GB5009.32-2016食品安全國家標準食品中9種抗氧化劑的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準G B5 0 0 9 .3 22 0 1 6食品安全國家標準食品中9種抗氧化劑的測定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3發(fā)布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3實施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會國 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局發(fā) 布G B5 0 0 9.3 22 0 1 6 前 言 本標準代替G B/T5 0 0 9.3 22 0 0 3 油脂中沒食子酸丙酯(P G) 的測定 和G B/T2 3 3 7 32 0 0 9 食品中抗氧化劑丁基羥基茴香醚(B HA) 、 二丁基羥基甲苯(B HT) 與叔丁基對苯二酚(T B HQ) 的測定 。本標準與G B/T5 0 0 9.3 22 0 0 3相比, 主要變化如下: 標準名稱修改為“ 食品安全國家標準 食品中9種抗氧化劑的測定” ; 增加了抗氧化劑的種類; 增加了方法的適用范圍; 增加了液相色譜法、 氣相色譜法、 液相色譜串聯(lián)質譜法和氣相色譜質譜聯(lián)用法。G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 食品安全國家標準食品中9種抗氧化劑的測定1 范圍本標準規(guī) 定 了 食 品 中 沒 食 子 酸 丙 酯 (P G) 、2,4,5 -三 羥 基 苯 丁 酮 (TH B P) 、 叔 丁 基 對 苯 二 酚(T B HQ) 、 去甲二氫愈創(chuàng)木酸(N D GA) 、 叔丁基對羥基茴香醚(B HA) 、2,6 -二叔丁基- 4 -羥甲基苯酚(I o n o x - 1 0 0) 、 沒食子酸辛酯(OG) 、2,6 -二叔丁基對甲基苯酚(B HT) 、 沒食子酸十二酯(D G)9種抗氧化劑的5種測定方法 高效液相色譜法、 液相色譜串聯(lián)質譜法、 氣相色譜質譜法、 氣相色譜法以及比色法。本標準液相色譜法適用于食品中P G、TH B P、T B HQ、N D GA、B HA、B HT、I o n o x - 1 0 0、OG、D G的測定; 液相色譜串聯(lián)質譜法適用于食品中TH B P、P G、OG、N D GA、D G的測定; 氣相色譜質譜法適用于食品中B HA、B HT、T B HQ、I o n o x - 1 0 0的測定; 氣相色譜法適用于食品中B HA、B HT、T B HQ的測定;比色法適用于油脂中P G的測定。第一法 高效液相色譜法2 原理油脂樣品經有機溶劑溶解后, 使用凝膠滲透色譜(G P C) 凈化; 固體類食品樣品用正己烷溶解, 用乙腈提取, 固相萃取柱凈化。高效液相色譜法測定, 外標法定量。3 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為色譜純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 甲酸(HC OOH) 。3.1.2 乙腈(CH3C N) 。3.1.3 甲醇(CH3OH) 。3.1.4 正己烷(C6H1 4) : 分析純, 重蒸。3.1.5 乙酸乙酯(CH3C OO CH2CH3) 。3.1.6 環(huán)己烷(C6H1 2) 。3.1.7 氯化鈉(N a C l) : 分析純。3.1.8 無水硫酸鈉(N a2S O4) : 分析純,6 5 0灼燒4h, 貯存于干燥器中, 冷卻后備用。3.2 試劑配制3.2.1 乙腈飽和的正己烷溶液: 正己烷中加入乙腈至飽和。3.2.2 正己烷飽和的乙腈溶液: 乙腈中加入正己烷至飽和。G B5 0 0 9.3 22 0 1 62 3.2.3 乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液(1+1) : 取5 0m L乙酸乙酯和5 0m L環(huán)己烷混勻。