GB8371-1987水稻種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程.pdf

中華 人 民 共和 國 國家 標(biāo) 準(zhǔn)U DC 6 3 3 . 1 8 3 - 1 5 2 - 6 3 2 - 9 1水 稻 種 子 產(chǎn) 地 檢 疫 規(guī) 程GB 83 71 一 8 7P l a n t q u a r a n t i n e r u l e s f o r p r o d u c i n g a r e a s o f r i c e s e e d s 本規(guī)程適用于水稻種子繁育基地的產(chǎn)地檢疫。1 名詞解釋1 . 1 產(chǎn)地檢疫: 系指水稻種子生產(chǎn)過程中的檢疫. 包括選擇基地、 選用無病良 種、 生長期間檢查、 必要的室內(nèi)檢驗(yàn)等， 直到簽發(fā)“ 產(chǎn)地檢疫合格證書， 。1 . 2 檢疫對象: 指國家法律規(guī)定禁止隨稻種、 秧苗、 植株殘?bào)w等人為傳播的危險(xiǎn)病蟲。2 檢疫對象2 . 1 水稻細(xì)菌性條斑病X a n t h o m o n a s C a m p e s t r i s p v . O r y z i c o l a ( F a n g e t a l ) D y e .2 . 2 水稻白葉枯病 X a n t h o m o n a s C a m p e s t r i s p v . O r y z a e ( I S H I Y A M A ) D y e .3 選擇基地 從未發(fā)生或連續(xù)三年未發(fā)生檢疫對象， 有一定隔離保護(hù)條件， 灌溉水源無檢疫對象污染.4 基地用種要求4 . 1 基地用種應(yīng)在無檢疫對象發(fā)生地區(qū)選種或經(jīng)檢疫部門檢驗(yàn)證明不帶栓疫對象的種子.4 . 2 播種前必須對種子進(jìn)行消毒處理( 詳見附錄A ) ,5 綜合治理措施5 . 1 栽培管理要求5 . 1 . 1 秧田要選擇在灌水系統(tǒng)上游， 距村莊較遠(yuǎn)的地勢高操的地方。5 . 1 . 2 捆秧苗用稻草要沸水消毒3 0 m i n ， 或用麥草、 棕葉等代替。5 . 1 . 3 在秧田三葉期和移栽前3 - 5 天用藥劑防治1 -2 次。5 . 1 . 4 灌水5 . 1 . 4 . 1 排灌分家。5 . 1 . 4 . 2 淺水勤灌， 嚴(yán)防串灌、 深水淹灌、 浸灌， 及時(shí)曬田。5 . 1 . 5 施肥5 . 1 . 5 . 1 基肥充分腐熟。5 . 1 . 5 . 2 防止偏施氮肥， 氮、 磷、 鉀要合理配比， 防止水稻貪青誘發(fā)病害.52 病田處理5 . 2 . 1 對發(fā)病田塊和發(fā)病中心插上標(biāo)記。5 . 2 . 2 化學(xué)防治: 田間一旦發(fā)現(xiàn)病中心， 立即拔除或齊泥割除病株， 噴藥控制， 對周圍田塊也應(yīng)噴藥預(yù)防， 特別是在暴風(fēng)雨及淹澇之后， 要立即噴藥。5 . 3 病田稻種處理中華人民共和國農(nóng)業(yè)郎1 9 8 7 一 1 1 一 2 5 批準(zhǔn)1 9 8 8 一 0 7 一 0 1 實(shí)施GB 8371 一 875 . 3 . 1 病田生產(chǎn)的種子要單收、 單存， 嚴(yán)防與無病種子混雜。5 . 3 . 1 . 1 輕病田( 只有零星病葉) 的種子必須經(jīng)消毒處理后嚴(yán)格控制在病區(qū)使用( 種子消毒處理方法見5 . 2 條) 。5 . 3 . 1 . 2 其它病田種子一律改做糧食不準(zhǔn)作種用。5 . 4 病稻草處理: 病稻草作燃料燒掉， 或作其他滅菌處理。 不得用病稻草捆秧和禁止帶病肥料施入稻田 。6 檢查、 檢驗(yàn)方法6 . 飛 田間檢查6 . 1 . 1 田間檢查時(shí)間6 . 1 . 1 . 1 秧田從四葉期開始， 逐畦目測檢查， 發(fā)現(xiàn)可疑病斑， 拔出病苗， 進(jìn)行鑒定。