01血涂片、紅細(xì)胞形態(tài)ppt課件.ppt

外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn),1,1.血涂片的制備：手工推片法2.血涂片的染色：瑞氏染色法3.紅細(xì)胞的形態(tài)檢查,2,將血標(biāo)本均勻地涂抹在清潔干燥的載玻片上，經(jīng)染色后在顯微鏡下檢查，是血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，臨床應(yīng)用廣泛，特別是對(duì)于各種貧血及血液病的診斷和鑒別診斷具有重要價(jià)值。,血涂片（bloodsmear）的制備,3,1.新玻片上有游離堿質(zhì)，須清洗后使用。,3.使用時(shí)切勿用手觸及玻片表面。,載玻片的清潔,血涂片的制備,2.用過的載玻片須用肥皂水或乙醇除去染料和油污。,4,手工推片法,灰白層涂片法,血涂片的制備方法,血涂片的制備,薄血涂片法,厚血涂片法,自動(dòng)血液涂片法,5,手持玻片推制血膜,推片,用推片從血滴前方接觸血滴,推片角度,吸附血液成一線,推完血片，迅速干燥,手工薄血推片法,6,厚薄適宜，頭體尾分明，細(xì)胞分布均勻，邊緣整齊，兩邊和兩端留有一定空隙。,良好血涂片的標(biāo)準(zhǔn),血涂片的制備,7,血滴越大，推片角度越大，速度越快，血液粘度越高，則血膜越厚。血滴越小，推片角度越小，速度越慢，血液粘度越低，則血膜越薄。,如果取血量較少，在推血片時(shí)應(yīng)如何才能使血膜的厚薄合適？,對(duì)于嚴(yán)重貧血患者，應(yīng)如何推制血片？,影響血膜厚薄的因素,血涂片的制備,8,角度大,速度快,太厚,太短,推制適當(dāng)?shù)难?推片不光滑，呈毛刷狀,用力不均，呈搓板狀,血量過多，無尾,玻片油膩，有空泡,9,1.灰白層涂片法,抗凝血離心，取灰白層涂片。,用于白細(xì)胞減少者的白細(xì)胞分類和紅斑狼瘡細(xì)胞(LEC)檢查。,其他方法,血涂片的制備,2.厚血涂片法,用于瘧原蟲、微絲蚴的檢查,10,血涂片的染色,染色的目的是使細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、胞漿中顆粒及細(xì)胞核等主要結(jié)構(gòu)染上特定的顏色，以便于顯微鏡下觀察與識(shí)別。,11,一、瑞氏染色法（Wrightsstain）,二、吉姆薩染色法（Giemsasstain）,三、瑞氏-吉姆薩復(fù)合染色法,血涂片的常用染色方法,對(duì)胞漿和中性顆粒染色較好，對(duì)胞核稍差。,對(duì)胞漿和中性顆粒染色較差，對(duì)胞核和寄生蟲著色較好。,取二者之長(zhǎng)，染色效果好。,12,瑞氏染色法,染料：酸性染料伊紅和堿性染料美蘭（亞甲藍(lán)）的復(fù)合染料。亞甲藍(lán)氧化為次級(jí)染料天青。溶劑：甲醇。溶解+固定。磷酸鹽緩沖液（PBS）：pH6.46.8,13,染色原理,1.血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性物質(zhì)，與酸性伊紅結(jié)合染成粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)。2.嗜堿性顆粒和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性美蘭結(jié)合，染成紫色或藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)。3.中性顆粒呈等電點(diǎn)狀態(tài)與伊紅美蘭均可結(jié)合，染成紫紅色，稱為中性物質(zhì)。,14,pH對(duì)細(xì)胞染色的影響,在酸性環(huán)境中染色偏紅；在堿性環(huán)境中染色偏藍(lán)。因此要求用磷酸鹽緩沖液，使染色環(huán)境維持在6.46.8之間，以達(dá)到滿意的染色效果。,15,1.用玻璃筆在血膜兩端劃線。,2.瑞氏染液覆蓋血膜，染0.51min。,3.加等量或稍多的緩沖液，混勻，染510min。,4.流水沖去染液，干燥后鏡檢。,染色步驟,瑞氏染色法,16,正常血膜外觀為淡紫紅色。,鏡下RBC和嗜酸性顆粒染粉紅色，嗜堿性顆粒染紫黑色，中性顆粒染淡紫紅色，細(xì)胞核染紫紅色。