3.2.4 乙腈和甲醇混合溶液(2+1) : 取1 0 0m L乙腈和5 0m L甲醇混合。3.2.5 飽和氯化鈉溶液: 水中加入氯化鈉至飽和。3.2.6 甲酸溶液(0.1+9 9.9) : 取0.1m L甲酸移入1 0 0m L容量瓶, 定容至刻度。3.3 標準品3.3.1 叔丁基對羥基茴香醚: 純度9 8%。3.3.2 2,6 -二叔丁基對甲基苯酚: 純度9 8%。3.3.3 沒食子酸辛酯: 純度9 8%。3.3.4 沒食子酸十二酯: 純度9 8%。3.3.5 沒食子酸丙酯: 純度9 8%。3.3.6 去甲二氫愈創(chuàng)木酸: 純度9 8%。3.3.7 2,4,5 -三羥基苯丁酮: 純度9 8%。3.3.8 叔丁基對苯二酚: 純度9 8%。3.3.9 2,6 -二叔丁基- 4 -羥甲基苯酚: 純度9 8%。 注:英文名字、 分子式和C A S號見附錄A。3.4 標準溶液配制3.4.1 抗氧化劑標準物質混合儲備液: 準確稱取0.1g( 精確至0.1m g) 固體抗氧化劑標準物質, 用乙腈溶于1 0 0m L棕色容量瓶中, 定容至刻度, 配制成濃度為10 0 0m g/L的標準混合儲備液,04避光保存。3.4.2 抗氧化劑混合標準使用液: 移取適量體積的濃度為10 0 0m g/L的抗氧化劑標準物質混合儲備液分別稀釋至濃度為2 0m g/L、5 0m g/L、1 0 0m g/L、2 0 0m g/L、4 0 0m g/L的混合標準使用液。3.5 材料3.5.1 C1 8固相萃取柱:20 0 0m g/1 2m L。3.5.2 有機系濾膜: 孔徑0.2 2m。4 儀器和設備4.1 離心機: 轉速30 0 0r/m i n。4.2 旋轉蒸發(fā)儀。4.3 高效液相色譜儀。4.4 凝膠滲透色譜儀。4.5 分析天平: 感量為0.0 1g和0.1m g。4.6 渦旋振蕩器。5 分析步驟5.1 試樣制備固體或半固體樣品粉碎混勻, 然后用對角線法取四分之二或六分之二, 或根據試樣情況取有代表性試樣, 密封保存; 液體樣品混合均勻, 取有代表性試樣, 密封保存。G B5 0 0 9.3 22 0 1 63 5.2 測定步驟5.2.1 提取5.2.1.1 固體類樣品: 稱取1g( 精確至0.0 1g) 試樣(5.1) 于5 0m L離心管中, 加入5m L乙腈飽和的正己烷溶液, 渦旋1m i n充分混勻, 浸泡1 0m i n。加入5m L飽和氯化鈉溶液, 用5m L正己烷飽和的乙腈溶液渦旋2m i n,30 0 0r/m i n離心5m i n, 收集乙腈層于試管中, 再重復使用5m L正己烷飽和的乙腈溶液提取2次, 合并3次提取液, 加0.1%甲酸溶液調節(jié)p H=4, 待凈化。同時做空白試驗。5.2.1.2 油類: 稱取1g( 精確至0.0 1g) 試樣(5.1) 于5 0m L離心管中, 加入5m L乙腈飽和的正己烷溶液溶解樣品, 渦旋1m i n, 靜置1 0m i n, 用5m L正己烷飽和的乙腈溶液渦旋提取2m i n,30 0 0r/m i n離心5m i n, 收集乙腈層于試管中, 再重復使用5m L正己烷飽和的乙腈溶液提取2次, 合并3次提取液,待凈化。同時做空白試驗。5.2.2 凈化在C1 8固相萃取柱中裝入約2g的無水硫酸鈉, 用5m L甲醇活化萃取柱, 再以5m L乙腈平衡萃取柱, 棄去流出液。將所有提取液(5.2.1) 傾入柱中, 棄去流出液, 再以5m L乙腈和甲醇的混合溶液洗脫,收集所有洗脫液于試管中,4 0下旋轉蒸發(fā)至干, 加2m L乙腈定容, 過0.2 2m有機系濾膜, 供液相色譜測定。5.2.3 凝膠滲透色譜法( 純油類樣品可選)稱取樣品(5.1)1 0g( 精確至0.0 1g) 于1 0 0m L容量瓶中, 以乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液定容至刻度, 作為母液; 取5m L母液于1 0m L容量瓶中以乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液定容至刻度, 待凈化。取1 0m L待測液加入凝膠滲透色譜(G P C) 進樣管中, 使用G P C凈化( 凝膠滲透色譜凈化條件見附錄B) , 收集流出液,4 0下旋轉蒸發(fā)至干, 加2m L乙腈定容, 過0.2 2m有機系濾膜, 供液相色譜測定。同時做空白試驗。