DNA的變性和復(fù)性.ppt

制作人：劉康 呂勝,微生物PPT課題制作,1,DNA的變性和復(fù)性,2,DNA的變性和復(fù)性,一）DNA的變性 二）DNA的復(fù)性 三）核酸分子雜交,3,變性(denaturation)和復(fù)性(renaturation) 是雙鏈核酸分子的兩個重要物理特性。 是核酸研究中經(jīng)常引用的術(shù)語。 雙鏈DNA、RNA雙鏈區(qū)，DNA: RNA雜種雙鏈(hybrid duplex)以及其它異源雙鏈核酸分子(heteroduplex) 都具有此性質(zhì)。,4,一) DNA的變性,指DNA分子由穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)松解為無規(guī)則線性結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。 本質(zhì)：氫鍵和疏水鍵斷裂 部分的或全部的 可逆的或非可逆的 不涉及到其一級結(jié)構(gòu)的改變,5,變性DNA 的理化及生物學(xué)性質(zhì),溶液粘度降低 溶液旋光性發(fā)生改變,增色效應(yīng)或高色效應(yīng),DNA的增色反應(yīng),6,破壞雙螺旋穩(wěn)定性的因素 加熱 極端的pH 甲醇 乙醇 尿素 甲酰胺,7,熱變性使DNA分子雙鏈解開所需溫度 ( melting temperature) 很狹的溫度范圍內(nèi)突發(fā)的躍變過程,熔解溫度（Tm）,8,不同來源DNA間的Tm存在差別的原因,（A）DNA的均一性 DNA分子中堿基組成的均一性 待測樣品DNA的組成是否均一,9,(B) DNA的(G+C)含量 (G+C)含量越高，即G-C堿基對越多，Tm值越高。 Tm與(G+C)含量(X)百分數(shù)的關(guān)系可用以下經(jīng)驗公式表示(DNA溶于0.2mol/L NaCl中)： X%(G+C)=2.44(Tm69.3),DNA的Tm值與G-C含量的關(guān)系,10,離子強度低，Tm值低，融點范圍寬 離子強度增高，Tm值增高，融點范圍變窄 DNA制劑不應(yīng)保存在離子強度過低的溶液中，一般保存在1mol/ NaCl溶液中較穩(wěn)定。,（C）溶劑的性質(zhì),11,二) DNA的復(fù)性,指變性DNA 在適當(dāng)條件下，兩條互補鏈全部或部分恢復(fù)到天然雙螺旋結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。 是變性的一種逆轉(zhuǎn)過程 經(jīng)緩慢冷卻即可復(fù)性，又稱為“退火”,12,熱變性過程和兩種冷卻過程示意圖,13,影響因素,a）溫度和時間 比Tm低25左右的溫度是復(fù)性的最佳條件 越遠離此溫度，復(fù)性速度就越慢,復(fù)性時溫度下降必須緩慢 降溫時間太短及溫差大不利于復(fù)性,14,b）DNA濃度 復(fù)性速度與DNA濃度的平方成正比,15,c）DNA順序的復(fù)雜性 順序越簡單，配對越快。,DNA片段愈大，擴散速度愈低