[地方標準]-DB33T 616-2006 配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測定 液相色譜法.doc

db db33浙江省質量技術監(jiān)督局 發(fā)布2006-12-27實施2006-11-27發(fā)布配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測定 液相色譜法determination of nitrofurazone and furazolidone in formula feed-liquid chromatographydb33/t 6162006浙江省地方標準ics 67.050b 541db33/t 6162006前 言本標準附錄a為資料性附錄。本標準由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。本標準起草單位：農業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產品質檢中心（舟山）。本標準主要起草人：陳雪昌、鄭斌、劉士忠、鐘志。1配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測定 液相色譜法1 范圍本標準規(guī)定了配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的液相色譜測定方法。本標準適用于配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測定。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。gb/t 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法gb/t 14699.1 飼料采樣方法3 原理樣品中呋喃西林和呋喃唑酮經乙腈提取，正己烷脫脂，固相萃取柱凈化，反相色譜柱分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。4 試劑本標準所用試劑在呋喃西林和呋喃唑酮出峰處應無干擾峰，實驗用水應符合gb/t 6682中一級水標準。4.1 呋喃西林標準品：純度99%。呋喃唑酮標準品：純度99%。4.2 正己烷：分析純。4.3 乙腈：分析純。4.4 甲醇：色譜純。4.5 磷酸二氫鈉: 分析純。4.6 0.05mol/l磷酸二氫鈉溶液。4.70.01mol/l磷酸鹽緩沖溶液(ph=2.5)，分析純。4.8乙二胺四乙酸(edta)溶液（50g/l），分析純。4.9 hlb固相萃取柱(150mg/3ml)。4.10標準儲備液：100mg/l，準確稱取一定量的標準品, 用少量乙腈溶解后, 再用甲醇定容為100 mg/ l 的儲備液, 避光冷藏保存，保存期為一個月。4.11標準中間液：2mg/l，用流動相稀釋標準儲備液。臨用時配制。5 儀器與設備5.1 液相色譜儀：配紫外檢測器。5.2 樣品粉碎機。5.3 均質機。5.4 離心機，4000rpm。5.5 旋轉蒸發(fā)器。5.6 固相萃取裝置。5.7 超聲儀。5.8 旋渦混勻器。5.9 氮吹儀。5.10天平，感量為0.01g和0.0001g。6 色譜條件6.1 色譜柱：ods c-18，5m，4.6mm250mm，或同類型號色譜柱。6.2 柱溫：室溫。6.3 流動相：乙腈-0.05mol/l磷酸二氫鈉溶液（ph= 4.0，體積比20：80）。6.4 流速：1.0ml/min。6.5 進樣量：20l。6.6 紫外檢測波長：365nm。7 分析步驟7.1試樣制備按gb/t 14699.1采集實驗室樣品。將實驗室樣品（通常500g）粉碎，使之全部通過1mm篩，充分混勻。貯于磨口瓶中備用。7.2提取 稱取樣品5g（準確至0.01g），置于50ml聚丙烯離心管，加入乙腈20ml，搖勻，超聲波輔助提取10min，均質（10000r/min）2min，4000r/min離心5min，過濾，用20ml乙腈重復提取，合并濾液于125ml分液漏斗。7.3凈化分液漏斗中加入25ml經乙腈飽和的正己烷，振搖5min，靜置分層后，將乙腈層放入旋發(fā)瓶中，于40減壓蒸餾濃縮近干，加入5ml 0.01mol/l磷酸鹽緩沖液(4.7)溶解，待凈化。固相萃取柱依次以10ml甲醇，10ml純水， 2ml 5%edta溶液，10ml純水預淋洗，上樣，以10ml甲醇洗脫，氮氣吹至近干，流動相準確定容至2ml，經0.45m濾膜過濾，待hplc分析。注意：所有操作都應在避光條件下進行。7.4 工作曲線取呋喃西林和呋喃唑酮標準中間液，用流動相稀釋成濃度為0.1mg/l2. 0 mg/l的標準工作液。分別取20l進樣，以峰高為縱坐標，以標準樣品中呋喃西林和呋喃唑酮含量為橫坐標，繪制工作曲線。7.5 色譜測定取試樣濾液20l進樣，記錄峰高，從工作曲線查得樣品提取液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量。若樣液濃度超過線性范圍，用流動相稀釋。8 計算樣品中呋喃西林和呋喃唑酮的含量按下式計算。式中：x試樣中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c試樣溶液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，單位為毫克每升（mg/l）；m試樣質量，單位為克（g）；v試樣溶液體積，單位為毫升（ml）。f提取液的稀釋倍數。9 方法準確度和精密度本方法回收率為81.6%-91.6%。本方法的相對標準偏差為10%。10 方法檢出限本方法檢出限為1.0 mg/kg。11 線性范圍本方法的呋喃西林和呋喃唑酮標準溶液的線性范圍為0.10 mg/l -2.0