5.3 液相色譜儀條件a) 色譜柱:C1 8柱, 柱長2 5 0mm, 內徑4.6mm, 粒徑5m, 或等效色譜柱;b) 流動相A:0.5%甲酸水溶液, 流動相B: 甲醇;c) 洗脫梯度:05m i n流動相(A)5 0%,5m i n1 5m i n: 流動相(A) 從5 0%降至2 0%,1 5m i n2 0m i n流動相(A)2 0%,2 0m i n 2 5m i n: 流動相(A) 從2 0%降至1 0%,2 5m i n 2 7m i n: 流動相(A) 從1 0%增至5 0%,2 7m i n 3 0m i n: 流動相(A)5 0%;d) 柱溫:3 5;e) 進樣量:5L;f) 檢測波長:2 8 0n m。5.4 標準曲線的制作將系列濃度的標準工作液分別注入液相色譜儀中, 測定相應的抗氧化劑, 以標準工作液的濃度為橫坐標, 以響應值( 如: 峰面積、 峰高、 吸收值等) 為縱坐標, 繪制標準曲線。9種抗氧化劑液相色譜圖見附錄C。5.5 試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中, 得到相應色譜峰的響應值, 根據標準曲線得到待測液中抗氧化G B5 0 0 9.3 22 0 1 64 劑的濃度。6 分析結果的表述試樣中抗氧化劑含量按式(1) 計算:Xi=iVm(1) 式中:Xi 試樣中抗氧化劑含量, 單位為毫克每千克(m g/k g) ;i 從標準曲線上得到的抗氧化劑溶液濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 稱取的試樣質量, 單位為克(g) 。結果保留三位有效數(shù)字( 或保留到小數(shù)點后兩位) 。7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 0%。8 其他本方法的檢出限為沒食子酸丙酯(P G) :2m g/k g,2,4,5 -三羥基苯丁酮(TH B P) :4m g/k g, 叔丁基對苯二酚(T B HQ) :1 0m g/k g, 去甲二氫愈創(chuàng)木酸(N D GA) :4m g/k g, 叔丁基對羥基茴香醚(B HA) :1 0m g/k g,2,6 -二叔丁基- 4 -羥甲基苯酚(I o n o x - 1 0 0) :2 0m g/k g, 沒食子酸辛酯(OG) :2m g/k g,2,6 -二叔丁基對甲基苯酚(B HT) :4m g/k g, 沒食子酸十二酯(D G) :1 0m g/k g; 定量限均為2 0m g/k g。第二法 液相色譜串聯(lián)質譜法9 原理油脂樣品經有機溶劑溶解后, 使用凝膠滲透色譜(G P C) 凈化; 固體類食品樣品用正己烷溶解, 用乙腈提取, 固相萃取柱凈化。液相色譜串聯(lián)質譜聯(lián)用儀測定, 外標法定量。1 0 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為色譜純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。1 0.1 試劑同3.11 0.2 試劑配制同3.2G B5 0 0 9.3 22 0 1 65 1 0.3 標準品1 0.3.1 沒食子酸辛酯: 純度9 8%。1 0.3.2 沒食子酸十二酯: 純度9 8%。1 0.3.3 沒食子酸丙酯: 純度9 8%。1 0.3.4 去甲二氫愈創(chuàng)木酸: 純度9 8%。1 0.3.5 2,4,5 -三羥基苯丁酮: 純度9 8%。 注:英文名字、 分子式和C A S號參見附錄A。1 0.4 標準溶液配制1 0.4.1 標準物質儲備液: 準確稱取0.1g( 精確至0.1m g) 固體抗氧化劑標準物質, 用乙腈溶于1 0 0m L棕色容量瓶中, 定容至刻度, 配置成濃度為10 0 0m g/L的標準儲備液,04避光保存。1 0.4.2 標準物質中間液: 移取標準物質儲備液1.0m L于1 0 0m L容量瓶中, 用乙腈定容, 配制成濃度為1 0m g/L的混合標準中間液,04避光保存。1 0.4.3 標準物質使用液: 移取適量體積的標準物質中間液分別稀釋至濃度為0.0 1m g/L、0.0 2m g/L、0.0 5m g/L、0.1m g/L、0.2m g/L、0.5m g/L、1m g/L、2m g/L的混合標準使用液。1 0.5 材料同3.5。