6 . 1 . 1 . 2 本田期檢查三次: 第一次在拔節(jié)期; 第二次在孕穆至抽穆階段， 多為病害流行時(shí)期， 癥狀明顯，易于識(shí)別; 第三次在齊穆后至葉片枯黃前， 結(jié)合種子純度、 質(zhì)量檢驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。6 . 1 . 2 田間檢查方法6 . 1 . 2 . 1 檢查方法: 種子田逐塊、 逐帶檢查( 包括隔離區(qū)) 。6 . 1 . 2 . 2 癥狀診斷: 田間癥狀識(shí)別( 詳見附錄B ) 。 可疑癥狀， 采集標(biāo)本帶回室內(nèi)鑒定。6 . 2 室內(nèi)檢驗(yàn)方法6 . 2 . 1 細(xì)菌溢檢查: 切取病葉上病健交界處葉片組織約1 毫米， 放在載玻片的水滴中， 加上蓋玻片， 靜止1 -2 m i n 后， 用手持?jǐn)U大鏡或低倍顯微鏡稍暗視野下檢查， 有云霧狀菌液自葉脈涌出。6 . 2 . 2 保濕檢查: 取玻璃杯一只， 內(nèi)盛清潔河沙約半寸深， 加水濕潤， 再切取病葉組織約6 . 6 c m， 下端擂入河沙中， 上端外露， 加蓋濕紗布， 保濕1 2 h以上， 上端切口處有混濁液或淡黃色菌珠形成。6 . 2 . 3 染色檢查: 將病葉莖部剪去， 插入盛有紅墨水( 原液或加稀釋) 的玻管或廣口瓶中， 放在通風(fēng)而溫暖的地方， 3 0 m i n 后， 健部染成紅色， 病部因?qū)Ч軆?nèi)充滿細(xì)菌， 影響紅墨水進(jìn)入， 仍為綠色或黃色。6 . 2 . 4 分離培養(yǎng)檢驗(yàn): 對病組織進(jìn)行分離培養(yǎng)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)( 詳見附錄C ) ,6 . 3 帶菌種子檢驗(yàn): 用噬菌體方法或免疫熒光檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)種子帶菌情況( 詳見附錄D ) ,了 簽發(fā)證書7 . 1 經(jīng)最后一次田間檢查后， 未發(fā)現(xiàn)檢疫對象的水稻種子， 由當(dāng)?shù)貦z疫部門簽發(fā)“ 產(chǎn)地檢疫合格證嘆見附錄 E ) ,了 . 2 凡發(fā)生有檢疫對象的種子田生產(chǎn)的種子不發(fā)給“ 產(chǎn)地檢疫合格證” 。7 . 3 種子部門憑“ 產(chǎn)地檢疫合格證” 收購無病種子.GB 8371 一 87 附錄A水箱種子消棄處理方法 ( 參考件)A l 細(xì)菌性條斑病、 白葉枯病。A l . 1 熱水燙種: 將稻種盛在籮筐內(nèi)， 先放到4 5 的溫水中預(yù)熱3 m i n ， 立即移入保持5 8 的熱水中浸泡1 0 m i n 。 將稻谷取出后立即用冷水沖洗冷卻再浸種催芽或曬干待播。A 1 . 2 8 0 0 a 4 0 21 0 0 0 倍( 或1 0 % 4 0 1 . 5 0 0 倍) +0 . 4 %鹽酸( 化學(xué)純) 漫種3 6 h e ( 注: 根據(jù)大田 應(yīng)用結(jié)果，浸種時(shí)間3 6 h比較安全. 實(shí)際應(yīng)用時(shí)， 各地應(yīng)對不同品種作發(fā)芽試驗(yàn)后， 方可應(yīng)用) 。A l . 3 氮泛奄5 0 0 o o m怪種4 8 h ( 水溫2 5 -2 8 -C) . 附錄B田間癥狀識(shí) 別 ( 補(bǔ)充件)B I 水稻細(xì)菌性條斑病 水稻細(xì)菌性條斑病在葉片上形成暗綠色或黃揭色的狹窄條斑。 初發(fā)期為暗綠色水演狀半透明小斑點(diǎn)， 很快在葉脈之間伸展， 形成寬約1 / 3 -3 / 4 m m， 長約1 - 4 m m的條斑， 可擴(kuò)大到寬1 m m、 長1 0 m m以上， 轉(zhuǎn)為黃褐色。 病斑上帶有成串的黃色珠狀細(xì)菌滋出， 形小而量多。 