,染色結(jié)果,瑞氏染色法,17,5.若有染料殘?jiān)?，可用少量甲醇溶解，并立即用流水沖洗。,1.血膜正面朝上，干透后再染色。,2.染色時(shí)間與染液濃度、室溫和細(xì)胞多少有關(guān)。,3.染色過程中防止蒸發(fā)沉淀。,4.沖洗時(shí)應(yīng)以流水沖洗，沖洗時(shí)間不能太久。,注意事項(xiàng),瑞氏染色法,6.復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液再加染液，或加染液與緩沖液的混合液。,18,質(zhì)量控制,瑞氏染色法,1載玻片要清潔。2制備良好的血涂片。3選擇抗凝劑。4處理白細(xì)胞濃度較低的標(biāo)本。5血細(xì)胞比容與涂片關(guān)系。6新配置染液的處理。7染色過深、過淺的處理。,19,紅細(xì)胞形態(tài)檢查,在貧血或其他血液系統(tǒng)疾病時(shí)紅細(xì)胞除有數(shù)量變化外，往往伴有形態(tài)改變，表現(xiàn)在紅細(xì)胞大小、形狀、染色性質(zhì)和內(nèi)涵物的異常。因此，紅細(xì)胞形態(tài)檢查對(duì)貧血的診斷和鑒別診斷有重要的臨床價(jià)值。,20,紅細(xì)胞形態(tài)檢查方法,低倍鏡：油鏡：,制備血涂片,染色,鏡檢,檢查區(qū)域：體尾交界處，細(xì)胞分布均勻，紅細(xì)胞緊密排列但不重疊。,估計(jì)細(xì)胞分布和染色情況，瀏覽全片是否存在異常細(xì)胞。,觀察紅細(xì)胞形態(tài)。,21,正常紅細(xì)胞形態(tài),雙凹圓盤形，淡桔紅色，中央1/3為生理性淡染區(qū)，呈正常色素性。紅細(xì)胞直徑為6.77.7m，平均直徑7.2m左右，厚約2m。無核，胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。除健康人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和部分白血病。,22,正常紅細(xì)胞形態(tài),23,異常紅細(xì)胞形態(tài),紅細(xì)胞大小異常紅細(xì)胞形狀異常血紅蛋白充盈度與著色異常紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)紅細(xì)胞排列異常有核紅細(xì)胞,24,紅細(xì)胞大小異常,1小紅細(xì)胞(microcyte)：直徑10m。最常見于缺乏葉酸和維生素B12所致的巨幼細(xì)胞性貧血（MA）。也可見于溶血性貧血（HA）、骨髓增生異常綜合癥（MDS）。3巨紅細(xì)胞(megalocyte)：直徑15m。常見于巨幼細(xì)胞性貧血（MA）和骨髓增生異常綜合癥（MDS）。,27,大紅細(xì)胞巨紅細(xì)胞,28,紅細(xì)胞大小異常,4紅細(xì)胞大小不均(anisocytosis)：指紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上。見于嚴(yán)重的增生性貧血的血涂片中。巨幼細(xì)胞性貧血尤為明顯，與骨髓造血紊亂有關(guān)。,29,紅細(xì)胞大小不均,30,紅細(xì)胞大小異常,小紅細(xì)胞(microcyte)大紅細(xì)胞(macrocyte)巨紅細(xì)胞(megalocyte)紅細(xì)胞大小不均(anisocytosis),31,紅細(xì)胞形狀異常,1球形紅細(xì)胞(spherocyte)：直徑小于正常，厚度增加大于2m。無中心淡染區(qū)。常見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥（HS）和伴有球形細(xì)胞增多的其他溶血性貧血如AIHA、HDN等。,32,球形紅細(xì)胞,33,紅細(xì)胞形狀異常,2橢圓形紅細(xì)胞（elliptocyte）：細(xì)胞呈卵圓形、桿狀，長(zhǎng)度可大于寬度34倍。這類紅細(xì)胞成熟后在高滲、等滲、低滲及正常血清內(nèi)，其橢圓形保持不變。常見于遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥（HE），可高達(dá)25%75%（正常人為1%）。也見于巨幼細(xì)胞貧血。