1 1 儀器和設備1 1.1 離心機: 轉速30 0 0r/m i n。1 1.2 旋轉蒸發(fā)儀。1 1.3 液相色譜串聯(lián)質譜儀。1 1.4 凝膠滲透色譜儀。1 1.5 分析天平: 感量為0.0 1g和0.1m g。1 1.6 渦旋振蕩器。1 2 分析步驟1 2.1 試樣制備同5.1。1 2.2 測定步驟同5.2。1 2.3 液相色譜-串聯(lián)質譜儀條件a) 色譜柱:C1 8鍵合硅膠色譜柱, 柱長5 0mm, 內徑2.0mm, 粒徑1.8m, 或等效色譜柱;b) 流動相A: 水, 流動相B: 乙腈;c) 流速:0.2m L/m i n;d) 洗脫梯度:03m i n: 流動相(B) 從1 0%至3 0%,3m i n5m i n: 流動相(B)3 0%,5 m i nG B5 0 0 9.3 22 0 1 66 1 0m i n:流動相(B) 從3 0%至8 0%,1 0m i n1 2m i n: 流動相(B)8 0%,1 2m i n1 2.0 1m i n流動相(B) 從8 0%至1 0%,1 2.0 1m i n 1 4m i n: 流動相(B)1 0%;e) 柱溫:3 5;f) 進樣量:2L;g) 電離源模式: 電噴霧離子化;h) 噴霧流速:3L/m i n;i)干燥氣流速:1 5L/m i n;j)離子噴霧電壓:35 0 0V;k) 監(jiān)測離子對、 碰撞能量、 駐留時間和保留時間見附錄D。1 2.4 定性測定在相同試驗條件下進行樣品測定時, 如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致, 并且在扣除背景后的樣品質譜圖中, 所選擇的離子均出現(xiàn), 而且所選擇的離子豐度比與標準樣品相一致( 相對豐度5 0%, 允許2 0%偏差; 相對豐度2 0%5 0%, 允許2 5%偏差; 相對豐度1 0%2 0%, 允許3 0%偏差; 相對豐度1 0%, 允許5 0%偏差) , 則可判斷樣品中存在這種抗氧化劑。1 2.5 標準曲線的制作將標準系列工作液進行液相色譜串聯(lián)質譜儀測定, 以定量離子對峰面積對應標準溶液濃度繪制標準曲線。9種抗氧化劑多反應監(jiān)測(MRM) 色譜圖見附錄E。1 2.6 試樣溶液的測定將試樣溶液進行液相色譜串聯(lián)質譜儀測定, 根據標準曲線得到待測液中抗氧化劑的濃度。1 3 分析結果的表述試樣中抗氧化劑含量按式(2) 計算:Xi=iVm(2) 式中:Xi 試樣中抗氧化劑含量, 單位為毫克每千克(m g/k g) ;i 從標準曲線上得到的抗氧化劑溶液濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 稱取的試樣質量, 單位為克(g) 。結果保留三位有效數(shù)字( 或保留到小數(shù)點后兩位) 。1 4 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 0%。1 5 其他本方法的檢出限為沒食子酸丙酯(P G) :0.0 5m g/k g,2,4,5 -三羥基苯丁酮(TH B P) :0.0 5m g/k g, 去甲二氫愈創(chuàng)木酸(N D GA) :0.0 5m g/k g, 沒食子酸辛酯(OG) :0.0 0 5m g/k g, 沒食子酸十二酯(D G) :G B5 0 0 9.3 22 0 1 67 0.0 0 5m g/k g;定量限為沒食子酸丙酯(P G) :0.1m g/k g,2,4,5 -三羥基苯丁酮(TH B P) :0.1m g/k g, 去甲二氫愈創(chuàng)木酸(N D GA) :0.1 m g/k g, 沒食子酸辛酯(OG) :0. 0 1 m g/k g, 沒食子酸十二酯(D G) :0.0 1m g/k g。第三法 氣相色譜-質譜法1 6 原理油脂樣品經有機溶劑溶解后, 使用凝膠滲透色譜(G P C) 凈化; 固體類食品樣品用正己烷溶解, 用乙腈提取, 固相萃取柱凈化。氣相色譜-質譜聯(lián)用儀測定, 外標法定量。1 7 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為色譜純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。1 7.1 試劑同3.1。