c） Ca2+（d） cGMP5、 頡氨酶素是一種可動離子載體，運輸（a） Na+（b） K+（c） Ca+（d） Mg+6、 佛波酯的受體分子是（a） PTK（b） PKC（c） PLC（d） PKA7、 在下列細胞物質(zhì)運輸方式中，不需能量而屬于被動運輸?shù)氖牵╝） 內(nèi)吞（b） 外排（c） 載體蛋白運輸（d） 鈉鉀泵8、 下列分子中不能通過無蛋白脂雙層膜的是（a） 二氧化碳（b） 乙醇（c） 尿素（d） 葡萄糖9、 在胞吞（endocytosis）時（a） 細胞膜不被吞入，只有外界物質(zhì)被吞入（b） 細胞膜隨之一起吞入，由于胞吐作用吞入的膜和吞出的膜平衡，細胞面積不縮小（c） 細胞膜隨之一起吞入，細胞面積縮小（d） 細胞膜隨之一起吞入，但很快回到細胞表面，供下次胞吞時再利用10、 細胞間通訊是通過（a） 分泌化學物質(zhì)（b） 與質(zhì)膜相結合的信號分子（c） 間隙連接（d） 三種都包括在內(nèi)11