乳腺癌組織中 MT1-MMP、VEGF 的表達(dá)及其相關(guān)性.doc

精品論文推薦乳腺癌組織中 mt1-mmp、vegf 的表達(dá)及其相關(guān)性陳艷波，龐達(dá)，張國強(qiáng)，王勁松 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，哈爾濱（150081） e-mail：摘要：目的： 探討mt1-mmp和vegf在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與乳腺癌臨床病理特征間的關(guān)系。方法： 采用免疫組織化學(xué)方法檢測67例乳腺癌組織和癌旁正常組織中mt1-mmp 和vegf的表達(dá)情況，并與臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果：mt1-mmp和vegf在乳 腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于在癌旁正常組織中的表達(dá)水平( p0.05) 。vegf 和mt1-mmp在乳腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)( p=0.005)。vegf表達(dá)與乳腺癌的tnm分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)( p 0.05) ；mt1-mmp表達(dá)與乳腺癌的tnm分期和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)( p0. 05) 。結(jié)論：mt1-mmp和vegf的過表達(dá)與乳腺癌的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)，二者的聯(lián)合檢測對 判斷乳腺癌的惡性程度和預(yù)后具有重要價值。關(guān)鍵詞：乳腺癌；mt1-mmp；vegf；免疫組織化學(xué)中圖分類號：a1引言乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤間質(zhì)中的血管生成和細(xì)胞外基質(zhì)的降解。血管內(nèi)皮生長 因子( vascular endothelial growth factor, vegf)是重要的促血管生成因子, 在腫瘤血管生成過 程中發(fā)揮著核心作用?；|(zhì)金屬蛋白酶(mmps)通過降解細(xì)胞外基質(zhì), 在腫瘤細(xì)胞的侵襲、 轉(zhuǎn)移和血管生成中起著重要的作用1。其中膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(membrane type-1 matrix metalloproteinase, mt1-mmp)已被證明在血管生成反應(yīng)中起關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用2。本研究采用 免疫組織化學(xué)方法檢測mt1-mmp和vegf乳腺癌和癌旁組織的表達(dá)水平，探討二者與乳腺 癌臨床病理特征的關(guān)系。2材料與方法2.1 標(biāo)本來源收集哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科2004年11月2006年11月手術(shù)切除乳腺癌組 織的石蠟包埋標(biāo)本67例, 平均年齡46.9 歲。同時另取距離癌組織邊緣5cm以外的正常組織石 蠟標(biāo)本為對照。所有患者術(shù)前均未行化療或放療。按照who乳腺腫瘤組織學(xué)類型分類標(biāo)準(zhǔn)： 浸潤性導(dǎo)管癌51例，浸潤性小葉癌8例，導(dǎo)管內(nèi)癌5例，粘液癌3例。按照國際抗癌聯(lián)盟（uicc）1997年tnm分期標(biāo)準(zhǔn)：期13例，期35例，期19例。2.2 主要試劑與方法濃縮型兔抗人mt1-mmp多克隆抗體（bs-0414r）購自北京博奧森公司。即用型vegf 單克隆抗體（za-0509）和pv-9000試劑盒購北京中杉試劑公司。采用免疫組化pv兩步法進(jìn) 行檢測。石蠟包埋標(biāo)本制成4m 的連續(xù)切片?？乖捎酶邏簾嵝迯?fù)，免疫染色按說明書進(jìn) 行操作。用已知的陽性片作陽性對照，用pbs液代替一抗作陰性對照。2.3 結(jié)果判定所有切片均由兩位病理科醫(yī)生雙盲計數(shù)，差異超過10%需重新計數(shù)。低倍鏡下分別選取 陽性細(xì)胞最密集區(qū)，在100倍視野下計數(shù)1000個腫瘤細(xì)胞，以陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分率 來表示。mt1-mmp/vegf表達(dá)的評分標(biāo)準(zhǔn)如下：不著色為陰性（）；陽性細(xì)胞數(shù)10%為- 5 -弱陽性（1+）；陽性細(xì)胞數(shù)10%50%為陽性（2+）；陽性細(xì)胞數(shù)50%為強(qiáng)陽性（3+）。2.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用spss 13.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用2 檢驗、spearman等級相關(guān)分析法, 以a =0. 05作為統(tǒng)計學(xué)檢驗的顯著性水準(zhǔn)。3結(jié)果3.1 mt1-mmp和vegf在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)mt1-mmp蛋白陽性染色為棕黃色顆粒,主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，見圖1；vegf蛋白 陽性染色為棕黃色顆粒,主要定位于細(xì)胞漿，見圖2。圖1 乳腺癌中mt1-mmp蛋白的陽性表達(dá)（sp,200）圖2 乳腺癌中vegf蛋白的陽性表達(dá)（sp,200）mt1-mmp在乳腺癌組織中表達(dá)的陽性率為67.2%( 45/67) , 顯著高于在癌旁正常組中表 達(dá)的陽性率41.8%( 28/67) 。vegf 在乳腺癌組織中表達(dá)的陽性率為71.6%( 48/67) , 顯著高 于癌旁正常組中的陽性率47.8%( 32 /67) , 詳見表1。表1 mt1-mmp與vegf 在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)mt1-mmpvegf陽性陽性率（%）陽性陽性率（%）乳腺癌組織674567.20.0034871.60.005癌旁正常組織672841.83247.8組別例數(shù) p p3.2 mt1-mmp和vegf表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系vegf的表達(dá)與乳腺癌的tnm分期和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)( p 0.05)。mt1-mmp的表達(dá)乳腺癌的tnm分期和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)( p 0.05)。見表2。表2 mt1-mmp 及vegf表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系mt1-mmpvegf臨床病理特征例數(shù)年齡（歲）p陽性陽性率（%）p陽性陽性率（%）50241358.30.0911562.50.21550433272.13374.4腫瘤大小2 cm281757.10.1911553.60.5602 cm392874.43384.6tnm 分期期483060.40.0143164.60.042期191584.21789.5淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有463576.10.0213780.40.018無211047.61152.43.3 乳腺癌組織中mt1-mmp和vegf表達(dá)的關(guān)系48例vegf表達(dá)陽性的乳腺癌中, mt1-mmp呈陽性表達(dá)37 例, 共同陽性率為77.1% , 而19例vegf表達(dá)陰性者中, mt1-mmp呈陽性表達(dá)8例,陽性率為42.1 % , spearman相關(guān)分析 顯示mt1-mmp、vegf在乳腺癌中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)( r = 0.336 , p 0. 