白血病與核型分析PPT課件.ppt

虞其紅 1 遺傳性血液病 血液與遺傳的關(guān)系是十分密切的 目前發(fā)現(xiàn)的遺傳性血液病已經(jīng)在百種以上 造血和淋巴組織系腫瘤中幾乎都是屬于染色體病和體細(xì)胞遺傳病 在體細(xì)胞水平上遺傳物質(zhì)的異常能擾亂細(xì)胞的正常生長(zhǎng)發(fā)育及分化調(diào)節(jié) 從而誘發(fā)腫瘤 在白血病中 多數(shù)是由染色體易位導(dǎo)致原癌基因的重排 原癌基因重排可以導(dǎo)致癌基因的過(guò)量表達(dá)而致病 也可由于原癌基因與易位處的某一基因形成融合性基因而發(fā)生白血病 2 發(fā)病情況我國(guó)白血病發(fā)病率發(fā)病率 1 4 10萬(wàn) 低于歐美 ANLL1 62 10萬(wàn) ALL0 69 10萬(wàn) CML0 36 10萬(wàn) CLL0 05 10萬(wàn) 急性比慢性多 成人急非淋多見 兒童急淋多見 歐美慢淋多見 易發(fā)人群 兒童及35歲以下成人 死亡率 惡性腫瘤中6位 男性 8位 女性 3 白血病分類分形 據(jù)白血病細(xì)胞的成熟程度和自然病程 將白血病分為急性白血病 AL 和慢性白血病 CL 兩大類 根據(jù)主要受累的細(xì)胞系列將 AL分為 急性淋巴細(xì)胞白血病 ALL 和急性非淋巴細(xì)胞白血病 ANLL 或急性髓性白血病 AML CL分為 慢性粒細(xì)胞白血病 CML 慢性淋巴細(xì)胞白血病 CML 及少見類型的白血病 如毛細(xì)胞白血病 HCL 幼淋巴細(xì)胞白血病 pLL 等 4 隨著血液病在發(fā)病機(jī)理 診斷方法以及治療手段等方面的進(jìn)展 急性白血病的診斷技術(shù)也有很大發(fā)展 急性白血病的分型基本上分三個(gè)階段 5 急性白血病分型的三個(gè)發(fā)展階段 FAB分型1976 M MIC分型1986 MIC WHO分型2001 MICM 6 70年代 1976 Benne等 法 美 英7位學(xué)者提出FAB分型 其后多次加以修改補(bǔ)充 70年代中用單克隆抗體發(fā)現(xiàn)造血細(xì)胞表面抗原 對(duì)AL進(jìn)行免疫表型分析 Chromosome分析90 AL有核型異常 80年代提出MIC分型 M morphology I immunology C Cytogenetics 近年MICM MIC 分子生物學(xué) 分型 7 急性白血病 AL 急性白血病是 造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病 發(fā)病的骨髓中異常的原始細(xì)胞及幼稚細(xì)胞 白血病細(xì)胞 大量增殖并廣泛浸潤(rùn)肝 脾 淋巴結(jié)等各種臟器 抑制正常造血 主要表現(xiàn)為貧血 出血 感染和浸潤(rùn)等征象 分類 國(guó)際常用的法美英 FAB 分類將AL分為ALL及ANLL 或急性隨性隨性白血病AML 兩大類 這兩大類再分成多種亞型 一 急性淋巴細(xì)胞白血病 ALL 分型 FAB分型 ALL L1原始淋巴細(xì)胞以胞體小 直徑 12 m 而規(guī)則為特點(diǎn) ALL L2原始淋巴細(xì)胞則以大小不一 直徑 12 m 和胞核形狀不規(guī)則見長(zhǎng) ALL L3原始和幼淋巴細(xì)胞以大細(xì)胞為主 大小較一致 細(xì)胞內(nèi)有明顯空泡 胞漿嗜堿性 染色深 因與EB病毒感染有關(guān)故又稱Burkitt細(xì)胞 在免疫表型上則為成熟型B細(xì)胞 8 另外 由于形態(tài)學(xué)分型為基礎(chǔ)的FAB分型具有一定的局限性 如 T B淋巴細(xì)胞不能區(qū)分 沒(méi)有沒(méi)有提供染色體異常和基因重排等對(duì)發(fā)病機(jī)制 治療選擇和對(duì)預(yù)后判斷重要意義的信息 因此除形態(tài)學(xué)外還應(yīng)做免疫學(xué)分型 急性淋巴細(xì)胞白血病 的MIC分型 B系1 早前B細(xì)胞型ALL 早前B ALL 2 前B細(xì)胞型 前B ALL 3 普通型ALL 4 成熟 細(xì)胞型ALL B ALL T系早前T細(xì)胞型ALL T ALL 成熟T細(xì)胞型ALL T ALL 9 急性髓性白血病 AML 的FAB分型 AML共分8型如下 M0急性髓細(xì)胞白血病微分化型M1急性粒細(xì)胞白血病未分化型M2急性粒細(xì)胞白血病部分分化型M3急性早幼粒細(xì)胞白血病 APL M4急性粒單核細(xì)胞白血病 AMML M4Eo除上述M4型的各特點(diǎn)外 嗜酸性粒細(xì)胞在NEC 5 M5急性單核細(xì)胞白血病 