1 7.2 試劑配制同3.2。1 7.3 標準品1 7.3.1 叔丁基對羥基茴香醚: 純度9 8%。1 7.3.2 叔丁基對苯二酚: 純度9 8%。1 7.3.3 2,6 -二叔丁基對甲基苯酚: 純度9 8%。1 7.3.4 2,6 -二叔丁基- 4 -羥甲基苯酚: 純度9 8%。 注:英文名字、 分子式和C A S號見附錄A。1 7.4 標準溶液配制1 7.4.1 標準物質儲備液: 準確稱取0.1g( 精確至0.1m g) 固體抗氧化劑標準物質, 用乙腈溶于1 0 0m L棕色容量瓶中, 定容至刻度, 配置成濃度為10 0 0m g/L的標準儲備液,04避光保存。1 7.4.2 標準混合使用液: 移取適量體積的濃度為10 0 0m g/L的抗氧化劑標準儲備液混合后, 分別稀釋至濃度為1m g/L、2m g/L、5m g/L、1 0m g/L、2 0m g/L、5 0m g/L、1 0 0m g/L、2 0 0m g/L的混合標準使用液。1 7.5 材料同3.5。1 8 儀器和設備1 8.1 離心機: 轉速30 0 0r/m i n。1 8.2 旋轉蒸發(fā)儀。1 8.3 氣相色譜質譜聯(lián)用儀。G B5 0 0 9.3 22 0 1 68 1 8.4 凝膠滲透色譜儀。1 8.5 分析天平: 感量為0.0 1g和0.1m g。1 8.6 渦旋振蕩器。1 9 分析步驟1 9.1 試樣制備同5.1。1 9.2 測定步驟同5.2。1 9.3 氣相色譜質譜儀條件a) 色譜柱:5%苯基-甲基聚硅氧烷毛細管柱, 柱長3 0m, 內徑0.2 5mm, 膜厚0.2 5m, 或等效色譜柱;b) 色譜柱升溫程序:7 0 保持1m i n, 然后以1 0 /m i n程序升溫至2 0 0 保持4m i n, 再以1 0/m i n升溫至2 8 0保持4m i n;c) 載氣: 氦氣, 純度9 9.9 9 9%, 流速1m L/m i n;d) 進樣口溫度:2 3 0;e) 進樣量:1L;f) 進樣方式: 無分流進樣,1m i n后打開閥;g) 電子轟擊源:7 0e V;h) 離子源溫度:2 3 0;i)G C - M S接口溫度:2 8 0;j)溶劑延遲8m i n;k) 選擇離子監(jiān)測: 每種化合物分別選擇一個定量離子,2個3個定性離子。每組所有需要檢測離子按照出峰順序, 分時段分別檢測。每種化合物的保留時間、 定量離子、 定性離子、 駐留時間見附錄F。1 9.4 定性測定在相同試驗條件下進行樣品測定時, 如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致, 并且在扣除背景后的樣品質譜圖中, 所選擇的離子均出現(xiàn), 而且所選擇的離子豐度比與標準樣品相一致( 相對豐度5 0%, 允許2 0%偏差; 相對豐度2 0%5 0%, 允許2 5%偏差; 相對豐度1 0%2 0%, 允許3 0%偏差; 相對豐度1 0%, 允許5 0%偏差) , 則可判斷樣品中存在這種抗氧化劑。1 9.5 標準曲線的制作將標準系列工作液進行氣相色譜質譜聯(lián)用儀測定, 以定量離子峰面積對應標準溶液濃度繪制標準曲線。4種抗氧化劑選擇離子監(jiān)測G C - M S圖見附錄G。1 9.6 試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜質譜聯(lián)用儀中, 得到相應色譜峰響應值, 根據標準曲線得到待測液中抗氧化劑的濃度。G B5 0 0 9.3 22 0 1 69 2 0 分析結果的表述試樣中抗氧化劑含量按式(3) 計算:Xi=iVm(3) 式中:Xi 試樣中抗氧化劑含量, 單位為毫克每千克(m g/k g) ;i 從標準曲線上得到的抗氧化劑溶液濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 稱取的試樣質量, 單位為克(g) 。結果保留三位有效數(shù)字( 或保留到小數(shù)點后兩位) 。2 1 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 0%。2 2 其他本方法的檢出限為叔丁基對苯二酚(T B HQ) :0.5m g/k g, 叔丁基對羥基茴香醚(B HA) :1m g/k g,2,6 -二叔丁基- 4 -羥甲基苯酚(I o n o x - 1 0 0) :0.5m g/k g,2,6 -二叔丁基對甲基苯酚(B HT) :0.5m g/k g; 定量限均為1m g/k g。