05)。見表3 。表3 乳腺癌組織中mt1-mmp和vegf表達(dá)的關(guān)系mt1-mmp表達(dá)vegf表達(dá) 合計 陽性陰性4. 討論陽性371148 陰性 81119 合計452267血管生成在促進(jìn)腫瘤生長、轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用。vegf能特異性地作用于血管 內(nèi)皮細(xì)胞,引起內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖,并在體內(nèi)誘導(dǎo)血管形成3,是目前已知的作用最強(qiáng)的促血管 生成因子4。已有學(xué)者研究證實(shí)vegf在乳腺癌中過度表達(dá)5,6，且常伴有血清vegf 水平升 高7,8。本研究通過免疫組化測定結(jié)果表明，vegf在乳腺癌的腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于癌旁 正常組織，并且vegf在乳腺癌組織中的表達(dá)與tnm分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性，這可能 與vegf增加蛋白水解酶活性,促進(jìn)間質(zhì)降解及增加血管的通透性的生物學(xué)功能有關(guān)。這些都 促進(jìn)了癌細(xì)胞的局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。有研究也顯示9，vegf能借其裂解內(nèi)皮屏障的功能 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的滲出和轉(zhuǎn)移。除了腫瘤血管形成外,腫瘤細(xì)胞突破基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)降解是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的 重要步驟。mmps 是一類與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系十分密切的蛋白水解酶。膜型基質(zhì)金屬 蛋白酶(membrane-type matrix metalloproteinase , mt-mmp) 是mmps 家族中的新成員,至今 已鑒別出6 種。與分泌性mmps 不同,它們依靠疏水性的c 末端錨定在細(xì)胞膜上,在細(xì)胞表面 發(fā)揮水解作用10。okada a 等人已經(jīng)證實(shí)mt1-mmp在多種腫瘤中過表達(dá)11。最近的研究 12,13發(fā)現(xiàn)mt1-mmp的過表達(dá)能增加細(xì)胞的侵襲活性，而沉默了mt1-mmp的表達(dá)抑制了細(xì)胞的遷移和侵襲，表明這個酶是侵襲機(jī)制中最關(guān)鍵的酶之一。本實(shí)驗結(jié)果顯示, mt1-mmp在乳腺癌與癌旁正常組織的陽性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計學(xué)意 義( p 0.05) 。mt1-mmp的表達(dá)與乳腺癌的tnm分期和組織學(xué)分級呈正相關(guān)( p 0.05)。這 可能是由于mt1-mmp位于侵犯性癌癥細(xì)胞的前沿，能降解細(xì)胞外基質(zhì)中含量最多的i 型膠 原，也能通過活化的mmp-2，將位于基底膜的iv型膠原裂解，解除限制癌細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移 的屏障，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞向周圍組織擴(kuò)散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。另外，有研究顯示14，mt1-mmp也 可通過對透明質(zhì)酸受體cd44和整合素等黏附分子的裂解也參與腫瘤細(xì)胞的侵襲。本實(shí)驗在67例乳腺癌中,發(fā)現(xiàn)mt1-mmp與vegf的表達(dá)呈正相關(guān)( r =0.336, p= 0.005)，提 示mt1-mmp與vegf可能在乳腺癌的血管發(fā)生和轉(zhuǎn)移中有內(nèi)在的聯(lián)系。這可能如sounni 等 15所報道的，mt1-mmp過表達(dá)可通過上調(diào)血管生成誘導(dǎo)因子vegf的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤的生 長和血管的發(fā)生，但其具體的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。綜上所述, mt1-mmp與vegf的高表達(dá)與乳腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān), 它們在乳腺癌 的血管發(fā)生和侵襲、轉(zhuǎn)移過程中可能起到了協(xié)同作用，二者的聯(lián)合檢測對判斷乳腺癌的惡性 程度和預(yù)后具有重要價值。參考文獻(xiàn)1gonzlez lo, pidal i, junquera s, et, al. overexpression of matrix metalloproteinases and their inhibitors in mononuclear inflammatory cells in breast cancer correlates with metastasis-relapse j. br j cancer, 2007,97(7):957-9632genis l, galvez bg, gonzalo p, et al. mt1-mmp: universal or particular player in angiogenesis j? cancermetastasis rev, 2006, 25(1):77-863fox sb, generali dg, harris al. breast tumour angiogenesis j.breast cancer research,2007, 9 (6):216 4nadji m. laminin receptor in lymph node negative breast carcinoma j.cancer, 1999, 85 (2):432-436.5linderholm b,grankvist k,wilking n,et al. correlation of vascular endothelial growth factor content withrecurrences, survival, and first relapse site in primary node-positive breast carcinoma after adjuvant treatmentj. j clin oncol, 2000, 18(7):1423-14316linderholm b,tavelin b,grankvist k,et al. vascular endothelial growth factor is of high prognostic value in node-negative breast carcinomaj. j clin oncol, 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breast cancer and adjacent normal tissues, and its correlations to clinicopathological features were analyzed. results the expressi