AMoL M6紅白血病 EL M7急性巨核細(xì)胞白血病 10 白血病染色體畸變與非隨機(jī)性 一 集中傾向性從理論上說(shuō) 人類的24種染色體 常染色體加X(jué)和Y性染色體 以均等機(jī)會(huì)參與腫瘤的畸變 但現(xiàn)實(shí)的研究結(jié)果并非如此 腫瘤染色體畸變常是涉及其中部分的染色體 畸變分布不均 且?guī)в心撤N集中傾向 聚集現(xiàn)象 和非隨機(jī)性Mitelman曾對(duì)1266例一白血病為主的15種腫瘤進(jìn)行染色體畸變分析 可見腫瘤染色體畸變集中在第1 3 5 7 8 9 14 17 20 21 和22號(hào)染色體中 而第1 8和14號(hào)染色體則涉及7 8種腫瘤 在腫瘤染色體重排的研究中 惡性腫瘤染色體重排分布和良性腫瘤染色體畸變均是非隨機(jī)性的 11 二 地域分布研究地理分布的非隨機(jī)性 也可發(fā)現(xiàn)腫瘤染色體畸變發(fā)生率存在地區(qū)異質(zhì)性 CML中 歐洲和日本 17的頻率高于澳大利亞與美國(guó) 日本 19的頻率是歐美的3倍 AML中 美國(guó) 5和 7的頻率比澳大利亞高2倍 而在日本則為罕見 淋巴瘤14q 發(fā)生的頻率 在歐洲為47 美國(guó)為83 CLL的t 8 14 在歐洲為67 在美國(guó)則未見 我國(guó)及東南亞較少見 三 年齡分布11q23重排是嬰兒AML患者最常見的細(xì)胞遺傳學(xué)異常 而在成人中的發(fā)病率僅為5 t 1 22 p13p13 僅限于兒童M7 尤其是嬰兒患者 5 7 i 17q 完整的第8 11 13和14號(hào)染色體的三體 以及復(fù)雜核型均多見于年齡較大的患者 t 15 17 t 8 21 t 6 9 t 6 16 t 3 5 等異常核型則常見于年輕患者 12 四 標(biāo)記染色體分布在腫瘤染色體的檢測(cè)中 標(biāo)記染色體的分布也是非隨機(jī)的 5q 常見于難治性貧血和治療相關(guān)AML和MDS6q 在ALL中的發(fā)生率為20 在淋巴瘤中的發(fā)生率為12 在CLL CGL AML及其他惡性腫瘤中少見 7q 常見于所有的白血病 最常見的為AML14q 主要見于淋巴系腫瘤 少見于其他惡性腫瘤 t 8 14 在B系白血病和淋巴瘤中是特異的 其斷裂位點(diǎn)是專一的 i 17q 為CML急性期的特征 少見于其他腫瘤 20q 主要見于真紅細(xì)胞增多癥 22q 則廣泛存在于白血病中 13 骨髓染色體核型分析 腫瘤有超過(guò)600種染色體結(jié)構(gòu)異常的核型 絕大多數(shù)血液腫瘤都有非隨機(jī)的染色體畸變 血液病 急性非淋巴細(xì)胞白血病 急性淋巴細(xì)胞白血病 慢性粒細(xì)胞白血病 骨髓增生異常綜合征 63 淋巴瘤 10 實(shí)體腫瘤 27 14 1 由于腫瘤細(xì)胞在體外的增殖能力較差 中期細(xì)胞數(shù)量少 2 腫瘤細(xì)胞的染色體核型形態(tài)較差 難分析 3 細(xì)胞毒性藥物的治療也會(huì)影響骨髓細(xì)胞培養(yǎng)成功率 最好是治療前的標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng) MPD中的骨髓抑制治療以及MDS中的支持治療也往往干擾細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果 4 不同培養(yǎng)方式 檢出率不同 如t 15 17 類型的病例 需要進(jìn)行24 48小時(shí)的培養(yǎng)才能得到結(jié)果 技術(shù)難點(diǎn) 15 骨髓細(xì)胞染色體分析流程圖 骨髓細(xì)胞 骨髓培養(yǎng)基 24h 秋水仙胺5h 0 5h 16 染色體制備影響因素分析 1 培養(yǎng)基pH 濃度 小牛血清量及培養(yǎng)箱溫度的恒定是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵 2 適量秋水仙素 適宜的處理時(shí)機(jī)和時(shí)間 是獲得良好 足夠分裂相的條件 分裂相的多少和染色體形態(tài)及帶型處理良好與否均受其影響 3 低滲處理是獲得分散良好的分裂相的關(guān)鍵步驟 低滲過(guò)度或不足都會(huì)造成染色體形態(tài)不良的結(jié)果 在低滲處理時(shí)期細(xì)胞十分嬌嫩 并且表面發(fā)黏 低滲細(xì)胞混勻時(shí) 吹打要適宜 避免細(xì)胞破碎及粘團(tuán) 另外不要將細(xì)胞吸到吸管上部及離心管上部 避免細(xì)胞丟失 17 4 固定技術(shù)是制備良好分散的染色體的重要步驟 若染色體分散不良 