嚴(yán)重時(shí)， 病斑增多而融聚一起， 局部呈不規(guī)則的黃褐色至枯白斑塊， 對光觀察， 病斑部半透明， 水浸狀。 病部菌膠多， 色深， 不易脫落。 秧苗期即可見到典型癥狀。B 2 水稻白葉枯病8 2 . 1 典型白葉枯病癥狀 典型白葉枯病癥狀主要發(fā)生在葉片及葉鞘部位， 病菌自葉片的葉尖或葉緣入侵后先產(chǎn)生黃綠色、 水演狀條斑紋斑點(diǎn)， 后沿葉緣一側(cè)或兩側(cè)， 或葉片中脈繼續(xù)發(fā)展成為波紋狀黃色、 黃綠色或灰綠色病斑，病、 健組織界線明顯， 病斑數(shù)天后轉(zhuǎn)灰白色， 并向內(nèi)卷曲， 遠(yuǎn)望一片枯搞色。 在空氣濕度大或雨后的傍晚和清晨露點(diǎn)大時(shí)， 病葉上的新鮮病斑上， 有時(shí)甚至在未表現(xiàn)病斑的葉緣上吐出混濁狀的水珠或蜜黃色膠珠狀的細(xì)菌膿， 干涸后硬結(jié)成粒， 易脫落。 在一些感病品種上， 病斑可以從葉片向下擴(kuò)展至葉鞘. 如黃白色轉(zhuǎn)為灰白色， 葉鞘最終亦呈干枯。B 2 . 2 雕萎型白葉枯病癥狀 雕萎型白葉枯病癥狀主要發(fā)生于秧田及移植前后， 幼株感病后， 在秧苗生育后期或本田移植后1 至4周內(nèi)， 能陸續(xù)表現(xiàn)癥狀. 癥狀的產(chǎn)生主要是病原菌自葉面?zhèn)凇?自然孔口、 傷莖或斷根等部位入侵. 在稻田內(nèi)沿維管束向其他器官部位轉(zhuǎn)移， 分泌毒素破壞并堵塞抽導(dǎo)組織而引起秧田失水， 整株雕葵。 雕萎株發(fā)生前期， 病菌的人侵點(diǎn)( 葉尖水孔或傷口) 上先出現(xiàn)水演狀灰綠色急性型病斑， 而后迅速沿主脈向下擴(kuò)展至葉鞘， 感病葉片及葉鞘很快干枯， 甚至死亡脫落， 7 - 1 0 天后便出現(xiàn)雌姜株、 心葉卷曲、 形似螟害枯心， 但只要把枯萎株拔起， 剝開枯萎心葉， 剖視病株假莖福變部位， 并用手?jǐn)D壓斷口， 可見大t黃白色至黃色涕狀菌膿溢出， 剝視病株葉鞘內(nèi)側(cè)， 亦常見有大量菌膿滋出。 病菌如從莖部或斷根以及自 根點(diǎn)伸長的新根所穿破的鞘部傷口 入侵時(shí)， 能迅速直接入侵心葉或假莖組織. 服葵出現(xiàn)早， 莖部葉片或心葉都可因癥狀發(fā)展嚴(yán)重而先后卷曲; 但有時(shí)往往在伸長的心葉上傷口 處出現(xiàn)葉枯型病斑. 雌姜癥狀與典型白葉枯癥狀可以相互轉(zhuǎn)化， 單獨(dú)發(fā)生或同時(shí)并發(fā)。G B 8 3 71 一 8 7B 2 . 3 黃葉型癥狀 黃葉型癥狀多見于成株上的心部新葉， 得病后呈淡黃至青黃色; 而其他下位葉片呈正常綠色。 在黃葉型的病葉上， 一般難以檢出細(xì)菌; 但在感染的葉片下方的節(jié)間及假莖部則大量帶菌， 在尚未足以破壞莖節(jié)的輸導(dǎo)組織時(shí)， 仍能為幼葉供應(yīng)少量養(yǎng)分， 致使葉片呈半死不活的淡黃色狀態(tài)。 附錄c細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法 ( 補(bǔ)充件) 水稻白葉枯病細(xì)菌和條斑病菌的分離方法與一般植物病原細(xì)菌的分離方法相同， 只是在培養(yǎng)基中以蔗糖代替葡萄糖， 分離后的培養(yǎng)皿先在2 0 -2 5 0C 溫箱中存放一天以后轉(zhuǎn)入2 7 - - 2 9 的溫箱中培養(yǎng)， 而菌落的出現(xiàn)一般都要3 -7 天以后。 在細(xì)菌的生理生化反映方面， 條斑病菌與白葉枯病菌基本相似， 但有幾個(gè)顯著區(qū)別: ( 1 )明膠液化:白葉枯病菌不能液化; 條斑病菌能液化明膠。 ( 2 ) 牛乳培養(yǎng): 白葉枯病菌不能陳化， 條斑病菌可以陳化。( 3 ) 阿拉伯糖發(fā)酵: 白葉枯病菌不能利用， 不產(chǎn)酸; 條斑病菌可以利用而產(chǎn)酸。 ( 4 )白葉枯病菌對還原物質(zhì)敏感， 在2 %葡萄糖的培養(yǎng)基上不能生長; 條斑病菌對還原物質(zhì)不敏感， 在2 0 0 葡萄搪培養(yǎng)基上可以生長。 ( 5 ) 兩者的血清反應(yīng)和噬菌體反應(yīng)各不相同。 附錄D帶，種子的檢驗(yàn)法 ( 補(bǔ)充件)D l 噬菌體檢驗(yàn)法D l . 1 檢驗(yàn)時(shí)間: 被檢驗(yàn)稻種在收獲后的三個(gè)月內(nèi)進(jìn)行。D l . 2 樣品的制備: 多點(diǎn)取樣稻種， 經(jīng)充分混合后隨機(jī)稱取1 0 g 種子， 脫下谷殼. 磨碎后放入消毒過的燒杯或研缽中， 加滅菌水2 0 m L , 浸泡并時(shí)常攪拌， 半小時(shí)后吸取上層清液供側(cè)定用， 也可用粗撼紙過濾除去組織殘余， 取濾液測定。D l . 3 指示菌液的制備: 使用O S - 3 ( 江蘇) 和O S - 1 4 ( 遼寧) 兩個(gè)菌株作混合指示菌( 各地在檢驗(yàn)本地種子材料時(shí)， 也可用本地的菌種) ， 要保證指示菌的純度， 指示菌要使用新鮮培養(yǎng)的， 尤以斜面培養(yǎng)的為好，一般以移植在斜面上生長3 -5 天的菌為最好. 超過1 0 天以上的不宜使用. 指示菌憊浮液濃度不宜過稀，以每毫升含菌量在9 億以上為好。 在每管斜面菌種管中， 加5 m L滅菌水， 刮下菌苔， 配制成細(xì)菌懸浮液，作測定用。D 1 . 4 測定及計(jì)數(shù): 每個(gè)樣品， 分別吸取上層溶液1 . 0 , 1 . 0 , 0 . 5 m L于三個(gè)滅菌培養(yǎng)皿中， 各加1 m L指示菌液和1 0 m L 溶化的固體培養(yǎng)基， 搖勻凝成平板后， 放在2 5 - 2 8 的溫箱中， 培養(yǎng)1 0 - 1 2 h 后， 記載各個(gè)培養(yǎng)皿中的噬菌斑數(shù)， 然后再換算成每克種子內(nèi)的曦菌斑數(shù)。D 2 熒光抗體檢驗(yàn)法D 2 . 1 熒光杭體法檢驗(yàn)水稻白葉枯病種操作程序D 2 . 1 . 1 熒光片的制備D 2 . 1 . 1 . 1 稱取5 g 干稻種( 最好收獲后一年以內(nèi)) ， 脫殼備用。D 2 . 1 - 1 . 2 將稻殼放在大試管內(nèi)， 加生理鹽水1 0 - 1 5 m L ， 以沒過稻殼為準(zhǔn). 用玻棒攪勻， 放2 8 0C 溫箱孵育2 h ,GB 8371 一 87D 2 . 1 . 1 . 3 將稻殼水?dāng)嚢韬鬄V出棄殼， 稻殼水放離心管內(nèi)， 以1 0 0 0 r / m i n 離心5 m i n ， 棄去沉淀物， 留上清液 .D2 . 1 - 1 . 4mL,D2 . 1 - 1 . 5D2 - 1 - 1 - 6將上清液放離心管內(nèi)， 以4 0 0 0 r / m i n離心3 0 m i n ， 用吸管棄去上清液， 留底部富集菌液0 - 5以富集菌液在載片上涂去， 陰干并在酒精燈火焰上迅速過1 -2 次， 使菌固定于載片。用1 - 1 0 - 1 5 白葉枯抗血清蓋滿載片上細(xì)菌涂片區(qū)， 將載片水平放在3 7 0C密閉水溶箱內(nèi)， 保濕3 0 m i n ,D 2 . 1 . 1 . 7 取出上項(xiàng)載片， 用磷酸緩沖液沖出多余的抗血清， 然后陰干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。D 2 . 1 - 1 . 8 在上項(xiàng)載片細(xì)菌涂片區(qū)加滴1 - 1 5 羊抗兔熒光抗體， 蓋滿涂片區(qū)， 水平放3 7 水溶箱3 0 m i n同前。D 2 . 1 . 1 . 9 取出載片、 用磷酸緩沖液沖洗熒光抗體， 陰干或吹風(fēng)機(jī)吹干載片， 備用。D 2 . 1 - 2 熒光片的檢驗(yàn)( 在暗室內(nèi)進(jìn)行)D 2 . 1 . 2 . 1 在熒光片涂菌區(qū)滴一滴p H為8 的緩沖甘油( 或無熒光鏡油) 。D 2 . 1 . 2 . 2 用熒光顯微鏡l o o x 物鏡對準(zhǔn)載片涂菌區(qū)， 小心地使鏡頭