農(nóng)林學(xué)類論文-簡述梨黑星病菌的分離培養(yǎng)和基質(zhì)研究.doc

農(nóng)林學(xué)類論文-簡述梨黑星病菌的分離培養(yǎng)和基質(zhì)研究作者：鈕緒燕李麗青趙華顧彪艾海江論文關(guān)鍵詞梨黑星病菌培養(yǎng)基質(zhì)苦皮藤論文摘要用18種培養(yǎng)基對梨黑星病菌進(jìn)行分離培養(yǎng)結(jié)果表明,用PDA、改進(jìn)PDA及PSA培養(yǎng)較易分離成功,在改進(jìn)PDA+L中營養(yǎng)生長速率最大,20下培養(yǎng)20d菌落直徑可達(dá)12mm,并產(chǎn)生分生孢子。藥效測定試驗(yàn)表明,10.0g/mL的70%代森錳鋅或5%殺菌清水劑及5.0g/mL的植物制劑20%苦皮藤水浸液,對梨黑星病菌分生孢子萌發(fā)有很高的抑制作用,抑制率分別達(dá)100%,100%和78.71%。梨黑星病(VenturiaprinaAderh)是我國南北梨產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的重要病害之一。近年來,由于種植結(jié)構(gòu)和品種布局的變化,常導(dǎo)致梨黑星病大流行。梨黑星病不僅危害葉片、葉柄、嫩枝和果實(shí),而且常引起葉片早期脫落、果實(shí)畸形,造成品質(zhì)和產(chǎn)量下降,嚴(yán)重影響樹勢和梨業(yè)生產(chǎn)。而該菌目前分離培養(yǎng)較困難,人工培養(yǎng)下生長緩慢,對研究該菌的生理生化特點(diǎn)、侵染發(fā)病規(guī)律、室內(nèi)外藥效試驗(yàn)等帶來不便。為此,作者等嘗試篩選適宜于該菌分離和生長的培養(yǎng)基及有效的殺菌劑。1材料與方法1.1材料1.1.1供試病原菌分別采自陜西楊陵、彬縣、乾縣果園。1.1.2供試培養(yǎng)基先后共試用了18種固定配方與改良配方培養(yǎng)基,其配方如下:(1)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)；(2)馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA)；(3)梨葉浸汁麥芽浸膏培養(yǎng)基(LY)；(4)梨果浸汁麥芽浸膏培養(yǎng)基(LG)；(5)PDA+梨果汁培養(yǎng)基(PDA+G)；(6)甘氨酸等微量元素瓊脂培養(yǎng)基(A)；(7)PSA+梨果汁培養(yǎng)基(PSA+G)；(8)PSA+梨塊培養(yǎng)基(PSA+L)；(9)PDA+熟梨塊培養(yǎng)基(PDA+L)；(10)PSA+胡蘿卜塊培養(yǎng)基(PSA+H)；(11)PDA+熟胡蘿卜塊培養(yǎng)基(PDA+H)；(12)木糖培養(yǎng)基(MD)；(13)多種培養(yǎng)液(PB、PDB)；(14)燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(Y)；(15)V8瓊脂培養(yǎng)基(V8)；(16)麥芽膏瓊脂培養(yǎng)基(M)；(17)牛肉浸膏瓊脂培養(yǎng)基(N)；(18)瓊脂培養(yǎng)基(Q)。其中,PB、PDB為液體培養(yǎng)基,其余均為固體培養(yǎng)基。1.1.3供試藥劑70%代森錳鋅、5%殺菌清水劑和12.5%烯唑醇均為市售,植物制劑20%苦皮藤水浸液由西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)藥研究所提供。1.2試驗(yàn)方法1.2.1病菌分離在上述17種固體培養(yǎng)基上,分別用常規(guī)組織分離法和單孢分離法1,2對所采病葉進(jìn)行分離,每種培養(yǎng)基分3皿,每皿內(nèi)放材料9塊(單孢挑9個(gè)),于10,15,20,25,305種溫度下培養(yǎng),選擇最適溫度,并將分離物進(jìn)行活體定點(diǎn)接種。1.2.2病菌在不同基質(zhì)上生長速率測定將分離物制成=4mm的菌餅,接入上述18種培養(yǎng)基,每處理重復(fù)3次,20下黑暗培養(yǎng),觀察菌絲生長情況。1.2.3藥效測定用孢子萌發(fā)法1,2測定70%代森錳鋅、5%殺菌清水劑、12.5%烯唑醇、植物制劑20%苦皮藤水浸液對梨黑星病菌的抑制作用。4種藥劑均設(shè)置0.625,1.25,2.5,5.0和10.0g/mL5個(gè)濃度,以清水為對照,置2023下培養(yǎng)12h。萌發(fā)百分率及抑制率計(jì)算公式如下:2結(jié)果與分析2.1分離基質(zhì)篩選各種培養(yǎng)基上的分離結(jié)果表明,在PDA+G、PSA、PDA、PSA+G、PSA+L、PSA+H、PDA+L培養(yǎng)基上,以組織分離法可獲得梨黑星病菌。