可適當(dāng)加大冰乙酸含量 其同時(shí)有改善由于低滲處理不夠或固定不充分所造成的缺陷 但過(guò)量會(huì)造成染色體形態(tài)變化和影響分帶結(jié)果 染色體形態(tài)不良與加固定液速度有關(guān) 加第一次固定液快或過(guò)快 可造成飄帶樣染色體 5 固定液每次使用必須新鮮配制 否則將會(huì)形成酯類 從而影響固定效果 6 滴片是染色體制備中影響染色體形態(tài)的關(guān)鍵一步 首先是載玻片要非常干凈 否則會(huì)影響染色體的分散和分帶效果 其次是滴片的距離 制片的方式都會(huì)影響染色體分期效果 烤片的溫度 時(shí)間與染色體形態(tài)和分帶有關(guān) 不宜溫度過(guò)高和烤片時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 18 常用染色體帶紋顯示方法 R banding G banding G Giemsa 帶 Giemsa顯帶 經(jīng)典方式 常用于臨床R Reverse 帶 與G顯帶帶紋相反 可觀察染色體的末端缺失 19 染色體閱片的七大影響因素 1 染色體分裂指數(shù)低2 染色體形態(tài)不理想3 染色體形態(tài)偏長(zhǎng) 4 染色體形態(tài)偏短5 染色體分帶不良6 染色背景不良7 培養(yǎng)失敗 20 白血病類型的細(xì)胞遺傳學(xué)表現(xiàn) 由于絕大多數(shù)白血病患者都有非隨機(jī)的染色體畸變 它們對(duì)于白血病的診斷分型 預(yù)后估計(jì) 治療方案的選擇乃至發(fā)病機(jī)制的研究都有極為重要的價(jià)值 盡管染色體改變的種類繁多 但具有四種基本特征 獲得性 克隆性 原發(fā)性和繼發(fā)性 平衡性和不平衡性 21 獲得性 獲得性 白血病染色體畸變?yōu)楹筇飓@得而非先天遺傳 許多研究表明 如同卵雙生子之一患CGL ph染色體不見于其健康的孿生同胞 白血病患者所生子女通常缺乏同樣的白血病和核型異常的證據(jù) 白血病患者其染色體畸變通常不見于皮膚和結(jié)締組織 22 克隆性 克隆性 是指來(lái)自同一個(gè)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的一群白血病細(xì)胞具有相同的染色體異常 23 原發(fā)性和繼發(fā)性 原發(fā)性和繼發(fā)性 原發(fā)性畸變是指發(fā)生于疾病早期 與白血病的發(fā)生有關(guān) 和白血病的細(xì)胞學(xué) 免疫學(xué)有關(guān) 因而對(duì)白血病有分類和標(biāo)志性的意義并決定其生物學(xué)特征的一類異常 繼發(fā)性畸變 指病程中由于克隆衍化所致的異常 它雖和疾病的發(fā)生無(wú)關(guān) 但卻賦予疾病更加惡性的特征 24 平衡性和不平衡性 平衡性和不平衡性 平衡性畸變是指白血病患者的染色體異常 常表現(xiàn)為染色體的結(jié)構(gòu)重排 如相互易位或者是倒位 而無(wú)DAN含量的改變 非平衡性畸變是指染色體異常常表現(xiàn)為整條染色體或部分的增加或丟失 而有DAN含量的改變 25 26 1 染色體數(shù)目異常 1 多倍體 2 非整倍體 27 2 染色體結(jié)構(gòu)異常 1 缺失 2 插入 3 倒位 4 易位 5 重復(fù) 6 環(huán)狀染色體 7 等臂染色體 8 雙著絲粒染色體 28 29 30 31 32 33 常見結(jié)構(gòu)異常的符號(hào)及含義 34 一 慢性粒細(xì)胞白血病 CML Ph染色體 ph染色體是9和22號(hào)染色體易位后的der 22 t 9 22 q34 q11 Ph染色體見于全部的髓系細(xì)胞 一部分B系細(xì)胞和極少數(shù)的T系細(xì)胞 這表明 是多能造血干細(xì)胞突變所致的克隆性疾病 由于 號(hào)染色體長(zhǎng)臂上的斷裂點(diǎn)是變化的 因而導(dǎo)致 種不同大小的 染色體 型 最大 斷裂點(diǎn)位于 型 大 斷裂點(diǎn)位于 型 中等 斷裂點(diǎn)位于 型 最小 斷裂點(diǎn)位于 其中前兩型少見 后兩型較多見 白血病類型的細(xì)胞遺傳學(xué)表現(xiàn) 35 2 Ph易位的類型 變異易位隱匿易位 典型易位t 9 22 q34 q11 36 CMLt 9 22 q34 q11 37 CML不典型Ph易位 38 慢粒慢性期的染色體改變 46 t 9 22 t 9 22 Y 8 Ph 39 CMLt 9 22 Y 40 慢粒急變期的染色體改變及其意義 20 保持46 t 9 22 不變80 除t 9 22 外出現(xiàn)額外異常 依次為2Ph 8 i 17q 19 21等少數(shù)病例Ph染色體可和t 