,34,橢圓形紅細(xì)胞,35,紅細(xì)胞形狀異常,3靶形紅細(xì)胞（targetcell）：紅細(xì)胞中心部位染色較深，其周圍為蒼白區(qū)域，而細(xì)胞邊緣又深染，形如射擊之靶。常見于各種低色素貧血（主要是地中海貧血，珠蛋白生成障礙性貧血）?？赡芤騂bA含量貧乏而又分布不均所致。應(yīng)注意與在血涂片制作中未及時(shí)固定而引起的改變相區(qū)別。,36,靶形紅細(xì)胞,37,紅細(xì)胞形狀異常,4口形紅細(xì)胞（stomatocyte）：紅細(xì)胞中央蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的嘴巴或魚口。血涂片中口形紅細(xì)胞增多，見于遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥（HST），常10%。也可見于酒精中毒、小兒消化系統(tǒng)疾病引起的貧血等。,38,口形紅細(xì)胞,39,紅細(xì)胞形狀異常,5鐮形紅細(xì)胞（sicklecell）：呈狹長(zhǎng)形，形如鐮刀，兩端尖銳，正常情況下少見。主要見于HbS病，是由于紅細(xì)胞內(nèi)存在異常HbS所致。在缺氧的情況下，異常HbS溶解度降低，形成狹長(zhǎng)的結(jié)晶體，使紅細(xì)胞變形。,40,鐮形紅細(xì)胞,41,紅細(xì)胞形狀異常,6棘形紅細(xì)胞（acanthocyte）：紅細(xì)胞表面有針狀或指狀突起，間距不規(guī)則，突起的長(zhǎng)度和寬度可不一。在-脂蛋白缺乏癥病人的血涂片中出現(xiàn)較多。也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥、溶性性貧血及重金屬中毒。應(yīng)與皺縮紅細(xì)胞區(qū)別。,42,紅細(xì)胞形狀異常,7皺縮紅細(xì)胞：也稱鈍鋸齒形紅細(xì)胞（echinocyte），主要由于高滲、制片不當(dāng)?shù)仍蛟斐?，紅細(xì)胞周邊呈鈍鋸齒狀排列緊密，大小相等，長(zhǎng)短一致。,43,皺縮紅細(xì)胞,44,紅細(xì)胞形狀異常,8淚滴形紅細(xì)胞（teardropcell）：形如淚滴或梨狀，正常人偶見。多見于骨髓纖維化。,45,淚滴形紅細(xì)胞,46,紅細(xì)胞形狀異常,9裂片細(xì)胞（schistocyte）：為紅細(xì)胞碎片或不完整的紅細(xì)胞，系紅細(xì)胞通過管腔狹小的微血管受牽拉、擠壓所致。有各種形態(tài)如刺形、盔形、三角形及扭轉(zhuǎn)形等。正常人血片中裂片紅細(xì)胞2%。增多見于彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）、微血管病性溶血性貧血（MHA）。,47,紅細(xì)胞形狀異常,10紅細(xì)胞形態(tài)不整（poikilocyte）：指紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生無規(guī)律的明顯改變。如淚滴狀、梨形、棍棒形及新月形。最常見于具有巨幼細(xì)胞性貧血（MA）?？赡苁怯捎谪氀獓?yán)重而造血原料不足，在骨髓內(nèi)粗制濫造所致。也可能是紅細(xì)胞脆性較大，在推片時(shí)碎裂所致。,48,紅細(xì)胞形態(tài)不整,49,紅細(xì)胞形狀異常,球形紅細(xì)胞橢圓形紅細(xì)胞靶形紅細(xì)胞口形紅細(xì)胞鐮形紅細(xì)胞棘形紅細(xì)胞皺縮紅細(xì)胞淚滴形紅細(xì)胞裂片細(xì)胞紅細(xì)胞形態(tài)不整,50,血紅蛋白充盈度與著色異常,1.低色素性(hypochromic)：紅細(xì)胞的生理性中心淡染區(qū)擴(kuò)大,染色淡薄，甚至為環(huán)形紅細(xì)胞，提示血紅蛋白含量明顯減少，常見于缺鐵性貧血（IDA）、珠蛋白合成障礙性貧血、鐵幼粒細(xì)胞性貧血（SA）和某些血紅蛋白病。,51,低色素性(hypochromic),52,血紅蛋白充盈度與著色異常,2高色素性（hyperchromic）：紅細(xì)胞的生理性中心淡染區(qū)消失，整個(gè)紅細(xì)胞著色較深，而且胞體也大，區(qū)別于球形紅細(xì)胞，MCH增高。最常見于巨幼紅細(xì)胞性貧血（MA）。