第四法 氣相色譜法2 3 原理樣品中的抗氧化劑用有機溶劑提取、 凝膠滲透色譜(G P C) 凈化后, 用氣相色譜氫火焰離子化檢測器檢測, 采用保留時間定性, 外標法定量。2 4 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為色譜純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。2 4.1 試劑2 4.1.1 環(huán)己烷(C6H1 2) 。2 4.1.2 乙酸乙酯(CH3C OO CH2CH3) 。2 4.1.3 石油醚: 沸程3 06 0( 重蒸) 。2 4.1.4 乙腈(CH3C N) 。2 4.1.5 丙酮(CH3C O CH3) 。2 4.2 試劑配制乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液(1+1) : 量取5 0m L乙酸乙酯和5 0m L環(huán)己烷混勻。G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 0 2 4.3 標準品2 4.3.1 B HA標準品: 純度9 9.0%。2 4.3.2 B HT標準品: 純度9 9.3%。2 4.3.3 T B HQ標準品: 純度9 9.0%。2 4.3.4 B HA、B HT、T B HQ標準儲備液: 準確稱取B HA、B HT、T B HQ標準品各5 0 m g( 精確至0.1m g) ,用乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液定容至5 0m L, 配制成1m g/m L的儲備液, 于4冰箱中避光保存。2 4.3.5 B HA、B HT、T B HQ標準使用液: 吸取標準儲備液0.1m L、0.5m L、1.0m L、2.0m L、3.0m L、4.0m L、5.0m L于一組1 0m L容量瓶中, 用乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液定容, 此標準系列的濃度為0.0 1m g/m L、0.0 5m g/m L、0.1m g/m L、0.2m g/m L、0.3m g/m L、0.4m g/m L、0.5m g/m L, 現(xiàn)用現(xiàn)配。2 4.4 材料有機系濾膜: 孔徑0.4 5m。2 5 儀器和設備2 5.1 氣相色譜儀(G C) : 配氫火焰離子化檢測器(F I D) 。2 5.2 凝膠滲透色譜儀(G P C) , 或可進行脫脂的等效分離裝置。2 5.3 分析天平: 感量為0.0 1g和0.1m g。2 5.4 旋轉蒸發(fā)儀。2 5.5 渦旋振蕩器。2 5.6 粉碎機。2 6 分析步驟2 6.1 試樣制備同5.1。2 6.2 試樣處理2 6.2.1 油脂樣品混合均勻的油脂樣品, 過0.4 5m濾膜后, 準確稱取0.5g( 精確至0.1m g), 用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液準確定容至1 0.0m L, 混合均勻待凈化。2 6.2.2 油脂含量較高或中等的樣品( 油脂含量1 5%以上的樣品)根據樣品中油脂的實際含量, 稱取5g混合均勻的樣品, 置于2 5 0m L具塞錐形瓶中, 加入適量石油醚, 使樣品完全浸沒, 放置過夜, 用快速濾紙過濾后, 旋轉蒸發(fā)回收溶劑, 得到的油脂用乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液準確定容至1 0.0m L, 混合均勻待凈化。2 6.2.3 油脂含量少的試樣( 油脂含量1 5%以下的樣品) 和不含油脂的樣品( 如口香糖等)同5.2中固體類樣品處理步驟。G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 1 2 6.3 凈化2 6.2中處理得到的試樣經凝膠滲透色譜裝置凈化( 凝膠滲透色譜凈化條件見附錄B) , 收集流出液蒸發(fā)濃縮至近干, 用乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液定容至2m L, 進氣相色譜儀分析。