8 21 t 15 17 inv 16 或inv 3 同時(shí)存在額外異常比臨床血液學(xué)急變征象早出現(xiàn)2 4個(gè)月無(wú)額外異常組80 對(duì)治療有反應(yīng) MS5 7個(gè)月部分細(xì)胞有額外異常組50 對(duì)治療有反應(yīng) MS4 9個(gè)月全部細(xì)胞有額外異常組成30 對(duì)治療有反應(yīng) MS2 5個(gè)月 41 慢粒的細(xì)胞遺傳學(xué)分型 Ph bcr 50 Ph bcr 50 Ph Ph 42 二 慢淋的染色體變化 43 121 3染色體異常CLL數(shù)目異常 3 6 18 5 B細(xì)胞慢淋14q 25 染色體異常CLLt 11 14 q13 q32 t 14 19 q32 q13 結(jié)構(gòu)異常del 13q 20 染色體異常CLLi 17q 6q T細(xì)胞慢淋inv 14 q11q32 44 CLL 12 45 CLL13q i 17q 46 CLL 7 t 8 22 11q mar 2 47 T CLLinv 14 48 三 急非淋 急髓白血病的染色體改變 染色體異常檢出率50 80 最高達(dá)93 檢出率高低主要與方法學(xué)有關(guān) 其次與地理環(huán)境及種族的差異有關(guān)原發(fā)性核型異常分兩大類和FAB亞型相關(guān) 特異性染色體重排和FAB亞型不相關(guān) 大多為數(shù)目異常初診時(shí)核型異常在CR時(shí)消失 復(fù)發(fā)時(shí)再現(xiàn)部分病例由于核型演化產(chǎn)生繼發(fā)性異常 49 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排1 50 AML M2t 8 21 q22 q22 Y 51 AML M2t 8 21 Y 52 AML M2t 8 21 9q Y 53 2020 1 8 54 AML M294 XXXX 4 4 t 8 21 X2 55 t 8 21 q22 q22 Yt 15 17 56 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排2 57 AML M3t 15 17 58 AML M3 8 t 15 17 59 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排3 60 16倒位inv 16 p13q22 61 AML M4Eo 8 inv 16 62 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排4 63 AML M5at 6 11 64 AML M5at 9 11 65 AML M5at 11 19 66 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排5 67 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排6 68 AML M2t 6 9 69 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排7 70 AML M2t 7 11 71 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排8 72 AML M4t 16 21 73 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排9 74 AML M1 M2 M4 M7 inv 3 q21q26 75 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排10 76 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排11 77 AML M2t 2 12 78 ANLL AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排12 79 ANLL AML中和FAB亞型不相關(guān)的核型異常 8 8 7 7q 7 21 1 2 11 1 13 1 11顯示干 祖細(xì)胞表型 HLA DR和CD34陽(yáng)性 分子水平上可見MLL外顯子2 8的串聯(lián)重復(fù) 治療效果差 僅獲短暫首次CR 13者白血病細(xì)胞常同時(shí)表達(dá)髓系和T系抗原 特別多見于M0和M1型 原始細(xì)胞呈手鏡樣或小原淋樣細(xì)胞 CR率低 MS9 5個(gè)月 80 AML M4 8 81 AML M2 11 82 AML M1 13 83