,53,高色素性（hyperchromic）,54,血紅蛋白充盈度與著色異常,3嗜多色性（polychromic）：屬于尚未成熟的紅細(xì)胞，呈淡灰藍(lán)色或灰紅色，胞體大，相當(dāng)于活體染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞。由于胞質(zhì)中含有多少不等嗜堿性物質(zhì)RNA與血紅蛋白并存，因此呈嗜多色性。嗜多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓增生活躍，見于急性失血性貧血和溶血性貧血。,55,嗜多色性（polychromic）,56,血紅蛋白充盈度與著色異常,4細(xì)胞著色不一（anisochromia）：紅細(xì)胞著色不一致，血紅蛋白充盈度偏離較大，如同時(shí)出現(xiàn)低色素性和正常色素性紅細(xì)胞，常見于鐵粒幼細(xì)胞性貧血（SA）。,57,血紅蛋白充盈度與著色異常,低色素性(hypochromic)高色素性（hyperchromic）細(xì)胞著色不一（anisochromia）嗜多色性（polychromic）,58,紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu),1嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（basophilicstipplingcell）：簡(jiǎn)稱點(diǎn)彩紅細(xì)胞。在瑞氏染色條件下，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性灰藍(lán)色點(diǎn)狀物的紅細(xì)胞。屬于未完全紅細(xì)胞，其顆粒大小不一、數(shù)量不等。重金屬中毒者增多，常作為鉛中毒的診斷篩選試驗(yàn)。,59,嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞,60,紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu),2豪焦小體（howell-jollysbody）：又稱染色質(zhì)小體。位于成熟或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)中，圓形，有12m大小，染成紫紅色，有1至多個(gè)，是核的殘余物。常見于巨幼細(xì)胞貧血、溶血性貧血、脾切除后和白血病。,61,豪焦小體,62,紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu),3卡波環(huán)（Cabotring）：胞質(zhì)內(nèi)變性脂蛋白所致。位于成熟或幼稚紅細(xì)胞的胞質(zhì)中，呈圓形或8字形的細(xì)線圈狀結(jié)構(gòu)。見于脾切除后或巨幼細(xì)胞性貧血。常與豪周小體并存。,63,卡波環(huán),64,紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu),4寄生蟲。如瘧原蟲的環(huán)狀體。,65,紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu),嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞豪焦小體卡波環(huán)寄生蟲,66,紅細(xì)胞排列異常,1紅細(xì)胞緡錢狀形成（rouleauxformation）：當(dāng)血漿纖維蛋白原和球蛋白含量增高時(shí)，可使紅細(xì)胞表面負(fù)電荷降低，減弱紅細(xì)胞之間的相互排斥力而互相連接呈緡錢狀。常見于多發(fā)性骨髓瘤。,67,紅細(xì)胞緡錢狀形成,68,紅細(xì)胞排列異常,2紅細(xì)胞自凝現(xiàn)象（selfagglutinating）：血涂片上紅細(xì)胞出現(xiàn)聚集、凝集成堆或成團(tuán)現(xiàn)象，多見于冷凝集素綜合癥和自身免疫性溶血性貧血等。注意與血涂片較厚引起的紅細(xì)胞堆積相區(qū)別，真正的紅細(xì)胞自凝在涂片較薄處也存在。,69,幼稚紅細(xì)胞，存在骨髓中。正常成人外周血液中不能見到。一周以內(nèi)嬰兒血涂片中可見到少量。常見于各種溶血性貧血，由于大量成熟紅