單孢分離僅在PDA+G、PSA、PDA培養(yǎng)基上見到極少菌落,在LY、LG培養(yǎng)基上采用組織分離法所獲病菌生長極弱,在V8、Y、M、A、LG、LY、N等其余供試培養(yǎng)基上病菌生長緩慢,且易被雜菌污染。將所得分離物接種于楊陵果園的梨樹葉片上,15d觀察到產(chǎn)生的分生孢子,證明分離成功。比較5種不同的溫度處理在PDA培養(yǎng)基上對梨黑星病菌生長的影響(表1),結(jié)果表明,梨黑星病菌分離培養(yǎng)的最適溫度為2025,15以下及超過25時(shí),生長緩慢。2.2病菌在不同培養(yǎng)基質(zhì)上的生長情況比較培養(yǎng)基質(zhì)比較試驗(yàn)結(jié)果(表2)表明,梨黑星病菌在PDA+L上生長最快,一般20d菌落直徑可達(dá)12mm,在PDA+H、PSA及A上次之,G上生長最慢。由于在其余培養(yǎng)基上生長極為緩慢,故未再列表贅述。2.3藥效測定表3表明,70%代森錳鋅10.0g/mL和5%殺菌清水劑10.0g/mL,對梨黑星孢子萌發(fā)的抑制率均高達(dá)100%,效果明顯優(yōu)于其他農(nóng)藥。植物制劑20%苦皮藤水浸液5.0g/mL抑制率也可達(dá)78.71%,這說明該植物制劑在防治梨黑星病中有很大潛力。3討論用17種培養(yǎng)基對梨黑星病菌進(jìn)行分離的結(jié)果表明,PDA、改進(jìn)PDA及PSA較易分離成功,組織分離法的成功率高于單孢分離法。其成功率的高低還與所采材料的新鮮程度關(guān)系密切,試驗(yàn)表明,如果在發(fā)病初期采褪綠斑或是剛產(chǎn)生微薄霉層的標(biāo)本,隨采隨分成功率可達(dá)90%以上,反之,成功率很低。據(jù)有關(guān)資料報(bào)道,分離時(shí)采用麥芽瓊脂培養(yǎng)基成功率最高3,進(jìn)入夏季不宜用單孢分離法。本研究結(jié)果表明,只要分離過程中消毒時(shí)間掌握好,將pH值調(diào)節(jié)到適宜于該菌生長的偏酸環(huán)境中,一般在該菌發(fā)生時(shí)間(410月)4采集的標(biāo)本用上述PDA+G、PSA、PDA、PSA+G、PSA+L、PAS+H、PHA+L等培養(yǎng)基進(jìn)行組織分離均可獲得成功,而且很少有污染,20下710d菌落直徑可達(dá)34mm,并產(chǎn)生少量分生孢子。本試驗(yàn)中也采用黑光燈照射,意在誘導(dǎo)產(chǎn)孢5,但發(fā)現(xiàn)其對該菌的生長有促進(jìn)作用,對產(chǎn)孢效果卻不理想。另外,利用無糖PB或降低糖含量的PDB進(jìn)行培養(yǎng),菌絲生長也較快,10d菌落直徑可達(dá)910mm(用十字交叉法,從瓶底測量其菌落直徑1,2)。說明該菌在無糖或少糖條件下,有利于營養(yǎng)生長。雖然已有資料研究出了產(chǎn)孢方法6,但產(chǎn)孢量仍很少,室內(nèi)藥效試驗(yàn)還有賴于田間發(fā)病后采集的標(biāo)本。其分離物的產(chǎn)孢機(jī)理、培養(yǎng)時(shí)需黑光還是黑暗、或是散光、以及基質(zhì)營養(yǎng)等條件,均有待于進(jìn)一步研究。在藥效測定試驗(yàn)中,10.0g/mL70%代森錳鋅和10.0g/mL5%殺菌清水劑對梨黑星孢子的萌發(fā)抑制率均高達(dá)100%。植物制劑20%苦皮藤水浸液5.0g/mL抑制率也達(dá)78.71%,雖低于試驗(yàn)中的化學(xué)農(nóng)藥,但其低毒、低殘留、對環(huán)境無污染,且成本低,在殺菌劑領(lǐng)域具有很大的發(fā)展?jié)摿?。如果將該試劑的濃度加大是否也能達(dá)到與化學(xué)制劑相同或近似的效果,有待于進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。參考文獻(xiàn)1方中達(dá).植病研究方法M.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1996.2孫廣宇,宗兆鋒.植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)M.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000.3曲儉緒.梨黑星病菌培養(yǎng)基的比較研究J.北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1987,9(2):179-180.4李建榮,石萬成,文純友,等.梨黑星病發(fā)