不同試樣的前處理需要同時做試樣空白試驗。2 6.4 色譜參考條件a) 色譜柱:5%苯基-甲基聚硅氧烷毛細管柱, 柱長3 0m, 內徑0.2 5mm, 膜厚0.2 5m, 或等效色譜柱;b) 進樣口溫度:2 3 0;c) 升溫程序: 初始柱溫8 0, 保持1m i n, 以1 0/m i n升溫至2 5 0, 保持5m i n;d) 檢測器溫度:2 5 0;e) 進樣量:1L;f) 進樣方式: 不分流進樣;g) 載氣: 氮氣, 純度9 9.9 9 9%, 流速1m L/m i n。2 6.5 標準曲線的制作將標準系列工作液分別注入氣相色譜儀中, 測定相應的抗氧化劑, 以標準工作液的濃度為橫坐標,以響應值( 如: 峰面積、 峰高、 吸收值等) 為縱坐標, 繪制標準曲線。B HA、B HT、T B HQ3種抗氧化劑標準溶液氣相色譜圖見附錄H。2 6.6 試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜儀中, 得到相應抗氧化劑的響應值, 根據標準曲線得到待測液中相應抗氧化劑的濃度。2 7 分析結果的表述試樣中抗氧化劑含量按式(4) 計算:X=Vm(4) 式中:X 試樣中抗氧化劑含量, 單位為毫克每千克(m g/k g) ; 從標準曲線上得到的抗氧化劑溶液濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 稱取的試樣質量, 單位為克(g) 。結果保留三位有效數(shù)字( 或保留到小數(shù)點后兩位) 。2 8 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 0%。2 9 其他本方法的檢出限為叔丁基對苯二酚(T B HQ) :5m g/k g, 叔丁基對羥基茴香醚(B HA) :2m g/k g,2,G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 2 6 -二叔丁基對甲基苯酚(B HT) :2m g/k g, 定量限均為5m g/k g。第五法 比色法3 0 原理試樣經石油醚溶解, 用乙酸銨水溶液提取后, 沒食子酸丙酯(P G)與亞鐵酒石酸鹽起顏色反應, 在波長5 4 0n m處測定吸光度, 與標準比較定量。3 1 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的二級水。3 1.1 試劑3 1.1.1 石油醚: 沸程3 06 0。3 1.1.2 乙酸銨(CH3C OONH4) 。3 1.1.3 硫酸亞鐵(F e S O47 H2O) 。3 1.1.4 酒石酸鉀鈉(N a K C4H4O44 H2O) 。3 1.2 試劑配制3 1.2.1 乙酸銨溶液(1 0 0g/L) : 稱取1 0g乙酸銨加適量水溶解, 轉移至1 0 0m L容量瓶中, 加水定容至刻度;3 1.2.2 乙酸銨溶液(1 6.7g/L) : 稱取1 6.7g乙酸銨加適量水溶解, 轉移至10 0 0m L容量瓶中, 加水定容至刻度;3 1.2.3 顯色劑: 稱取0.1g硫酸亞鐵和0.5g酒石酸鉀鈉, 加水溶解, 稀釋至1 0 0m L, 臨用前配制。3 1.3 標準溶液配制P G標準溶液: 準確稱取0.0 1 00gP G溶于水中, 移入2 0 0m L容量瓶中, 并用水稀釋至刻度。此溶液每毫升含5 0.0gP G。3 2 儀器和設備3 2.1 分析天平: 感量為0.0 1g和0.1m g。3 2.2 分光光度計。3 3 分析步驟3 3.1 試樣制備稱取1 0.0 0g試樣, 用1 0 0 m L石油醚溶解, 移入2 5 0 m L分液漏斗中, 加2 0 m L乙酸銨溶液(1 6.7g/L) ,振搖2m i n, 靜置分層, 將水層放入1 2 5m L分液漏斗中( 如乳化, 連同乳化層一起放下) , 石油醚層再用2 0m L乙酸銨溶液(1 6.7g/L) 重復提取兩次, 合并水層。石油醚層用水振搖洗滌兩次, 每次1 5m L, 水洗滌并入同一1 2 5m L分液漏斗中, 振搖靜置。將水層通過干燥濾紙濾入1 0 0m L容量瓶中,G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 3 用少量水洗滌濾紙, 加水至刻度, 搖勻。