細(xì)菌的染色技術(shù)及大小的測(cè)定.ppt

實(shí) 驗(yàn) 三,細(xì)菌的染色技術(shù)及微生物大小的測(cè)定,第一部分 細(xì)菌的染色技術(shù),目的要求 染色劑和染色的原理 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)程序,目的要求,掌握微生物的染色原理 掌握染色的基本操作技術(shù) 掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法,染色劑和染色原理,微生物染色的基本原理：細(xì)菌機(jī)體無色透明，與背景反差小，可將細(xì)菌染色，增加其反差；細(xì)菌在通常培養(yǎng)狀態(tài)下總帶負(fù)電荷，故可用帶正電荷的堿性染料染色。 染色劑 染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型： 1. 酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。 2. 堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。 3. 中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細(xì)胞核染色）。 4. 單純?nèi)玖希哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類的染料。,染色劑和染色原理,微生物染色常用染料如下表：,實(shí)驗(yàn)材料,顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。 石炭酸復(fù)紅染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、95乙醇、蕃紅染液 菌種：枯草桿菌、大腸桿菌,實(shí)驗(yàn)程序 （細(xì)菌染色的方法和步驟）,細(xì)菌染色的方法: 1. 簡(jiǎn)單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。 2. 復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細(xì)胞染色法等。 染色技術(shù)的一般過程 涂片 干燥 固定 染色 媒染 脫色 復(fù)染 水洗 干燥 鏡檢,實(shí)驗(yàn)程序 （簡(jiǎn)單染色的方法和步驟）,簡(jiǎn)單染色法(一般染色法) 1.涂片 2.干燥：自然晾干或酒精燈高處微微加熱。 3.固定 4.染色：在整個(gè)涂面上滴加染色液，染色min。 5.水洗：傾去染液，用自來水細(xì)流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。 6.吸干 7.鏡檢,實(shí)驗(yàn)程序 （革蘭氏染色的方法和步驟）,革蘭氏（Gram）染色法 1. 涂片、干燥、固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液染1min，傾去染液，流水沖洗至無紫色。 3. 媒染：加革氏碘液媒染1min，水洗。 4. 脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約30s45s，接著立即用流水沖洗。 5. 復(fù)染：滴加番紅染色液染1min，水洗后用吸水紙吸干。 6. 鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。,第二部分 細(xì)菌大小的測(cè)定,目的要求 學(xué)習(xí)使用目測(cè)微尺和物測(cè)微尺在顯微鏡下測(cè)定微生物大小的方法。,測(cè)定的工具：目測(cè)微尺和物測(cè)微尺 目測(cè)微尺是一圓形玻片，其中央刻有5mm長(zhǎng)、等分為50格的標(biāo)尺，每格的長(zhǎng)度隨使用目鏡和物鏡的放大倍數(shù)及鏡筒長(zhǎng)度而定。使用前用物鏡測(cè)微尺標(biāo)定，用時(shí)放在目鏡內(nèi)。 物測(cè)微尺是一厚玻片，中央有一圓形蓋玻片，中央刻有1mm長(zhǎng)的標(biāo)尺，等分為100格，每格為10m用以標(biāo)定目測(cè)微尺在不同放大倍數(shù)下每格的實(shí)際長(zhǎng)度。,目測(cè)微尺的標(biāo)定： 將目測(cè)微尺裝入目鏡的隔板上，刻度朝下；把物測(cè)微尺放在載物臺(tái)上，刻度朝上。 用低倍鏡找到物測(cè)微尺的刻度，移動(dòng)物測(cè)微尺和目測(cè)微尺使兩者的第一條刻度線重合，順著刻度找出第二條完全重合的刻度線。 計(jì)算兩刻度間目測(cè)微尺的格數(shù)和物測(cè) 微尺的格數(shù)。 由于物測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)10m，得,菌體大小的測(cè)定 取下物測(cè)微尺，將細(xì)菌染色標(biāo)本置于載物臺(tái)上，然后在油鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量菌體的長(zhǎng)和寬。 注