將此溶液用濾紙過濾, 棄去初濾液的2 0m L。收集濾液供比色測定用。同時做空白試驗。3 3.2 測定移取2 0.0m L上述處理后的試樣提取液于2 5m L具塞比色管中, 加入1m L顯色劑, 加4 m L水,搖勻。另準確吸取0m L、1.0m L、2.0m L、4.0m L、6.0m L、8.0m L、1 0.0m LP G標準溶液( 相當于0g、5 0g、1 0 0g、2 0 0g、3 0 0g、4 0 0g、5 0 0gP G) , 分別置于2 5m L帶塞比色管中, 加入2.5m L乙酸銨溶液(1 0 0g/L) , 加入水至約2 3m L, 加入1m L顯色劑, 再準確加水定容至2 5m L, 搖勻。用1c m比色杯, 以零管調節(jié)零點, 在波長5 4 0n m處測定吸光度, 繪制標準曲線比較。3 4 分析結果的表述試樣中抗氧化劑的含量按式(5) 計算:X=Am(V2/V1)(5) 式中:X 試樣中P G含量, 單位為毫克每千克(m g/k g) ;A 樣液中P G的質量, 單位為微克(g) ;m 稱取的試樣質量, 單位為克(g) ;V2 測定用吸取樣液的體積, 單位為毫升(m L) ;V1 提取后樣液總體積, 單位為毫升(m L) 。計算結果保留三位有效數(shù)字( 或保留到小數(shù)點后兩位) 。3 5 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 0%。3 6 其他本方法的定量限為:2 5m g/k g。G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 4 附 錄 A食品中9種抗氧化劑的英文名稱、 分子式與C A S號 食品中9種抗氧化劑的英文名稱、 分子式與C A S號見表A.1。表A.1 食品中9種抗氧化劑的英文名稱、 分子式和C A S號序號中文名稱英文名稱分子式英文簡稱C A S號1沒食子酸丙酯P r o p y l g a l l a t eC1 0H1 2O5P G1 2 1 - 7 9 - 922,4,5 -三羥基苯丁酮2,4,5 - T r i h y d r o x y b u t y r o p h e n o n eC1 0H1 2O4TH B P1 4 2 1 - 6 3 - 23叔丁基對苯二酚T e r t - b u t y l h y d r o q u i n o n eC1 0H1 4O2T B HQ1 9 4 8 - 3 3 - 04去甲二氫愈創(chuàng)木酸N o r d i h y d r o g u a i a r e t i ca c i dC1 8H2 2O4N D G A5 0 0 - 3 8 - 95叔丁基對羥基茴香醚B u t y l h y d r o x y a n i s o l eC1 1H1 6O2B HA2 5 0 1 3 - 1 6 - 562,6 -二叔丁基- 4 -羥甲基苯酚2,6 - D i - t e r t - b u t y l - 4 - h y d r o x ym e t h y l p h e n o lC1 5H2 4O2I o n o x - 1 0 08 8 - 2 6 - 67沒食子酸辛酯O c t y l g a l l a t eC1 5H2 2O5OG1 0 3 4 - 0 1 - 182,6 -二叔丁基對甲基苯酚B u t y l a t e dh y d r o x y t o l u e n eC1 5H2 4OB HT1 2 8 - 3 7 - 09沒食子酸十二酯D o d e c y l g a l l a t eC1 9H3 0O5D G1 1 6 6 - 5 2 - 5G B5 0 0 9.3 22 0 1 61 5 附 錄 B凝膠滲透色譜凈化參考條件 凝膠滲透色譜凈化參考條件如下:a) 凝膠滲透色譜柱:3 0 0mm2 0mm玻璃柱,B i oB e a d s(S - X 3) ,4 0m7 5m;b) 柱分離度: 玉米油與抗氧化劑(P G、TH B P、T B HQ、OG、B HA、I o n o x - 1 0 0、B HT、D G、N D GA)的分離度8 5%;c) 流動相: 乙酸乙酯環(huán)己烷=11( 體積比) ;d) 流速:5m L/m i n;e) 進樣量:2m L;f) 流出液收集時間:7